This work was supported by a CIHR operating grant (MOP-102624) to Q. Y. We thank Dr Carolyn Harley for helpful discussions throughout the study, Dr. Qinlong Hou, Amin Shakhawat, and Andrea Darby-King for technical support.

גורי החולדה ספראג Dawley (Charles River) משני המינים נמצאים בשימוש. המלטות נבחרות ל12 על PD1 (לידה להיות PD0). הסכרים נשמרים בשעתי אור 12 / מחזור כהה גישה כרצונך מודעת מזון ומים עם. הפרוצדורות שאושרו על ידי ועדת בעלי החיים המוסדית של האוניברסיטה ממוריאל טיפול. בניית Plug 1 Nose הערה:. הליך זה הותאם ושונה מאל קאמינגס et (1997) 35. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות aquire 20-פוליאתילן ו3-0 חוט תפר משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי חתיכה קטנה של 20-פוליאתילן צינורות כ 0.8 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר משי חוט דרך צינורות מוכנים כך שיש חוט משני צדי הקטע של צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצה אחד של החוט מחוץ לתקע, לקשור קשר בחוט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את הקטע של צינורות מעל הקשר בחוט. הקשר צריך להגיש בתוך צינורות.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך את שני הקצוות של החוט כזה ש~ 2 מ&quot;מ של חוט בולט מקצה אחד של הצינור (ראה איור 1 א). </li></ol> .2 Naris ספיגה לפני אימון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר גור מהסכר ומניחים בצלחת מאובטחת מכוסות במצעים רגילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ביישום קצה כותנה להספיג ג&#39;לי הרדמה מקומי, 2% Xylocaine, על Naris להיות occluded. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את הגור לנוח בצלחת ל~ 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הגור בעדינות אך באופן מאובטח ביד הלא הדומיננטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השימוש ביד הדומיננטית, להרים תקע האף ולהספיג אותו ג&#39;לי ההרדמה המקומי סביב הקצה שממנו החוט לא בולט. זה יפעל כשתי הרדמה לכל כאבי קטין הקשורים להכנסת תקע ויפעל כחומר סיכה בתוך Naris. הערה: ההשפעה של Xylocaine מתחילה בתוך כמה דקות ונמשכת 20-30 דקות. גורים בסובלנות טובה מופע הכללי להכנסת תקע לאחר יישום ג&#39;לי xylocaine (מ &#39;inimum נאבק וניקוד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את תקע האף על ידי תוקף מחזיק את הגור ומסתובב באיטיות בתקע בדחיפות מאוד עדינות עד שהתקע מוכנס באופן מלא ורק את החוט 2 מ&quot;מ בולט מNaris (ראה איור 1). לא צריך להיות שום דימום משני Naris במהלך תהליך זה. גורים עם דימום במהלך החדרת תקע האף אינם נכללים וחזרו לסכרים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לבעל החיים לנוח במנה זו למשך 5 דקות על מנת להרגיל לתקע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגור מצלחת ההתרגלות ולהתחיל את הפרדיגמה אוויר 24. </li></ol><img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1 בנייה של התוספת האף. ) שרטוטים המציגים את השלבים של מה שהופך את תקע האף. חוט נמשך דרך צינורות פוליאתילן; קשר הוא עשה וpulהוביל לאמצע הצינור כדי לחסום אותו; שני קצוות נחתכים עם שאריות 2 מ&quot;מ בקצה אחד מצינורות. B) שפתוחה ותצוגה לרוחב של עכברוש עם תקע האף בNaris אחד. .3 ריחני מצעים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבישת כפפות חדשות ובמנדף על מנת למנוע זיהום ריח, למקם 500 מ&quot;ל של מצעי שבבי עץ לתוך שקית ניילון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במזרק להכין 0.3 מ&quot;ל תמצית מנטה, ולרסס את זה על המצעים בשקית הניילון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את השקית הסגורה, לנער את השקית במרץ, ולאפשר לכלי המיטה לנוח בשקית למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המצעים הריחניים בקופסא ברורה, רדודה, אקריליק אימון (20 x 20 x 5 סנטימטר 3, איור 2 א) שנחשפה במנדף ל5 דקות לפני השימוש. ברגע שהמצעים מוכנים, להשליך כפפות אלה, ואינם מאפשר לכפפות אלה כדי לבוא במגע עם בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המצעים ללא בישום בתיבת פלסטיק שקופה זהה, וחדרבטוח שזה לא בא במגע עם המצעים הריחניים או כפפות בשימוש. </li></ol> .4 ריח אוויר פרדיגמה (ראה תמונה באיור 2 א) גורים עוברים גם מפגש אוויר אחד, על PD 6, או פגישות מרובות משפט (אימון אחד ביום, פ&quot;ד 3-6). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הגור המורגל במצעים ריחניים. לריח שליטה בלבד (O / S -) גורים, להשאיר גורים אלה על המצעים עבור 10 דקות, לאחר מכן דילגתי לשלב 4.5. לשבץ + ריח ניסיוני גורים (O / S +), ממשיכים את השלבים הבאים בסעיף זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבץ הגור ל30 שניות באמצעות מכחול קטן. השתמש בתנועות מעגליות מהירות בעיקר סביב האזור האחורי של הגור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את הגור לנוח 30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 4.2 &amp; 4.3 עבור הסכום כולל של 10 דקות (כלומר 10 זיווגים של ליטוף + ריח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר גור מתיבת האוויר, להסיר את תקע האף ולהחזיר את הגור לסכר. </li></ol> &lt;class = &quot;jove_title&quot; p&gt; 5. העדפות ריח Lateralized בדיקה (ראה תמונה באיור 2) בדיקה מתרחשת בנקודות זמן שונות (לדוגמא, שעה 24 או 48) הבאות האימון האחרון. הבדיקה מתבצעת בתא חלד בדיקות פלדה (30 x 20 x 18 סנטימטר 3), אשר ממוקם בחלק העליון של שתי תיבות אימונים (תיבת הכשרה מתוארת ב3.4), מופרדות על ידי אזור ניטראלי 2 סנטימטר. תיבת הכשרה אחת מכילה מצעים בניחוח מנטה ואילו התיבה אחרת מכילה מצעים נקיים, ללא בישום. הרצפה של חדר הבדיקות היא רשת מתכת, אשר לאחר מכן מכוסה בסדין להסרה של רשת פלסטיק (איור 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנטה אחד ומצעים ללא בישום אחד כאמור בסעיף 3, ולמקם כל תיבה שמתחת לשני צדי מתרס של חדר הבדיקות, מלבד 2 סנטימטר. הנח את רשת הפלסטיק על רצפת מתכת הרשת של חדר הבדיקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגור מהסכר והנח טיפת משרד של גריז סיליקון חסר ריח על Narisשהאפיל במהלך אימון. Re-להחיל את הגריז לאורך כל הליך הבדיקה הראשון בהתאם לצורך. הערה: חסימת Naris אקראית במהלך אימון ובדיקה עשויה להיחשב כדי למנוע הטיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח גור באזור הניטרלי של חדר הבדיקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את הגור לחקור את התא 1 דקות, הקלטה כמה זמן את הגור בילה יותר משני הצדדים של החדר (כלומר מעל מנטה או מצעים ניטרליים בניחוח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את הגור לנוח דקות 1 בתא החזקת פלסטיק מכוסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 5.2 &amp; 5.3 עבור הסכום כולל של 10 דקות (כלומר 5 ניסויי מבחן מופרדים על ידי 5 ניסויי שאר) מיתוג הנטייה הראשונית של הגור בתא על מנת לשלוט על העדפות כיוון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר בדיקה, לנגב את השומן מNaris. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס noseplug פוליאתילן לNaris ההפך כאמור בסעיף 2 ולאפשר לבעל החיים לנוח במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחן את הגור שוב כמו ב<html> 5.3 -5.6, להסיר את התקע, ולהחזיר את הגור לסכר. להסיר ולנקות את רשת הפלסטיק של חדר בדיקות עם 95% אתנול ויאפשר לנוזל מתאדה. הנח את הרשת בחזרה לפני בדיקת הגור הבא. הערה: יישום גריז סיליקון בחסימת Naris הראשונה במהלך הבדיקה מונעת את הסיכוי לדימום ולחץ הקשור בהחדרת תקע האף. </li></ol><img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig2highres.jpg" width="500" /> הכשרת איור 2 ריח מוקדם העדפה ובדיקות. ) אימון ריח מוקדם העדפת שימוש בריח + מלטף את הפרדיגמה. B) בדיקת העדפת ריח שתי בחירה עם מצעי מנטה בצד אחד, לשלוט במצעים ללא בישום בצד השני. אזור ניטראלי 2 סנטימטר ממוקם באמצע. .6 בדיקה אפקטיביות של יחיד Naris ספיגה nt &quot;&gt; ניסוי זה מתבצע על מנת לקבוע אם חסימת Naris אחת מובילה להפעלת lateralized של מערכת חוש הריח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע חסימות Naris חד צדדיות על PD 6 או 7 גורים כפי שתואר בסעיף 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי ~ 5 דקות התרגלות, למקם את הגור במכל פלסטיק מכוסה וחושף אותה ל30 μl שמן מנטה טהור ספוגים בפיסת הרקמה עבור 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאחר חשיפת ריח המנטה, להזריק את הגור intraperitoneally (IP) עם כלורל (400 מ&quot;ג / קילוגרם) כהרדמה כללית, או pentobarbitol, (150 מ&quot;ג / קילוגרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהרדמה מלאה (לא מראה תגובה לזנב או קמצוץ רגל), transcardially ינקב את הגור עם פתרונות קרים כקרח של תמיסת מלח (0.9%) ל~ 1 דקות, ואחריו paraformaldehyde (4%, מומס בפתרון חיץ 0.1 M פוספט, PBS ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 10 דקות של זלוף paraformaldehyde, לאסוף את המוח ולמקם אותו בparaformaldehyde לילה ב 4 ° C, אז טרנסFER המוח לתמיסת סוכרוז (20% PBS) ל24 שעות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך פרוסות מוח העטרה ב30 עובי מיקרומטר עם cryostat. לאסוף פרוסות OB ומחשב ולעלות על גבי שקופיות ג&#39;לטין מצופה, ואחריו מכתים אימונוהיסטוכימיה סטנדרטי לנוגדן pCREB 21,25,30. </li></ol> .7 בדיקת ההפיכות של יחיד Naris ספיגה בדיקות ניסוי זה אם השפעת החסימה היא הפיכה ב24 שעות לאחר הסרת תקע האף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע חסימות Naris חד צדדיות על PD 6 או 7 גורים כפי שתואר בסעיף 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 15 דקות (שווה ערך ל משך הזמן של חסימת Naris במהלך אימון - 5 התרגלות + הכשרת דקות דקות 10), להסיר את תקע האף, ולהחזיר את הגור לסכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות מאוחר יותר, לחשוף את הגור לריח המנטה במכל פלסטיק מכוסה עבור 10 דקות כפי שתואר ב6.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע אותם שלבים בכתיוני 6.3-6.6. </li></ol>

