המחברים מודים בהכרת תודה את הסיוע מיומן של גב &#39;Trine וו מיקלסן, גב&#39; ליזה M. התאמה, וכך גם הצוות Påskehøjgaard. המועצה למחקר הרפואית הדנית, הקרן לונדבק, וקרן נובו נורדיסק כלכלית נתמכת במחקר.

הרדמת euthanesia Animal בוצעה בהתאם &quot;עקרונות של טיפול בבעלי חיים במעבדה&quot; (מס &#39;פרסום NIH 86-23, מתוקן 1985) ואושר על ידי המועצה הדנית לאתיקת מחקר בבעלי החיים. 1. מכשירים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף המכשירים שהוצגו וידאו נזכרים בטבלה של חומרים. </li></ol> עריפת ראש 2. הערה: הרדמה הושרה על ידי זריקה תוך שרירית של 5 מ&quot;ל של midazolam (5 מ&quot;ג / מ&quot;ל) ו 5 מ&quot;ל של קטמין (25 מ&quot;ג / מ&quot;ל). 5-10 דקות מאוחר יותר, כאשר החיה היה מורדמת, וריד האוזן היה cannulated ו ממנת יתר קטלנית (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג ממשקל הגוף) של נתרן pentobarbital (200 מ&quot;ג / מ&quot;ל) ניתנה לווריד. כדי להבטיח כי בעל החיים מורדמים לגמרי, רפלקס הכאב interdigital נבדק כפי שמוצג על ידי Ettrup ואח. (2011) 20. euthanization Complete היה מובטח כמתוארהצהרת האתיקה מעל ואחריו זלוף transcardial עם 5 L של סליין איזוטוני, כפי שהוכח על ידי Ettrup ואח. (2011) 20. כל הנהלים הפגינו מבוצעות לאחר המוות, מניעת הצורך באמצעי הזהירות הדרושים הרווחה הרדמה לטווח ארוך הישרדות postprocedural. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את חזיר ידי חתך צוואר הרחם עגול גבוה, באמצעות אזמל כירורגי, ממש מתחת זווית בלסת התחתונה, (איור 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ובכל זאת עם האזמל כירורגי, להמשיך את החתך anteriorly דרך הרקמות הרכות של הצוואר, כולל הגרון והוושט, עד עמוד השדרה הגרמי היא הגיעה, כ ברמה של צומת craniocervical. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Advance לחתוך באיזמל מנתחים מהצד הקדמי של צומת craniocervical, מעל הקשת הקדמית של אטלס, ואת דרך הממברנה atlantooccipital הקדמית, ובכך לחשוף את תעלת שדרה ואת חוט השדרה (איור 1B). במקביל לשאול עוזרים למשוך את גוף החזיר הרחק בראש החזיר כדי להקל על הגישה בין בסיס הגולגולת ואת החוליה הצווארית הראשונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך חתך ניתוחי דרך שק dural ואת חוט השדרה (איור 1B). קח טיפול מיוחד על מנת להבטיח כי קטע רוחבי מלא של חוט השדרה מושג. הערה: אי ביצוע השלב הקודם עלולים לגרום מתיחה רצויה על חוט השדרה והמוח במהלך השלבים הבאים בתהליך עריפת הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכוח להאריך את צומת cranocervical ברמה סעיף (איור 1C). במקביל, השתמש באזמל כירורגי סעיף רצועות atlantooccipital הנותרים כדי לשחרר את הארטיקולציה בין condyles העורפית ואת התהליך הרהוט העליון של אטלס. הפרד את ראש החזיר מהגוף. </li></ol><img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/55511/55511fig1.jpg" style="font-size: 14px;" /> איור 1: עריפת ראש Minipig. (א) צוואר חתך (חץ, זווית בלסת תחתונה,). (ב) חתך דרך רצועות atlantooccipital ואת חוט שדרה-מוקף ההדור (SC) בצומת craniocervical (C1, קשת קדמית של אטלס; OC, condyle העורפית). (ג) החלק האחורי של ארטיקולצית atlantooccipital הוא שוחרר על ידי רחבה כוחנית (חיצים) ברמת הסעיף. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55511/55511fig1large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 3. פתיחת גולגולת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את ראש החזיר על שולחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך אורכי הגב באיזמל מנתחים דרך העור ואת רקמות רכות הבסיסית מהחלק האחורי של חוטם, על הקודקוד של הראש, ולמטה דרך החלק האחורי שלהאזור העורפי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את החלק הגבה ואת אחורי של הגולגולת על ידי הסרת הרקמות הרכות הממוקמות לרוחב החתך הראשוני באיזמל מנתחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את השריר הזמני בילטרלי מהגולגולת (איור 2 א) באיזמל מנתחים. ודא כי עצם העורף האחורי הוא ניקה של רקמות רכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש הכניסה האחורית של מגנום foramen להסיר את עצם העורף עם אגרוף העצם Kerrison ו rongeurs העצם ולחשוף המוחון מכוסי הדורה (איור 2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור אל הצד הקדמי החשוף של הגולגולת ובחר נקודת כניסה של העצם הפרונטלית, ממש מול העיניים. בשלב זה, להשתמש באיזמל העצם עם פטיש לחדור הגולגולת להיכנס סינוס פרונטלי (איור 2C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש היקף סינוס פרונטלי כדי לקדם את הסרת dorsoposterior של lamina הגולגולת החיצוני באגרוף rongeur או עצם עצם ולחשוף את הפנימיות, רזהlamina פדחת גרמית המכסה את המוח הגדול (2D איור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לפתוח את lamina הגולגולת הגרמי הפנימי קדמי עם פטיש ואזמל עצם לחשוף את המוח הגדול מכוסה-דורא (האיור 2E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך הסרת עצם רוחבית בעזרת אזמל עצם ועצם rongeur דרך העצם הטמפורלית הקודקודית כדי לשחרר את החלק dorsoposterior הסופי של הגולגולת, הממוקם בין החלקים החשופים כבר פעולת המוח מכוסה הדורה המוחון (איור 2F). הערה: זה בדרך כלל אפשרי, במהלך השלב הסופי של הליך זה, להשתמש המפסלת לפרוץ את עצם הגולגולת האחורית הנותרים מצד אחד, בדיוק כמו אחד פותח דלת. </li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/55511/55511fig2.jpg" style="opacity: 0.9; font-size: 14px;" /> איור 2: פתיחת גולגולת Minipig. (א) חשיפה של dorsoposterioפני גולגולת R, כולל ההסרה העורפית ואת השרירים זמניים. הסרת (B) של עצם העורף (CB, המוחון מכוסי דורא; OB, עצם העורף; OC, condyle העורפית; ו SC, חוט השדרה). (ג) פטיש ואזמל עצם משמשים לחדור הגולגולת קדמית ו להיכנס סינוס פרונטלי ברמה של העיניים. (ד) היקף סינוס פרונטלי (FS) משמש כדי להסיר את עצם הגולגולת העבה החיצוני (1), וחשף lamina עצם דק פנימי (2) המכסה את המוח הגדול. הסרה (E) של lamina העצם הדק, חשיפת המוח גדול מכוסי הדורה (חץ). (F) לבסוף, פטיש ואזמל עצם משמשים רוחבי לחבר את הקדמי ואת פתחי הגולגולת האחורית. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55511/55511fig2large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 4. המוח removאל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים כירורגיים להרים את הדורה וליצור קרוב חתך עדין אל סינוס sagittal מעולה ורידי באמצעות אזמל כירורגי קנס (איור 3A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו-מספריים מיקרו או א-דורא סכין נוספת כדי לפתוח את הדורה המכסה את פני השטח הגבי של המוח. הערה: טיפול מיוחד יש לנקוט בעת הסרת הדורה המתאים אוֹהֶל המוח הקטן (איור 3B), כמו שימור עלים dural זה ימנע הסרת המוח עוקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את ראש החזיר אנכי (איור 3 ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל העצם או מבתר לשחרר את המוח הגדול ventroanterior ידי לנתיחה בוטה של הנורה הריח מן הרצפה המכוסה הדורה של חלל הגולגולת (איור 3D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל כירורגים בסדר סעיף תצלובת הראייה החשופה (האיור 3E). לחשוף קטע גבעול ההיפופיזה ואת העצבים האוקולומוטורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את המוח הגחון על ידי חתך את loעצבי גולגולת wer (איור 3F) באיזמל מנתחים דק. ודא כי אוֹהֶל cerebellar dural היה חרוט לחלוטין (איור 3B), כמו עלה dural זה יקצץ אחרת דרך גזע המוח במהלך תהליך השחרור. </li></ol><img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/55511/55511fig3.jpg" style="font-size: 14px;" /> איור 3: הסרת המוח Minipig. (א) פתיחת Dural עם מלקחיים כירורגיים וסכין הדור. (ב) יש להקפיד על מנת לחתוך את עלי dural לחלוטין (חץ), הממוקמים בין המוח הגדול לבין המוח הקטן. (ג) ראש החזיר ממוקם אנכי עבור ויזואליזציה טובה יותר של מבנים בבסיס גולגולת כדי כובד לסייע עקירה המיועדת של המוח. (ד) מבתר או אזמל עצם משמש כדי להקל את נורת חוש הריח על ידי סעיף בוטה מן דורא-covereבסיס גולגולת ד. (E) דיסקציה היא המשיכה בכיוון אחורי לאורך בסיס הגולגולת לחשיפת חתך של תצלובת הראייה (חץ), גבעול infundibular, ועצבים האוקולומוטורי. (F) שחרור המוח יושלם עם הסעיף של עצבי גולגולת הנמוכים כפי שהם יוצאים מן שטח הגחון של גזע המוח (III, עצב האוקולומוטורי; IV, עצב סליל; V, עצב trigeminal; ו- VI, עצב המצדיד). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55511/55511fig3large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 5. הסרת יותרת המוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את גבעול יותרת עלה dural המקיפים שלה (sellae diapragma) ב (איור 4 א) רצפת הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את רוחבי עלה dural לגבעול יותרת המוח באמצעות אזמל כירורגי קנס (איור 4 ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מבתר לשחרר את בורuitary ולהרים אותו אל מחוץ הפוסה יותרת המוח (איור 4C). </li></ol><img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/55511/55511fig4.jpg" style="opacity: 0.9; font-size: 14px;" /> איור 4: הסרת יותרת המוח Minipig. (א) הפוסה יותרת המוח (*) מזוהה רצפת הגולגולת (1, נורת ריח; 2, תצלובת ראייה; ו PF, הפוסה גולגולתי אחורית). (ב) כיסוי dural (diagphragm sellar, (החץ)) הוא חרות רוחבי. (ג) בלוטת יותרת המוח (חץ) הוא שוחרר עם מבתר והרים מתוך הפוסה יותרת המוח. בר סולם (AC) = 10 מ&quot;מ. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55511/55511fig4large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

