This work was supported in part by the United States Department of Veterans Affairs Biomedical Laboratory Research and Development Program Merit Review Award I01-BX002336, the National Institute of Health grant R56-HL095498, as well as with the resources and the use of facilities at the VA Connecticut Healthcare System, West Haven, CT.

אישור ועדת האשפוז במוסד סיעודי בעלי החיים והשימוש המתאים מתקבל. 1. הרדמה ונהלים טרום ניתוחיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים זכר C57Bl / 6 קרח, בן 8 שבועות, עם 3% isoflurane מתאדה וחמצן 0.8 L / min מנוהל לתוך תא אינדוקציה אקריליק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר הרדמה נאותה על ידי חוסר התגובה לצבוט הבוהן. מקם את העכבר פרקדן על שולחן הניתוח ולמקם מסכה סיליקון לספק מתאדה 2 - 3% isoflurane משאיפת רציפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שיער גחון מהצוואר עד בטן תחתונה באמצעות קרם מקריח כימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע בדיקת אולטרסאונד דופלר לפני ניתוח AVF להקליט מאפיינים בסיסיים של עורקים וזרימה ורידית ו קוטר כלי ב תחומי העניין. 1,2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מזרק 1 מ&quot;ל ל מחט 25 G ו לטעון את המזרק עם התרופה הרצויה. כופף את המחט לזווית של 60 מעלות כ 4 מ&quot;מ מהצורךטיפ le. תפוס את המחט 25 G עם בעל מחט מעוקל. </li></ol> 2. נוהלי Operative <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את אתר החתך עם חיטוי אקטואלי ולהחיל לעטוף כירורגית. יש להשתמש בכפפות ומכשירים סטרילי לשמור טכניקה אספטי לאורך כל הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך בבטן קו אמצע עם אזמל המשתרעת הרמה בקצה הכבד התחתון בדיוק מעל החיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מפשק ו לעקור מעיים כל מעי מחלל הבטן לעבר הצד הימני. עוטף את המעיים בגזה ספוגה מלוח. לנתח את קרום המחבר בין המעי הגס רטרו הצפק והתחתון להשיג לעיני אבי העורקים ו- IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את אבי העורקים אינפרא כליות ו- IVC מן הרקמות הסובבות, מתכוננים הפרוקסימלית ומ ההידוק דיסטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים קליפ המיקרו-כירורגיה אחת על פני שתי האאורטה הפרוקסימלית ומ הפרוקסימלי IVC ברמה ממש מתחת עורק הכליה השמאלית. מניח קליפ המיקרו-כירורגיה שני על פני שני דאבי העורקים istal ואת IVC דיסטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחוז רקמת החיבור המקיף את אב העורקים ולסובב מדיאלית כך את פני השטח הגבי של אב העורקים חשופים מעט עבור לנקב העורק, כפי שתואר לעיל. 1 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות לחשוף את האתר לנקב. האתר לנקב יהיה על היבט הזנב של הכלי, כשלושה רבעי המרחק בין עורק הכליה השמאלי אל הסתעפות אב העורקים. שמירה האאורטה בעמדה מסובב ביד שמאל, לנתח את שולי לרוחב השמאלי של אבי העורקים, כך קיימת חשיפה מספיק כדי לאפשר לנקב עם יד ימין. היזהר שלא לנתח בין אבי העורקים ואת IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור האאורטה בעמדת סיבוב לנקב את אב העורקים באמצעות לתוך IVC באמצעות מחט 25 G עם פתרון תרופה המכילה מזרק 1 מצורף מיליליטר. (איור 1 א) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות הפתרון סמים (100 - 200 μl) שימוש ביד שמאל. המחט ניתן לראות דרך מורחב ורזהקיר IVC כאשר פתרון התרופה השקוף מחליף את הדם מוריד מתוך IVC (איור 1 ב &#39;, ג&#39;). הישאר עדיין ולתחזק את המחט בנקודה במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקליפ המיקרו-כירורגיה דיסטלי לדה-מהדק האאורטה הדיסטלי בלבד IVC דיסטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט ואז לכסות את האתר לנקב של אבי העורקים על ידי משיכת עד רקמת רטרו הצפק הסמוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקליפ המיקרו-כירורגיה הפרוקסימלי לדה-מהדק את אבי העורקים הפרוקסימלי ואת הפרוקסימלי IVC. עם דה-clamping, דם העורקי הוא ציין זורם לתוך IVC במקום זרימת דם כהה ורידים. שמור המכסה את החור לנקב דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר האישור של המוסטאסיס ידי תצפית במשך 30 שניות ללא דחיסה, להחזיר את המעיים למצב הטבעי שלהם ולסגור את הבטן עם תפר פועל על פי פרוטוקול החיה אשר שלך. </li></ol> נהלים 3. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סגירת הבטן, להפסיק anesthesia. החל טיפול שלאחר ניתוח כולל שיכוך כאבים ופצע טיפול בהתאם להוראות שהומלצו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש. על שיכוך כאבים אנו משתמשים עצירות ברמה של 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג intrasmuscularly כל 12 שעות למשך 24 שעות לאחר ניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הראשון לאחר הניתוח, לבצע דופלר אולטרה-סאונד כדי לאשר patency של AVF. בנוסף, למדוד כלי אחר וזרימת מאפיינים סדרו ולהשוות לשינויים ערכים בסיס טרום ניתוחי. 1,2 </li></ol><img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53905/53905fig1.jpg" /> באיור 1. (א) תמונה Operative מציג משלוח Intraluminal במהלך ניתוח AVF. הצמד את הפרוקסימלי ואבי העורקים דיסטלי, כמו גם את IVC ידי החלת קליפים המיקרו-כירורגיה. לנקב את אבי העורקים באמצעות לתוך IVC באמצעות מחט 25 G עם פתרון תרופה המכילה מזרק המצורף. (ב) HIGתמונת כוחה (גדלת 4X) של IVC Punctured לפני העירוי. קצה המחט מוסתר על ידי דם ורידים בצבע כהה. ראשי חץ צהוב לציין את קוטר מקיר אל קיר של IVC. (ג) הכוח העליון תמונה (הגדלה 4X) של IVC Punctured לאחר עירוי. קצה המחט (חץ שחור) ניתן לראות דרך הקיר IVC נפוחה ורזה בעדינות (ראשי חץ צהוב) כפתרון התרופה שקוף מחליף את הדם הורידי.