<ol>
	<li>Gregory, E. H., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+olfactory-guided+behavior+in+infant+rats.">Development of olfactory-guided behavior in infant rats.</a> Physiol Behav. 6, 573-576 (1971).</li><li>Alberts, J. R., May, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonnutritive,+thermotactile+induction+of+filial+huddling+in+rat+pups.">Nonnutritive, thermotactile induction of filial huddling in rat pups.</a> Dev Psychobiol. 17, 161-181 (1984).</li><li>Galef, B. G., Kaner, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+maintenance+of+preference+for+natural+and+artificial+olfactory+stimuli+in+juvenile+rats.">Establishment and maintenance of preference for natural and artificial olfactory stimuli in juvenile rats.</a> J Comp Physiol Psychol. 94, 588-595 (1980).</li><li>Johanson, I. B., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetitive+learning+in+1-day-old+rat+pups.">Appetitive learning in 1-day-old rat pups.</a> Science. 205, 419-421 (1979).</li><li>Johanson, I. B., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetitive+conditioning+in+neonatal+rats:+conditioned+orientation+to+a+novel+odor.">Appetitive conditioning in neonatal rats: conditioned orientation to a novel odor.</a> Dev Psychobiol. 15, 379-397 (1982).</li><li>Johanson, I. B., Teicher, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+of+an+odor+preference+in+3-day-old+rats.">Classical conditioning of an odor preference in 3-day-old rats.</a> Behav Neural Biol. 29, 132-136 (1980).</li><li>McLean, J. H., Darby-King, A., Sullivan, R. M., King, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonergic+influence+on+olfactory+learning+in+the+neonate+rat.">Serotonergic influence on olfactory learning in the neonate rat.</a> Behav Neural Biol. 60, 152-162 (1993).</li><li>Moore, C. L., Power, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+maternal+care+and+individual+differences+in+play,+exploration,+and+grooming+of+juvenile+Norway+rat+offspring.">Variation in maternal care and individual differences in play, exploration, and grooming of juvenile Norway rat offspring.</a> Dev Psychobiol. 25, 165-182 (1992).</li><li>Pedersen, P. E., Williams, C. L., Blass, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+and+odor+conditioning+of+suckling+behavior+in+3-day-old+albino+rats.">Activation and odor conditioning of suckling behavior in 3-day-old albino rats.</a> J Exp Psychol Anim Behav Process. 8, 329-341 (1982).</li><li>Sullivan, R. M., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinforcers+in+infancy:+classical+conditioning+using+stroking+or+intra-oral+infusions+of+milk+as+UCS.">Reinforcers in infancy: classical conditioning using stroking or intra-oral infusions of milk as UCS.</a> Dev Psychobiol. 21, 215-223 (1988).</li><li>Sullivan, R. M., Leon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+olfactory+learning+induces+an+enhanced+olfactory+bulb+response+in+young+rats.">Early olfactory learning induces an enhanced olfactory bulb response in young rats.</a> Brain Res. 392, 278-282 (1986).</li><li>Weldon, D. A., Travis, M. L., Kennedy, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttraining+D1+receptor+blockade+impairs+odor+conditioning+in+neonatal+rats.">Posttraining D1 receptor blockade impairs odor conditioning in neonatal rats.</a> Behav Neurosci. 105, 450-458 (1991).</li><li>Sullivan, R. M., Hofer, M. A., Brake, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory-guided+orientation+in+neonatal+rats+is+enhanced+by+a+conditioned+change+in+behavioral+state.">Olfactory-guided orientation in neonatal rats is enhanced by a conditioned change in behavioral state.</a> Dev Psychobiol. 19, 615-623 (1986).</li><li>Camp, L. L., Rudy, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+categorization+of+appetitive+and+aversive+events+during+postnatal+development+of+the+rat.">Changes in the categorization of appetitive and aversive events during postnatal development of the rat.</a> Dev Psychobiol. 21, 25-42 (1988).</li><li>Moriceau, S., Wilson, D. A., Levine, S., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+circuitry+for+odor-shock+conditioning+during+infancy:+corticosterone+switches+between+fear+and+attraction+via+amygdala.">Dual circuitry for odor-shock conditioning during infancy: corticosterone switches between fear and attraction via amygdala.</a> J Neurosci. 26, 6737-6748 (2006).</li><li>Roth, T. L., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+opioids+and+their+role+in+odor+preference+acquisition+and+consolidation+following+odor-shock+conditioning+in+infant+rats.">Endogenous opioids and their role in odor preference acquisition and consolidation following odor-shock conditioning in infant rats.</a> Dev Psychobiol. 39, 188-198 (2001).</li><li>Roth, T. L., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consolidation+and+expression+of+a+shock-induced+odor+preference+in+rat+pups+is+facilitated+by+opioids.">Consolidation and expression of a shock-induced odor preference in rat pups is facilitated by opioids.</a> Physiol Behav. 78, 135-142 (2003).</li><li>Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+a+sense+of+safety:+the+neurobiology+of+neonatal+attachment.">Developing a sense of safety: the neurobiology of neonatal attachment.</a> Ann N Y Acad Sci. 1008, 122-131 (2003).</li><li>Wilson, D. A., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+associative+conditioning+in+infant+rats+with+brain+stimulation+as+reward.+I.+Neurobehavioral+consequences.">Olfactory associative conditioning in infant rats with brain stimulation as reward. I. Neurobehavioral consequences.</a> Brain Res Dev Brain Res. 53, 215-221 (1990).</li><li>Sullivan, R. M., Wilson, D. A., Leon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+Processes+in+Early+Olfactory+Preference+Acquisition:+Neural+and+Behavioral+Consequences.">Associative Processes in Early Olfactory Preference Acquisition: Neural and Behavioral Consequences.</a> Psychobiology. , 29-33 (1989).</li><li>McLean, J. H., Harley, C. W., Darby-King, A., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pCREB+in+the+neonate+rat+olfactory+bulb+is+selectively+and+transiently+increased+by+odor+preference-conditioned+training.">pCREB in the neonate rat olfactory bulb is selectively and transiently increased by odor preference-conditioned training.</a> Learn Mem. 6, 608-618 (1999).