The study was supported by the Swiss National Foundation [SNF 310030-149986 to MNG], the University of Fribourg, and Fribourg Hospital.

כל החיות קיבלו טיפול אנושי בהתאם לאמנה האירופית על טיפול בבעלי חיים. הליכים כירורגיים בוצעו בהתאם לחוק צער בעלי חיים השוויצרי לאחר קבלת אישור של משרד וטרינר ממשלתי, פריבורג, שאושר על ידי משרד וטרינרית הפדרלי השוויצרי, שוויץ. קציר לב 1. הערה: כל התערבות כירורגית בוצעו תחת הרדמה isoflurane. נעשו מאמצים להקטין סבל לבעלי חיים. בפרט, כל החיות קיבלו הזרקה תת עורית של 0.1 מ&quot;ג /-הרדמה מראש עצירות ק&quot;ג. הפרוטוקול כירורגית עבור inducting אוטם שריר לב תואר בעבר במקום אחר 13. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע sternotomy על חית myocardially אוטמת בהרדמה (חיה מחוברת לצינורות, 2.5% isoflurane, הרדמה תקינה אושר על ידי רפלקס קמצוץ כפה). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את החיה על ידי חיתוך העור ולאחר מכן את השריריםעם מספריים כירורגיות. חותכים את הצלעות על ימין ועל שמאל, ולאחר מכן הסר את החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את ההידבקויות הנותרות לאחר הניתוח הקודם (קשירת LAD). חותכים את אבי העורקים ולהסיר את הלב. שים את רקמות 1 M KCl (PBS), ולאחר מכן לשטוף אותו עם PBS. </li></ol></li></ol> 2. רקמות הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב אוטם אורכי מטריקס לב עכברוש אקריליק. שמור את זה ב -20 מעלות צלזיוס במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הלב ישירות במטריצה ​​באמצעות סכין גילוח עם משוכל. ודא כל פרוסה הוא בעובי 2 מ&quot;מ. חותך כ 5 - 7 שקופיות עבור כל לב (בהתבסס על רמת השיפוץ); זה נקרא דגימה שיטתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, ביצוע כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium מכתים (TTC) הוא אופציונלי (לשמור על הכיוון של base-to-איפקס פרוסות הלב). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגירים TTC 1% ב PBS במשך 50 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. דגירה זה paraformaldehyde 4% (PFA) במשך 20 דקות עד 1 שעה. שים את הסעיפים between שני לוחות זכוכית עם מפרידי 2 מ&quot;מימ ומצלמים עם מיקרוסקופ stereological מצמיד עם מצלמה בהגדלה 15X. זְהִירוּת! Paraformaldehyde רעיל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפאת שקופיות (אפשרות st 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים כל שקופית בתוך תבנית פלסטיק (10 x 10 x 5 מ&quot;מ) עם הרכבה בינונית עבור cryotomy (הטמפרטורה חיתוך אופטימלי, אוקטובר), לשמור על האוריינטציה (למקם את הצד איפקס מונחה של הסעיף למטה בחלק התחתון של עובש). להקפיא את אובניים עם אדי 2-methylbutane תחת חנקן נוזל קירור במשך 10 - 15 דקות. לבסוף, לאחסן את הרקמה ב -80 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Paraffinization (2 אפשרות nd) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח כל שקופית הטבעת קלטות (לשמור על האורינטציה על ידי נחת צד אורינטציה-איפקס של הסעיף למטה בחלק התחתון של הקלטת) ולאחר מכן ב 4% PFA למשך 24 שעות. שים את זה בתוך לילה מכונה מעבד רקמות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה זה 70% אתנול עבור שעה 2. דגירה זה ethanol 95% עבור 2 שעות. דגירה זה 100% אתנול עבור 3 שעות. דגירה זה xylol עבור 4 שעות. דגירה זה פרפין (מותכת ב 60 ° C בתנור) במשך 5 שעות. לבסוף, לעשות בלוקים על ידי הטבעת כל שקופית לב פרפין. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. מסון-גולדנר Trichrome מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך קטעי רקמה מבלוקים פרפין עם microtome ידנית (עובי: מיקרומטר 5) או מבלוקים אוקטובר עם cryostat מוגדר -18 ° C (עובי: מיקרומטר 7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם שקופיות אחד מכל חלק לב לכל חולדה (3 - 4 חלקים משוכל לכל שקופית) עם מסון-גולדנר trichrome מכתים (ראה נספח). הערה: התחל שלב זה עבור חלקי פרפין. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את השקופיות ב 60 מעלות צלזיוס בתנור. מתחת למכסה מנוע קטר, deparaffinize אותם xylol פעמים במשך 10 דקות כל אחד. רעננותם אותם אתנול 100%, 95% אתנול, 70% אתנול, ומים מזוקקים במשך 3 דקות כל אחד. הערה: התחל שלב זה עבור cryosectionים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן אותם לילה פתרון Bouin. לאחר מכן, לשטוף אותם במים זורמים מהברז במשך 10 - 15 דקות. יש לשטוף אותם במים מזוקקים. דגירה אותם hematoxylin של מאייר במשך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את השקופיות ולהשאיר אותם במים מזוקקים למשך 5 דקות. לאחר מכן, דגירה אותם בחומצה Fuchsin-Ponceau למשך 5 דקות. יש לשטוף אותם 1% חומצה אצטית 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, דגירה אותם בחומצה phosphomolybdic אורנג G דקות 1. יש לשטוף אותם 1% חומצה אצטית דקות 1, דגירה אותם לצבוע בצבע ירוק בהיר במשך 10 דקות, ולשטוף אותם בחומצת 1% אצטית דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבש אותם אתנול 70% (30 שניות), 95% אתנול (30 שניות), ו -100 אתנול% (5 דקות). לשים טיפה אחת של הרכבה בינונית שרף על סעיפי רקמות, לכסות אותם עם coverslips, ולתת להם להתייבש. </li></ol></li></ol> 4. ניתוח גודל האוטם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סריקתתמונה אחד מכל להחליק על (בהגדלה 15X) סטראו יחד עם המצלמה. לצלם שליט עם אותה הגדרהים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנת ניתוח תמונה כדי למדוד את עובי הצלקת באמצע האוטם, עובי מחצה, חדר השמאלי באזור החלל (LV), באזור האוטם, ואזור רקמת LV משתמש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קנה המידה עם התמונה השלטת (איור 1 א). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקישו על מדידות ולאחר מכן בחר Set המרה גורם. צייר קו בסרגל הכיול. קליק ימני על התמונה ולחץ על כיול הסוף. הערת הערך הבר, ולאחר מכן לחץ על אישור. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את LV מתמונת הלב המוכתם (האיור 1B). השתמש בכלי סגמנטים רבים. בחר את הנקודה-ידי נקודות LV, קליק ימני ואז העתק / הדבק בכל מקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את עובי הצלקת מחצה באמצעות כלי מדידה למגזר אחד (איור 1 ג </stרונג&gt;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זיהוי אוטומטי של החלל, אוטם LV, ואזורי LV שימוש באפשרות מדידת השטח האוטומטית במצב RGB (1D איור). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הכלי. הפעל רק גבולות רציף במצב RGB. לבסוף, לחץ בתוך השטח של עניין לזהות אותו. במידת הצורך, להשתמש בכלי דיוק. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את גודל האוטם כיחס באזור האוטם לאזור LV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב המדד הרחבה כדלקמן: [אזור חלל LV / כל אזור LV] / [עובי אוטם / עובי מחצה], עם אזור LV כולו כולל הוא את חלל LV ואזורי רקמות LV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, חשב &quot;ממוצע&quot; עבור כל לב כדלקמן: [ממוצע של מדד הרחבה מן השקופיות האוטמות] [מספר השקופיות אוטמות / סה&quot;כ שקופיות] *. </li></ol>

