JH מבקש להכיר ולהודות מנטור, חבר ומנהל לשעבר ואלרי ברי עבור הראשון מלמד אותנו מודל זה; וגארי Woodnutt, שלימד אותנו את היסודות של השראה מחויבותנו בתחום PK / PD אנטיבקטריאלי. כל המחברים מבקשים להודות דוד פיין לתמיכה והערכתו המדע שלנו. ברצוננו להכיר לשעבר שלנו עמיתים מיקרוביולוגיה vivo שתרמו הגוף של נתונים שנוצרו באמצעות שיטות אלה, במיוחד פיט DeMarsh, רוב שטראוב, רוני פייג &#39;Nerissa סיימון. לבסוף, תודתנו ללכת העמיתים מיקרוביולוגיה במבחנה שלנו על עזר, במיוחד עבור מתן כל המיקרופונים אנו מבקשים (לין McCloskey, ג&#39;וש המערבי ושרון מינ &#39;); ועבור צוות מיקרוביולוגיה קלינית שלנו אשר מספק ייעוץ ותמיכה מומחה (לינדה מילר, ניקול Scangarella-עומאן ודבורה באטלר).

<ol>
	<li>Eagle, H., Fleischman, R., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous'+vs.+'discontinuous'+therapy+with+penicillin:+the+effect+of+the+interval+between+injections+on+therapeutic+efficacy.">Continuous' vs. 'discontinuous' therapy with penicillin: the effect of the interval between injections on therapeutic efficacy.</a> N Engl J Med. 248 (12), 481-488 (1953).</li><li>Eagle, H., Fleischman, R., Musselman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bactericidal+action+of+penicillin+in+vivo:+the+participation+of+the+host,+and+the+slow+recovery+of+the+surviving+organisms.">The bactericidal action of penicillin in vivo: the participation of the host, and the slow recovery of the surviving organisms.</a> Ann Intern Med. 33 (3), 544-571 (1950).</li><li>Vogelman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+antimicrobial+pharmacokinetic+parameters+with+therapeutic+efficacy+in+an+animal+model.">Correlation of antimicrobial pharmacokinetic parameters with therapeutic efficacy in an animal model.</a> J Infect Dis. 158 (4), 831-847 (1988).</li><li>Craig, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic/pharmacodynamic+parameters:+rationale+for+antibacterial+dosing+of+mice+and+men.">Pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters: rationale for antibacterial dosing of mice and men.</a> Clin Infect Dis. 26 (1), 1-12 (1998).</li><li>Ambrose, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics-pharmacodynamics+of+antimicrobial+therapy:+it's+not+just+for+mice+anymore.">Pharmacokinetics-pharmacodynamics of antimicrobial therapy: it's not just for mice anymore.</a> Clin Infect Dis. 44 (1), 79-86 (2007).</li><li>Ambrose, P. G., Bhavnani, S. M., Owens, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+pharmacodynamics+of+quinolones.">Clinical pharmacodynamics of quinolones.</a> Infect Dis Clin North Am. 17 (3), 529-543 (2003).</li><li>Andes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic+and+pharmacodynamic+properties+of+antimicrobials+in+the+therapy+of+respiratory+tract+infections.">Pharmacokinetic and pharmacodynamic properties of antimicrobials in the therapy of respiratory tract infections.</a> Curr Opin Inf Dis. 14 (2), 165-172 (2001).</li><li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+pneumonia.">Animal models of human pneumonia.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (3), L387-L398 (2008).</li><li>Lorian, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Antibiotics in laboratory medicine, 5th edition. Chapter 15: Evaluation of antimicrobials in experimental animal infections. , (2005).</li><li>McConnell, M. J., Actis, L., Pach&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acinetobacter+baumannii:+human+infections,+factors+contributing+to+pathogenesis+and+animal+models.">Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models.</a> FEMS Microbiol Rev. 37 (2), 130-155 (2013).</li><li>Nuermberger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pneumococcal+pneumonia+and+their+applicability+to+the+study+of+tissue-directed+antimicrobials.">Murine models of pneumococcal pneumonia and their applicability to the study of tissue-directed antimicrobials.</a> Pharmacotherapy. 25 (12 Pt 2), 134S-139S (2005).</li><li>Mehrad, B., Standiford, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+animal+models+in+the+study+of+inflammatory+mediators+of+pneumonia.">Use of animal models in the study of inflammatory mediators of pneumonia.</a> ILAR J. 40 (4), 167-174 (1999).</li><li>De Simone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+background+influences+the+response+to+the+opportunistic+Pseudomonas+aeruginosa+infection+altering+cell-mediated+immunity+and+bacterial+replication.">Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication.</a> PLoS ONE. 9 (9), (2014).</li><li>Smith, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+non-surgical+method+of+intrabronchial+instillation+for+the+establishment+of+respiratory+infections+in+the+rat.">A simple non-surgical method of intrabronchial instillation for the establishment of respiratory infections in the rat.</a> Lab Anim. 25 (1), 46-49 (1991).</li><li>Berry, V., Ferreira-Cornwell, M. C., Singley, C., Woodnutt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+experimental+murine+infections+caused+by+H.+influenzae+and+H.+parainfluenzae.">Development of experimental murine infections caused by H. influenzae and H. parainfluenzae.</a> Clin Microbiol Infect. 7 (S1), 322 (2001).</li><li>Miles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+cyclohexyl-amides+as+potent+antibacterials+targeting+bacterial+type+IIA+topoisomerases.">Novel cyclohexyl-amides as potent antibacterials targeting bacterial type IIA topoisomerases.</a> Bioorg Med Chem Lett. 21 (24), 7483-7488 (2011).</li><li>Miles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+tricyclics+(e.g.+GSK945237)+as+potent+inhibitors+of+bacterial+type+IIA+topoisomerases.">Novel tricyclics (e.g. GSK945237) as potent inhibitors of bacterial type IIA topoisomerases.</a> Bioorg Med Chem Lett. 26 (10), 2464-2469 (2016).</li><li>Hoover, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics/pharmacodynamics+of+peptide+deformylase+inhibitor+GSK1322322+against+Streptococcus+pneumoniae,+Haemophilus+influenzae,+and+Staphylococcus+aureus+in+rodent+models+of+infection.">Pharmacokinetics/pharmacodynamics of peptide deformylase inhibitor GSK1322322 against Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, and Staphylococcus aureus in rodent models of infection.</a> Antimicrob Agents Chemother. 60 (1), 180-189 (2016).</li><li>Berry, V., Hoover, J., Singley, C., Woodnutt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+bacteriological+efficacy+of+pharmacokinetically+enhanced+amoxicillin-clavulanate+against+Streptococcus+pneumoniae+with+elevated+amoxicillin+MICs+and+Haemophilus+influenzae.">Comparative bacteriological efficacy of pharmacokinetically enhanced amoxicillin-clavulanate against Streptococcus pneumoniae with elevated amoxicillin MICs and Haemophilus influenzae.</a> Antimicrob Agents Chemother. 49 (3), 908-915 (2005).</li><li>Czock, D., Markert, C., Hartman, B., Keller, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+antimicrobial+drugs.">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of antimicrobial drugs.</a> Expert Opin Drug Metab Toxicol. 5 (5), 475-487 (2009).