</li><li>Sullivan, R. M., Stackenwalt, G., Nasr, F., Lemon, C., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+an+odor+with+activation+of+olfactory+bulb+noradrenergic+beta-receptors+or+locus+coeruleus+stimulation+is+sufficient+to+produce+learned+approach+responses+to+that+odor+in+neonatal+rats.">Association of an odor with activation of olfactory bulb noradrenergic beta-receptors or locus coeruleus stimulation is sufficient to produce learned approach responses to that odor in neonatal rats.</a> Behav Neurosci. 114, 957-962 (2000).</li><li>Yuan, Q., Harley, C. W., McLean, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitral+cell+beta1+and+5-HT2A+receptor+colocalization+and+cAMP+coregulation:+a+new+model+of+norepinephrine-induced+learning+in+the+olfactory+bulb.">Mitral cell beta1 and 5-HT2A receptor colocalization and cAMP coregulation: a new model of norepinephrine-induced learning in the olfactory bulb.</a> Learn Mem. 10, 5-15 (2003).</li><li>Fontaine, C. J., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateralized+odor+preference+training+in+rat+pups+reveals+an+enhanced+network+response+in+anterior+piriform+cortex+to+olfactory+input+that+parallels+extended+memory.">Lateralized odor preference training in rat pups reveals an enhanced network response in anterior piriform cortex to olfactory input that parallels extended memory.</a> J Neurosci. 33, 15126-15131 (2013).</li><li>Morrison, G. L., Fontaine, C. J., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+the+anterior+piriform+cortex+in+early+odor+preference+learning:+evidence+for+multiple+olfactory+learning+structures+in+the+rat+pup.">A role for the anterior piriform cortex in early odor preference learning: evidence for multiple olfactory learning structures in the rat pup.</a> J Neurophysiol. 110, 141-152 (2013).</li><li>Nakamura, S., Kimura, F., Sakaguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+development+of+electrical+activity+in+the+locus+ceruleus.">Postnatal development of electrical activity in the locus ceruleus.</a> J Neurophysiol. 58, 510-524 (1987).</li><li>Harley, C. W., Darby-King, A., McCann, J., McLean, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta1-adrenoceptor+or+alpha1-adrenoceptor+activation+initiates+early+odor+preference+learning+in+rat+pups:+support+for+the+mitral+cell/cAMP+model+of+odor+preference+learning.">Beta1-adrenoceptor or alpha1-adrenoceptor activation initiates early odor preference learning in rat pups: support for the mitral cell/cAMP model of odor preference learning.</a> Learn Mem. 13, 8-13 (2006).</li><li>Shakhawat, A. M., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+bulb+alpha2-adrenoceptor+activation+promotes+rat+pup+odor-preference+learning+via+a+cAMP-independent+mechanism.">Olfactory bulb alpha2-adrenoceptor activation promotes rat pup odor-preference learning via a cAMP-independent mechanism.</a> Learn Mem. 19, 499-502 (2012).</li><li>Isaacson, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+representations+in+mammalian+cortical+circuits.">Odor representations in mammalian cortical circuits.</a> Curr Opin Neurobiol. 20, 328-331 (2010).</li><li>Lethbridge, R., Hou, Q., Harley, C. W., Yuan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+bulb+glomerular+NMDA+receptors+mediate+olfactory+nerve+potentiation+and+odor+preference+learning+in+the+neonate+rat.">Olfactory bulb glomerular NMDA receptors mediate olfactory nerve potentiation and odor preference learning in the neonate rat.</a> PLoS One. 7, e35024 (2012).</li><li>Yuan, Q., Harley, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+a+nostril+knows:+olfactory+nerve-evoked+AMPA+responses+increase+while+NMDA+responses+decrease+at+24-h+post-training+for+lateralized+odor+preference+memory+in+neonate+rat.">What a nostril knows: olfactory nerve-evoked AMPA responses increase while NMDA responses decrease at 24-h post-training for lateralized odor preference memory in neonate rat.</a> Learn Mem. 19, 50-53 (2012).</li><li>Schwob, J. E., Price, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+axonal+connections+in+the+central+olfactory+system+of+rats.">The development of axonal connections in the central olfactory system of rats.</a> J Comp Neurol. 223, 177-202 (1984).</li><li>Kucharski, D., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+routes+to+early+memories.">New routes to early memories.</a> Science. 238, 786-788 (1987).</li><li>Kucharski, D., Johanson, I. B., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+olfactory+conditioning+in+6-day-old+rat+pups.">Unilateral olfactory conditioning in 6-day-old rat pups.</a> Behav Neural Biol. 46, 472-490 (1986).</li><li>Cummings, D. M., Henning, H. E., Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+bulb+recovery+after+early+sensory+deprivation.">Olfactory bulb recovery after early sensory deprivation.</a> J Neurosci. 17, 7433-7440 (1997).</li><li>Kucharski, D., Hall, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+change+in+the+access+to+olfactory+memories.">Developmental change in the access to olfactory memories.</a> Behav Neurosci. 102, 340-348 (1988).</li><li>Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+odor+deprivation:+time+course+of+changes+in+laminar+volume.">Unilateral odor deprivation: time course of changes in laminar volume.</a> Brain Res Bull. 14, 233-237 (1985).</li><li>Kass, M. D., Pottackal, J., Turkel, D. J., McGann, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+neural+representation+of+odorants+after+olfactory+deprivation+in+the+adult+mouse+olfactory+bulb.">Changes in the neural representation of odorants after olfactory deprivation in the adult mouse olfactory bulb.</a> Chem Senses. 38, 77-89 (2013).</li><li>Kim, H. H., Puche, A. C., Margolis, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+deprivation+reversibly+modulates+transsynaptic+changes+in+the+NR2B-mediated+CREB+pathway+in+mouse+piriform+cortex.">Odorant deprivation reversibly modulates transsynaptic changes in the NR2B-mediated CREB pathway in mouse piriform cortex.</a> J Neurosci. 26, 9548-9559 (2006).</li><li>Korol, D. L., Brunjes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+changes+in+2-deoxyglucose+uptake+and+amino+acid+incorporation+following+unilateral+odor+deprivation:+a+laminar+analysis.">Rapid changes in 2-deoxyglucose uptake and amino acid incorporation following unilateral odor deprivation: a laminar analysis.</a> Brain Res Dev Brain Res. 52, 75-84 (1990).</li><li>Leung, C. H., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-neuronal+regulation+of+cortical+apoptosis+in+the+adult+rat+olfactory+system.">Trans-neuronal regulation of cortical apoptosis in the adult rat olfactory system.</a> Brain Res. 984, 182-188 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