<ol>
	<li>Lind, M. N., Moustgaard, A., Jelsing, J., Vajta, G., Cumming, P., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+pigs+in+neuroscience:+Modeling+brain+disorders.">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neurosci Biobehav Rev. 31, 728-751 (2007).</li><li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+in+a+minipig+model+of+Parkinson+disease.">Neuromodulation in a minipig model of Parkinson disease.</a> British J Neurosurg. 22 (Suppl. 1), S9-S12 (2008).</li><li>Bjarkam, C. R., Cancian, G., Glud, A. N., Ettrup, K. S., &#216;stergaard, L., S&#248;rensen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-guided+stereotaxic+targeting+in+pigs+based+on+a+stereotaxic+localizer+box+fitted+with+an+isocentric+frame+and+use+of+SurgiPlan+computer-planning+software.">MRI-guided stereotaxic targeting in pigs based on a stereotaxic localizer box fitted with an isocentric frame and use of SurgiPlan computer-planning software.</a> J Neurosci Methods. 183 (2), 119-126 (2009).</li><li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery.">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li><li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+function+of+a+new+clinical+intracerebral+microinjection+instrument+for+stem+cells+and+therapeutics+examined+in+the+Göttingen+minipig.">Safety and function of a new clinical intracerebral microinjection instrument for stem cells and therapeutics examined in the Göttingen minipig.</a> Stereotact Funct Neurosurg. 88 (1), 56-63 (2010).</li><li>Fjord-Larsen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+delivery+of+nerve+growth+factor+by+encapsulated+cell+biodelivery+in+the+minipig+basal+forebrain.">Long-term delivery of nerve growth factor by encapsulated cell biodelivery in the minipig basal forebrain.</a> Mol Therapy. 18 (12), 2164-2172 (2010).</li><li>S&#248;rensen, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+neuromodulation+treatments+in+a+large+animal+model+-+Do+neurosurgeons+dream+of+electric+pigs?.">Development of neuromodulation treatments in a large animal model - Do neurosurgeons dream of electric pigs?.</a> Prog Brain Res. 194, 97-103 (2011).</li><li>Dolezalova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+models+of+neurodegenerative+disorders:+utilization+in+cell+replacement-based+preclinical+safety+and+efficacy+studies.">Pig models of neurodegenerative disorders: utilization in cell replacement-based preclinical safety and efficacy studies.</a> J Comp Neurol. 522 (12), 2784-2801 (2014).</li><li>Mikkelsen, M., Moller, A., Jensen, L. H., Pedersen, A., Harajehi, J. B., Pakkenberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPTP-induced+Parkinsonism+in+minipigs:+A+behavioral,+biochemical,+and+histological+study.">MPTP-induced Parkinsonism in minipigs: A behavioral, biochemical, and histological study.</a> Neurotoxicol Teratol. 21, 169-175 (1999).</li><li>Danielsen, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DaNEX+study+of+embryonic+mesencephalic,+dopaminergic+tissue+grafted+to+a+minipig+model+of+Parkinson's+disease:+Preliminary+findings+of+effect+of+MPTP+poisoning+on+striatal+dopaminergic+markers.">The DaNEX study of embryonic mesencephalic, dopaminergic tissue grafted to a minipig model of Parkinson's disease: Preliminary findings of effect of MPTP poisoning on striatal dopaminergic markers.</a> Cell Transplant. 9 (2), 247-259 (2000).</li><li>Dalmose, A., Bjarkam, C. R., S&#248;rensen, J. C., J&#248;rgensen, T. M., Djurhuus, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+high+frequency+deep+brain+stimulation+on+urine+storage+and+voiding+function+in+conscious+minipigs.">Effects of high frequency deep brain stimulation on urine storage and voiding function in conscious minipigs.</a> Neurourol Urodyn. 23 (3), 265-272 (2004).</li><li>Dalmose, A., Bjarkam, C. R., Djurhuus, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotactic+electrical+stimulation+of+the+pontine+micturition+center+in+the+pig.">Stereotactic electrical stimulation of the pontine micturition center in the pig.</a> Br J Urol. 95, 886-889 (2005).</li><li>Andersen, F., Watanabe, H., Bjarkam, C. R., Danielsen, E. H., Cumming, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+brain+stereotaxic+standard+space:+Mapping+of+cerebral+blood+flow+normative+values+and+effect+of+MPTP-lesioning.">Pig brain stereotaxic standard space: Mapping of cerebral blood flow normative values and effect of MPTP-lesioning.</a> Brain Res Bull. 66 (1), 17-29 (2005).</li><li>Glud, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+gene+transfer+in+the+minipig+CNS+using+stereotaxic+lentiviral+microinjections.">Direct gene transfer in the minipig CNS using stereotaxic lentiviral microinjections.</a> Acta Neurobiol Exp. 70 (3), 1-8 (2010).</li><li>Glud, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+MRI-guided+stereotaxic+viral+mediated+gene+transfer+of+alpha-synuclein+in+the+minipig+CNS.">Direct MRI-guided stereotaxic viral mediated gene transfer of alpha-synuclein in the minipig CNS.</a> Acta Neurobiol Exp. 71 (4), 508-518 (2011).</li><li>Ettrup, K. S., S&#248;rensen, J. C., Rodell, A., Alstrup, A. K. O., Bjarkam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+deep+brain+stimulation+influences+autonomic+and+limbic+circuitry+involved+in+the+regulation+of+aggression+and+cardiocerebrovascular+control+in+the+minipig.">Hypothalamic deep brain stimulation influences autonomic and limbic circuitry involved in the regulation of aggression and cardiocerebrovascular control in the minipig.</a> Stereotact Funct Neurosurg. 90 (5), 281-291 (2012).</li><li>Nielsen, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+MPTP+intoxication+in+the+minipig+results+in+chronic+parkinsonian+deficits.">Continuous MPTP intoxication in the minipig results in chronic parkinsonian deficits.</a> Acta Neurobiol Exp. 76, 198-210 (2016).</li><li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+MRI-compatible+stereotaxic+localizer+box+enables+high-precision+stereotaxic+procedures+in+pigs.">A MRI-compatible stereotaxic localizer box enables high-precision stereotaxic procedures in pigs.