<ol>
	<li>Yamamoto, K., Li, X., Shu, C., Miyata, T., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+Aspects+of+the+Mouse+Aortocaval+Fistula.">Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula.</a> J. Vis. Exp. (77), e50449 (2013).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+aortocaval+fistula+recapitulates+human+arteriovenous+fistula+maturation.">The mouse aortocaval fistula recapitulates human arteriovenous fistula maturation.</a> Am. J. Physiol.: Heart Circ. Physiol. 305 (12), H1718-H1725 (2013).</li><li>Escobar-Ch&#225;vez, J. J., L&#242;pez-Cervantes, M., Na&#239;k, A., Kalia, Y. N., Quintanar-Guerrero, D., Ganem-Quintanar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+thermo-reversible+pluronic+F-127+gels+in+pharmaceutical+formulations.">Applications of thermo-reversible pluronic F-127 gels in pharmaceutical formulations.</a> J. Pharm. Pharm. Sci. 9 (3), 339-358 (2006).</li><li>Almeida, H., Amaral, M. H., Lob&#227;o, P., Lobo, J. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluronic&#174;+F-127+and+Pluronic+Lecithin+Organogel+(PLO):+main+features+and+their+applications+in+topical+and+transdermal+administration+of+drugs.">Pluronic&#174; F-127 and Pluronic Lecithin Organogel (PLO): main features and their applications in topical and transdermal administration of drugs.</a> J. Pharm. Pharm. Sci. 15 (4), 592-605 (2012).</li><li>Karper, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+4+is+involved+in+human+and+mouse+vein+graft+remodeling,+and+local+gene+silencing+reduces+vein+graft+disease+in+hypercholesterolemic+APOE*3Leiden+mice.">Toll-like receptor 4 is involved in human and mouse vein graft remodeling, and local gene silencing reduces vein graft disease in hypercholesterolemic APOE*3Leiden mice.</a> Arterioscler., Thromb., Vasc. Biol. 31 (5), 1033-1040 (2011).</li><li>Redmond, E. M., Hamm, K., Cullen, J. P., Hatch, E., Cahill, P. A., Morrow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+patched-1+prevents+injury-induced+neointimal+hyperplasia.">Inhibition of patched-1 prevents injury-induced neointimal hyperplasia.</a> Arterioscler., Thromb., Vasc. Biol. 33 (8), 1960-1964 (2013).</li><li>Wong, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ephrin+type-B+receptor+4+activation+reduces+neointimal+hyperplasia+in+human+saphenous+vein+in+vitro.">Ephrin type-B receptor 4 activation reduces neointimal hyperplasia in human saphenous vein in vitro.</a> J. Vasc. Surg. , (2014).</li><li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemagglutinating+virus+of+Japan-liposome-mediated+gene+transfer+of+endothelial+cell+nitric+oxide+synthase+inhibits+intimal+hyperplasia+of+canine+vein+grafts+under+conditions+of+poor+runoff.">Hemagglutinating virus of Japan-liposome-mediated gene transfer of endothelial cell nitric oxide synthase inhibits intimal hyperplasia of canine vein grafts under conditions of poor runoff.</a> J. Vasc. Surg. 27 (1), 135-144 (1998).</li><li>Petrofski, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+to+aortocoronary+saphenous+vein+grafts+in+a+large+animal+model+of+intimal+hyperplasia.">Gene delivery to aortocoronary saphenous vein grafts in a large animal model of intimal hyperplasia.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 127 (1), 27-33 (2004).</li><li>Hata, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+phosphatidylinositol+3-kinase+signaling+reduces+intimal+hyperplasia+in+aortocoronary+saphenous+vein+grafts.">Modulation of phosphatidylinositol 3-kinase signaling reduces intimal hyperplasia in aortocoronary saphenous vein grafts.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 129 (6), 1405-1413 (2005).</li><li>Ohta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+gene+transfer+of+endothelial+cell-nitric+oxide+synthase+suppresses+intimal+hyperplasia+of+vein+grafts+in+cholesterol-fed+rabbit:+a+limited+biological+effect+as+a+result+of+the+loss+of+medial+smooth+muscle+cells.">Intraluminal gene transfer of endothelial cell-nitric oxide synthase suppresses intimal hyperplasia of vein grafts in cholesterol-fed rabbit: a limited biological effect as a result of the loss of medial smooth muscle cells.</a> Surg. 131 (6), 644-653 (2002).</li><li>Baldwin, Z. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+vascular+remodeling+induced+by+a+brief+intraluminal+exposure+to+the+recombinant+R7020+strain+of+Herpes+simplex-1.">Modulation of vascular remodeling induced by a brief intraluminal exposure to the recombinant R7020 strain of Herpes simplex-1.</a> J. Vasc. Surg. 41 (1), 115-121 (2005).</li><li>Eslami, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+to+in+situ+veins:+differential+effects+of+adenovirus+and+adeno-associated+viral+vectors.">Gene delivery to in situ veins: differential effects of adenovirus and adeno-associated viral vectors.</a> J. Vasc. Surg. 31 (6), 1149-1159 (2000).</li><li>Globerman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+transgene+expression+from+naked+DNA+delivered+into+an+arterio-venous+fistula+model+for+kidney+dialysis.">Efficient transgene expression from naked DNA delivered into an arterio-venous fistula model for kidney dialysis.</a> J. Gene Med. 13 (11), 611-621 (2011).</li><li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adventitial+transduction+of+lentivirus-shRNA-VEGF-A+in+arteriovenous+fistula+reduces+venous+stenosis+formation.">Adventitial transduction of lentivirus-shRNA-VEGF-A in arteriovenous fistula reduces venous stenosis formation.</a> Kidney Int. 85 (2), 289-306 (2014).</li><li>Brahmbhatt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Iex-1+in+the+pathogenesis+of+venous+neointimal+hyperplasia+associated+with+hemodialysis+arteriovenous+fistula.">The role of Iex-1 in the pathogenesis of venous neointimal hyperplasia associated with hemodialysis arteriovenous fistula.</a> PLoS ONE. 9 (7), e102542 (2014).</li><li>Karram, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+cardiac+hypertrophy+by+a+controlled+reproducible+sutureless+aortocaval+shunt+in+the+mouse.">Induction of cardiac hypertrophy by a controlled reproducible sutureless aortocaval shunt in the mouse.</a> J. Investig. Surg. 18 (6), 325-334 (2005).</li><li>Perry, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variation+in+angiotensin-converting+enzyme+does+not+prevent+development+of+cardiac+hypertrophy+or+upregulation+of+angiotensin+II+in+response+to+aortocaval+fistula.">Genetic variation in angiotensin-converting enzyme does not prevent development of cardiac hypertrophy or upregulation of angiotensin II in response to aortocaval fistula.</a> Circ. 103 (7), 1012-1016 (2001).</li><li>Guzman, R. J., Krystkowiak, A., Zarins, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+sustained+medial+cell+activation+after+aortocaval+fistula+creation+in+mice.">Early and sustained medial cell activation after aortocaval fistula creation in mice.</a> J. Surg. Res. 108 (1), 112-121 (2002).</li><li>Alexander, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+edifoligide,+an+E2F+transcription+factor+decoy,+for+prevention+of+vein+graft+failure+following+coronary+artery+bypass+graft+surgery:+PREVENT+IV:+a+randomized+controlled+trial.">Efficacy and safety of edifoligide, an E2F transcription factor decoy, for prevention of vein graft failure following coronary artery bypass graft surgery: PREVENT IV: a randomized controlled trial.</a> JAMA. 294 (19), 2446-2454 (2005).</li><li>Khaleel, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-pressure+distention+of+the+saphenous+vein+during+preparation+results+in+increased+markers+of+inflammation:+a+potential+mechanism+for+graft+failure.">High-pressure distention of the saphenous vein during preparation results in increased markers of inflammation: a potential mechanism for graft failure.</a> Ann. thorac. surg. 93 (2), 552-558 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