מודל למידת ריח וזיכרון lateralized בגורי חולדה בתוך חלון זמן קריטי הוקם לראשונה על ידי הול ועמיתים. בסדרה של מחקרים 33,34,36, הם הראו כי זיכרון העדפת ריח יכול להיות lateralized על ידי זוגות ריח + חלב לNaris אחד בPD 6 בגורי חולדה. זיכרון העדפה היה חזק כאשר אותו Naris היה פתוח במהלך אימון ובדיקה, אבל לא נצפה כאשר Naris החסום היה חסום ונבדק. עם זאת, בפ&quot;ד 12, כאשר קשרי commissural קדמי מקליפת המוח הקדמית חוש הריח הפכו 32 פונקציונליים, Naris מאומן לבדו יכול לתמוך בביטוי של העדפת הריח שנרכשה בפ&quot;ד .6 נגע של השליך הקדמי שוחזר זיכרון lateralized כך שזה כבר לא היה נגיש מNaris מאומן 33. מודל למידת lateralized זה שוחזר בהצלחה עם ריח + מלטף 24,25,31 הפרדיגמה. + ריח מלטף את אימונים עם OCC Naris הבודדlusion על PD 6 מוביל לזיכרון lateralized על PD 7 ביום 31 ב. חסימות Naris אחת חוזרות ונשנות בפ&quot;ד 3-6 מובילה לזיכרון lateralized יותר שנמשך לפחות 48 שעות 24. תוצאות פרוטוקול למידת ריח lateralized ב&quot; מוח מפוצל &quot;בבעלי חיים בודדים. מודל זה יש יתרונות גדולים ללימוד התנהגות והשינויים ביו הפיזיולוגי עיגון. לדוגמא, השוואת תפוקות התנהגות תוך שימוש במודל נושא בתוך-מספיק מפחית וריאציות בעיצובים בין בעלי החיים. גורים בגיל צעיר זה להשתנות במידה ניכרת בפעילות ובהיענות שלהם. שליטת Intra-חיה מסירה את השוני הפנימי של פרט בביצועים ואת ההיענות, כמו גם הבדלים מהותיים בביולוגיה מההערכה של שינויים מולקולריים ופיסיולוגיים. בנוסף, מודל התינוק הזה החזק של למידת lateralized מעניק לנו הזדמנות להתייחס ביצועי זיכרון אישיים לפיזיולוגית פרט, ועל מנת להעריך היסודות דואר של זכרונות של משכי זמן שונים 24,25,31. השימוש במודל למידה lateralized זה בשילוב עם ניסויי vivo לשעבר משווים את הפיסיולוגיה של שתי ההמיספרות באותה חיות, זה כבר הוכיח לאחרונה כי למידת ריח מוקדמת גורמת לפלסטיות הסינפטית כגון תגובות קולטן AMPA גדלו בסינפסות בשני OB 31 ב, ו APC 24,25. שידור סינפטי משופר הבא למידת ריח המוקדמת מתורגם לתפוקה משופרת ברשת חוש הריח ייצוגי 24. מחקרים עתידיים צריכים לבחון את היסודות המולקולריים של זיכרון ריח באמצעות מודל למידת lateralized זה. זה כולל מחקרים התאמה מסתכלים על חלבונים וגנים מופעלים הלמידה הבאה, ומחקרים סיבתי מסתכלים על ההשפעות של עלייה של פונקציה ואובדן של פונקציה של חלבונים והגנים של עניין מיוחד. אפשרות אחרת, מרגשת וחשובה היא להיות לא מסוגליםo מתייחס לשינויים פיסיולוגיים ומולקולריים לכוחו של הזיכרון התנהגותיות. לכל גור, זה אפשרי ראשון נובע מידת זיכרון העדפת nares הפתוח והחסום. הניסויים הבאים vivo לשעבר בקליפת המוח המאומן ולא מאומן המתאים יספק שינויים פיסיולוגיים גומלים. זה אפשרי, עם זאת, כי ריח מחדש החשיפה במהלך העדפת הבדיקה עצמה לשנות את הכוח הסינפטי, או שאזורים האחרים במוח לתרום באופן משמעותי לביטוי זיכרון. במחקרים הנוכחיים שלנו, פיזיולוגיה והתנהגות מתבצעות על קבוצות נפרדות. זה מסיר חששות לגבי בדיקות התנהגותיות המשפיעים על הפרמטרים מאוד של עניין. אזהרה אחת באמצעות תקע האף היא נזק לרקמות עצביות פוטנציאליות המשויך להחדרת תקע וההסרה. מסיבה זו, טיפול צריך נלקח בהחדרת תקע האף וגורים עם הדימום במהלך החדרה צריך להיות שלילי, כדי למנוע כל EF טווח ארוך פוטנציאלfects הקשורים לדימום כגון דלקת. חסימה ממושכת (שעות, ימים עד חודשים) של Naris או אבלציה הקבועה של אפיתל הריח מוביל לקיפוח ארוך טווח חוש הריח, נזק עצבי, ופעילויות עצביות מופחתות בOB ומחשב 37-41, למרות שחלק מתופעות אלה בשל ממושכות חסימת Naris היא הפיכה 39,40 באופן מלא. שלמות רקמות הבאות חסימת Naris חריפה (~ 15 דקות) אומתה על ידי צביעת אימונוהיסטוכימיה של pCREB, סמן עצבי פעילות תלויה, אשר הוכח להיות מופחת במחשב של עכברים בוגרים הצעירים הבא חסימת Naris 5 ימים 39. רמות pCREB בOB ומחשב ipsilateral של Naris האפיל היו באופן משמעותי פחות בחשיפת ריח מנטה, המאשרים את lateralization המוצלח של תפוקת חוש הריח בגורי חולדה במהלך חסימת Naris. עם זאת, 24 שעות לאחר הסרת תקע האף, בעת בדיקת העדפת ריח, רמות pCREB ניתנים להשוואה אניn שני חצאים הכדור, דבר המצביע על ההשפעה של חסימה חריפה הוא הפיך 24 באופן מלא. לכן, חוסר ההעדפה למנטה נבדקה עם Naris האפיל בעבר בשל חוסר הזיכרון, אך לא בשל שינוי או חוסר תפיסת ריח הקשורים לניזק לרקמות במהלך בדיקה. בנוסף, קלטות אלקטרו השליטה O / S - (עם Naris אחד האפיל במהלך חשיפת ריח בלי ללטף) הראו בעלי חיים לא נמצאה הבדלים בfEPSPs או מספר התאים פירמידליים מופעלים ראו עם הדמיה סידן - גם מאשר אין שינוי תפקודי בקליפת אגסי בשל חסימות אלה לטווח קצר הפיכים Naris 24,25.