</a> J Neurosci Methods. 139 (2), 293-298 (2004).</li><li>Bjarkam, C. R., Jorgensen, R. L., Jensen, K. N., Sunde, N. A. A., S&#248;rensen, J. C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+brain+stimulation+electrode+anchoring+using+BioGlue&#174;,+a+protective+electrode+covering,+and+a+titanium+microplate.">Deep brain stimulation electrode anchoring using BioGlue&#174;, a protective electrode covering, and a titanium microplate.</a> J Neurosci Methods. 168, 151-155 (2008).</li><li>Ettrup, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+Surgical+Techniques+in+the+Minipig:+Intubation,+Transurethral+Bladder+Catheterization,+Femoral+Vessel+Catheterization,+and+Transcardial+Perfusion.">Basic Surgical Techniques in the Minipig: Intubation, Transurethral Bladder Catheterization, Femoral Vessel Catheterization, and Transcardial Perfusion.</a> J Vis Exp. (52), e2652 (2011).</li><li>Ettrup, K. S., Torn&#248;e, J., S&#248;rensen, J. C., Bjarkam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surgical+device+for+minimally+invasive+implantation+of+experimental+deep+brain+stimulation+leads+in+large+research+animals.">A surgical device for minimally invasive implantation of experimental deep brain stimulation leads in large research animals.</a> J Neurosci Methods. 200 (1), 41-46 (2011).</li><li>Danielsen, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positron+emission+tomography+of+living+brain+in+minipigs+and+domestic+pigs.">Positron emission tomography of living brain in minipigs and domestic pigs.</a> Scand J Lab Anim Sci Suppl. 25 (1), 127-135 (1998).</li><li>R&#248;hl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+evolution+of+cerebral+perfusion+and+ADC+measured+by+MRI+in+a+porcine+stroke+model.">Time evolution of cerebral perfusion and ADC measured by MRI in a porcine stroke model.</a> J Magn Reson Imaging. 15 (2), 123-129 (2002).</li><li>Cumming, P., Gillings, N. M., Jensen, S. B., Bjarkam, C. R., Gjedde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+the+uptake+and+distribution+of+the+dopamine+D2/3+agonist+(R)-N-[1-11C]n-propylnorapomorphine+in+brain+of+healthy+and+MPTP-poisoned+Gottingen+miniature+pigs.">Kinetics of the uptake and distribution of the dopamine D2/3 agonist (R)-N-[1-11C]n-propylnorapomorphine in brain of healthy and MPTP-poisoned Gottingen miniature pigs.</a> Nucl Med Biol. 30 (5), 547-553 (2003).</li><li>Jensen, K. N., Deding, D., S&#248;rensen, J. C., Bjarkam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+implantation+of+deep+brain+stimulation+electrodes+in+the+pontine+micturition+centre+of+the+minipig.">Long-term implantation of deep brain stimulation electrodes in the pontine micturition centre of the minipig.</a> Acta Neurochir. 151 (7), 785-794 (2009).</li><li>Rosendal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+chronic+low+dose+treatment+with+ciclosporin+influence+the+brain?+A+histopathological+study+in+pigs.">Does chronic low dose treatment with ciclosporin influence the brain? A histopathological study in pigs.</a> Transplantation Proc. 37 (8), 3305-3308 (2005).</li><li>Nielsen, M. S., S&#248;rensen, J. C., Bjarkam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantia+nigra+pars+compacta+of+the+minipig:+An+anatomical+and+stereological+study.">The substantia nigra pars compacta of the minipig: An anatomical and stereological study.</a> Brain Struct Funct. (4-5), 481-488 (2009).</li><li>S&#248;rensen, J. C., Bjarkam, C. R., Simonsen, C. Z., Danielsen, E., Geneser, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oriented+sectioning+of+irregular+tissue+blocks+in+relation+to+computerized+scanning+modalities.+Results+from+the+domestic+pig+brain.">Oriented sectioning of irregular tissue blocks in relation to computerized scanning modalities. Results from the domestic pig brain.</a> J Neurosci Methods. 104, 93-98 (2000).</li><li>Bjarkam, C. R., Pedersen, M., S&#248;rensen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+strategies+for+embedding,+orientation+and+sectioning+of+small+brain+specimens+enable+direct+correlation+to+MR-images,+brain+atlases,+or+use+of+unbiased+stereology.">New strategies for embedding, orientation and sectioning of small brain specimens enable direct correlation to MR-images, brain atlases, or use of unbiased stereology.</a> J Neurosci Methods. 108, 153-159 (2001).</li><li>Bjarkam, C. R., S&#248;rensen, J. C., Geneser, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+morphology+of+serotonin-immunoreactive+axons+in+the+hippocampal+region+of+the+New+Zealand+white+rabbit.+I.+Area+dentata+and+hippocampus+proper.">Distribution and morphology of serotonin-immunoreactive axons in the hippocampal region of the New Zealand white rabbit. I. Area dentata and hippocampus proper.</a> Hippocampus. 13 (1), 21-37 (2003).</li><li>Bjarkam, C. R., Glud, A. N., Orlowski, D., S&#248;rensen, J. C., Palomero-Gallagher, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+telencephalon+of+the+minipig,+cytoarchitecture+and+cortical+surface+anatomy.">The telencephalon of the minipig, cytoarchitecture and cortical surface anatomy.</a> Brain Struct Funct. , (2016).</li><li>Boltze, J., Nitzsche, B., Geiger, K. D., Schoon, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathological+investigation+of+different+MCAO+modalities+and+impact+of+autologous+bone+marrow+mononuclear+cell+administration+in+an+ovine+stroke+model.">Histopathological investigation of different MCAO modalities and impact of autologous bone marrow mononuclear cell administration in an ovine stroke model.</a> Transl Stroke Res. 2, 279-293 (2011).</li><li>Jortner, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+return+of+the+dark+neuron.+A+histological+artifact+complicating+contemporary+neurotoxicologic+evaluation.">The return of the dark neuron. A histological artifact complicating contemporary neurotoxicologic evaluation.</a> Neurotoxicology. 27, 628-634 (2006).</li></ol>