<ol>
	<li>Amsterdam, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AHA/ACC+Guideline+for+the+Management+of+Patients+with+Non-ST-Elevation+Acute+Coronary+Syndromes:+a+report+of+the+American+College+of+Cardiology/American+Heart+Association+Task+Force+on+Practice+Guidelines.">AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines.</a> J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).</li><li>Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Left+ventricular+remodeling+in+heart+failure:+current+concepts+in+clinical+significance+and+assessment.">Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment.</a> JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).</li><li>Frobert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+Value+of+Troponin+I+for+Infarct+Size+to+Improve+Preclinical+Myocardial+Infarction+Small+Animal+Models.">Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models.</a> Front Physiol. 6, 353 (2015).</li><li>Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarct+size+and+area+at+risk+assessment+in+mice.">Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice.</a> Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).</li><li>Guex, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma-functionalized+electrospun+matrix+for+biograft+development+and+cardiac+function+stabilization.">Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization.</a> Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).</li><li>Landa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+injectable+alginate+implant+on+cardiac+remodeling+and+function+after+recent+and+old+infarcts+in+rat.">Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat.</a> Circulation. 117, 1388-1396 (2008).</li><li>Valente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+heart+sampling+and+systematic+evaluation+of+cardiac+therapies+inmouse+models+of+ischemic+injury:+Assessment+of+cardiacremodeling+and+semi-automated+quantification+of+myocardial+infarctsize.">Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize.</a> Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).</li><li>Csonka, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+myocardial+infarct+size+in+preclinical+studies.">Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).</li><li>Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+myocardium+infarction+in+rats:+Analysis+of+the+model.">Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model.</a> Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).</li><li>Lichtenauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarct+size+measurement+using+geometric+angle+calculation.">Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation.</a> Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).</li><li>Lutgens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+myocardial+infarction+in+the+mouse:+cardiac+structural+and+functional+changes.">Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes.</a> Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).</li><li>Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-based+therapy+for+heart+failure+in+rat:+double+thoracotomy+for+myocardial+infarction+and+epicardial+implantation+of+cells+and+biomatrix.">Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix.</a> J Vis Exp. , e51390 (2014).</li><li>Takagawa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarct+size+measurement+in+the+mouse+chronic+infarction+model:+comparison+of+area-+and+length-based+approaches.">Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches.</a> J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).</li><li>Fishbein, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+phase+acute+myocardial+infarct+size+quantification:+validation+of+the+triphenyl+tetrazolium+chloride+tissue+enzyme+staining+technique.">Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique.</a> Am Heart J. 101, 593-600 (1981).