</li><li>Drusano, G. L., Fregeau, C., Liu, W., Brown, D. L., Louie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+burden+on+granulocyte+clearance+of+bacteria+in+a+mouse+thigh+infection+model.">Impact of burden on granulocyte clearance of bacteria in a mouse thigh infection model.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54 (10), 4368-4372 (2010).</li><li>Miles, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+hydroxyl+tricyclics+(e.g.+GSK966587)+as+potent+inhibitors+of+bacterial+type+IIA+topoisomerases.">Novel hydroxyl tricyclics (e.g. GSK966587) as potent inhibitors of bacterial type IIA topoisomerases.</a> Bioorg Med Chem Lett. 23 (19), 5437-5441 (2013).</li><li>Hunt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleuromutilin+antibiotics.">Pleuromutilin antibiotics.</a> Drugs Future. 25 (11), 1163-1168 (2000).</li><li>Jin, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+LpxC+inhibitors+with+broad-spectrum+gram-negative+activity.">Novel LpxC inhibitors with broad-spectrum gram-negative activity.</a> Proceedings of the 44th National Organic Chemistry Symposium.. , (2015).</li><li>Singley, C., Page, R., Hoover, J., Elefante, P., DeMarsh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+a+LRS+inhibitor+GSK2251052+against+Enterobacteriaceae+isolates+using+a+computer-controlled+infusion+system+to+recreate+human+PK+profiles+in+rats.">Efficacy of a LRS inhibitor GSK2251052 against Enterobacteriaceae isolates using a computer-controlled infusion system to recreate human PK profiles in rats.</a> Clin Microbiol Infect. 17 (S4), S429-S430 (2011).</li><li>Berry, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+in+vivo+activity+of+gemifloxacin+in+a+rat+model+of+respiratory+tract+infection.">Comparative in vivo activity of gemifloxacin in a rat model of respiratory tract infection.</a> J Antimicrob Chemother. 45 (S1), 79-85 (2000).</li><li>Tsuji, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S-649266,+a+Novel+Siderophore+Cephalosporin:+Efficacy+against+Klebsiella+pneumoniae+producing+NDM-1+or+KPC+in+rat+lung+infection+model+with+recreated+humanized+exposure+profile+of+2+gram+dose+with+1+hour+and+3+hours+infusion.">S-649266, a Novel Siderophore Cephalosporin: Efficacy against Klebsiella pneumoniae producing NDM-1 or KPC in rat lung infection model with recreated humanized exposure profile of 2 gram dose with 1 hour and 3 hours infusion.</a> Open Forum Infect Dis. 1 (S1), S106-S107 (2014).</li><li>Tsuji, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Iron+Depleted+Mueller+Hinton+Broth+(IDMHB)+for+microdilution+testing+of+S-649266,+a+novel+siderophore+cephalosporin.">Use of Iron Depleted Mueller Hinton Broth (IDMHB) for microdilution testing of S-649266, a novel siderophore cephalosporin.</a> , (2016).</li><li>Singley, C., Hoover, J., DeMarsh, P. J., Elefante, P., Zalacain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+PDF+Inhibitor+GSK1322322+Against+Abscess+Infections+Caused+by+MRSA+Using+a+Computer-Controlled+Infusion+System+to+Recreate+Human+PK+Profiles+in+Rats.">Efficacy of PDF Inhibitor GSK1322322 Against Abscess Infections Caused by MRSA Using a Computer-Controlled Infusion System to Recreate Human PK Profiles in Rats.</a> , (2010).</li><li>Hoover, J., Mininger, C., Rittenhouse, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GSK2251052,+a+novel+LeuRS+inhibitor,+is+effective+against+multi-drug+resistant+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+mouse+pneumonia+model.">GSK2251052, a novel LeuRS inhibitor, is effective against multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa in a mouse pneumonia model.</a> Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2012).</li><li>Hoover, J., Mininger, C., Novick, S., Rittenhouse, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+GSK2140944+against+Streptococcus+pneumoniae+in+a+non-neutropenic+mouse+lung+infection+model.">Efficacy of GSK2140944 against Streptococcus pneumoniae in a non-neutropenic mouse lung infection model.</a> Proceedings of the 53rd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2013).</li><li>Hoover, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+a+lung+infection+model+to+predict+efficacy+in+community-acquired+pneumonia+(CAP)+caused+by+S.+pneumoniae+(SP).">Selection of a lung infection model to predict efficacy in community-acquired pneumonia (CAP) caused by S. pneumoniae (SP).</a> Proceedings of the 47th Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2007).</li><li>Drusano, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saturability+of+granulocyte+kill+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+murine+model+of+pneumonia.">Saturability of granulocyte kill of Pseudomonas aeruginosa in a murine model of pneumonia.</a> Antimicrob Agents Chemother. 55 (6), 2693-2695 (2011).</li><li>Peric, M., Browne, F. A., Jacobs, M. R., Applebaum, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+nine+oral+agents+against+gram-positive+and+gram-negative+bacteria+encountered+in+community-acquired+infections:+use+of+pharmacokinetic/pharmacodynamic+breakpoints+in+the+comparative+assessment+of+beta-lactam+and+macrolide+antimicrobial+agents.">Activity of nine oral agents against gram-positive and gram-negative bacteria encountered in community-acquired infections: use of pharmacokinetic/pharmacodynamic breakpoints in the comparative assessment of beta-lactam and macrolide antimicrobial agents.</a> Clin Ther. 25 (1), 169-177 (2003).</li><li>Calbo, E., Garau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+to+antimicrobial+therapy+of+community-acquired+respiratory+tract+infections.">Application of pharmacokinetics and pharmacodynamics to antimicrobial therapy of community-acquired respiratory tract infections.</a> Respiration. 72 (6), 561-571 (2005).</li><li>Bulik, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+pharmacokinetics-pharmacodynamics+of+GSK2140944+against+Staphylococcus+aureus+and+Streptococcus+pneumoniae+in+a+murine-thigh+infection+model.">Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2140944 against Staphylococcus aureus and Streptococcus pneumoniae in a murine-thigh infection model.</a> Proceedings of the 54th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2014).</li><li>Bulik, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+pharmacokinetics-pharmacodynamics+of+GSK2251052+against+gram-negative+bacilli+in+a+murine-thigh+infection+model.">Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2251052 against gram-negative bacilli in a murine-thigh infection model.</a> Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2012).</li><li>Andes, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+pharmacokinetics-pharmacodynamics+of+GSK2251052+against+gram-negative+bacilli+using+data+from+a+neutropenic+murine-pneumonia+infection+model.">Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2251052 against gram-negative bacilli using data from a neutropenic murine-pneumonia infection model.</a> Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2012).</li></ol>