החוקרים אין לחשוף.

רוב המחקרים במדעי מוח הניסיונות מבוצעים מינים של בעלי חיים קטנים, כגון עכברים וחולדות, שבו גישת CNS בהנחייתם א-עובי dural skull- ורזה. עם זאת, בחיות מעבדה גדולות כמו חזירים 1, 4, 8, כבשת 32, ו פרימטים לא אנושי, העובי הניכר של מבנים אלה מחייב שימוש בכלים חזקים (טבלה של חומרים) וכן בנקודות כניסה נכונות להסרת עצם גולגולת (איור 2). ידיעת הגבלת עלי dural (איורים 3 ו 4) נדרשה לפני CNS ניתן לגשת ואת המוח להסיר בבטחה. מומלץ להשאיר את הדורה ללא פגע במהלך הסרת עצם הגולגולת, כמו זה יהיה להגן על המוח מפני נזק הבסיסית. קיבוע transcardial הקודם 20 עלול להקשות כן ו SLIghtly לכווץ את המוח, מה שמאפשר את עצם תהליך הסרת dural להתבצע בקלות יותר ובטיחות. תכונה מיוחדת של הגולגולת חזיר, בניגוד כבשים הפרימטים הלא-אנושית, היא התרחבות הדרגתית של סינוס פרונטלי עם הגיל, אשר עשוי להיות יתרון בתהליך הסרת עצם הגולגולת (איור 2). הטכניקה המוצגת עשויה לשמש בהתאם על כל מיני בעלי חיים גדולים, אלא רק בחזירים, במיוחד אלו מעל גיל 6 חודשים, יהיה הסינוס הפרונטלי יפותח מספיק כדי לספק סיוע בתהליך הסרת עצם הגולגולת. לבסוף, חתך שלם של חוט השדרה במהלך תהליך עריפת (איור 1B) חתך שלם של אוֹהֶל cerebellar dural (איור 3B) לפני שחרור המוח הסופי נדרשים לחלוטין על מנת למנוע נזק לאחר בגזע המוח. בחלק ממחקרים, זה עשוי להיות יתרון להיות חלק חוט השדרה הצווארי המקורי מצורף המוח.זה ניתן להשיג על ידי צבת חתך העריפה הראשוני (איור 1A) יותר caudally על הצוואר, המאפשר גישה אל חוט השדרה באמצעות דיסק צוואר רחם חולייתי במקום לצומת craniocervical, כפי שמודגם בסרטון הנוכחי. הסרת העצם האחורי יהיה אז צריך להתחיל מן lamina הזנב חשוף. מלבד זאת, הטכניקה תהיה דומה, ולכן חשוב לזכור כי חוט השדרה חייב להיות מחולק לחלוטין לפני העריפה תושלם עם סיומת חזקה ברמת הסעיף (איור 1). ההליך הנוכחי מודגם על חיות מבולבלות, כמו המחקר רקע בפועל חייב ניתוח HPLC של בלוטת יותרת המוח נגזר. הערה, עם זאת, כי הטכניקה הזהה משמשת על חיות מקובעות transcardially עם paraformaldehyde 3, 5, 14, 15, <sעד class = &quot;Xref&quot;&gt; 16, 17, 18, 19, 20, 25, 26, 27, 28, 31, למרות כל ההליכים במקרה כזה חייבים להתבצע תחת אוורור טוב שמספק במנדף 20. הבחירה של דיסקציה המקורי בניגוד הטוטו -fixation ו לנתיחה שלאחר מכן ולכן צריך לסמוך אך ורק על ההליך שלאחר העיבוד הנדרש (למשל, היסטולוגיה קונבנציונלי, אימונוהיסטוכימיה, HPLC, ודגים) 32. כפי שנאמר בפסקאות הבאה, העדפנו להשתמש בכלי כירורגיים הלא ממונע. הגולגולת של חזירים בגילאים מעל 1-2 שנים עשויה, עם זאת, להיות כל כך חזקה כי הסרת גולגולת עם Instr הפגיןuments לא אפשרי, יש צורך בהפעלת מכשירים ממונעים, כגון craniotomes, מסורי נדנוד, מקדחות חשמליות 32. במקרה כזה, הוא עדיין מומלץ לבצע את שלבי הפרוטוקול שצוינו לעיל, ובכך מנצל את נקודות כניסת גולגולת הטבעיות ופיתוח סינוס פרונטלי. הגישה הקדמית הציגה לבסיס הגולגולת היא אלגנטית וקלה, אך שחרורו הבוטה תאר של נורות ההרחה חייבת להתבצע ללא הדרכה ויזואלית ישירה (איור 3D), בניגוד שחרורו האחורי יותר של המוח (האיור 3EF). חלק הגחון של נורות הרחה עשוי אפוא סובל במידה מסוימת של ניזק בלתי מבוקר שרק ניתן להימנע, במידת הצורך, על ידי קידוח בבסיס הגולגולת הקדמי החוצה הגחון נורה לפני תהליך השחרור הוא יזם. שים לב המניפולציה, במיוחד של רקמת מוח מבולבלת במהלך הסרת גולגולת, כבר הצביעה כדי לגרום histologi<html> חפץ נוירון כהה קאל, אשר עלול להוביל למסקנות שגויות במחקרים neurotoxicological 33. תהליך הסרת עצם הגולגולת יכול גם להתבצע עם מכונות כמו craniotomes, מסורי נדנוד, מקדחות חשמליות 32. אלה עשויים לזרז את התהליך, אבל הם גם יגדילו את הסיכון של פגיעת המבנים העצביים הבסיסיים. ציוד כזה גם יכול להיות יקר יהיה זמין ככל הנראה למרבית המעבדות. לפיכך, אנו מעדיפים להפגין את ההליך הנוכחי באמצעות ציוד כירורגים הלא ממונע (לוח של חומרים) כי הוא קל לגשת ולהשתמש. הטכניקה המתוארת ואייר יהיה, כאשר משתמשים בו כראוי, לאפשר חשיפה והסרה של המוח חזיר לאחר המוות, יותרת המוח, ו / או בחוט השדרה הצווארי (איור 5), וכתוצאה מכך חתיכות רקמה שמתאימים היטב לניתוח מקרוסקופית נוספת&quot;Xref&quot;&gt; 5, 6, 19, 26, 31, חתך לתוך לוחות מוח 28, וניתוח כימי עוקב ו / או עיבוד היסטולוגית 6, 14, 15, 16, 17, 25, 26, 27, 31.