שינוי זה של מודל AVF murine משלב משלוח סמי intraluminal האנדותל הוורידים בעת יצירת AVF. AVF נוצר על ידי ניקוב האאורטה אינפרא כליות עם מחט 25 G והארכת לנקב דרך הקיר אבי העורקים מול לתוך IVC, ואחריו הזרקה של פתרון התרופה בעזרת אותה מחט. הפתרון נשמר תוך caval, כלומר., באיבר הוורידים של AVF, עד-clamping דה. מה שמייחד את המודל הזה ממודלי AVF בעכברים אחרים 17-19 הוא חוסר תפרים או דבקים שעלולות לגרום היצרות, פקקו חריפה, והפרעה אפשרית עם ניתוח מולקולרי. היכולת להשתמש באותה המחט כי מנפצת את אב העורקים ו- IVC כדי ליצור את AVF כדי גם לספק תרופות לומן AVF מאפשרת משלוח פשוט עם מניפולצית כלי מינימאלית. ישנם כמה צעדים ונקודות קריטיים לשיפור צלחת השיעור והעקביות של ההליך. יחסי ציבורמהדק oximal של אבי העורקים ו- IVC ממוקם מתחת עורק הכליה השמאלית. אם יש ורידים המותני גדולים בחלק העליון של IVC אינפרא כליות, אז שינוי של אתר ההידוק אל מתחת הכלים האלה מומלצים לאפשר דגירה יעילה של תרופה ללא דילול על ידי מדרדר גב מדמם ורידים המותני. מהדק הדיסטלי של האאורטה IVC מושם ברמת הסתעפות הכסל, שמא הוא עלול להפריע לפעולת הדיקור מחט של אבי העורקים דיסטלי ו- IVC. מחזיק את המחט 25 G עם בעל מחט מעוקל מאפשר כיוון אופטימלי של המחט במהלך לנקב כלי. המוסטאסיס מושגת על ידי כיסוי חור כניסת עורקים עם רטרו הצפק הסמוך. תשומת לב מיוחדת מוקדש לספק דחיסה זהירה תוך הימנעות חסימת AVF ופקק כפי שתואר לעיל. 1 פיתוח הטכנולוגיה העברה גנים מציע את הפוטנציאל לשנות את התוצאות כירורגי ברמה המולקולרית. דוחות המתארים בלמסירת גן traluminal כדי וריד התמקדה בעיקר טיפול ממוקד של לכישלון שתל וריד. לעומת זאת, מודל זה מאפשר משלוח סמים עבור אפנון של התבגרות AVF. יתרונותיו של מודל זה כוללים את השימוש במודל בעכברים אשר מאפשר בחינה של משתנה זנים גנטיים עכבר. בנוסף, פרוטוקול חשיפת intraluminal 15 דקות ניתן להעברה בקלות להגדרות תוך אופרטיבית קליניות עשוי לעזור להעריך התערבויות פרי-פרוצדורליים למנוע היצרות-anastomotic juxta כי בדרך כלל מסבך ניתוח AVF אדם. מתוצאות ראשוניות אלה, אנו מראים כי שיטה זו מניבה ביטוי גנים ספציפיים לאתר יותר בתוך האנדותל בהשוואה לתוואי חיצוניים מסורתיים. מגבלת פוטנציאל של מחקר זה היא ההשפעה של לחץ distension משתנה על IVC. בידוד של מגזר IVC אינו מושלם במודל העכבר הזה, כלומר., ענפים בצד (ורידים המותני) היו לא ligated. לכן, קשה בשימור בדיוקAin רמה עקבית של הלחץ distension במהלך הדגירה. למרות IVC היא נפוחה בעדינות על ידי עירוי ידני, לחצי ניפוח גבוהים עלולים לגרום היפרפלזיה neointimal 20,21 ו ניזק לתאי שריר חלק ישיר, 11 מוביל התערבות ניתוח. כמו כן, קשה לכמת את יעילות לחלוטין של אספקת סמים, כמו איזה סם עלול ללכת לאיבוד במהלך הלידה דרך הוורידים בצוואר, כמו גם לאחר הסרת מהדק דרך הפרוקסימלי IVC ואפשרות דרך AVF לתוך אבי העורקים. לבסוף, שיטה זו מאפשרת כמה התרופה להשתחרר מערכתי לאחר הסרת מהדק; פינוי תרופת השטיפה של האתר עשוי למנוע שחרור מערכתי, אך כימותי מידת כישלון תרופה היה צריך להיות אשר. לסיכום, שינוי טכני זה למודל AVF בעכברים הוא יחסית פשוט לשחזור ומאפשר ממוקד משלוח סמים האנדותל אל AVF העכבר. intraluminal בjection בעת יצירת AVF קיימת היתכנות טכנית והוא יכול לשפר ביטוי גנים ויראלי בהצלחה האנדותל לעומת משלוח adventitial. במודל אספקת AVF-תרופה זו יהיה שיטה שימושית לא רק לנתיחה של המנגנונים מווסתים התבגרות איבר AVF ורידים, אלא גם עבור אפנון טיפולי של התבגרות AVF.