</li><li>Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+myocardial+infarct+expansion.">Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion.</a> Circulation. 78, 186-201 (1988).</li><li>Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+administration+after+myocardial+infarction+promotes+early+infarct+expansion.+A+study+in+the+rat.">Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat.</a> J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול רקמת פיברוטית ניתן להעריך במדויק במודל חולדה כרוני MI באמצעות דגימה שיטתית של לב שנקטף ותמונת מנתח סעיפים היסטולוגית מוכתמת טריים-כרומטית המתקבלים בסיס לקודקוד. שני צעדים חשובים במיוחד עבור יישום פרוטוקול מוצלח. ראשית, השימוש KCl לקציר הלב מאפשר שריר הלב להישמר במצב רגוע. שלב זה חשוב להשוואות של ממדים אוטמים מלבבות שונות. שנית, קיבעון הלילה של הסעיף בתמיסת Bouin הוא קריטי להשגת מכתים trichrome בהיר. שינויים ופתרון בעיות עדר מכתים יכול להיות בגלל קשיים במהלך הקיבעון של הסעיף בתמיסת Bouin, כגון זמן דגירה מופחת או פג פתרונות Bouin. מכתים TTC הוא אופציונאלי could לשמש כדי להמחיש את גודל האוטם בצורה מהירה אך הלא-כמותי. חשוב לציין כי TTC יכול להתבצע עבור אותו הלב, לפני הכללת או אוקטובר או פרפין. מגבלות של הטכניקה הגישה הנוכחית מתירה לך לבחור בין סעיפי לב פרפין מוטבעים השתמר קריו וניתן להשתמש בו עבור immunostaining. אף על פי כן, בלב המלא צריך להיות מחולק, והרקמה לא ניתן להשתמש לצורך ניתוח נוסף, כגון כתם מערבי או RT-PCR עבור חלבון ביטוי גני המנתח. משמעות של הטכניקה ביחס קיימים / שיטות חלופיות מכיוון שתהליך כימות, בפרט, מספר סעיפים נתחו להשתנות משמעותי בין החקירות, המגדירים את המספר הקטן ביותר של סעיפים צורכים לקבל כימות אמינה היא בעל חשיבות עליונה. דואר Takagawat al. 9 הוכיחו כי אמינות מוגדלת עם מספר פרוסת לב מינימאלי של 6 - 8 חלקים של כל הלב של עכבר באמצעות מרווחי 1 מ&quot;מ. בפרוטוקול הנוכחי, 5 - 7 סעיפים של לב החולדה כולו התקבלו בעת ביצוע חתך בעובי 2 מ&quot;מ. יתר על כן, סעיפים 2 מ&quot;מ הם סטנדרטיים שימוש תכוף גודל מכתים TTC. בנוסף, הדגימה המערכתית היא פשוטה ליישום ומציג היבט תקופתי המאפשר אפיון של הלב כולו. מכל אחת את פרוסות 2 מ&quot;מ, 5 סעיפים מיקרומטר נחתכו ומוכתמת. עבור כל מקטע של 5 מיקרומטר, כימות של עובי מחצה, עובי צלקת אורך, שטח צלקת כולל, באזור LV הכולל, ואזור חלל LV בוצעה, ואת הממוצע של כל פרמטר חושב לכל בעלי חיים. השתמשנו מסון-גולדנר מכתים סעיפים רזים ולא מכתים TTC סעיפי 2 מ&quot;מ כדי לשפר את הדיוק הן של זיהוי הצבע האוטומטי וההערכהבאורכים. ואכן, מכתים TTC מעניין בעיקר בשלבים מוקדמים או מודלים reperfusion איסכמי לצורך זיהוי של האזור בסיכון 8,14, ולא לשלב כרוני. MI המושרה מן קשירת LAD עשוי להשתנות תלוי באתר ליגטורה. במודל האוטם כרוני שהוצג, גודל הקשירה שונה בכוונה עבור כל חיה, ותוצאות עבור תנאים שונים של גודל אוטם שיפוץ נכחו לאחר 6 שבועות. בהתאם לכך, EI המחושב חשף מגוון רחב של אוטמים בשריר הלב ותמך ההבדל שנצפה בתפקוד הלב בקורלציה עם EF. כאשר דליל נרחב של המגזר האוטם התרחש, באזור של האוטם היה פחות בהרבה במקרה של סיסטיק transmural. במצב זה, המגדיר את גודל האוטם על ידי חישוב השטח של הרקמה האוטמת ביחס LV כולו (מבוטאים באחוזים של LV) היה להעריך את ההיקף בחולשה של האוטם. היעדר גonsideration עבור התרחבות LV-induced שיפוץ ודילול קיצוניים של הקיר LV האוטם שעלול להמעיט בהערכת גודל האוטם, בעוד האוטם נוכח העדר דליל הקיר היה יתר לאמוד את גודל האוטם, כפי שהוא מיוצג על ידי ערכים מחוץ סמך 95% הַפסָקָה. חיסרון זה יכול להתבטל דרך החישוב של EI. הוכח כי שינוי צורת LV מתואם חיובי עם EI וקיר הדליל 15, 16. למרות EI יכול להיות מנבא של תפקוד LV, חשוב להדגיש כי אקו וניתוחים היסטולוגית הם שיטות משלימות להעריך את אוטם שריר הלב ברמה התפקודית ורקמות, בהתאמה. אקו מאפשר מחקר אורך, היסטולוגית המנתח לספק מבחני סוף נקודות יסוד המאפשרים כימות נוסף של מורפולוגיה LV, כגון עובי קיר. יישומים או כיוונים לעתיד מובילים לירכיםאה מאסטרינג טכניקה זו הדגימה המערכתית של הלב כולו ואת החישוב של EI הם בעלי העניין מיוחד כאשר מעריכים MI כרוני. בנוסף, שיטה זו תהיה מתאימה להערכת יעילות טיפול, בפרט עבור טיפולים חדשניים, כגון cell- מטריצה ​​מבוסס טיפולים שמטרתם הקטנת גודל אוטם שיפוץ. כימות אמין של התרחבות האוטם היא בעלת חשיבות עליונה עבור השוואות בין בעלי חיים שאינם מטופלים ומטופל, כפי היסטולוגית קצה מנתח מונע השוואה של לפני ואחרי גודל האוטם ו שלאחר הטיפול.