<html> מחקרים במדעי המוח Translational בחזירים הפכו פופולריים יותר ויותר במהלך שני העשורים האחרונים. גודלו של מוח החזיר מאפשר את שימוש הדמיה מוחית קליני קונבנציונלית והשימוש הישיר ובדיקה של נהלים נוירוכירורגיים וציוד מהמרפאה האנושית 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. בשנות ה 20 השנים האחרונות, חזירים, במיוחד minipigs (למשל, גטינגן Minipig), שימשו לבחון שיטות טיפול neuromodulatory, כגון השתלת תאי גזע; transfection וקטור ויראלי; גירוי מוחי עמוק מכוון מחלת פרקינסון, השמנה, דיכאון, אלצהיימר ומחלות 2, 6,= &quot;Xref&quot;&gt; 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. זה כבר ואחריו בפיתוח גישות stereotaxic וכירורגים לתפעל את Minipig 3 CNS, 18, 19, 20, 21. השינויים CNS הנהיג הוערכו בבעלי חיים באמצעות דימות המוח (10 PET, 13, 22, 24 ו MR 23), cystometry 11, 12, 25, ניתוח הליכה17, נוירולוגיות הערכה 9, 17, ו לבדיקה שלאחר המוות מבוסס על היסטולוגיה וניתוח stereological 14, 15, 17, 26, 27, 31. עם זאת, ניתוח שלאחר המוות מחייב חשיפה וסרה של מוח החזיר, אשר אינה משימה קלה, כמו גולגולת עבה, גרמית ו dural סיבי מכסים המקיפים את מוח החזיר. מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד מוח החזיר לאחר המוות ובלוטת יותרת המוח עלול להיחשף והוסרו במצב שלם ב 15-20 דקות באמצעות כלי כירורגיים הלא ממונע. וידאו ההדרכה ואיורי צילום להראות minipigs זכר (גיל: 6 חודשים, משקל גוף: 20-25 קילו) המשמש במחקר אנטומי על בלוטת יותרת מוח Minipig.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1036">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heavy Scalpel Handle #4</td>
			<td style="width:191px;">FST (Fine Science Tools)</td>
			<td style="width:149px;">10008-13</td>
			<td style="width:481px;">Good for skin incision and soft tissue removal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Sterile Scalpel Blades #23</td>
			<td style="width:191px;">FST&#160;</td>
			<td>10023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel Handle #7</td>
			<td style="width:191px;">FST&#160;</td>
			<td>10007-12</td>
			<td>Optimal for dural incision and precision work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Sterile Scalpel Blades #11</td>
			<td style="width:191px;">FST&#160;</td>
			<td>10011-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Forceps</td>
			<td style="width:191px;">FST&#160;</td>
			<td>11024-18</td>
			<td>The tip of the surgical forceps ensure a firm grip&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kerrison Bone Punch</td>
			<td style="width:191px;">Aesculap Neurosurgery</td>
			<td style="width:149px;">FF713R</td>
			<td>Must be robust, bite size 3-5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bone Rongeur</td>
			<td>Aesculap Neurosurgery</td>
			<td style="width:149px;">MD615</td>
			<td>Must be robust, bite size 15 x 5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bone Rongeur</td>
			<td>Aesculap Neurosurgery</td>
			<td style="width:149px;">FO551R</td>
			<td>Must be robust, bite size 25 x 15 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bone Chisel</td>
			<td>Lawton</td>
			<td>67-0335</td>
			<td>The size of the chisel head should not exceed 20 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mallet (Hammer)</td>
			<td>Millarco</td>
			<td>5624108</td>
			<td>Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-Scissor</td>
			<td>FST&#160;</td>
			<td>14002-14&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissector</td>
			<td>Aesculap Neurosurgery</td>
			<td style="width:149px;">OL165R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;G&#246;ttingen minipigs</td>
			<td style="width:191px;">&#160;Ellegaard G&#246;ttingen Minipigs A/S, Denmark</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Euthanimal</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td>pentobarbital</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine</td>
			<td style="width:191px;">Pfizer</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Midazolam&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Hameln Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

exposure of the pig cns for histological analysis: a manual for decapitation, skull opening, and brain removal