המחברים כל משולמים לעובדי GlaxoSmithKline תרופות עצמו מניות בחברה.

להצלחה אופטימלית בשעתוק מודל זיהום זה, ההצעות הנוספות הבאות צריכות להיחשב. ארסיות של בידודים חדשים יכולה להיות מוגברת על ידי passaging 2 - 3 פעמים ב vivo לפני הניצול במחקר. מניות קפוא חיידקים צריכות תמיד להיות מוכנות מהמקור עיקרי in vivo מקור -derived עם קטעים מעטים ככל האפשר מן המקור, ו refreezing או שימוש חוזר של מניות מופשרות הוא מיואש. שימוש מבודדים קליני האחרון התאושש מחול עם דלקת ריאות, ו / או הכנת תרבויות בצמיחה בשלב יומן יכול גם לעזור לשפר את הקמת הזיהום. דילול פי חמישה לתוך אגר (למשל 2 השעיה מלוחה מיליליטר הוסיפה 8 אגרו מיליליטר) יכול לשמש במקום עשרה לקפל להגדיל את הבידוד חיידקי, ואת נפח הבידוד יכול להיות מותאם על פי הגודל של החיה (למשל 200 μL / בעלי חיים בדרך כלל מחוסן לתוך 250 חולדות גרם). לפני הוספת השעית החיידקים המלוחה לתוךאגר (כלומר שלב 2.3), צפיפות החיידקים ניתן לחזות או מוערך על ידי בדיקה ויזואלית, סטנדרטים מקפרלנד או מדידות צפיפות אופטיות. זה עוזר להכיר את מאפייני צמיחה במבחנה לכל לבודד לפני ביצוע בניסויי vivo. עקביות בצמיחה וטיפול מאפשרת הערכה המדויקת ביותר של צפיפות חיידקים לכל לבודד נתון. שיטות מיקרוביולוגית תקן שונות מאלה שתוארו, כגון תקשורת אלטרנטיבית ורקמות homogenizers, עשויות לשמש מתאים להכנת inocula ואת ספירת חיידקי רקמות נגועות. מומלץ מאוד להכין או להמיס את אגר יום לפני הניסוי ולאחסן אותו לילה באמבט מים נפרד להגדיר עד 50 מעלות צלזיוס. זה יפשט את התהליך ולעזור להישמר מפני אגר להיות חם מדי בזמן הזיהום. טמפרטורה של 41 - 42 מעלות צלזיוס משיגה איזון טוב בין maintaiנינג אגר במצב נוזלי מבלי להיות חם מדי להישרדות חיידקים לטווח קצר. כחלופה ניתן אגר מזין, אגר אצילי שימש בהצלחה בניסויים מסוימים. צינור אחד הבידוד אגר הוא בדרך כלל מספיק עבור ניסוי כולו (והוא מומלץ), אבל צינורות מרובים יכולים להיות מוכנים להדביק מספר רב של בעלי חיים (למשל יותר מ -60) או כאשר התהליך הדבקה לוקח יותר 30 - 45 דק &#39;אם צינורות בידוד דרושים מספר, מוסיף את השעית חיידקים המלוחה על צינור אחד של אגר כפי שהוא נדרש. הפעולה זו מפחיתה את הסיכון כי הישרדות חיידקים ו / או כושר תושפע בחשיפה ממושכת טמפרטורה גבוהה לפני החיסון. יצוין כי צינורות בידוד מרובים באמצעות עשויים גם לדרוש הליכים אקראיים בעלי חיים נוספים. במידת האפשר, להדביק את כל החיות מאותו הכנה הבידוד. מומלץ להתאים את גודל ניסויים לרמה הנוכחית של מיומנות עם technique. מדען מיומן יכול לצנרר לחסן חיה בתוך פחות מ -30 שניות לחסן עד 5 - 6 חיות לכל אצווה (כלומר עם מזרק אחד מלא של בידוד אגר). לאלו לימוד הטכניקה, המהירות חשובה כמו אגרתי תתחיל לחזק; עם זאת, מיקום מדויק של הבידוד חשוב יותר. להתחיל עם 1 או 2 חיות לכל תצווה, ולהגדיל את הטכניקה הופכת יותר מוכרת. החיות להמשיך לנשום במהלך אינטובציה; וכך, חלון הזמן עבור חיסון תלוי כמה מהר את החיה מתאוששת מן isoflurane, אשר צריך להיות כ 2 - 3 דקות. בעלי חיים המעוררים בתהליך ניתנים מחדש מורדמים ניסו בשנית, אבל זה לא מומלץ לעשות זאת שוב ושוב. חיסון מוצלח על הניסיון הראשון צפוי כמעט 100% של בעלי חיים פעם מושגת מיומנת. הערה שזה קל יותר ללמוד את הטכניקה באמצעות החולדות ראשונות; עכברים הם יותר עדין קטן מדיls נוטה יותר סתימה עם אגר הקרושה אם לא מניפולציות במהירות. מזרקים טרום התחממות, צינורות מלוחים כמו גם שמירה על מכשיר אינטובציה על משטח חם (לא חם), כגון כרית חימום על הגדרה נמוכה, יכול לעזור למנוע התמצקות של אגר. כאשר לומדים את הטכניקה, זה גם מועיל לתרגל מיקום נכון של הבידוד באמצעות צבע כהה (כגון מתילן כחול מרוכז) במקום השעית החיידקים אגרו. בצע את ההליך כמתואר, אבל להרדימו מיד לאחר חיסון של צבע (שאינו מאפשר את החיה להתאושש בין הרדמה המתת חסד). לנתח כדי לקבוע היכן לצבוע הושם, ולהתאים טכניקה בהתאם. המדד העיקרי במודל זה הוא CFU מריאות נגועות. הישרדות היא לא אינדיקטור טוב של נטל בקטריאלי אינו נקודת הסיום מומלץ. עבור מחקרי יעילות, ה- N הציע הוא 5 - 6 חיות לכל קבוצה כמו זה predicteד כדי לאתר ≥1 יומן 10 הבדלים CFU בין קבוצות עם כוח% 90 לפחות. ניתן בעקבות בעלי חיים יכולים להידבק בקבוצות כך חבריהם לכלוב להישאר ביחד, או תהליך אקראי אמיתי. שימו לב שאם קבוצות מוקצות על ידי כלוב, הקבוצות צריכות להיות נגועות ב רצף אקראי עם פקדי צמיחת סוף המחקר הנגועים אחרון (כדי לאשר הישרדות חיידקים / כושר לא היה מושפע משך הזמן החשוף טמפרטורה גבוהה באמבט מים). אין שיטות צנזורת נתונים צריכות להיות הכרחיות, ואף אחד המומלצים למעט סילוק המיידי של כל חיה כי כבר ברור mis-מחוסן בתחילת המחקר (לפני תחילת כל טיפול). בעלי חיים מומתים לפני תום המחקר צריכים להיות שנדגמו ותוצאות נכללות בנתונים להגדיר אלא סיבה טובה הדרה זוהתה באופן פרוספקטיבי (כלומר אירוע שאינו קשור זיהום או טיפול). שריד התרופה עלולה AFFect כמה דוגמאות והוא מהווה שיקול חשוב בכל דגמי זיהום in vivo. אם תרכובת ניתנת לעתים קרובות, בסמוך למועד של המתת חסד או יש זמן מחצית חיים ארוך, זה יכול להיות נוכח homogenate רקמות בריכוז גבוה מספיק כדי להמשיך להרוג חיידקים vivo לשעבר במהלך תהליך ספירה בקטריאלי (דילול ציפוי של הדגימות או על הצלחות אגרו במהלך דגירת הלילה). כדי למנוע זאת, פחם פעיל ו / או תוסף אשר מפרק את המולקולה הפעילה מבלי לפגוע תאי חיידקיים ניתן להוסיף המדגם לפני המגון. שיטות אחרות כוללות centrifuging הדגימות כדי להסיר את רוב המתחם הפעיל (שאמור להישאר supernatant) והעסיקו דילול שונה ציפוי מזימות כדי לדלל את המתחם הפעיל מספיק לריכוז שאינו מעכב. כפי שמעידה דוגמאות שניתן לראות בתרשים 2, מודל זה בהצלחה induces דלקות ריאות במכרסמים עם מגוון רחב של אורגניזמים כולל אלה שאינם גדלים גם במודלים אחרים (אינפלואנזה H. למשל). זיהומים אלה הם עקביים לשחזור, להקטין את הסבירות כי ניסויים יהיו צורך לחזור בשל כשל מודל ו / או ביצועים ירודים עם לבודד נתון. למרות החיות הן עם מערכת חיסון תקינות, הם אינם מסוגלים