אוטם שריר הלב (MI) הוא הגורם המוביל למוות ונכות בעולם. מחלת לב כלילית היא הגורם העיקרי; MI נובע איסכמיה רצוף לאירועים כליליים כגון חסימה. כאשר רה-פרפוזיה לא מבוצע בתוך 6 שעות, איסכמיה הראשון גורם נמק שריר הלב בלתי הפיך. בחולים, האפיון של MI מסתמך על כלי אבחון שונים, לרבות סימנים קליניים, electrocardiography, הערכת רמות הפלזמה של סמנים ביולוגיים, אקו, הדמית MRI, היסטולוגית מנתח 1. אקוטי וכרוני MI מסווגים לשני שלבים שונים של פגיעה, בהתאם לעיתוי של יחסי נמק שריר הלב אל זמן של חסימה כלילית. בשלב החריף, המתרחשים במהלך 7 הימים הראשונים, מזוהה עם הפסד של cardiomyocytes, דלקת נרחבת, ועל הגיוס של פיברובלסטים. השלב תת-חריפים, מאופיינת הריפוי של רקמת לב ואת היווצרות צלקת, מתרחשבין 1 ל -4 - 6 שבועות. הרחבת האוטם, דליל קיר החדר, ואת התרחבות החדר לאפיין בשלב הכרוני. שיפוץ נרחב של החדר השמאלי תוצאות בהדרגה אי ספיקת לב חמורה 2. MI המושרה על ידי קשירת העורק השמאלי הקדמי היורד קבע (LAD) מייצג את המודל מכרסם רמת אוטם לבבי כרוני. מחק ליגטורה כלילית החסימה כלילית. גודלו של האוטם תלוי באתר של המיתר. אפיון של פגיעת איסכמית שריר לב במודל מכרסם מבוצע באופן קלסי באמצעות רמות פלזמת סמן ביולוגיות, כגון טרופונין I ו- T 3, אקו, MRI, היסטולוגיה 4,5. רמות ביומרקר מתואמות עם היקף הרג cardiomyocyte. אקו מעריך את ירידת הערך השמאלית הפונקציה חדרית הנובע הפרעות תנועת קיר אזוריות. בנוסף, טכניקות הדמיה לא פולשנית, כגון MRI או ברזולוציה גבוההאקו, לאפשר ההערכה של הירידה בתנועת קיר, ההיקף באזור הצלקת עם זלוף מופחת שריר לב קיימא, ואת דליל הקיר. ממדים LV להתיר הערכה מדויקת של גודל האוטם. לבסוף, כימות של שריר לב קיימא והמת יכולה להתבצע לאחר מוות באמצעות כתמים ספציפיים סעיפים היסטולוגית של לבבות שנקטפו ומאפשרת אימות של גודל האוטם (IS). תכונה חשובה נוספת היא ההערכה של מדד ההתרחבות האוטמת (EI) 6. EI קשורה אוטם transmural והתחלות בתוך 3 הימים הראשונים. EI מאופיין הפחתה הדרגתית עובי דופן, גידול בגודל חלל LV, ושינויים סוגרים בכושר LV. על מנת להעריך את היעילות הטיפולית של טיפולים חדשניים - בפרט, אסטרטגיות המשובים מבוססים על תאים, מטריצות, והערכת משלוח-מדויק גן של MI במכרסמים היא בעלת חשיבות עליונה.כאשר נמדדו על חתך יחיד שהושג ברמת שריר פפילרי, הגודל הוא עלול להיות מוטה בשל ההשתנות הגדולה שמקיים בפיתוח האוטם הבא קשירת LAD; ייתכן אוטם איפקס אז וטשטש. חשוב לציין, יותר מתודולוגיות מדויקת לגודל נקבע MI תוארה עבור עכברים 7-9 או חולדות 10. אף על פי כן, IS אינו מספיק כדי לכמת LV שיפוץ במדויק או הפחתות מושרות טיפולי (או סיכולים) של השיפוץ. ואכן, היא מתבטאת בדרך כלל כאחוז נפח LV הכולל הוערך על חתכי רוחב של הלב. אמנם שיטה זו תקפה עבור אוטם לבבי חריף, הדילול של קיר LV המתרחשים במהלך השיפוץ נשאר תחת הערכת 11,12. כימות morphometric מלאות של גודל אוטם ושינויים מבניים צריכות לכמת מספר פרמטרים, כגון אורכי endocardial ו epicardial ובקטרים, כמו גם אוטם ואזורים בריאים. אנו מתארים appr מתודולוגייםאוח כדי להעריך נכון MI שיפוץ במודל חולדה כרונית.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="775">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Acrylic rat heart matrix 2mm</td>
			<td style="width:119px;">72-5015</td>
			<td style="width:136px;">Harvard Appartus</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:247px;">INSPIRA ADVANCED VOLUME CONTROLLED VENTILATOR</td>
			<td style="width:119px;">HARVARD APPARATUS</td>
			<td style="width:136px;">557058</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">CATHETER INSYTE 14G</td>
			<td style="width:119px;">BD</td>
			<td style="width:136px;">381267</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:247px;">O.C.T</td>
			<td style="width:119px;">BDHA361603E</td>
			<td style="width:136px;">VWR</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">TTC</td>
			<td style="width:119px;">T8877-10G</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Mayer hematoxylin</td>
			<td style="width:119px;">MHS32-1L</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Acid Fuchsin 
			CI 42685</td>
			<td style="width:119px;">F8129-50G</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ponceau Xylidin 
			CI 16150</td>
			<td style="width:119px;">P2395-25G</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Orange G 
			CI 16230</td>
			<td style="width:119px;">O3756-100G</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:247px;">Light green 
			CI 42095</td>
			<td style="width:119px;">L5382-25G</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">KCl</td>
			<td style="width:119px;">P9333-500G</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylol</td>
			<td style="width:119px;">10315083</td>
			<td style="width:136px;">HoneyWell</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ethanol absolute</td>
			<td style="width:119px;">10303990</td>
			<td style="width:136px;">HoneyWell</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">2-methylbutane</td>
			<td style="width:119px;">M32631-1L</td>
			<td style="width:136px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Stereogical microscope</td>
			<td style="width:119px;">SM2800</td>
			<td style="width:136px;">Nikon</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Formaldehyde</td>
			<td style="width:119px;">99340</td>
			<td style="width:136px;">Reactolab</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Embedding cassette</td>
			<td style="width:119px;">K113.1</td>
			<td style="width:136px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:247px;">Bersoft Image measurement Software</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:136px;">Bersoft.com</td>
			<td style="width:273px;">Licensed software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

