Name: assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells
Uploaded: 2014-08-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי מענק מטעם BSF בין ארה&quot;ב לישראל לתואר ראשונה וEDSBS היא חובה של כיסא פרופסור הילדה וססיל לואיס בגנטיקה מולקולרית.

הערה: נהלים מעורבים נושאי בעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) במכון ויצמן למדע. הכנת .1 לדוגמא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד של acini הלבלב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 300 מ&quot;ל של HEPES בינוניים ביקרבונט קרבס-Ringer הטרי (KRBH) לפני שמתחיל. מערבבים 140 mM NaCl, 4.7 מ&quot;מ KCl, 1.16 מ&quot;מ MgCl 2, 1 מ&quot;מ CaCl 2, 11 מ&quot;מ גלוקוז, 10 HEPES מ&quot;מ. הוספת אלבומין בסרום שור (BSA) ומעכב 0.1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​טריפסין הסויה (STI) (בינוני resuspension). הכן 5 - 10 מ&quot;ל של resuspension בינוני בתוספת Collagenase (~ 0.75 מ&quot;ג / מ&quot;ל) (בינוני עיכול). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמצן בינוני KRB ל~ 30 דקות. הוספת BSA אחרי חמצון כדי למנוע מבעבע. להביא מדיומים resuspension ועיכול ל37 C °. הערה: החמצון הבינוני מפחית את תמותת תאים ומשפר את ההיענות לsecretagogues. ההשפעה של חמצון היא לכאורה לפחות למשך 6 שעות. </li><li&gt; להקריב את העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם או CO 2 מחנק, על פי הנחיות טיפול בבעלי החיים מוסדיות. מניחים את החיה הקריבה על הגב שלה, לצרף אותו לכרית לנתיחה ולנקות את משטח הבטן עם אתנול. הערה: על מנת למנוע זיהום, חיטוי הכלים לנתיחה ומים המשמשים למדיום KRBH לפני השימוש. סנן בינוני KRBH דרך מסנן 0.2 מיקרומטר. לפני הכריתה של הלבלב לשטוף הכלים נתיחה עם 70% אתנול ולבצע נתיחה על ספסל נקי. לבצע זיהומים נגיפיים בקבינט ביו בטיחות ברמת 3. הוספת אנטיביוטיקה לO / הבינוני culturing N (ראה סעיף 4). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כריתת הלבלב העכברי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך נרחב עור בטן ושכבה התת עורית. זהה את הכבד, קיבה, מעי, הלבלב וטחול (איור 1). הערה: בשלבים הבאים, לטפל ברקמת הלבלב בעדינות ולהימנע מהחלת forc המכני מוגזםדואר כדי למנוע אוטומטי עיכול של מות הרקמות ותאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על ידי שימוש בשני מלקחיים בוטים, לשלוף את המעי הדק. התחל מהקצה הפרוקסימלי המעי הדק, בסמוך ליציאה מהבטן. הפרד את הלבלב מהמעי ולשמור אותו בתוך חלל הגוף. ברגע שמגיע למעי גס, שם לב רקמה ורוד / לבן חיבור. אל תבלבל אותו עם הלבלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקות כמה שיותר רקמת לבלב ככל האפשר מבלי איסוף רקמת שומן או חיבור. הסר את הלבלב על ידי ניתוקו מהטחול והקיבה וחיתוך כלי דם בבטן מתחתיה (איור 1 א-C). הערה: מאחר שהתשואה של acini לבלב מחיה אחת היא גבוהה, אפשר להימנע מלאסוף את כל רקמת הלבלב כדי למנוע איסוף רקמות אחרות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיכול Collagenase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הלבלב כמה פעמים במדיום resuspension מחוממות ל37 מעלות צלזיוס ולהסיר חלקים הנותרים של אי לבלברקמות. לטבול את הלבלב ב~ 5 מ&quot;ל של מדיום עיכול מחומם מראש בבקבוקון נצנץ 20 מ&quot;ל. לרכך את הלבלב לחתיכות של 1-3mm. למקם אותו באמבט מים מחומם (בצורה אופטימלית תחת תסיסה של ~ 100 סל&quot;ד). כדי להאיץ את תהליך העיכול, פיפטה רקמה עד מתעכל ומטה אחת לכמה דקות. הערה: משך הזמן של עיכול collagenase תלוי בעיקר בריכוז collagenase ועל כמות הכוח מכאני מיושמת על הרקמה. שימוש ב0.75 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​collagenase כ 15 דקות וpipetting הרקמה עם טפטפת 5 מ&quot;ל קלקר עם 2 מ&quot;מ פתח כל 3 - 5 דקות, וכתוצאה מכך acini של 10 - 30 תאים. בעקבות עיכול, ההשעיה מופיעה עכורות המכילה חתיכות גלויות של רקמה. מאז יעילות collagenases משתנה בין סוגים מסחריים שונים והרבה, לקבוע את העיתוי של מערכת עיכול באופן אמפירי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כביסה וסינון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת הרקמה מתעכל לתוך צינור 50 מ&quot;ל ולסיים חפירהestion ידי הוספת 45 מ&quot;ל של מדיום resuspension. סנן את ההשעיה דרך גס (~ 1 מ&quot;מ) רשת מתכת לתוך צינור טרי. צנטריפוגה הזרימה דרך ב100 × גרם במשך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant וresuspended הלבלב מתעכל ב50 מ&quot;ל של מדיום resuspension. סנן את ההשעיה דרך רשת ניילון 70 או 100 מיקרומטר. צנטריפוגה