לפתור את הזיהום במהירות, אם בכלל. זה מאפשר גמישות רבה יותר אורך המחקר, כפי מבודד רבים לשמור על זיהום קיימא דרך לפחות 96 שעות ללא צורך בזריקות חוזרות ונשנות לשמור נויטרופניה. היתרון הפוטנציאלי של הלימוד יעיל אנטיבקטריאלי בחיות immunocompetent כבר ציין בעבר 20, 21, ויש ראיות לכך, עבור תרכובות מסוימות (למשל oxazolidinones), נתוני מכרסמים שאינם נויטרופני יכולים יותר לחזות במדויק במטרות חשיפה אנושיות בהשוואה לאלו נויטרופני שניתנה 5. השירות רב תכליתי של tהוא מודל מודגם איורים 3 ו -4 ובלוחות 1 ו 2. מחקרים אלה הם חלק מאוסף גדול של נתונים שהתפרסמו פורסם שנוצרה עם המודל הזה כדי לתמוך במאמצים אופטימיזציה להוביל 16, 17, 22-24, להשוואה והאישור של מינון אדם מוצע משטר 19, 25-29 ו לאפיון PK / PD 18, 30-32 .While המודל הזה הוא בתחילה מורכב יותר לנהל בהשוואה לשיטת משאיפת אף, ישנם יתרונות רבים כפי שתואר לעיל. בעזרת תרגול שימוש שיגרתי, הטכניקות צריכות להיות פשוטות לביצוע. ראוי לציין בחלק מהמחקרים כי הנטל חיידקי בתחילת המחקר היה נמוך מזה ממוקד בדרך כלל במודלים זיהום ריאה אחרות. הדבר נובע במידה רבה על הדילול הנדרש לתוך אגרתי ואת נפח האתגר הקטן, במיוחד אצל עכברים. עם זאת, ראוי גם לצייןהתפתחות חיידקים כי נתפסה בכל המקרים גם כאשר הנטל הראשוני היה נמוך יחסית. את עומס חיידקי בסיס היעד הוא 6 עד 6.5 יומן 10 ריאות CFU / (6.8 עד 7.3 יומן 10 CFU / g של רקמה בעכברי סמך משקל ריאות ממוצעות) אשר תואמת את הצפיפויות מוערכות בבני אדם עם דלקת ריאות חמורות 33. נטל בסיסי גבוה יותר ניתן להשיג על ידי התמקדות יותר את הבידוד חיידקי או על ידי וכתוצאה מכך התעכבה תחילת הממשל המתחם כדי לאפשר התפתחות חיידקים נוספים; עם זאת, להגדיל את העומס אתגר יותר מדי יכול להוביל למחלות קשות וחריף באופן חריג (כלומר מוות בתוך פחות מ -24 שעות) כי הוא עקשן לכל הטיפולים אנטיבקטריאלי קשר הרגישות. למרות הבידוד מושם בתחילה מועדף לתוך הריאה השמאלית של החיה, הזיהום מתפשט בדרך כלל ברחבי בשתי הריאות. מחלת ריאות מתקדמת, הפצת החיידקים לאיברים אחרים, ותחלואה סופית היא לעתים קרובות observאד עם ס pneumoniae, ק pneumoniae ו פ aeruginosa. מעניין, זיהומים עם אינפלואנזה ח ו baumannii א הם בדרך כלל יותר מאופקים, ורק לעתים רחוקות לגרום למוות בבית inocula החיידקים שנקבע. תוצאות יעילות המתקבלות במודל זה יש בקורלציה גם עם פרופילים רגישים במבחנה כמו גם מטרות PD PK / מוגדרות. צמצום הוצאה לנפש ניטלת חיידקים הם נצפו באופן שיגרתי עבור מבודד הנחשב רגיש הסוכן נבדק, בעוד אלה תערוכה העמידה הנחשב ללא שינוי או התפתחות חיידקים מעל הבסיס 16, 17, 19, 24-29. בניסויים שנערכו בחיות מעבדה הערכת שני quinolones וכן macrolide באמצעות מודל זה 32 הראו כי היעד PK / PD הנדרשים 1-log 10 הפחתת ס pneumoniae בהשוואה לנקודת ההתחלה בקורלציה עם יעד שנקבע עכברים נויטרופני, וחשוב יותר, עם מטרות קליניות pneum חיידקי נרכש בקהילה6 onia, 7, 34, 35. Gepotidacin, אנטיביוטיקה המנגנון החדשני, נוסתה נגד מספר ס pneumoniae ונזקק יעד דומה PK / PD הפחתה 1-log 10 במודל דלקת ריאות זה 31 כפי שדרשה הפחתה 1-log 10 במודל הירך נויטרופני 36 כאשר חדירת ריאות נלקחה בחשבון (נתונים על קובץ). באופן דומה, PK / המטרות PD שנקבעו עכברי GSK2251052 נגד פ aeruginosa תאמו עבור קיפאון, 1- ו -2-log 10 הפחתות CFU בין מודל ריאה זה 30 ואת מודל זיהום נויטרופני ירך כאשר חדירת ריאות נחשבות 37, 38 . מתאם עם מודל דלקת ריאות נויטרופני באמצעות חיסון אף היה עני; עם זאת, GSK2251052 לא לייצר יותר מאשר תגובה סטטית שלימוד 38. זה ניתן לייחס בידוד החיידקים הגבוה, אשר היה 8 יומן 10 CFU / עכבר לעומת 6 יומן <sub&gt; 10 CFU / עכבר אינטובציה נויטרופני הירך 37 ו intratracheal 30 דגמים. אוסף של נתונים כגון זה הוא קריטי עבור בהשוואות, שכן היא מאפשרת השוואה ישירה עם מודלים קיימים קורלציה עם נתונים קליניים על מנת להעריך את יכולת הניבוי של התרגום. עוד שימוש נרחב של מודל דלקת ריאות אינטובציה intratracheal יספק נתונים נוספים על אלו סוגים של ניתוחים. ישנן מספר מגבלות של מודל דלקת ריאות עם מערכת חיסון תקינה זו. ראשית, הוא לא מתאים היטב כדי להעריך הופעתה של התנגדות ספונטנית בגלל בידוד החיידקים הגבוה הנדרש בדרך כלל לתוצאות מחקרים כאלה חמורים מדי זיהום. בעקבות ניסיונות להשיג ניטל חיידקים של יומן 7 או 8 10 CFU בתחילת המחקר, תחלואה מהירה נצפתה (כלומר בעלי חיים הופכים הגוססת בתוך פחות מ -24 שעות) למרות שטיפה היסודית של inocula כדי לסלק רעלים קיימים (נתונים על קובץ). זהייתכן שתוכל להתגבר על בעיה זו באמצעות מכרסמים גדולים. חולדות, במיוחד חולדות כבדות (&gt; 250 גרם), מופיעות לסבול יותר inocula הגבוה לעומת עכברים עשויים להיות מתאים עבור סוגים אלה של מחקרים. מגבלה שנייה היא כי השימוש של אגר כמו משפר-זיהום עלול למנוע שימוש במודל להערכה של מארחת מסוימת: אינטראקציות הפתוגן. הוא האמין כי אגר מספק נקודה מוגנת מוקדים עד הזיהום הוא לקבוע באופן מלא בתוך הריאה. אפשר לספק את הבידוד מלוח ולא אגרתי כדי לעזור להתגבר על בעיה זו; עם זאת, יש לציין כי זו תייצר זיהום רק עם בידודים כמה. שלישית, קיימת עקומת למידה תלולה נדרש להיות בקיאים הטכניקה. ההליך יכול להיות עדין, במיוחד אצל עכברים. יקל בטעות למקום צינורית המתכת לתוך הוושט, ו בכוח מופרז יכול להוביל ניקוב או הוושט או קנה הנשימה. מיקום זהיר של הבידוד הוא גםנדרשים או או לא חיות לשחזר או לא להיות נגועות כראוי. עם זאת, עם סבלנות והתמדה, אפשר להיות מאוד מיומן לבצע את הטכניקה במהירות, בצורה חלקה ומדויק. על ידי ביטול הדרישה עבור נויטרופניה, הגדלת האיתנות שחזור, מאפשר לחוקרים ללמוד יותר פתוגנים ומבודד, שיפור הגמישות של תכנון הניסוי ומתן זיהום מאתגר לאפיין פרמקודינמיקה עבור דלקת ריאות, מודל דלקת ריאות עם מערכת חיסון תקינה זה מוסיף ערך משמעותי לגילוי האנטיביוטיקה קהילה. שימוש מוגבר של מודל זה על ידי חוקרים נוספים יעזור לספק את בהשוואות דרושים לכך שהוא יוכל להשיג הסכמה רחבה יותר ולהמשיך לספק מידע תומך פרשנות ראויה.