histological quantification of chronic myocardial infarct in rats

Myocardial infarction is defined as cardiomyocyte death due to prolonged ischemia; an inflammatory response and scar formation (fibrosis) follow the ischemic injury. Following the initial acute phase, chronic remodeling of the left ventricle (LV) modifies the structure and function of the heart. Permanent coronary ligation in small animals has been widely used as a reference model for a chronic model of MI. Thinning of the infarcted wall progressively develops to transmural fibrosis. Histological assessment of infarct size is commonly performed; nevertheless, a standardization of the methods for quantification is missing. Indeed, important methodological aspects, such as the number of sections analyzed and the sampling and quantification methods, are usually not described and therefore preclude comparison across investigations. Too often, quantification is performed on a single section obtained at the level of the papillary muscles. Because novel strategies aimed at reducing infarct expansion and remodeling are under investigation, there is an important need for the standardization of accurate heart sampling protocols. We describe an accurate method to quantify the infarct size using a systematic sampling of harvested rat heart and image analyses of trichromatic stained histological sections obtained from base to apex. We also provide evidence that calculating the expansion index (EI) allowed for infarct size assessment, taking into account changes of the left ventricle throughout the remodeling.

שישה שבועות קשירה שלאחר LAD, לבבות נבצרו חולדות לואיס. 2 מ&quot;מ סעיפי רקמות התקבלו מן הקודקוד לבסיס. הליך מכתים TTC בוצע על מנת להמחיש את האזור האוטם, המופיע בלבן, ואת שריר לב הבריא, המופיע באדום (איור 2). בהתאם לאתר של קשירת LAD, גודל האוטם משתנה. עבור MI גדול, אוטמים transmural נצפו מן הקודקוד לבסיס (איור 2 א). קטן אוטמים הציג רקמה לבנה אוטם גלויה מן הקודקוד אל אמצע הקטע של הלב (איור 2 ב). לקבלת אוטמים הלא transmural קטן, רקמה פיברוטית נצפתה על אחד או שניים בלבד חלקים מן הקודקוד (איור 2 ג). 5 מיקרומטר חלקים דקים מכל פרוסת לב נחתכו מוכתם trichrome מסון-גולדנר. תמונות של החתך השלם של הלב היורכשה תחת סטראו (איור 3). רקמות בריאות הופיעו באדום ואת רקמת החיבור בירוקה. אפליה בין כל צבע יכולה להתבצע בקלות עם תוכנת ניתוח תמונה. עובי של האוטם ו מחצה, באזור חלל LV ואת השטח הכולל LV נמדדו מחושב לחשב את EI (טבלה 1). EI חושב עבור כל מקטע. בהתאם לגודל הלב, מספר סעיפים נעים בין 5 עד 7. עבור כל לב, EI הוא ממוצע של EI מכל קטע. EI נע בין 0 כדי 0,278 וגילה מגוון רחב של אוטמים בשריר הלב, עם קורות חיים של 58%. לשם השוואה, הממוצע של אחוז האוטם אל LV נע בין 0 ל 0.241, עם קורות חיים של 54% (טבלה 1). EI ואחוז האוטם היו בקורלציה משמעותית; ניתוח ספירמן הלא פרמטרית סיפק r-va מקדם המתאםlue של 0.491 (p = 0.005) (איור 4 א). עבור ערכי EI קרובים, כגון 0.11 ו -0.13, אחוז האוטם נע בין 5.8 ל -24.1%. תפקוד לב הוערך על ידי אקו ברזולוציה גבוהה על קשירת 6 שבועות לאחר LAD על חיות הרדימו בוצע פעם אחת לפני קצירת לב. EI שנמדדת כימות היסטולוגית בקורלציה משמעותית עם EF. ניתוח ספירמן הלא פרמטרית סיפק r-ערך של -.709 (p = 0.005) (איור 4 ב). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54914/54914fig1.jpg" /> שלב-אחר-שלב באיור 1. איור של השימוש בתוכנת ניתוח תמונה. מדידות תיחום ואורך צבע אוטומטיים כללו את מספר שלבים. כיול א: קנה המידה של התמונה הוקמה. תמונה שלסרגל צולם באותו המצב כמו בסעיף הלב. אורכו של השליט היה מסומן להגדיר את מקדם המרת מידה. מרת מ- פיקסל מילימטרים בוצעה. הבחירה ב LV: החדר הימני נחתך מחוץ לתמונה באמצעות כלי הבחירה של התוכנה. ג LV מדידת עובי קיר מחץ: כלי המדידה הבודד שמש לכמת מרחקים. ברי הסולם עולים 3 מ&quot;מ. ד אוטומטי כימות באזור: תיחום צבע אוטומטית בוצע במצב RGB. הבחירה אוטומטית בוצעה לאחר בחירת מצב הבחירה האוטומטית. בחירת צבע מבוסס יכולה להיות שונה; החוקר בצע שליטה ויזואלית של הרקמה הירוקה נבחרת להגדיל או להקטין את האזור שנבחר לפי צורך. ברי הסולם עולים 3 מ&quot;מ. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54914/54914fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> </p&gt; <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54914/54914fig2.jpg" /> איור 2. לב סעיפים ויטראז עם TTC. סעיפים 2 מ&quot;מ של הלב מלא הוכתמו TTC. שריר לב בריא הופיע ברקמות אדומות fibrotic בלבן. שלושה לבבות בגדלים שונים אוטמים מוצגים. ת: אוטם transmural גדול, B: אוטם בינוני, ו- C: אוטם קטן. ברי הסולם עולים 3 מ&quot;מ. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54914/54914fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54914/54914fig3.jpg" /> איור 3. סעיפי לב ויטראז עם מסון-גולדנר Trichrome. סעיפי 5-מיקרומטר נחתכו מכל קטע לב השיג 6 שבועות קשירה שלאחר LAD. Staסעיפים שאינם עומדים הושמו תחת סטראו. תמונות של חלקים המלאים התקבלו עם הגדלה 15X. תמונת הנציג, שהושגה ברמת שרירי papillary (החץ חזרה), מראה שריר לב בריא ברקמות אדומות fibrotic בירוק. התמונה ממחישה את תיחום צבע האוטומטי עם תוכנת ניתוח תמונה, כמו גם את האתר שבו העובי האוטם ו מחץ נמדד (קווים שחורים). ברי הסולם עולים 3 מ&quot;מ. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54914/54914fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/54914/54914fig4.jpg" /> מתאם איור 4. בין הרחבת המדד (EI) ואחוז האוטם הקשור ל LV (א) או מקטע הפליטה (EF) (B). הרגרסיה הליניארית (קו שחור) ו -95% לבטוחבמרווחי NCE (קווים מקווקווים) מיוצגים. המגזר השקלי הלא צמוד פרמטרית ספירמן r-ערך מדווח. ת: אחוז האוטם ו EI בקורלציה משמעותית (r = 0.567; p = 0.003). מדד התרחבות האוטם (EI) חושב [באזור חלל LV / כל אזור LV] / [עובי האוטם / עובי מחצה]. את כל שטח LV נמדד כמו חלל LV בשילוב ואזור רקמת LV. אחוז האוטם חושב כאזור רקמה באזור רקמות LV / אוטם. B: הפונקציה העריכה ב -6 שבועות קשירה שלאחר LAD באמצעות אקוקרדיוגרפיה ברזולוציה גבוהה בקורלציה משמעותית עם EI. פרמטרי שניהם היו בקורלציה משמעותית (r = -0.709, p = 0.005). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54914/54914fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="שולחן 1" src="/files/ftp_upload/54914/54914table1.jpg" /> שולחן1: הפרמטרים שנמדדו על סעיפים מאסון גולדנר מוכתם הלב.