Olfaction הוא השיטה העיקרית חושית במכרסמים, שבלעדיו הם לא יהיו מסוגלים לנווט או לשרוד בסביבה שלהם בהצלחה. זה קריטי במיוחד עבור גורים בילוד, שלא יכול לראות ולא לשמוע במהלך השבוע שלאחר הלידה הראשונה, להשתמש olfaction על מנת לאתר את האמא שלהם כדי להאכיל 1. כתוצאה מכך, יכולים להיות מותנים גורי חולדה ילוד להעדיף ריחות עם מניפולציות ניסיוני פשוטות. מגוון רחב של גירויים היה בשימוש כגירוי הבלתי מותנה (UCS) כדי לגרום לתגובות מותנות לריחות רומן (גירוי מותנה, CS) בילודים, לרבות סביבת קינון 2,3, יונק חלב 4-6, מלטף או גירוי חוש המישוש 7- 12, קמצוץ זנב 13, רוק אימהי 13, הלם רגל קל 14-18, וגירוי מוח תוך גולגולתי 19. המחקר הנוכחי מעסיק הפרדיגמה העדפת ריח המוקדם מבוססת היטב שבו ריח, במקרה מנטה זה, אניs בשילוב עם גירוי חוש המישוש על מנת לייצר העדפה למנטת 24 שעות מאוחר יותר 10,11,20. זכרונות ריחות אלה נשענים על מעגלי חוש הריח שלמים, הכוללים בעיקר את נורות חוש הריח (OB) 21-23 וקליפת המוח הקדמי אגסי (APC) 24,25. חקירות ניסיוניות של למידת העדפת ריח המוקדמת העמיקו והרחיבו את ההבנה של היסודות המולקולריים ופיסיולוגיים של זיכרון יונקים שלנו. יש מודל של יונקים זה מספר יתרונות בלימוד מנגנוני זיכרון. ראשית, המקורות העצביים של אות UCS זוהו. גירויים שונים כאמור לעיל לעורר שחרור לוקוס נוראפינפרין coeruleus 26, אשר בתורו מפעיל adrenoceptors מרובה בOB וAPC, לגרום לתופעות תאיות ופיזיולוגיות התומכות בלמידה 22,27,28. שנית, מנגנונים תומכי זיכרון יתקיימו במבנים עצביים מינרית מוגדרת היטב.פשטות של מעגלי חוש הריח בחולדות בילוד מספקת לחוקרים את המסגרת האידיאלית שעם לחשוף את התהליכים המורכבים הקשורים לפלסטיות הסינפטית. נוירונים חושיים ריח (OSN) בפרויקט אפיתל ההרחה על צניפי תאים מצוייצים / בOB וצניפי תאים אלה / מצוייצים בפרויקט תור ipsilaterally לקליפת אגסי (PC) באמצעות לרוחב דרכי חוש הריח (הרבה), בין מבנים אחרים 29. שתי סינפסות OSN בOB 30,31 והרבה סינפסות 24,25 בAPC זוהו כמוקדים קריטיים לשינויים סינפטיים שתומכים בלמידה ובזיכרון. שלישית, בגיל צעיר בחולדות, יכולות בקלות להיות lateralized תשומות חוש הריח. לכל אחד יש APC גישה למידע ריח דו צדדי באמצעות השליך קדמי פעם אחת בחומר הלבן הזה נוצר במלואו ביום 12 שלאחר לידה (PD12) 32. לפני 12 PD, קלט ריח יכול להיות מבודד לipisilateral OB וAPC דרך חסימת Naris יחידה 24,25,31,33,34 &lt;/ Sup&gt;. חסימת Naris יחידה מאפשרת את היווצרות זיכרון הריח מNaris הפתוח, ומונעת את אותו זיכרון מNaris occluded לפני פ&quot;ד 12 33. זיכרון ריח מבודד לחצי כדור ipsilateral כולל שני OB וAPC. לכן, כל גור חולדה יכול להיות שליטה משלו ללימוד ושבסיס פיזיולוגיה. במחקר הנוכחי, פרוטוקול למידת העדפת הריח המוקדם lateralized הוא הציג. שיטה זו משמשת ככלי רב עוצמה ללימוד מנגנונים עצביים שבבסיס למידת ריח על ידי מתן שליטת התוך בעלי חיים 24,25,31, וכך להקטין הן את מספר בעלי החיים הנדרשים ווריאציה הכללית. חסימת Naris היא הפיכה שבתוספת השומן או האף יכולה להיות מיושמת ולהסיר עם לחץ או לניזק לבעלי החיים מינימאליים. כאן, לראשונה, נהלים מפורטים של אימוני העדפת ריח מוקדם ובדיקות מתוארים, עם דגש על פרוטוקול lateralized באמצעות חסימת Naris יחידה עם nosתקע דואר. לאחר מכן תוצאות מוצגות כדי להדגים את היעילות של חסימת Naris בודדת בבידוד קלט ריח והפקת זיכרון ריח lateralized. לבסוף, הפוטנציאל של שימוש במודל למידת lateralized זה ללמוד שינויים פיסיולוגיים במערכת חוש הריח שגם ליצור ביטוי למידה וזיכרון תמיכה הם דנו.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<tbody>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Polythylene 20 tubing</td>
			<td style="width:123px;">Intramedic</td>
			<td style="width:103px;">427406</td>
			<td style="width:205px;">Non radiopaque, Non toxic</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">3-0 silk suture thread</td>
			<td style="width:123px;">Syneture</td>
			<td style="width:103px;">Sofsilk</td>
			<td style="width:205px;">Non absorbant&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Silicone grease</td>
			<td style="width:123px;">Warner Instrument</td>
			<td style="width:103px;">64-0378</td>
			<td style="width:205px;">Odorless</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">2% xylocaine gel</td>
			<td style="width:123px;">AstraZeneca</td>
			<td style="width:103px;">Prod. No 061</td>
			<td style="width:205px;">Lidocaine hydrochloride jelly,&#160; purchased at local pharmacy</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Paint brush</td>
			<td style="width:123px;">Dynasty</td>
			<td style="width:103px;">206R</td>
			<td style="width:205px;">Similar size/other brands work too</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Peppermint extract</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">W284807</td>
			<td style="width:205px;">Other brand should be okay too</td>
		</tr>
		<tr height="171">
			<td height="171" style="height:171px;width:149px;">Training box</td>
			<td style="width:123px;">Custom-made</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td style="width:205px;">Acrylic box (20x20x5cm3), see Figure 2A. Parameters and material for the box are not critical and can be modified. Material used should be odorless and does not absorb odors</td>
		</tr>
		<tr height="182">
			<td height="182" style="height:182px;width:149px;">Testing chamber</td>
			<td style="width:123px;">Custom-made</td>
			<td style="width:103px;">N/A</td>
			<td style="width:205px;">Stainless steel (30x20x18cm3), see Figure 2B. Parameters and material for the chamber are not critical and can be modified. For example, an acrylic chamber instead of a stainless steel one can be used</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">pCREB antibody</td>
			<td style="width:123px;">Cell Signaling</td>
			<td style="width:103px;">9198</td>
			<td style="width:205px;">Ser 133 (87G3) Rabbit mAb</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Chloral hydrate</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">C8383</td>
			<td style="width:205px;">N/A</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Paraformaldehype</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">P6148</td>
			<td style="width:205px;">N/A</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:149px;">Sucrose</td>
			<td style="width:123px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">S9378</td>
			<td style="width:205px;">N/A</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a lateralized odor learning model in neonatal rats for dissecting neural circuitry underpinning memory formation