הערכת היעילות של לתרופות פוטנציאליות במודלים של בעלי חיים של זיהום הוא מרכיב קריטי של תהליך גילוי תרופות אנטיבקטריאלי. בשנת vivo מחקרי יעילות לספק נתונים חשובים לקבלת החלטות על פני האורך של מאמצי גילוי, מן הבהרת יחסים-פעילות מבנה (SAR) ואופטימיזציה סדרה כימית להוביל דרך קביעה-pharmacodynamic pharmacokinetic (PK / PD) מאפיינים של תרכובות ותמיכת בחירה במינון פיתוח ואישור רגולטורים קליניים. דגמים רבים זיהום חיה מתוארים בספרות למטרות אלה. אחד המודלים הנפוצים ביותר בשימוש נרחב הוא זיהום ירך עכבר נויטרופני, אשר היה חלוץ ידי 1 נשר, 2 והרחיבו לאחר מכן פוגלמן וקרייג 3, 4. מודל זה כבר לא יסולא בפז לתמיכת קביעת נקודות עצירה רגישה חיידקים למתן מטרות PK / PD להנחות מינון אדם. ישנם בחינה רבהPles שבהם היכולת החזויה של מודל זה הוכחה 4-7. עם זאת, אחד החסרונות של מודל זיהום הירך הוא חוסר הרלוונטיות ישירה למחל ריאה. כיום ישנו דגש רב יותר על התאמת האתר של זיהום במודלים של בעלי חיים לאתר של זיהום בבני אדם; וכך, ללמוד תרכובות לטיפול בדלקת ריאות, הוא אידיאלי כדי לנצל מודל דלקת ריאות בחיות. כמה שיטות גרימת זיהומים בריאות בחיות מעבדה תוארו ושימשו מחקרי יעילות אנטיבקטריאלי כולל שאיפה אפי, השאיפה דרך המסלול הלוע התחתון, חשיפה אירוסול, וכירורגי intratracheal חיסון 8. במקרים רבים, בעלי החיים (במיוחד עכברים) צריכים קודם כל להיות שניתנו נויטרופני על מנת להשיג זיהום ריאות חזק. למרות קשה זו מדינת מדוכאי חיסון, מספר חיידקים פתוגנים זנים אשר מייצרים זיהומי קיימא במכרסמים הואמוגבל. לדוגמה, זה יכול להיות קשה לקבוע אינפלואנזה המופילוס בהצלחה או baumannii Acinetobacter במודלים דלקת ריאות 9, 10, ופתוגנים אפילו יותר ארסית, כגון Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa ו Klebsiella pneumoniae, יכול להוות אתגר 11-13. בשנת 1991, סמית &#39;תארה מודל דלקת ריאות אצל חולדות יַנוּקָא immunocompetent שבו הזיהום הוקם על ידי הקניית חיידקים ישירות לריאות באמצעות שיטת אינטובציה intratracheal ניתוחית פשוט 14. ברי et al. מאוחר יותר שינה את שיטת הדבקת עכברים 15. שימוש בידוד אגר מבוסס, טכניקת חיסון זה גורמת למחל ריאה חזקות בשני חולדות ועכברים עם מערכת החיסון התקינות עם ס pneumoniae, H. אינפלואנזה, ק pneumoniae, פ aeruginosa ו baumannii א. זה מקובל מגוון רחב של בידודים, כולל אלה מחסה שונה להתנגדהגורם אהה ואלה אשר אינם מייצרים זיהום קיימא דרך נתיבי חיסון אחרים. זה גם מאפשר יעילות שתיקבע בחיות immunocompetent, מצב שבו הוא רלוונטי יותר מאשר דגם העכבר המסורתי נויטרופני עבור אוכלוסיות חולים שאינם מדוכאי חיסון קשה. העקביות והאמינות של המודל הזה על פני פתוגנים רבים ומבודדים עושות את זה היטב מתאים מחקרי יעילות אנטיבקטריאלי.