Watch this Scientific Journal Video about Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats at JoVE.com

Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats

The post-mortem assessment of myocardial infarction (MI) in rodents is based on quantification of the infarct on stained heart sections. We describe an accurate method to quantify the infarct size using systematic sampling of harvested rat hearts from base to apex and image analyses of trichrome-stained histological sections.

כימות היסטולוגית של אוטם שריר לב כרוני אצל חולדות

Myocardial infarction is defined as cardiomyocyte death due to prolonged ischemia; an inflammatory response and scar formation (fibrosis) follow the ...

histological-quantification-of-chronic-myocardial-infarct-in-rats

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

14.4K Views.  University of Fribourg. The post-mortem assessment of myocardial infarction (MI) in rodents is based on quantification of the infarct on stained heart sections. We describe an accurate method to quantify the infarct size using systematic sampling of harvested rat hearts from base to apex and image analyses of trichrome-stained histological sections. 

Video: Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats

Acute Myocardial Infarction in Rats

With heart failure leading the cause of death in the USA (Hunt), biomedical research is fundamental to advance medical treatments for cardiovascular diseases. Animal models that mimic human cardiac disease, such as myocardial infarction (MI) and ischemia-reperfusion (IR) that induces heart failure as well as pressure-overload (transverse aortic constriction) that induces cardiac hypertrophy and heart failure (Goldman and Tarnavski), are useful models to study cardiovascular disease. In particular, myocardial ischemia (MI) is a leading cause for cardiovascular morbidity and mortality despite controlling certain risk factors such as arteriosclerosis and treatments via surgical intervention (Thygesen). Furthermore, an acute loss of the myocardium following myocardial ischemia (MI) results in increased loading conditions that induces ventricular remodeling of the infarcted border zone and the remote non-infarcted myocardium. Myocyte apoptosis, necrosis and the resultant increased hemodynamic load activate multiple biochemical intracellular signaling that initiates LV dilatation, hypertrophy, ventricular shape distortion, and collagen scar formation. This pathological remodeling and failure to normalize the increased wall stresses results in progressive dilatation, recruitment of the border zone myocardium into the scar, and eventually deterioration in myocardial contractile function (i.e. heart failure). The progression of LV dysfunction and heart failure in rats is similar to that observed in patients who sustain a large myocardial infarction, survive and subsequently develops heart failure (Goldman). The acute myocardial infarction (AMI) model in rats has been used to mimic human cardiovascular disease; specifically used to study cardiac signaling mechanisms associated with heart failure as well as to assess the contribution of therapeutic strategies for the treatment of heart failure. The method described in this report is the rat model of acute myocardial infarction (AMI). This model is also referred to as an acute ischemic cardiomyopathy or ischemia followed by reperfusion (IR); which is induced by an acute 30-minute period of ischemia by ligation of the left anterior descending artery (LAD) followed by reperfusion of the tissue by releasing the LAD ligation (Vasilyev and McConnell). This protocol will focus on assessment of the infarct size and the area-at-risk (AAR) by Evan's blue dye and triphenyl tetrazolium chloride (TTC) following 4-hours of reperfusion; additional comments toward the evaluation of cardiac function and remodeling by modifying the duration of reperfusion, is also presented. Overall, this AMI rat animal model is useful for studying the consequence of a myocardial infarction on cardiac pathophysiological and physiological function.

The rat model of acute myocardial infarction (AMI) is useful to study the consequence of a MI on cardiac pathophysiological and physiological function.

באוטם שריר הלב אצל חולדות

With heart failure leading the cause of death in the USA (Hunt), biomedical research is fundamental to advance medical treatments for cardiovascular ...