חזירים הפכו פופולריים יותר ויותר מחקרים במדעי translational גדול חיה כתחליף מבחינה כלכלית והן מבחינה מוסרית כדי פרימטים לא אנושיים. גודל המוח הגדול של החזיר מאפשר שימוש הדמיה מוחית קליני קונבנציונלית והשימוש הישיר והבדיקה של נהלים נוירוכירורגיים וציוד מהמרפאה האנושית. ניתוח מקרוסקופית היסטולוגית בהמשך, לעומת זאת, דורש חשיפה שלאחר המוות של מערכת העצבים המרכזית חזיר (CNS) והסרת המוח עוקבות. זו אינה משימה קלה, כמו החזיר CNS הוא כמוסה על ידי גולגולת עבה, גרומה עמוד שדרה. מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד לחשוף ולהסיר את מוח החזיר לאחר מוות ואת בלוטת יותרת המוח במצב שלם, מתאימה לניתוח מקרוסקופית היסטולוגית עוקב.

כדי למנוע את חומר רקמות מהתייבשות, מומלץ לאחסן את המוח הוסר יותרת בצנצנת מלאה מקבע או סליין איזוטוני מייד לאחר ניתוח מקרוסקופי שבוצע. חומר הרקמות ניתן לאחסן מקבע במשך שנים, ואילו אחסון סליין איזוטוני, אפילו במקרר, יוביל ריקבון רקמה עם זמן. בלוטת יותרת מוח הסיר עשוי גם להיות קפוא ישירות על ידי טבילה לתוך נוזל 2-methylbutane קרח מקורר יבש, ואילו מוח החזיר השלם הוא גדול מדי עבור מקפיא ישיר 28. במקום זאת, מומלץ לחתוך את המוח חזיר, כפי שמודגם בעבר 28, לתוך 9-15 מ&quot;מ לוחות רקמות העטרה במקביל עבה שיכול להיות קפוא טוטו cryostat-מחולק לתוך 40 מיקרומטר בעובי חלקים 5, 18, </sup&gt; 26, 28. לחלופין, אזורים ספציפיים במוח יכולים להיות חופשיים-גזור מן המוח השלם סיר או פרוס לוח המוח שהוגש עיבוד היסטולוגית נוסף לאחר חתך vibratome 30, פרפין / methacrylate הטבעה ו microtome חתך 6, 17, 27, או מקפיא cryostat חתך 6, 14, 15, 25. בהגדרה שלנו, על פגרי החזירים ממוקמים ולבסוף במכלי פלסטיק שצוינו ומאוחסני חדר קירור ייעודי עד שהם נאספים ומובלים למתקן משפיל ביולוגי. עם השימוש בכלי כירורגיים הלא ממונע (טבלה של חומרים), הטכניקה המתוארת (איורים 1 </stron<html> g&gt; - 3) מאפשר, ב כ 15-20 דקות, הסרת המוח חזיר שלם (איור 5AB), בעוד העצבים ובלוטת יותרת המוח גולגולתי הכרות נשארים מחוברים לרצפה הגולגולת (איור 4A). כמו כן, יותרת המוח ניתן להסיר פשוט, ללא פגע, לאחר הסרת המוח שמעליה ושחרור לסרעפת sellar dural (איור 4 ו -5 ג). המוח וכתוצאה מכך ו / או יותרת המוח (איור 5) ייתכן כי בהמשך יוגשו ניתוח מקרוסקופי כי, מלבד בדיקה ויזואלית ישירה, עשויים לכלול מדידות גודל ונפח 31. זה יכול להיות מלווה על ידי אוריינטציה חתך לתוך לוחות המוח קטן 28, 29 מתאים ניתוח כימי ו / או הכנה היסטולוגית נוספת, מכתים, ניתוח מיקרוסקופי 6,s = &quot;Xref&quot;&gt; 14, 15, 17, 25, 26, 27. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/55511/55511fig5.jpg" /> איור 5: מוח Minipig (A ו- B) ובלוטת יותרת המוח (C). (א) מוח, נוף laterodorsal (BS, גזע מוח; CB, מוח קטן; ו CRB, מוח גדול). (B) מוח, נוף גחון (BS, גזע מוח; CB, מוח קטן; ו CRB, מוח גדול). (ג) יותרת המוח, נוף האחורי (AH, adenohypophysis ו NH, neurohypophysis). בר סולם (A ו- B) = 10 מ&quot;מ, (C) = 5 מ&quot;מ. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55511/55511fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal at JoVE.com

Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד לחשוף ולהסיר את מוח חזיר לאחר המוות ואת בלוטת יותרת מוח במצב שלם, מתאים לניתוח מקרוסקופית היסטולוגית עוקב.

הסרת &quot;חוברת הדרכת עריפת הראש, פתיחת גולגולת, ו Brain: חשיפה של החזיר CNS לניתוח היסטולוגית

Pigs have become increasingly popular in large-animal translational neuroscience research as an economically and ethically feasible substitute to ...

exposure-pig-cns-for-histological-analysis-manual-for-decapitation

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Axial Skeleton

SCIENTISTS IN ACTION

15.3K Views.  Aalborg University Hospital.  מטרת נייר זה סרט הדרכה היא לתאר כיצד לחשוף ולהסיר את מוח חזיר לאחר המוות ואת בלוטת יותרת מוח במצב שלם, מתאים לניתוח מקרוסקופית היסטולוגית עוקב. 

Video: Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse Brain

In vivo imaging of cortical function requires optical access to the brain without disruption of the intracranial environment. We present a method to form a polished and reinforced thinned skull (PoRTS) window in the mouse skull that spans several millimeters in diameter and is stable for months. The skull is thinned to 10 to 15 &mu;m in thickness with a hand held drill to achieve optical clarity, and is then overlaid with cyanoacrylate glue and a cover glass to: 1) provide rigidity, 2) inhibit bone regrowth and 3) reduce light scattering from irregularities on the bone surface. Since the skull is not breached, any inflammation that could affect the process being studied is greatly reduced. Imaging depths of up to 250 &mu;m below the cortical surface can be achieved using two-photon laser scanning microscopy. This window is well suited to study cerebral blood flow and cellular function in both anesthetized and awake preparations. It further offers the opportunity to manipulate cell activity using optogenetics or to disrupt blood flow in targeted vessels by irradiation of circulating photosensitizers.