<table><tbody><tr><td>TSA II Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>4321261</td><td></td></tr><tr><td>Chocolate II Agar</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>4321267</td><td></td></tr><tr><td>BBL Brain Heart Infusion Broth Modified</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>299070</td><td></td></tr><tr><td>BBL Trypticase Soy Broth with 20% Glycerol</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>297808</td><td>storage media for frozen stock</td></tr><tr><td>Inoculating loop</td><td>Nunc</td><td>251586</td><td></td></tr><tr><td>0.9% Sodium Chloride, USP</td><td>Baxter Healthcare Corporation</td><td>NDC 0338-0048-04</td><td></td></tr><tr><td>Difco Nutrient Agar</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>213000</td><td></td></tr><tr><td>30 mL free standing centrifuge tube with cap</td><td>EverGreen Scientific</td><td>222-3530-G80</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Polypropylene Conical Tube 30 x 115 mm</td><td>Falcon, a Corning Brand</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube 17 x 100 mm</td><td>Falcon, a Corning Brand</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>Guide Tool</td><td>Intek Services Ltd</td><td>GT01</td><td>custom-made metal cannula for rats</td></tr><tr><td>90&#039; Portex tubing</td><td>SAI</td><td>POR-080-100</td><td>plastic cannula for rats</td></tr><tr><td>1 mL TB syringe slip tip</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide Needle 25 G x 5/8</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>Animal feeding needle - straight 20 x 3&quot; 2-1/4</td><td>Popper and Sons, Inc</td><td>7903</td><td>used to create metal cannula for mice</td></tr><tr><td>Intramedic polyethylene tubing</td><td>Clay Adams brand - Becton Dickinson and Company</td><td>427401</td><td>plastic cannula for mouse&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>75 TN 5.0 &amp;micro;L syringe 26s/2&quot;/2</td><td>Hamilton</td><td>87930</td><td>HPLC glass injection syringe</td></tr><tr><td>Pyrex tube, culture 25x150 screwcap with rubber liner</td><td>Corning</td><td>9825-25</td><td>to autoclave/store metal cannulae</td></tr><tr><td>70% isopropyl alcohol</td><td>Vi-Jon (Swan)</td><td>NDC 0869-0810-43</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-10</td><td></td></tr><tr><td>Stomacher&amp;nbsp;</td><td>Seward</td><td>Stomacher80</td><td></td></tr><tr><td>Stomacher 80 classic bags</td><td>Seward</td><td>BA6040</td><td></td></tr><tr><td>Assay plate, 96 well, round bottom</td><td>Costar, Corning Inc</td><td>3795</td><td>optional, for serial diluting</td></tr><tr><td>Blood Omni Plates</td><td>Hardy</td><td>#A127</td><td>optional, rectangular blood plates</td></tr></tbody></table>

a robust pneumonia model in immunocompetent rodents to evaluate antibacterial efficacy against s. pneumoniae, h. influenzae, k. pneumoniae, p. aeruginosa or a. baumannii