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory testing in rat SCI models is needed. However, until recently, no single testing approach had been validated for SCI so that standardized methods have not been implemented across labs. Additionally, available testing methods could not be implemented acutely or when severe motor impairments existed, preventing studies of the development of SCI-induced allodynia3. Here we present two validated sensory testing methods using von Frey Hair (VFH) monofilaments which quantify changes in tactile sensory thresholds after SCI4-5. One test is the well-established Up-Down test which demonstrates high sensitivity and specificity across different SCI severities when tested chronically5. The other test is a newly-developed dorsal VFH test that can be applied acutely after SCI when allodynia develops, prior to motor recovery4-5. Each VFH monofilament applies a calibrated force when touched to the skin of the hind paw until it bends. In the up-down method, alternating VFHs of higher or lower forces are used on the plantar L5 dermatome to delineate flexor withdrawal thresholds. Successively higher forces are applied until withdrawal occurs then lower force VFHs are used until withdrawal ceases. The tactile threshold reflects the force required to elicit withdrawal in 50% of the stimuli. For the new test, each VFH is applied to the dorsal L5 dermatome of the paw while the rat is supported by the examiner. The VFH stimulation occurs in ascending order of force until at least 2 of 3 applications at a given force produces paw withdrawal. Tactile sensory threshold is the lowest force to elicit withdrawal 66% of the time. Acclimation, testing and scoring procedures are described. Aberrant trials that require a retest and typical trials are defined. Animal use was approved by Ohio State University Animal Care and Use Committee.

We describe two tactile sensory testing methods for acute or chronic periods of spinal cord injury in rats. These validated procedures can detect the development and maintenance of allodynia-like sensations.

אקוטי וכרוני בדיקה חושי טקטילי לאחר פגיעה בחוט השדרה של חולדות

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of the population1,2. Symptoms include spontaneous (tingling, burning, electric-shock like) pain, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (pain resulting from normally non-painful stimuli) and hyperalgesia (an increased response to painful stimuli). The sensory symptoms are co-morbid with behavioural disabilities, such as insomnia and depression. To study chronic neuropathic pain several animal models mimicking peripheral nerve injury have been developed, one of the most widely used is Bennett and Xie's (1988) unilateral sciatic nerve chronic constriction injury (CCI)3 (Figure 1). Here we present a method for performing CCI and testing pain hypersensitivity.
CCI is performed under anaesthesia, with the sciatic nerve on one side exposed by making a skin incision, and cutting through the connective tissue between the gluteus superficialis and biceps femoris muscles. Four chromic gut ligatures are tied loosely around the sciatic nerve at 1 mm intervals, to just occlude but not arrest epineural blood flow. The wound is closed with sutures in the muscle and staples in the skin. The animal is then allowed to recover from surgery for 24 hrs before pain hypersensitivity testing begins.
For behavioural testing, rats are placed into the testing apparatus and are allowed to habituate to the testing procedure. The area tested is the mid-plantar surface of the hindpaw (Figure 2), which falls within the sciatic nerve distribution. Mechanical withdrawal threshold is assessed by mechanically stimulating both injured and uninjured hindpaws using an electronic dynamic plantar von Frey aesthesiometer or manual von Frey hairs4. The mechanical withdrawal threshold is the maximum pressure exerted (in grams) that triggers paw withdrawal. For measurement of thermal withdrawal latency, first described by Hargreaves et al (1988), the hindpaw is exposed to a beam of radiant heat through a transparent glass surface using a plantar analgesia meter5,6. The withdrawal latency to the heat stimulus is recorded as the time for paw withdrawal in both injured and uninjured hindpaws. Following CCI, mechanical withdrawal threshold, as well as thermal withdrawal latency in the injured paw are both significantly reduced, compared to baseline measurements and the uninjured paw (Figure 3). The CCI model of peripheral nerve injury combined with pain hypersensitivity testing provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to modify chronic neuropathic pain. In our laboratory, we utilise CCI alongside thermal and mechanical sensitivity of the hindpaws to investigate the role of neuro-immune interactions in the pathogenesis and treatment of neuropathic pain.

Due to the simplicity of surgery and the robust behavioural outcome, chronic constriction of the sciatic nerve is one of the pre-eminent animal models of neuropathic pain. Within 24 hrs following surgery, pain hypersensitivity is established and can be quantitatively measured using a von Frey aesthesiometer (mechanical test) and plantar analgesia meter (thermal test).

היצרות כרונית של העצב Sciatic ואת רגישות יתר לכאב בדיקה אצל חולדות

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of ...

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery (SALLI) MRI in Rats

Small animal magnetic resonance imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial tissue. The high heart rates of small animals (200 to 600 beats/min) have previously limited the role of CMR imaging. Small animal Look-Locker inversion recovery (SALLI) is a T1 mapping sequence for small animals to overcome this problem 1. T1 maps provide quantitative information about tissue alterations and contrast agent kinetics. It is also possible to detect diffuse myocardial processes such as interstitial fibrosis or edema 1-6. Furthermore, from a single set of image data, it is possible to examine heart function and myocardial scarring by generating cine and inversion recovery-prepared late gadolinium enhancement-type MR images 1.
	The presented video shows step-by-step the procedures to perform small animal CMR imaging. Here it is presented with a healthy Sprague-Dawley rat, however naturally it can be extended to different cardiac small animal models.

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery SALLI MRI in Rats

Contrast enhanced cardiac magnetic resonance (CMR) imaging allows comprehensive in vivo assessment of the heart in small animal models of cardiovascular disease. Here we detail the procedures to perform CMR imaging, reconstruction and analysis using Small Animal Lock-Locker Inversion Recovery (SALLI) in rats.

הערכה של תפקוד לב ומורפולוגיה שריר הלב באמצעות שחזור קטן בעלי חיים תראו-הלבשה היפוך (SALLI) בדיקת MRI בחולדות

Small animal magnetic resonance  imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial  tissue. The high heart rates of small ...