באבוב aortovenous בעכברים (AVF) לנקב מודל בין אבי העורקים ואת הווריד הנבוב נחות (IVC) הוא עכשיו טכניקה הוקמה. 1 במודל זה, שני הקירות של אבי העורקים אינפרא כליות הם ניקב עם מחט 25 G, היציאה אל סמוך וריד נבוב-ספיקת כליות אינפרא; חור כניסת אב העורקים הקדמי יתוקן עם דחיסה פשוטה, ואינו זקוק לתיקון תפר. בחינת מעקב סידורים ידי אולטרסאונד דופלר ברזולוציה גבוהה וניתוח היסטולוגית מראה את AVF יש שלב התבגרות ולאחר מכן שלב כושל, משחזר בפתופיזיולוגיה הידועה של AVF אדם. 2 כדי לחקור מנגנונים מווסתים התבגרות AVF, שיטות משופרות למסירה ממוקדת של תרופות האנדותל התבגרות AVF נדרשות. משלוח ממוקד של תרופות כלי יכול להיות באמצעות משלוח endovascular לומן, או באמצעות משלוח חיצוני adventitia. דוגמא אחת של משלוח החיצוני היא commonly בשימוש יישום adventitial של ג&#39;ל Pluronic. קופולימר זהו התרמו-הפיך והפך מנוזל ג&#39;ל מוצק כאשר מחומם לטמפרטורת הגוף. מחקרים קודמים הראו משלוח סמים מתמשך מושגת כאשר התרופה המעורבת ג&#39;ל pluronic היא למריחה על עור in vivo. 3,4 יישום adventitial של וקטורים ויראליים או siRNA עם ג&#39;ל Pluronic דווח כיעיל כמערכת משלוח perivascular. 5,6 אנחנו יש גם דיווח כי טיפול של ורידי saphenous אדם explanted עם גירוי adventitial ידי פפטידים הביא זרחון של חלבוני קולטן האנדותל. 7 מצד שני, החוקרים השתמשו גם משלוח intraluminal של שני וקטורים ויראליים nonviral 8-10 ארנב 11,12 מודלים כלבים של שתלי וריד. בדוחות אלה, העברת גנים בוצעה vivo לשעבר לאחר וריד קציר. אסלאמי et al. דיווח גנטי נגיפי endovascular לספקy כדי תרדמת ורידים באתרו ללא יצירת מעקף. 13 Gloverman et al. משלוח intraluminal ו adventitial המדווחים של DNA ערום fistulae וריד ברום הבטן עורק-שטחית הירך חולדה. 14 הקבוצה מאיו דיווחו משלוח סמים adventitial ב fistulae וריד העכבר התרדמה עורק-וריד הצוואר. 15,16 עם זאת, מודלים שדווח בעבר אלה נדרש השקה שנתפרו כדי ליצור AVF. בדו&quot;ח זה, אספקת סמי intraluminal עם יצירת סימולטני AVF בעכברים מתוארת, תוך שימוש במודל תפר-פחות בריאת AVF. באמצעות מודל AVF בעכברים מהונדסים זו שיטה פשוטה עבור משלוח הסמים intraluminal אל איבר ורידי של פיסטולה יכול להתבצע.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="948">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">Pluronic F-127</td>
			<td style="width:259px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2443-250G</td>
			<td style="width:231px;">Used as 30% solution in d-water</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">GFP antibody</td>
			<td style="width:259px;">NOVUS BIOLOGICALS INC</td>
			<td style="width:119px;">NB100-1770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">Ad-CMV-GFP</td>
			<td style="width:259px;">VECTOR BIOLABS</td>
			<td style="width:119px;">1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">0.9% Sodium Chloride Irrigation, USP</td>
			<td style="width:259px;">Baxter</td>
			<td style="width:119px;">2F7122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">BD PrecisionGlide Needle 25G x 5/8</td>
			<td style="width:259px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">BD 1ml Syringe Tuberculin Slip Tip</td>
			<td style="width:259px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">Scarpel</td>
			<td style="width:259px;">Surgical Design Inc</td>
			<td style="width:119px;">22079707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">6-0 ETHILON P-1 11mm 3/8c Reverse Cutting</td>
			<td style="width:259px;">ETHICON INC</td>
			<td style="width:119px;">697G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:343px;">Vevo 770 ultrasound machine&#160;</td>
			<td style="width:259px;">Visualsonics&#160;</td>
			<td style="width:119px;">20-60 Mhz scan head; RMV-704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">Vascular clamp&#160;</td>
			<td style="width:259px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:119px;">RS-5424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:343px;">Clamp applying forceps&#160;</td>
			<td style="width:259px;">Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:119px;">RS-5410</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intraluminal drug delivery to the mouse arteriovenous fistula endothelium