Rat pups during a critical postnatal period (&#8804; 10 days) readily form a preference for an odor that is associated with stimuli mimicking maternal care. Such a preference memory can last from hours, to days, even life-long, depending on training parameters. Early odor preference learning provides us with a model in which the critical changes for a natural form of learning occur in the olfactory circuitry. An additional feature that makes it a powerful tool for the analysis of memory processes is that early odor preference learning can be lateralized via single naris occlusion within the critical period. This is due to the lack of mature anterior commissural connections of the olfactory hemispheres at this early age. This work outlines behavioral protocols for lateralized odor learning using nose plugs. Acute, reversible naris occlusion minimizes tissue and neuronal damages associated with long-term occlusion and more aggressive methods such as cauterization. The lateralized odor learning model permits within-animal comparison, therefore greatly reducing variance compared to between-animal designs. This method has been used successfully to probe the circuit changes in the olfactory system produced by training. Future directions include exploring molecular underpinnings of odor memory using this lateralized learning model; and correlating physiological change with memory strength and durations.

כאן אנו סוקרים כמה מהתוצאות שהוקמו בעבר 24 כדי להדגים את היעילות של חסימת Naris בבידוד קלט ריח ולמידה לחצי כדור אחד, וההפיכות של שיטה זו. חסימת Naris אחת במהלך אימון העדפת ריח מוקדם מובילה לזיכרון ריח lateralized 24. הזיכרון מוגבל לNaris חסך (איור 3). כאשר גורים נבדקים להעדפת ריח עם אותו Naris האפיל כבמהלך אימון, הם מראים העדפה לריח המותנה (למשל, מנטה). כאשר גורים נבדקים עם Naris ההפך האפיל, הם לא מראים העדפה לריח המותנה. יחד, תוצאות אלו מצביעות על כך שזכרון העדפת ריח הוא רק נוצר ובא לידי ביטוי בNaris חסך שעבר הריח + מלטף את האוויר אסוציאטיבי. <img alt="איור 3" fo:content-width = src &quot;5in&quot; = &quot;/ קבצים / ftp_upload / 51,808 / 51808fig3highres.jpg&quot; width = &quot;500&quot; /&gt; .3 חסימת Naris יחידה איור גורמת למידה ריח lateralized. פרוטוקול ההתנהגות מוצג בפנל העליון. ריח + מלטף (O / S +) או ריח בלבד (O / S -) חיות עם Naris היחיד האפיל במהלך אימון, עבר בדיקת העדפת הריח ראשונה עם אותו Naris occluded אז עם Naris ההפך האפיל. הפנל התחתון מציג את אחוז הזמן שבילה על מצעים בניחוח מנטה בקרב קבוצות שונות במבחן ריח שתי בחירה. * P &lt;0.05. ברים שגיאה, ממוצע ± SEM. לשכפל מפונטיין et al. J. מדעי המוח (2013) באישור. תוצאות lateralized אימון ריח בהפעלת lateralized של מערכת חוש הריח בזמן חשיפת ריח (איור 4) 24. חסימת Naris יחידה מונעת הפעלה של OB והמחשב של duri חצי כדור ipsilateralng חשיפת ריח. זו באה לידי ביטוי על ידי ניטור זירחון CREB בOB, והמחשב. כפי שניתן לראות באיור 4, באמצעות אימונוהיסטוכימיה, CREB פוספורילציה (pCREB) הוא באופן משמעותי פחות בחצי הכדור החסומים בעקבות חשיפת ריח מנטה, בהשוואה לחצי הכדור חסכו הנגדי. מכתים Nissl (איור 4 א) מדגים גופי תא דומים בשכבת תאי צניפי של OB, ובשכבת תאי הפירמידה של המחשב של שני חצאים הכדור. עם זאת, pCREB הוא באופן משמעותי פחות בשני שכבות התאים בipsilateral חצי הכדור לNaris החסום (איור 4). <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig4highres.jpg" width="500" /> איור 4 תוצאות חסימת Naris יחידה בהפעלת lateralized של מערכת חוש הריח בזמן חשיפת ריח. ) מכתים Nissl של הנורה חוש הריח(OB) וקליפת מוח קדמי אגסי (APC). B) ביטויי PCREB באונות החסומות וחסכו בעקבות חשיפת מנטה בגור occluded Naris היחיד. חצים מצביעים על שכבת תאי צניפי בשכבת תאי OB והפירמידה בAPC. סולם ברים, 500 מיקרומטר. לשכפל מפונטיין et al. J. Neuroscience (2013) באישור. ההשפעה של חסימת Naris משפט אחד (15-20 דקות) היא זמנית והפיכה, ולא לגרום לנזק נראה לעין לטווח ארוך עצבי שעלולות להוביל לתפיסה שינו ריח והפעלה עצבית מופחתת לריחות במהלך בדיקת 24. כאינדקס של הכתמת pCREB בOB והמחשב (איור 5), ביטויי pCREB בתאי צניפי של OB, ותאים פירמידליים במחשב לריח חשיפה ניתן להשוואה בין ההמיספרות החסומות וחסכו, 24 שעות לאחר הסרת תקע האף - אותה נקודת הזמן שלהריח בדיקת העדפהמתבצע לאחר אימון העדפת ריח מוקדם. <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig5highres.jpg" width="500" /> איור 5 הערכה של תגובתיות עצבית הבאים חסימת Naris הפיכה. מכתים PCREB של OB וAPC, 24 שעות לאחר הסרת תקע האף בגור אחד. חצים מצביעים על שכבת תאי צניפי בשכבת תאי OB והפירמידה בAPC. MCL, שכבת תאי צניפי. PCL, שכבת תאים פירמידליים. סולם ברים, 500 מיקרומטר להגדלה נמוכה ולהגדלה גבוהה יותר 100 מיקרומטר.