יעילות של טיפולים אנטי-בקטריאלי מועמד חייבת להיות מופגנת במודלים של בעלי חיים של זיהום כחלק מתהליך הגילוי ופיתוח, רצוי במודלים אשר לחקות את האינדיקציה הקלינית המיועדת. שיטת התרמת דלקות ריאות חזקות אצל חולדות ועכברים עם מערכת חיסון תקינים מתוארת אשר מאפשרת ההערכה של טיפולים במודל של דלקת ריאות חמורות הנגרם על ידי S. pneumoniae, H. אינפלואנזה, פ aeruginosa, ק pneumoniae או baumannii א. בעלי חיים מורדמים, וכן בידוד אגר מבוססת מופקד עמוק לתוך הריאות באמצעות אינטובציה intratracheal הניתוחית. הזיהום הנובע עולה בקנה אחד, לשחזור, ויציב לפחות 48 שעות ועד 96 שעות עבור רוב הבידודים. מחקרים עם antibacterials משווקים הוכיחו קורלציה טובה בין יעילות in vivo ו רגישות במבחנה, הלימה בין מטרות pharmacokinetic / pharmacodynamic נקבעהבמודל זה ויעדים קבלו קליני נצפה. אמנם יש השקעה ראשונית זמן כאשר לומדים את הטכניקה, זה יכול להתבצע במהירות וביעילות פעם מיומנת מושג. יתרונות של המודל כוללים חיסול של דרישת נויטרופני, חוסן מוגבר שחזור, יכולת ללמוד יותר פתוגנים ומבודדים, גמישות משופרת בעיצוב מחקר והקמת זיהום מאתגר מארח עם מערכת חיסון תקין.

Watch this Scientific Journal Video about A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. אינפלואנזה</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; או<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

a-robust-pneumonia-model-immunocompetent-rodents-to-evaluate

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

14.5K Views.  GlaxoSmithKline. A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

Video: A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

כרוני לטווח ארוך<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; זיהום דרכי הנשימה בעכברים

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. Despite advances in knowledge of this illness, the availability of intensive care units (ICU), and the use of potent antimicrobial agents and effective vaccines, the mortality rates remain high1. Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen of community-acquired pneumonia (CAP) and one of the most common causes of bacteremia in humans. This pathogen is equipped with an armamentarium of surface-exposed adhesins and virulence factors contributing to pneumonia and invasive pneumococcal disease (IPD). The assessment of the in vivo role of bacterial fitness or virulence factors is of utmost importance to unravel S. pneumoniae pathogenicity mechanisms. Murine models of pneumonia, bacteremia, and meningitis are being used to determine the impact of pneumococcal factors at different stages of the infection. Here we describe a protocol to monitor in real-time pneumococcal dissemination in mice after intranasal or intraperitoneal infections with bioluminescent bacteria. The results show the multiplication and dissemination of pneumococci in the lower respiratory tract and blood, which can be visualized and evaluated using an imaging system and the accompanying analysis software.

Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen causing severe community-acquired pneumonia and responsible for over 2&#160;million deaths worldwide. The impact of bacterial factors implicated in fitness or virulence can be monitored in real-time in an acute mouse pneumonia or bacteremia model using bioluminescent bacteria.

בעקבות בזמן אמת השפעת גורמי דלקת ריאות ארסיים בעכבר דלקת ריאות דגם אקוטי באמצעות חיידקי Bioluminescent

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. Here we have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa or PA). Using this model, we were able to show lung inflammation at the early phase of injury. In addition, alveolar epithelial barrier leakiness was observed by analyzing bronchoalveolar lavage (BAL); and alveolar cell death was observed by Tunel assay using tissue prepared from injured lungs. At a later phase following injury, we observed cell proliferation required for the repair process. The injury was resolved 7 days from the initiation of P. aeruginosa injection. This model mimics the sequential course of lung inflammation, injury and repair during pneumonia. This clinically relevant animal model is suitable for studying pathology, mechanism of repair, following acute lung injury, and also can be used to test potential therapeutic agents for this disease.

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

לומד קהילות חיידקים<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של אינטראקציה בתיווך בין מארח<em&gt; קנדידה אלביקנס</em&gt; ו<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; באיירווייס

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

A Precise Pathogen Delivery and Recovery System for Murine Models of Secondary Bacterial Pneumonia

Secondary bacterial pneumonias following influenza infections consistently rank within the top ten leading causes of death in the United States. To date, murine models of co-infection have been the primary tool developed to explore the pathologies of both the primary and secondary infections. Despite the prevalence of this model, considerable discrepancies regarding instillation procedures, dose volumes, and efficacies are prevalent among studies. Furthermore, these efforts have been largely incomplete in addressing how the pathogen may be directly influencing disease progression post-infection. Herein we provide a precise method of pathogen delivery, recovery, and analysis to be used in murine models of secondary bacterial pneumonia. We demonstrate that intratracheal instillation enables an efficient and accurate delivery of controlled volumes directly and evenly into the lower respiratory tract. Lungs can be excised to recover and quantify the pathogen burden. Following excision of the infected lungs, we describe a method to extract high quality pathogen RNA for subsequent transcriptional analysis. This procedure benefits from being a non-surgical method of delivery without the use of specialized laboratory equipment and provides a reproducible strategy to investigate pathogen contributions to secondary bacterial pneumonia.

Here, we present methods to improve secondary bacterial pneumonia studies by providing a non-invasive route of instillation into the lower respiratory tract followed by pathogen recovery and transcript analysis. These procedures are reproducible and can be performed without specialized equipment such as cannulas, guide wires, or fiber optic cables.