משלוח ממוקד של תרופות כדי לשפר פיסטולה arteriovenous (AVF) התבגרות יכולה להינתן גם דרך נתיבי intraluminal או חיצוניים. המודל AVF murine פשוט היה בשילוב עם הממשל intraluminal של פתרון התרופה האנדותל ורידי בעת ובעונה אחת כבריאה פיסטולה. היבטים טכניים של מודל זה הם דנו. תחת הרדמה כללית, חתך בטן נעשה ואת הנבוב האאורטה ונח קאווה (IVC) נחשפת. אב העורקים אינפרא כליות ו- IVC הם גזורים עבור מהדק. לאחר ההידוק הפרוקסימלית ומ דיסטלי, האתר לנקב חשופה ומחט G 25 משמש לנקב שני הקירות של אבי העורקים ואת לתוך IVC. מייד לאחר הניקור, גן להביע כתב וקטור ויראלי היה חדור ב IVC באמצעות אותה המחט, ואחריו 15 דקות של דגירה. שיטת ממשל intraluminal הפעלת הצגה גנטית נגיפית חזקה יותר האנדותל הוורידים לעומת ממשל ידי התוואי החיצוני. Nove זהשיטת l מסירה תקל מחקרים לחקור את תפקידו של האנדותל ב התבגרות AVF ולאפשר אספקת סמי intraluminal בעת פעולה כירורגית.