We present a method to form an imaging window in the mouse skull that spans millimeters and is stable for months without inflammation of the brain. This method is well suited for longitudinal studies of blood flow, cellular dynamics, and cell/vascular structure using two-photon microscopy.

מלוטשת מחוזק דליל, הגולגולת חלון הדמיה לטווח ארוך של מוח עכבר

In vivo imaging of cortical function requires optical access to the brain without disruption of the intracranial environment. We present a method to form ...

Co-analysis of Brain Structure and Function using fMRI and Diffusion-weighted Imaging

The study of complex computational systems is facilitated by network maps, such as circuit diagrams. Such mapping is particularly informative when studying the brain, as the functional role that a brain area fulfills may be largely defined by its connections to other brain areas. In this report, we describe a novel, non-invasive approach for relating brain structure and function using magnetic resonance imaging (MRI). This approach, a combination of structural imaging of long-range fiber connections and functional imaging data, is illustrated in two distinct cognitive domains, visual attention and face perception. Structural imaging is performed with diffusion-weighted imaging (DWI) and fiber tractography, which track the diffusion of water molecules along white-matter fiber tracts in the brain (Figure 1). By visualizing these fiber tracts, we are able to investigate the long-range connective architecture of the brain. The results compare favorably with one of the most widely-used techniques in DWI, diffusion tensor imaging (DTI). DTI is unable to resolve complex configurations of fiber tracts, limiting its utility for constructing detailed, anatomically-informed models of brain function. In contrast, our analyses reproduce known neuroanatomy with precision and accuracy. This advantage is partly due to data acquisition procedures: while many DTI protocols measure diffusion in a small number of directions (e.g., 6 or 12), we employ a diffusion spectrum imaging (DSI)1, 2 protocol which assesses diffusion in 257 directions and at a range of magnetic gradient strengths. Moreover, DSI data allow us to use more sophisticated methods for reconstructing acquired data. In two experiments (visual attention and face perception), tractography reveals that co-active areas of the human brain are anatomically connected, supporting extant hypotheses that they form functional networks. DWI allows us to create a "circuit diagram" and reproduce it on an individual-subject basis, for the purpose of monitoring task-relevant brain activity in networks of interest.

We describe a novel approach for simultaneous analysis of brain function and structure using magnetic resonance imaging (MRI). We assess brain structure with high-resolution diffusion-weighted imaging and white-matter fiber tractography. Unlike standard structural MRI, these techniques allow us to directly relate anatomical connectivity to functional properties of brain networks.

שיתוף ניתוח של מבנה המוח ותפקודו באמצעות fMRI ודיפוזיה משוקללת הדמיה

The study of complex computational systems is facilitated by network maps, such as circuit diagrams. Such mapping is particularly informative when ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, hippocampus, and the associated parahippocampal regions (perirhinal, entorhinal,&#160;and parahippocampal proper). Unlike most other tracing protocols available, typically focusing on certain MTL areas (e.g., amygdala and/or hippocampus), the integrative perspective adopted by the present tracing guidelines allows for clear localization of all MTL subregions. By integrating information from a variety of sources, including extant tracing protocols separately targeting various MTL structures, histological reports, and brain atlases, and with the complement of illustrative visual materials, the present protocol provides an accurate, intuitive, and convenient guide for understanding the MTL anatomy. The need for such tracing guidelines is also emphasized by illustrating possible differences between automatic and manual segmentation protocols. This knowledge can be applied toward research involving not only structural MRI investigations but also structural-functional colocalization and fMRI signal extraction from anatomically defined ROIs, in healthy and clinical groups alike.

The present work provides a comprehensive set of guidelines for manually tracing the medial temporal lobe (MTL) structures. This protocol can be applied to research involving structural and/or combined structural-functional magnetic resonance imaging (MRI) investigations of the MTL, in both healthy and clinical groups.

מקיף פרוטוקול לפילוח ידני של מבנים המדיאלי Temporal האונה

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at the synaptic level. The Active Zone (AZ) is the region at the presynaptic membrane that mediates neurotransmitter release and is composed of a dense collection of scaffold proteins. AZs of Drosophila melanogaster (Drosophila) photoreceptors undergo molecular remodeling after prolonged exposure to natural ambient light. Thus the level of neuronal activity can rearrange the molecular composition of the AZ and contribute to the regulation of the functional output.
Starting from the light exposure set-up preparation to the immunohistochemistry, this protocol details how to quantify the number, the spatial distribution, and the delocalization level of synaptic molecules at AZs in Drosophila photoreceptors. Using image analysis software, clusters of the GFP-fused AZ component Bruchpilot were identified for each R8 photoreceptor (R8) axon terminal. Detected Bruchpilot spots were automatically assigned to individual R8 axons. To calculate the distribution of spot frequency along the axon, we implemented a customized software plugin. Each axon&#39;s start-point and end-point were manually defined and the position of each Bruchpilot spot was projected onto the connecting line between start and end-point. Besides the number of Bruchpilot clusters, we also quantified the delocalization level of Bruchpilot-GFP within the clusters. These measurements reflect in detail the spatially resolved synaptic dynamics in a single neuron under different environmental conditions to stimuli.

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Here we show how to quantify the number and spatial distribution of synaptic active zones in Drosophila melanogaster&#160;photoreceptors, highlighted with a genetically encoded molecular marker, and their modulation after prolonged exposure to light.

ניתוח Synaptic אפנון של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור לאחר חשיפה לאור ממושך

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other neurological diseases at an increasing speed. However, little is known about the molecular mechanisms that underlie these disorders. The genetic, molecular, and behavioral toolbox of Drosophila melanogaster makes this model organism particularly useful to characterize new disease genes and mechanisms in a high-throughput manner. Nevertheless, high-throughput screens require efficient and reliable assays that, ideally, are cost-effective and allow for the automatized quantification of traits relevant to these disorders. The island assay is a cost-effective and easily set-up method to evaluate Drosophila locomotor behavior. In this assay, flies are thrown onto a platform from a fixed height. This induces an innate motor response that enables the flies to escape from the platform within seconds. At present, quantitative analyses of filmed island assays are done manually, which is a laborious undertaking, particularly when performing large screens.
This manuscript describes the &#34;Drosophila Island Assay&#34; and &#34;Island Assay Analysis&#34; algorithms for&#160;high-throughput, automated data processing and quantification of island assay data. In the setup, a simple webcam connected to a laptop collects an image series of the platform while the assay is performed. The &#34;Drosophila Island Assay&#34; algorithm developed for the open-source software Fiji processes these image series and quantifies, for each experimental condition, the number of flies on the platform over time. The &#34;Island Assay Analysis&#34; script, compatible with the free software R, was developed to automatically process the obtained data and to calculate whether treatments/genotypes are statistically different. This greatly improves the efficiency of the island assay and makes it a powerful readout for basic locomotion and flight behavior. It can thus be applied to large screens investigating fly locomotor ability, Drosophila models of movement disorders, and drug efficacy.