משלוח הפתוגן מדויק מערכת השחזור של מודלים Murine של דלקת ריאות משנית בקטריאלי

Secondary bacterial pneumonias following influenza infections consistently rank within the top ten leading causes of death in the United States. To date, ...

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative pathogens. Infectious pneumonia is among the most common infections presented by patients in the clinic and thus warrants an appropriate in vivo model. Typical pneumonia models use intranasal inoculation, which deposits excessive organisms outside the lung, causing off-target complications and symptoms, such as sinusitis, gastritis, enteritis, physical trauma, or microparticle misting to mimic aerosol spread more typical of viral, tuberculous, or fungal pneumonia. These models do not accurately reflect the pathogenesis of typical community- or healthcare-acquired bacterial pneumonia. In contrast, this murine model of oropharyngeal aspiration pneumonia mimics the droplet route in healthcare-acquired pneumonia. Inoculating 50 &#181;L of the bacteria suspension into the oropharynx of anesthetized mice causes reflexive aspiration, which results in pneumonia. With this model, one can examine the pathogenesis of pneumonia-causing pathogens and new treatments to combat these diseases.

Infectious pneumonia is among the most common infections in human. An appropriate in vivo model is critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics. With this murine oropharyngeal aspiration pneumonia model, one can examine the pathogenesis and new treatments against these deadly infections.

השאיפה הלוע התחתון מאתר מודל של הנשמה-הקשורים ו רכשה החולים בדלקת ריאות חיידקית

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

Medicine

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic pathogen upon influenza A virus (IAV) infection. Advanced age enhances host susceptibility to secondary pneumococcal pneumonia and is associated with worsened disease outcomes. The host factors driving those processes are not well defined, in part due to a lack of animal models that reproduce the transition from asymptomatic colonization to severe clinical disease. 
This paper describes a novel mouse model that recreates the transition of pneumococci from asymptomatic carriage to disease upon viral infection. In this model, mice are first intranasally inoculated with biofilm-grown pneumococci to establish asymptomatic carriage, followed by IAV infection of both the nasopharynx and lungs. This results in bacterial dissemination to the lungs, pulmonary inflammation, and obvious signs of illness that can progress to lethality. The degree of disease is dependent on the bacterial strain and host factors. 
Importantly, this model reproduces the susceptibility of aging, because compared to young mice, old mice display more severe clinical illness and succumb to disease more frequently. By separating carriage and disease into distinct steps and providing the opportunity to analyze the genetic variants of both the pathogen and the host, this S. pneumoniae/IAV co-infection model permits the detailed examination of the interactions of an important pathobiont with the host at different phases of disease progression. This model can also serve as an important tool for identifying potential therapeutic targets against secondary pneumococcal pneumonia in susceptible hosts.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

This paper describes a novel mouse model for the transition of pneumococcus from an asymptomatic colonizer to a disease-causing pathogen during viral infection. This model can be readily adapted to study polymicrobial and host-pathogen interactions during the different phases of disease progression and across various hosts.

מודל עכברי למעבר של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס מקולונייזר לפתוגן עם זיהום משותף ויראלי מחזיר מחלה המחמירה בגיל

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Experimental Model to Evaluate Resolution of Pneumonia

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) causes acute lung injury, characterized by rapid alveolar damage and severe hypoxemia. This, in turn, leads to high morbidity and mortality. Currently, there are no pre-clinical models that recapitulate the complexity of human ARDS. However, infectious models of pneumonia (PNA) can replicate the main pathophysiological features of ARDS. Here, we describe a model of PNA induced by the intratracheal instillation of live Streptococcus pneumoniae and Klebsiella pneumoniae in C57BL6 mice. In order to evaluate and characterize the model, after inducing injury, we carried out serial measurements of body weight and bronchoalveolar lavage (BAL) for measuring markers of lung injury. Additionally, we harvested lungs for cell count and differentials, BAL protein quantification, cytospin, bacterial colony-forming unit counts, and histology. Lastly, high dimensional flow cytometry was performed. We propose this model as a tool to understand the immune landscape during the early and late resolution phases of lung injury.

This manuscript describes the establishment of an infectious model of pneumonia in mice and the respective characterization of injury resolution along with methods for growing bacteria and intratracheal instillation. A novel approach using high-dimensional flow cytometry to evaluate the immune landscape is also described.

מודל ניסיוני להערכת רזולוציה של דלקת ריאות

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) causes acute lung injury, characterized by rapid alveolar damage and severe hypoxemia. This, in turn, leads to ...

Preparation of Agar Bead Embedded Mycobacterium abscessus to Inoculate Immunocompetent Mice Intratracheally

Robust mouse models of chronic infection with Mycobacterium abscessus, an environmental pathogen that preferably infects the lungs, are badly needed. Year-long multidrug therapies deliver unacceptably poor cure rates in patients, around 50%, hence the need for predictive preclinical tools to develop better antibiotics. However, immunocompetent mice are generally resistant to pulmonary infection by M. abscessus. Numerous attempts to establish a sustained infection with M. abscessus in immunocompetent mice have been reported in the literature. Among these, methods relying on agar bead-embedded bacteria inoculated into C57BL/6 mice via the intratracheal route have proven most promising. The major limitation of this approach is the technical challenge associated with the preparation of agar beads of reproducible size and bacterial numbers, followed by intratracheal inoculation. Here, we first provide a detailed description of an optimized protocol that delivers M. abscessus-loaded agar beads of optimal diameter and reproducible bacterial burden. Next, we provide a detailed protocol of intratracheal inoculation, optimized to avoid losses of beads and bacteria due to adherence to surfaces of the inoculation devices and to achieve reproducible pulmonary deposition of agar-embedded M. abscessus. The objective is to ensure ease of implementation and excellent lab-to-lab reproducibility.

Mice are generally resistant to infections by Mycobacterium abscessus, which complicates the discovery and development of much-needed antibiotics against pulmonary infections. Here, we describe a method of inoculum preparation and intratracheal infection that was shown to deliver sustained infection in immunocompetent mice.

Robust mouse models of chronic infection with Mycobacterium abscessus, an environmental pathogen that preferably infects the lungs, are badly needed. ...

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

כרוני לטווח ארוך