בסדרה של 33 עכברים, הישרדות ביום שלאחר הניתוח הראשון הייתה 97.0%; patency AVF, כפי שנקבע על ידי אולטרסאונד, היה 84.9%. יעילות ג&#39;ין תמרה של מסלול משלוח endovascular זה עם המסלול המסורתי החיצוני הושוותה. למסירה intraluminal (ILD), מיד לאחר ניקור, 200 μl של Adenovirus-GFP (Ad-GFP) פתרון וקטור (1 × 10 9 PFU / ml) החדיר לתוך IVC באמצעות מחט ניקוב, ואחריו זמן הדגירה 15 דקות . עכברי בקרה קבלו משלוח adventitial (AD) של Ad-GFP (1 × 10 9 PFU / ml) אל IVC באמצעות ג&#39;ל Pluronic. דוגמאות היו explanted ב 24 שעות לאחר חשיפת וקטורים אדנווירוס. ביטוי של ה- GFP בכותל IVC ואת פיסטולה הוערך על ידי תצפית en פנים מן אינטימה ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי, כמו גם בדיקה היסטולוגית בסעיפים באמצעות-GFP אנטינוֹגְדָן. צמוד תצפית פנים הראתה ביטוי חזק יותר של GFP בקיר IVC בעכברים שטופלו ILD לעומת לספירה, עם הגדלת מאפיין ברחבי פיסטולה ב 24 שעות (איור 2 א). ביטוי של GFP היה עיקש בשתי הקבוצות ב 72 שעות לאחר transfection (מידע לא מוצג). ניתוח היסטולוגית עם נוגדן אנטי- GFP הראה ביטוי GFP חזק יותר באתר ספציפי אינטימה של IVC בעכברים שטופלו ILD לעומת לספירה. (תרשים 2B). כדי לאשר את הממצאים, IVCs-ספיקת כליות אינפרא שטופלו אדנו-GFP על ידי AD או ILD נבצרו עבור כתם המערבי. ביטוי חלבון ה- GFP היה מספיק לגילוי רק לאחר הכשרת הישוב, דבר המצביע על משלוח סמים ויראלי מעולה אל הקיר IVC דרך המסלול intraluminal ב 24 שעות לאחר transfection. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53905/53905fig2.jpg" /> משלוח איור 2. Adenovirus-GFP אל לומן AVF משפר הביטוי GFP. (א) מראה immunofluorescence נציג en צפה פני האנדותל AVF (24 שעות) בעכברים שקיבלו אדנו-GFP מיושם על ידי משלוח adventitial (למעלה) או על ידי משלוח intraluminal (למטה). בר מציין 25 מיקרומטר. (ב) immunofluorescence נציג מראה קטעי האנדותל AVF (24 שעות) בעכברים שקיבלו אדנו-GFP מיושם על ידי משלוח adventitial (למעלה) או על ידי משלוח intraluminal (למטה). * מציין לומן של IVC; העמודה מציין 25 מיקרומטר. (C) כתם המערבי נציג מראה זיהוי של GFP ב AVF שטופלו אדנו-GFP מיושם באמצעות adventitia או מסלול intraluminal.

Watch this Scientific Journal Video about Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium at JoVE.com

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

החדרת תרופות Intraluminal אל האנדותל מורסה arteriovenous עכבר

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

intraluminal-drug-delivery-to-mouse-arteriovenous-fistula

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.3K Views.  Yale University. After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

Video: Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to stimulate microcirculation. The choice of delivery method for these agents is important because the route of administration profoundly affects the bioactivity and efficacy of these agents1,2. In this article, we demonstrate how to locally administer a substance in ischemic hindlimbs by using a catheterized osmotic pump. This pump can deliver a fixed volume of aqueous solution continuously for an allotted period of time. We also present our mouse model of unilateral hindlimb ischemia induced by ligation of the common femoral artery proximal to the origin of profunda femoris and epigastrica arteries in the left hindlimb. Lastly, we describe the in vivo cannulation and ligation of the infrarenal abdominal aorta and perfusion of the hindlimb vasculature with Microfil, a silicone radiopaque casting agent. Microfil can perfuse and fill the entire vascular bed (arterial and venous), and because we have ligated the major vascular conduit for exit, the agent can be retained in the vasculature for future ex vivo imaging with the use of small specimen micro-CT3.

We show here the in vivo insertion of an osmotic pump for constant local drug delivery and the creation of hindlimb ischemia in a mouse model. Moreover, the hindlimb vasculature is perfused with Microfil, a silicone radiopaque agent, to prepare for micro-computed tomography (micro-CT) imaging.

משלוח סמים האוסמוטי לhindlimbs איסכמי וטפטוף של כלי דם עם Microfil למייקרו-טומוגרפיה ממוחשבת הדמיה

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

היבטים טכניים של מורסת Aortocaval מאוס

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high molecular weight compounds from the bloodstream and into brain tissue. Some direct delivery success in humans has been achieved via implantation of transcranial catheters; however this method is highly invasive and associated with numerous complications. A less invasive alternative would be to dose the brain through a surgically implanted, semipermeable membrane such as the nasal mucosa that is used to repair skull base defects following endoscopic transnasal tumor removal surgery in humans. Drug transfer though this membrane would effectively bypass the BBB and diffuse directly into the brain and cerebrospinal fluid. Inspired by this approach, a surgical approach in mice was developed that uses a donor septal mucosal membrane engrafted over an extracranial surgical BBB defect. This model has been shown to effectively allow the passage of high molecular weight compounds into the brain. Since numerous drug candidates are incapable of crossing the BBB, this model is valuable for performing preclinical testing of novel therapies for neurological and psychiatric diseases.