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

The island assay is a relatively new, cost-effective assay that can be used to evaluate the basic locomotor behavior of Drosophila melanogaster. This manuscript describes algorithms for automatic data processing and objective quantification of island assay data, making this assay a sensitive, high-throughput readout for large genetic or pharmacological screens.

ניתוח תפוקה גבוהה של התנהגות גינקולוגיות וזמינותו האי דרוזופילה

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, a multitude of novel clearing methodologies including CUBIC (clear, unobstructed brain imaging cocktails and computational analysis), SWITCH (system-wide control of interaction time and kinetics of chemicals), MAP (magnified analysis of the proteome), and PACT (passive clarity technique), have been established to further expand the existing toolkit for the microscopic analysis of biological tissues. The present study aims to improve upon and optimize the original PACT procedure for an array of intact rodent tissues, including the whole central nervous system (CNS), kidneys, spleen, and whole mouse embryos. Termed psPACT (process-separate PACT) and mPACT (modified PACT), these novel techniques provide highly efficacious means of mapping cell circuitry and visualizing subcellular structures in intact normal and pathological tissues. In the following protocol, we provide a detailed, step-by-step outline on how to achieve maximal tissue clearance with minimal invasion of their structural integrity via psPACT and mPACT.

Here, we present two novel methodologies, psPACT and mPACT, for achieving maximal optical transparency and subsequent microscopic analysis of tissue vasculature in the intact rodent whole CNS.

הרומן פסיבית ניקוי שיטות לייצור מהיר של שקיפות אופטית כל רקמה CNS

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent development of thin, flexible ECoG electrodes has enabled conduction of stable recordings of large-scale cortical activity. We have developed a whole-cortical ECoG array for the common marmoset. The array continuously covers almost the entire lateral surface of cortical hemisphere, from the occipital pole to the temporal and frontal poles, and it captures whole-cortical neural activity in one shot. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain. Marmosets have two advantages regarding ECoG recordings, one being the homologous organization of anatomical structures in humans and macaques, including frontal, parietal, and temporal complexes. The other advantage is that the marmoset brain is lissencephalic and contains a large number of complexes, which are more difficult to access in macaques with ECoG, that are exposed to the brain surface.These features allow direct access to most cortical areas beneath the surface of the brain. This system provides an opportunity to investigate global cortical information processing with high resolutions at a sub-millisecond order in time and millimeter order in space.

We have developed a whole-cortical electrocorticographic array for the common marmoset that continuously covers almost the entire lateral surface of cortex, from the occipital pole to the temporal and frontal poles. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain.

השרשה כרונית של מערך שלם-קורטיקליים Electrocorticographic ב המרמוסט נפוצות

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular systems, gastrointestinal systems, and nutrition, and the pig is increasingly being used as a large animal model in neuroscience. Furthermore, the pig is an accepted model to study neurodevelopment as it displays brain growth and development patterns similar to what occurs in humans. As a less common animal model in neuroscience, surgical and dissection procedures on pigs may not be as familiar or well-practiced among researchers. Therefore, a standardized visual protocol detailing consistent extraction and dissection methods may prove valuable for researchers working with the pig. The following video showcases a technique to remove the pig brain while keeping the cortex and brainstem intact and reviews methods to dissect several commonly investigated brain regions including the brainstem, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus, and medial prefrontal cortex. The purpose of this video is to provide researchers with the tools and knowledge necessary to consistently perform a brain extraction and dissection on the four-week-old pig.

This protocol details the technique for removal of the pig brain in its entirety and dissection of several brain regions commonly studied in neuroscience.

מיצוי וניתוק של מוח החזיר המבוית

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

In vivo Imaging of Fully Active Brain Tissue in Awake Zebrafish Larvae and Juveniles by Skull and Skin Removal

Understanding the ephemeral changes that occur during brain development and maturation requires detailed high-resolution imaging in space and time at cellular and subcellular resolution. Advances in molecular and imaging technologies have allowed us to gain numerous detailed insights into cellular and molecular mechanisms of brain development in the transparent zebrafish embryo. Recently, processes of refinement of neuronal connectivity that occur at later larval stages several weeks after fertilization, which are for example control of social behavior, decision making or motivation-driven behavior, have moved into focus of research. At these stages, pigmentation of the zebrafish skin interferes with light penetration into brain tissue, and solutions for embryonic stages, e.g., pharmacological inhibition of pigmentation, are not feasible anymore.
Therefore, a minimally invasive surgical solution for microscopy access to the brain of awake zebrafish is provided that is derived from electrophysiological&#160;approaches. In teleosts, skin and soft skull cartilage can be carefully removed by micro-peeling these layers, exposing underlying neurons and axonal tracts without damage. This allows for recording neuronal morphology, including synaptic structures and their molecular contents, and the observation of physiological changes such as Ca2+ transients or intracellular transport events. In addition, interrogation of these processes by means of pharmacological inhibition or optogenetic manipulation is feasible. This brain exposure approach provides information about structural and physiological changes in neurons as well as the correlation and interdependence of these events in live brain tissue in the range of minutes or hours. The technique is suitable for in vivo brain imaging of zebrafish larvae up to 30 days post fertilization, the latest developmental stage tested so far. It, thus, provides access to such important questions as synaptic refinement and scaling, axonal and dendritic transport, synaptic targeting of cytoskeletal cargo or local activity-dependent expression. Therefore, a broad use for this mounting and imaging approach can be anticipated.

Here we present a method to image the zebrafish embryonic brain in vivo upto larval and juvenile stages. This microinvasive procedure, adapted from electrophysiological approaches, provides access to cellular and subcellular details of mature neuron and can be combined with optogenetics and neuropharmacological studies for characterizing brain function and drug intervention.

In vivo הדמיה של רקמת מוח פעילה לחלוטין בזחלי דגי זברה ערים וצעירים על ידי הסרת גולגולת ועור

Understanding the ephemeral changes that occur during brain development and maturation requires detailed high-resolution imaging in space and time at ...