Watch this Scientific Journal Video about A Lateralized Odor Learning Model in Neonatal Rats for Dissecting Neural Circuitry Underpinning Memory Formation at JoVE.com

A Lateralized Odor Learning Model in Neonatal Rats for Dissecting Neural Circuitry Underpinning Memory Formation

This protocol introduces lateralized early odor preference learning in rats using acute single naris occlusion. Lateralized learning permits the examination of behavioral outcomes and underpinning biological mechanisms within the same animals, reducing variance induced by between-animal designs. This protocol can be used to investigate molecular mechanisms underpinning early odor learning.

מודל הלמידה Lateralized ריח חולדות ילודים לביתור גיבוש עצבי מעגל בבסיס זיכרון

Rat pups during a critical postnatal period (&#8804; 10 days) readily form a preference for an odor that is associated with stimuli mimicking maternal ...

a-lateralized-odor-learning-model-neonatal-rats-for-dissecting-neural

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

8.9K Views.  Faculty of Medicine, Memorial University. This protocol introduces lateralized early odor preference learning in rats using acute single naris occlusion. Lateralized learning permits the examination of behavioral outcomes and underpinning biological mechanisms within the same animals, reducing variance induced by between-animal designs. This protocol can be used to investigate molecular mechanisms underpinning early odor learning.

Video: A Lateralized Odor Learning Model in Neonatal Rats for Dissecting Neural Circuitry Underpinning Memory Formation

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment through neuron-specific detection of food and chemical odors1, 2, and can associate nutritive states with chemical odors3, temperature4, and the pathogenicity of a food source5.
Here, we describe assays of C. elegans associative learning and short- and long-term associative memory. We modified an aversive olfactory learning paradigm6 to instead produce a positive response; the assay involves starving ~400 worms, then feeding the worms in the presence of the AWC neuron-sensed volatile chemoattractant butanone at a concentration that elicits a low chemotactic index (similar to Toroyama et al.7). A standard population chemotaxis assay1 tests the worms' attraction to the odorant immediately or minutes to hours after conditioning.
After conditioning, wild-type animals' chemotaxis to butanone increases ~0.6 Chemotaxis Index units, its "Learning Index". Associative learning is dependent on the presence of both food and butanone during training. Pairing food and butanone for a single conditioning period ("massed training") produces short-term associative memory that lasts ~2 hours. Multiple conditioning periods with rest periods between ("spaced training") yields long-term associative memory (&lt;40 hours), and is dependent on the cAMP Response Element Binding protein (CREB),6 a transcription factor required for long-term memory across species.8
Our protocol also includes image analysis methods for quick and accurate determination of chemotaxis indices. High-contrast images of animals on chemotaxis assay plates are captured and analyzed by worm counting software in MatLab. The software corrects for uneven background using a morphological tophat transformation.9 Otsu's method is then used to determine a threshold to separate worms from the background.10 Very small particles are removed automatically and larger non-worm regions (plate edges or agar punches) are removed by manual selection. The software then estimates the size of single worm by ignoring regions that are above a specified maximum size and taking the median size of the remaining regions. The number of worms is then estimated by dividing the total area identified as occupied by worms by the estimated size of a single worm.
We have found that learning and short- and long-term memory can be distinguished, and that these processes share similar key molecules with higher organisms.6,8 Our assays can quickly test novel candidate genes or molecules that affect learning and short- or long-term memory in C. elegans that are relevant across species.

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

Here we describe methods to test C. elegans associative learning and short- and long-term associative memory. These population assays employ the worms abilities to chemotax toward volatile odorants, and form positive associations upon pairing food with the chemoattractant butanone. Increasing the number of conditioning periods induces long-term memory.

סי אלגנס למידה חיובית Butanone, לטווח קצר, לטווח ארוך מבחני זיכרון אסוציאטיבי

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment ...

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of these diseases, including Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's disease are characterized by age-dependent deterioration in learning and memory functions and movement coordination2. Here we use behavioral assays, including the negative geotaxis assay3 and the aversive phototaxic suppression assay (APS assay)4,5, to show that some of the behavior characteristics associated with human neurodegeneration can be recapitulated in flies. In the negative geotaxis assay, the natural tendency of flies to move against gravity when agitated is utilized to study genes or conditions that may hinder locomotor capacities. In the APS assay, the learning and memory functions are tested in positively-phototactic flies trained to associate light with aversive bitter taste and hence avoid this otherwise natural tendency to move toward light. Testing these trained flies 6 hours post-training is used to assess memory functions. Using these assays, the contribution of any genetic or environmental factors toward developing neurodegeneration can be easily studied in flies.

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Behavior assays for measuring locomotor functions, learning, and memory abilities in Drosophila.

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#39;s Disease Model Mice

The Morris Water Maze (MWM) was first established by neuroscientist Richard G. Morris in 1981 in order to test hippocampal-dependent learning, including acquisition of spatial memoryand long-term spatial memory 1. The MWM is a relatively simple procedure typically consisting of six day trials, the main advantage being the differentiation between the spatial (hidden-platform) and non-spatial (visible platform) conditions 2-4. In addition, the MWM testing environment reduces odor trail interference 5. This has led the task to be used extensively in the study of the neurobiology and neuropharmacology of spatial learning and memory. The MWM plays an important role in the validation of rodent models for neurocognitive disorders such as Alzheimer&#x2019;s Disease 6, 7. In this protocol we discussed the typical procedure of MWM for testing learning and memory and data analysis commonly used in Alzheimer&#x2019;s disease transgenic model mice.

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer's Disease Model Mice

The Morris Water Maze is a behavioral task to test hippocampal-dependent learning and memory. It has been widely used in the study of neurobiology, neuropharmacology and neurocognitive disorders in rodent models.

מוריס מבוך המים מבחן גירעונות למידה וזיכרון במודל של מחלת אלצהיימר עכברים

The Morris Water Maze (MWM) was first established by neuroscientist Richard G. Morris in 1981 in order to test hippocampal-dependent learning, including ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative response mounted by PNS neurons thereby possibly illuminating the failures of CNS regeneration1. Sciatic nerve crush (axonotmesis) is one of the most common models of peripheral nerve injury in rodents2. Crushing interrupts all axons but Schwann cell basal laminae are preserved so that regeneration is optimal3,4. This allows the investigator to study precisely the ability of a growing axon to interact with both the Schwann cell and basal laminae4. Rats have generally been the preferred animal models for experimental nerve crush. They are widely available and their lesioned sciatic nerve provides a reasonable approximation of human nerve lesions5,4. Though smaller in size than rat nerve, the mouse nerve has many similar qualities. Most importantly though, mouse models are increasingly valuable because of the wide availability of transgenic lines now allows for a detailed dissection of the individual molecules critical for nerve regeneration6, 7. Prior investigators have used multiple methods to produce a nerve crush or injury including simple angled forceps, chilled forceps, hemostatic forceps, vascular clamps, and investigator-designed clamps8,9,10,11,12. Investigators have also used various methods of marking the injury site including suture, carbon particles and fluorescent beads13,14,1. We describe our method to obtain a reproducibly complete sciatic nerve crush with accurate and persistent marking of the crush-site using a fine hemostatic forceps and subsequent carbon crush-site marking. As part of our description of the sciatic nerve crush procedure we have also included a relatively simple method of muscle whole mount we use to subsequently quantify regeneration.