MRI and PET in Mouse Models of Myocardial Infarction

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ideal model for testing novel therapeutic strategies.
In vivo magnetic resonance imaging (MRI) gives excellent views of the heart noninvasively with clear anatomical detail, which can be used for accurate functional assessment. Contrast agents can provide basic measures of tissue viability but these are nonspecific. Positron emission tomography (PET) is a complementary technique that is highly specific for molecular imaging, but lacks the anatomical detail of MRI. Used together, these techniques offer a sensitive, specific and quantitative tool for the assessment of the heart in disease and recovery following treatment.
In this paper we explain how these methods are carried out in mouse models of acute myocardial infarction. The procedures described here were designed for the assessment of putative protective drug treatments. We used MRI to measure systolic function and infarct size with late gadolinium enhancement, and PET with fluorodeoxyglucose (FDG) to assess metabolic function in the infarcted region. The paper focuses on practical aspects such as slice planning, accurate gating, drug delivery, segmentation of images, and multimodal coregistration. The methods presented here achieve good repeatability and accuracy maintaining a high throughput.

We describe how to perform MRI and PET imaging of the mouse heart. The protocol is tailored to assess treatment efficacy in models of myocardial infarction and heart failure.

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ...

Ultrasonic Assessment of Myocardial Microstructure

Echocardiography is a widely accessible imaging modality that is commonly used to noninvasively characterize and quantify changes in cardiac structure and function. Ultrasonic assessments of cardiac tissue can include analyses of backscatter signal intensity within a given region of interest. Previously established techniques have relied predominantly on the integrated or mean value of backscatter signal intensities, which may be susceptible to variability from aliased data from low frame rates and time delays for algorithms based on cyclic variation. Herein, we describe an ultrasound-based imaging algorithm that extends from previous methods, can be applied to a single image frame&#160;and accounts for the full distribution of signal intensity values derived from a given myocardial sample. When applied to representative mouse and human imaging data, the algorithm distinguishes between subjects with and without exposure to chronic afterload resistance. The algorithm offers an enhanced surrogate measure of myocardial microstructure and can be performed using open-access image analysis software.

Echocardiography is commonly used to noninvasively characterize and quantify changes in cardiac structure and function. We describe an ultrasound-based imaging algorithm that offers an enhanced surrogate measure of myocardial microstructure and can be performed using open-access image analysis software.

הערכה אולטרה סאונד של מיקרו-מבנה שריר הלב

Echocardiography is a widely accessible imaging modality that is commonly used to noninvasively characterize and quantify changes in cardiac structure and ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

תגובות שתן בשלפוחית ​​השתן ההתנפחות העוררת Visceromotor כמודל לשלפוחית ​​שתן כאב בעכברים

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed in mice is high. Phenotypic characterization of these mouse models also requires the examination of cardiac function and morphology. Echocardiography and magnetic resonance imaging (MRI) are commonly used approaches to characterize cardiac function and morphology in mice. Echocardiographic and MRI equipment specialized for use in small rodents is&#160;expensive and requires a dedicated space. This protocol describes cardiac measurements in mice using a clinical echocardiographic system with a 15 MHz human vascular probe. Measurements are performed on anesthetized adult mice. At least three image sequences are recorded and analyzed for each animal in M-mode in the parasternal short-axis view. Afterwards, cardiac histological examination is performed, and cardiomyocyte diameters are determined on hematoxylin-eosin- or wheat germ agglutinin (WGA)-stained paraffin sections. Vessel density is determined morphometrically after Pecam-1 immunostaining. The protocol has been applied successfully to pharmacological studies and different genetic animal models under baseline conditions, as well as after experimental myocardial infarction by the permanent ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD). In our experience, echocardiographic investigation is limited to anesthetized animals and is feasible in adult mice weighing at least 25 g.

Echocardiographic examination is frequently used in mice. Expensive high-resolution ultrasound devices have been developed for this purpose. This protocol describes an affordable echocardiographic procedure combined with histological morphometric analyses to determine cardiac morphology.

בבדיקה היסטולוגית ו echocardiographic של מורפולוגיה לב העכבר

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

הערכה של שמורת זרם כלילית לאחר איסכמיה אוטם שריר הלב Reperfusion בחולדות

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

Semi-Minimal Invasive Method to Induce Myocardial Infarction in Rats and the Assessment of Cardiac Function by an Isolated Working Heart System

Myocardial infarction (MI) remains the main contributor to morbidity and mortality worldwide. Therefore, research on this topic is mandatory. An easily and highly reproducible MI induction procedure is required to obtain further insight and better understanding of the underlying pathological changes. This procedure can also be used to evaluate the effects or potency of new and promising treatments (as drugs or interventions) in acute MI, subsequent remodeling and heart failure (HF). After intubation and pre-operative preparation of the animal, an anesthetic protocol with isoflurane was performed, and the surgical procedure was conducted&#160;quickly. Using a minimally invasive approach, the left anterior descending artery (LAD) was located and occluded by a ligature. The occlusion can be performed acutely for subsequent reperfusion (ischemia/reperfusion injury). Alternatively, the vessel can be ligated permanently to investigate the development of chronic MI, remodeling or HF. Despite common pitfalls, the drop-out rates are minimal. Various treatments such as remote ischemic conditioning can be examined for their cardioprotective potential pre-, peri- and post-operatively. The post-operative recovery was quick as the anesthesia was precisely controlled and the duration of the operation was short. Post-operative analgesia was administered for three days. The minimally invasive procedure reduces the risk of infection and inflammation. Furthermore, it facilitates rapid recovery. The &#8220;working heart&#8221; measurements were performed ex vivo and enabled precise control of preload, afterload and flow. This procedure requires specific equipment and training for adequate performance. This manuscript provides a detailed step-by-step introduction for conducting these measurements.

This article presents an efficient method to perform myocardial ischemia and subsequent chronic reperfusion in rats using a minimally invasive approach. In addition, left ventricular hemodynamic function of rats is assessed by echocardiography and isolated working heart methods.&#160;

חצי מינימלי שיטה פולשנית כדי לגרום אוטם שריר הלב בחולדות הערכה של תפקוד הלב על ידי מערכת לב עבודה מבודדת

Myocardial infarction (MI) remains the main contributor to morbidity and mortality worldwide. Therefore, research on this topic is mandatory. An easily ...