A mouse model of human endoscopic skull base reconstruction has been developed that creates a semipermeable interface between the brain and nose using nasal mucosal grafts. This method allows researchers to study delivery to the central nervous system of high molecular weight therapeutics which are otherwise excluded by the blood-brain barrier when administered systemically.

Heterotopic הרירי Engrafting נוהל העברת תרופות ישיר למוח בעכברים

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these diseases. Chronic retinal diseases such as retinal oedema or neovascularization usually require multiple intraocular injections to effectively treat the condition. However, the risks associated with these injections increase with repeated delivery of the drug. Therefore, alternative delivery methods need to be established in order to minimize the risks of reinjection. Several other investigations have developed methods to deliver drugs over extended time, through materials capable of releasing chemicals slowly into the eye. In this investigation, we outline the use of Elvax 40W, a copolymer resin, to act as a vehicle for drug delivery to the adult rat retina. The resin is made and loaded with the drug. The drug-resin complex is then implanted into the vitreous cavity, where it will slowly release the drug over time. This method was tested using 2-amino-4-phosphonobutyrate (APB), a glutamate analogue that blocks the light response of the retina. It was demonstrated that the APB was slowly released from the resin, and was able to block the retinal response by 7 days after implantation. This indicates that slow-release drug delivery using this copolymer resin is effective for treating the retina, and could be used therapeutically with further testing.

This paper details how Elvax 40W can be used as a slow-release method for drug delivery to the adult rat retina. The protocol for preparing, loading, and delivering the drug-resin complex to the eye is described.

משלוח שחרור איטי תרופות דרך Elvax 40W לרשתית העכברוש: ​​השלכות לטיפול במצבים כרוניים

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

מודל Murine רומן של אי מורסה arteriovenous: ההליך הכירורגי בהרחבה

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Pancreatic Duct Infusion: An Effective and Selective Method of Drug and Viral Delivery

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, pancreatitis, and pancreatic cancer. All three of these diseases mark active areas of study, not only to develop immediate therapy, but also to better understand their pathophysiology. There are few tools to further these areas of study. Pancreatic duct infusion is an important technique that can allow for lineage tracing, gene introduction, and cell line-specific targeting. The technique requires the intricate dissection of the second portion of the duodenum and ampulla, followed by the occlusion of the bile duct and the cannulation of the pancreatic duct. Although the technique is technically challenging at first, the applications are myriad. Ambiguity in the specifics of the procedure between groups highlighted the need for a standard protocol. This work describes the expression of a green fluorescent protein (GFP) within the pancreas after the pancreatic duct infusion of a viral vector expressing GFP versus a sham surgery. The infusion and therefore expression is specific to the pancreas, without expression present in any other tissue type.

Pancreatic duct infusion is an important technique that can allow for lineage tracing, gene introduction, and cell line-specific targeting. A pancreatic duct infusion technique for drug and viral delivery to pancreatic cells is presented here.

עירוי צינור הלבלב: שיטה יעילה וסלקטיבית של סמים ומשלוח ויראלי

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening pulmonary manifestations. Ivacaftor (IVA) and ivacaftor-lumacaftor (LUMA) combination are two new breakthrough CF drugs that directly modulate the activity and trafficking of the defective CFTR-protein. However, there is still a dearth of understanding on pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters and the pharmacology of ivacaftor and lumacaftor. The HPLC-MS technique for the simultaneous analysis of the concentrations of ivacaftor, hydroxymethyl-ivacaftor, ivacaftor-carboxylate, and lumacaftor in biological fluids in patients receiving standard ivacaftor or ivacaftor-lumacaftor combination therapy has previously been developed by our group and partially validated to FDA standards. However, to allow the high-throughput analysis of a larger number of patient samples, our group has optimized the reported method through the use of a smaller pore size reverse-phase chromatography column (2.6 &#181;m, C8 100 &#197;; 50 x 2.1 mm) and a gradient solvent system (0-1 min: 40% B; 1-2 min: 40-70% B; 2-2.7 min: held at 70% B; 2.7-2.8 min: 70-90% B; 2.8-4.0 min: 90% B washing; 4.0-4.1 min: 90-40% B; 4.1-6.0 min: held at 40% B) instead of an isocratic elution. The goal of this study was to reduce the HPLC-MS analysis time per sample dramatically from ~15 min to only 6 min per sample, which is essential for the analysis of a large amount of patient samples. This expedient method will be of considerable utility for studies into the exposure-response relationships of these breakthrough CF drugs.

Ivacaftor and ivacaftor-lumacaftor combination are two new CF drugs. However, there is still a dearth of understanding on their PK/PD and pharmacology. We present an optimized HPLC-MS technique for the simultaneous analysis of ivacaftor and its major metabolites, and lumacaftor.