In this report we describe a method to crush mouse sciatic nerve. This method uses readily available hemostatic forceps and easily and reproducibly produces complete sciatic nerve crush. In addition, we describe a method to prepare muscle whole mounts suitable for analysis of nerve regeneration after sciatic nerve crush.

עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution

Signaling of information in the vertebrate central nervous system is often carried by populations of neurons rather than individual neurons. Also propagation of suprathreshold spiking activity involves populations of neurons. Empirical studies addressing cortical function directly thus require recordings from populations of neurons with high resolution. Here we describe an optical method and a deconvolution algorithm to record neural activity from up to 100 neurons with single-cell and single-spike resolution. This method relies on detection of the transient increases in intracellular somatic calcium concentration associated with suprathreshold electrical spikes (action potentials) in cortical neurons. High temporal resolution of the optical recordings is achieved by a fast random-access scanning technique using acousto-optical deflectors (AODs)1. Two-photon excitation of the calcium-sensitive dye results in high spatial resolution in opaque brain tissue2. Reconstruction of spikes from the fluorescence calcium recordings is achieved by a maximum-likelihood method. Simultaneous electrophysiological and optical recordings indicate that our method reliably detects spikes (&gt;97% spike detection efficiency), has a low rate of false positive spike detection (&lt; 0.003 spikes/sec), and a high temporal precision (about 3 msec) 3. This optical method of spike detection can be used to record neural activity in vitro and in anesthetized animals in vivo3,4.

Understanding the function of the vertebrate central nervous system requires recordings from many neurons because cortical function arises on the level of populations of neurons. Here we describe an optical method to record suprathreshold neural activity with single-cell and single-spike resolution, dithered random-access scanning. This method records somatic fluorescence calcium signals from up to 100 neurons with high temporal resolution. A maximum-likelihood algorithm deconvolves the underlying suprathreshold neural activity from the somatic fluorescence calcium signals. This method reliably detects spikes with high detection efficiency and a low rate of false positives and can be used to study neural populations in vitro and in vivo.

הקלטה אופטית של פעילות עצבית suprathreshold עם רזולוצית תא בודד ויחיד ספייק

Signaling of information in the vertebrate central nervous system is often carried by populations of neurons rather than individual neurons. Also ...

Viral Tracing of Genetically Defined Neural Circuitry

Classical methods for studying neuronal circuits are fairly low throughput. Transsynaptic viruses, particularly the pseudorabies (PRV) and rabies virus (RABV), and more recently vesicular stomatitis virus (VSV), for studying circuitry, is becoming increasingly popular. These higher throughput methods use viruses that transmit between neurons in either the anterograde or retrograde direction.
Recently, a modified RABV for monosynaptic retrograde tracing was developed. (Figure 1A). In this method, the glycoprotein (G) gene is deleted from the viral genome, and resupplied only in targeted neurons. Infection specificity is achieved by substituting a chimeric G, composed of the extracellular domain of the ASLV-A glycoprotein and the cytoplasmic domain of the RABV-G (A/RG), for the normal RABV-G1. This chimeric G specifically infects cells expressing the TVA receptor1. The gene encoding TVA can been delivered by various methods2-8. Following RABV-G infection of a TVA-expressing neuron, the RABV can transmit to other, synaptically connected neurons in a retrograde direction by nature of its own G which was co-delivered with the TVA receptor. This technique labels a relatively large number of inputs (5-10%)2 onto a defined cell type, providing a sampling of all of the inputs onto a defined starter cell type.
We recently modified this technique to use VSV as a transsynaptic tracer9. VSV has several advantages, including the rapidity of gene expression. Here we detail a new viral tracing system using VSV useful for probing microcircuitry with increased resolution. While the original published strategies by Wickersham et al.4 and Beier et al.9 permit labeling of any neurons that project onto initially-infected TVA-expressing-cells, here VSV was engineered to transmit only to TVA-expressing cells (Figure 1B). The virus is first pseudotyped with RABV-G to permit infection of neurons downstream of TVA-expressing neurons. After infecting this first population of cells, the virus released can only infect TVA-expressing cells. Because the transsynaptic viral spread is limited to TVA-expressing cells, presence of absence of connectivity from defined cell types can be explored with high resolution. An experimental flow chart of these experiments is shown in Figure 2. Here we show a model circuit, that of direction-selectivity in the mouse retina. We examine the connectivity of starburst amacrine cells (SACs) to retinal ganglion cells (RGCs).

A method of tracing synaptically connected neurons is described. We use TVA specificity of an upstream cell to probe whether a cell population of interest receives synaptic input from genetically defined cell types.

איתור נגיפי של מעגלים עצביים מוגדרים גנטי

Classical methods for studying neuronal circuits are fairly low throughput. Transsynaptic viruses, particularly the pseudorabies (PRV) and rabies virus ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

בoptogenetic גירוי vivo של מערכת העצבים המרכזית מכרסם

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Assessing Spatial Learning and Memory in Small Squamate Reptiles

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, interest in the cognitive processes of nonmodel species, typically within an ecological context, has also become an emerging field of study. In particular, interest in the cognitive processes in reptiles is growing although experimental studies on reptilian cognition are sparse. The few reptilian studies that have experimentally tested for spatial learning and memory have used rodent paradigms modified for use in reptiles. However, ecologically important aspects of the physiology and behavior of this taxonomic group must be taken into account when testing for spatially based cognition. Here, we describe modifications of the dry land Barnes maze and associated testing protocol that can improve performance when probing for spatial learning and memory ability in small squamate reptiles. The described paradigm and procedures were successfully used with male side-blotched lizards (Uta stansburiana), demonstrating that spatial learning and memory can be assessed in this taxonomic group with an ecologically relevant apparatus and protocol.

This paper describes a modification of the Barnes maze, a standard rodent paradigm used to assess spatial memory and learning, for use in small squamate reptiles.

הערכת למידה וזיכרון המרחבי קטן קַשׂקַשִׂי זוחל

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such as epilepsy and neurodegenerative disorders. However, it is technically difficult to obtain EEG recordings in neonates as it requires specialized handling and great care. Here, we present a novel method to record EEG in neonatal rat pups (P8-P15). We designed a simple and reliable electrode using computer pin loci; it can be easily implanted into the skull of a rat pup to record high-quality EEG signals in the normal and epileptic brain. Pups were given an intraperitoneal (i.p.) injection of the neurotoxin kainic acid (KA) to induce epileptic seizures. The surgical implantation performed in this procedure is less expensive than other EEG procedures for neonates. This method allows one to record high-quality and stable EEG signals for more than 1 week. Furthermore, this procedure can also be applied to adult rats and mice to study epilepsy or other neurological disorders.

Here, we introduce a novel technique designed to record electroencephalography (EEG) in freely moving neonatal epileptic pups and describe its procedures, features, and applications. This method allows one to record EEG for more than 1 week.

הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

תסיסנית חיזור התניה כמדד למידה וזיכרון

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...