שיטת אופטימיזציה LC-MS/MS לניתוח תפוקה גבוהה של דגימות קליניות של Ivacaftor, שלה מטבוליטים העיקריים Lumacaftor של נוזלים ביולוגיים של חולי סיסטיק פיברוזיס

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) models based on pBECs in mono-culture (MC), MC with astrocyte-conditioned medium (ACM), and non-contact co-culture (NCC) with astrocytes of porcine or rat origin. pBECs were isolated and cultured from fragments of capillaries from the brain cortices of domestic pigs 5-6 months old. These fragments were purified by careful removal of meninges, isolation and homogenization of grey matter, filtration, enzymatic digestion, and centrifugation. To further eliminate contaminating cells, the capillary fragments were cultured with puromycin-containing medium. When 60-95% confluent, pBECs growing from the capillary fragments were passaged to permeable membrane filter inserts and established in the models. To increase barrier tightness and BBB characteristic phenotype of pBECs, the cells were treated with the following differentiation factors: membrane permeant 8-CPT-cAMP (here abbreviated cAMP), hydrocortisone, and a phosphodiesterase inhibitor, RO-20-1724 (RO). The procedure was carried out over a period of 9-11 days, and when establishing the NCC model, the astrocytes were cultured 2-8 weeks in advance. Adherence to the described procedures in the protocol has allowed the establishment of endothelial layers with highly restricted paracellular permeability, with the NCC model showing an average transendothelial electrical resistance (TEER) of 1249 &#177; 80 &#937; cm2, and paracellular permeability (Papp) for Lucifer Yellow of 0.90 10-6 &#177; 0.13 10-6 cm sec-1 (mean &#177; SEM, n=55). Further evaluation of this pBEC phenotype showed good expression of the tight junctional proteins claudin 5, ZO-1, occludin and adherens junction protein p120 catenin. The model presented can be used for a range of studies of the BBB in health and disease and, with the highly restrictive paracellular permeability, this model is suitable for studies of transport and intracellular trafficking.

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

The aim of the protocol is to present an optimized procedure for the establishment of an in vitro blood-brain barrier (BBB) model based on primary porcine brain endothelial cells (pBECs). The model shows high reproducibility, high tightness, and is suitable for studies of transport and intracellular trafficking in drug discovery.

שיפור שיטה להקמת במבחנה מחסום הדם - מוח מודל המבוסס על תאי אנדותל המוח חזירי

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Trans-Tympanic Drug Delivery for the Treatment of Ototoxicity

The systemic administration of protective agents to treat drug-induced ototoxicity is limited by the possibility that these protective agents could interfere with the chemotherapeutic efficacy of the primary drugs. This is especially true for the drug cisplatin, whose anticancer actions are attenuated by antioxidants which provide adequate protection against hearing loss. Other current or potential otoprotective agents could pose a similar problem, if administered systemically. The application of various biologicals or protective agents directly to the cochlea would allow for high levels of these agents locally with limited systemic side effects. In this report, we demonstrate a trans-tympanic method of delivery of various drugs or biological reagents to the cochlea, which should enhance basic science research on the cochlea and provide a simple way of directing the use of otoprotective agents in the clinics. This report details a method of trans-tympanic drug delivery and provides examples of how this technique has been used successfully in experimental animals to treat cisplatin ototoxicity.

We present a technique for localized administration of drugs through the trans-tympanic route into the cochlea. Drug delivery through this route would not interfere with the anti-cancer efficacy of the chemotherapeutic drugs such as cisplatin.

משלוח סמים טרנס-Tympanic לטיפול Ototoxicity

The systemic administration of protective agents to treat drug-induced ototoxicity is limited by the possibility that these protective agents could ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves focal endothelial-selective transgenesis, thereby allowing an investigator to determine the biological roles of endothelial-expressed transgenes and to quantify the in vivo transcriptional activity of DNA sequences in large artery endothelial cells. The method uses surgical isolation of rabbit common carotid arteries and an arteriotomy to deliver a transgene-expressing viral vector into the arterial lumen. A short incubation period of the vector in the lumen, with subsequent aspiration of the lumen contents, is sufficient to achieve efficient and durable expression of the transgene in the endothelium, with no detectable transduction or expression outside of the isolated arterial segment. The method allows assessment of the biological activities of transgene products both in normal arteries and in models of human vascular disease, while avoiding systemic effects that could be caused either by targeting gene delivery to other sites (e.g. the liver) or by the alternative approach of delivering genetic constructs to the endothelium by germ line transgenesis. Application of the method is limited by the need for a skilled surgeon and anesthetist, a well-equipped operating room, the costs of purchasing and housing rabbits, and the need for expertise in gene-transfer vector construction and use. Results obtained with this method include: transgene-related alterations in arterial structure, cellularity, extracellular matrix, or vasomotor function; increases or reductions in arterial inflammation; alterations in vascular cell apoptosis; and progression, retardation, or regression of diseases such as intimal hyperplasia or atherosclerosis. The method also allows measurement of the ability of native and synthetic DNA regulatory sequences to alter transgene expression in endothelial cells, providing results that include: levels of transgene mRNA, levels of transgene protein, and levels of transgene enzymatic activity.

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

This method is to introduce a transgene into the endothelium of rabbit carotid arteries. Introduction of the transgene allows the assessment of the biological role of the transgene product either in normal arteries or disease models. The method is also useful for measuring activity of DNA regulatory sequences.

אין ויוו העברה גנטית כדי אנדותל העורק נפוצות הארנב

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...