כמו קודם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להסיר acini הצף, פגום, לבטל את supernatant וresuspend רקמת הלבלב ב3 - 5 מ&quot;ל של מדיום resuspension. החל 1 מ&quot;ל חלקים של acini הלבלב לתוך צינורות חרוטי 15 מ&quot;ל מלא 7 מ&quot;ל של מדיום resuspension. לאפשר acini להסתפק ב2 - 3 דקות. לאסוף acini שהתיישב בחלק התחתון של הצינור עם טפטפת מ&quot;ל 1, וחזור על שלב זה 2 - 3 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צפה acini הלבלב תחת מיקרוסקופ אור או לנתח כדי לבדוק את מצבם. באיור 2, להתבונן על טוהר הבידוד ונזקים שנגרם לתאי duriבידוד ng. השתמש acini אלה באופן מיידי או תרבות עד 20 שעה. </li></ol></li></ol></li></ol> .2 עמילאז Assay ההפרשה הערה: assay הפרשת עמילאז משמש כמדד גלובלי ליכולת ההפרשה של acini לבלב. זו מושגת על ידי איסוף המדיום שבו acini הלבלב הודגרו, וקביעת פעילות עמילאז של המדיום, בדרך כלל על ידי שימוש בערכה מסחרית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את מספר תנאי ניסוי לבדיקה (לעומת למשל שאינו מגורה המגורה). השתמש לפחות שלושה משכפל עבור כל מצב. בנוסף, להוסיף סט של משכפל כדי לקבוע את התוכן הכולל הסלולרי עמילאז (מדגם &#39;סך הכל&#39;) ומערכת לפעילות עמילאז של המדיום (מדגם &#39;אפס&#39;). תווית צלחת רב גם שבassay יתקיים, ושני סטים של microtubes לכל אחת מהחזרות לשימוש. צלחת 12- או 24 גם: הערהים יכול לשמש כדי לפקח על 1 ו0.5 מ&quot;ל של השעיות acinar, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את acini פעמיים ב30 מ&quot;ל של מדיום resuspension KRBH דגירה אותם במדיום resuspension ל30 דקות על 37 מעלות צלזיוס. לצלחת רב גם להוסיף טיפת 10μl של secretagogue להגיע הריכוז הסופי המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> acini הלבלב להגיב לשיפוע של secretagogue באופן דו phasic. הריכוזים עם ערכי הפרשה אופטימליים הם 50 - 100 PM של כולציסטוקינין (CCK) ו1μM של Carbachol (איור 3 א) 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף וresuspend acini במדיום resuspension. ודא שacini מופצים homogenously בכמויות שווים ההשעיה וaliquot של השעיה לתוך הצלחת רבות גם ולתוך microtubes כותרת total&#39; &#39;. דגירה את הצלחת ל30 דקות על 37 מעלות צלזיוס. (רצוי באמבט מים תחת תסיסה קלה (~ 50 סל&quot;ד)). הערה: מספר acini המדויק עשוי להשתנות בין experiments אבל צריך להיות דומה בחזרות בתוך כל ניסוי. לפיכך, aliquoting המדויק של ההשעיה acini הוא קריטי להשוואה בין משכפל ותנאים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הדגירה, לייצר &#39;סך הכל&#39; ו &#39;אפס&#39; דגימות. צנטריפוגה microtubes &#39;סך הכל&#39; לכמה שניות ב5,000 × גרם ולהסיר 50 μl מsupernatant לתוך microtubes &#39;zero&#39; שכותרתו ומניחה אותם על 4 מעלות צלזיוס. Lyse acini בדגימות &quot;בסך הכל&quot; על ידי הוספת טריטון X-100 microtubes להגיע ריכוז סופי של 1%. מערבולת microtubes במרץ. הערה: Aliquote &#39;סך הכל&#39; משכפל דומה למשכפל של הניסוי. Lysing acini, מוביל לשחרור בסך הכל תוכן עמילאז. לחלופין, לאסוף את acini בכל מצב וlyse בסוף הניסוי, כדי לקבוע את התוכן הסלולרי של כל לשכפל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את רוב i ההשעיה acinarn כדי הסט הראשון של microtubes שכותרתו מראש. צנטריפוגה microtubes לכמה שניות ב5,000 × גרם. מעבירים את supernatant לסט השני של microtubes שכותרתו מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Assay supernatant לפעילות עמילאז עם ערכה מסחרית. חישוב אחוזי עמילאז מופרשים. הערה: חשוב מאוד לקרוא את פעילות עמילאז בטווח ליניארי שלה. להציג את האחוז של עמילאז מופרש כאחוזים מעמילאז שוחררו מתוכן כולל ראשוני. הפחת את רמת עמילאז הרקע של מדיום מכל שלושה עותקים ולחלק אותו על ידי התוכן הכולל הראשוני דומה המנורמל. </li></ol> .3 הדמיה חיה של הפרשת לבלב הפרשה מacini הלבלב יכולה להיות במעקב באופן ישיר על ידי הדמיה לחיות. שימוש בצבעי ניאון שונים וחיישנים, הדמיה חיה מאפשרת האפיון של הפרשה ברזולוציה משנה הסלולר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין מדיום resuspension טרי מחומצן כמו שאניn צעד 1.1 ולהביא אותו ל37 ºC. הגדר את המיקרוסקופ, ואם מצוידים בבקר טמפרטורה, להתאים אותו ל37 ºC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את תאי acinar ב30 מ&quot;ל של מדיום resuspension ולמקם אותם בשקופית זכוכית או פלסטיק. הערה: אם צבעי lipophilic ישמשו לתייג לקרום פלזמה שכותרתו עם צבעי lipophilic, להכתים את acini על כך שלא יותר מ 5 דקות כדי למנוע תיוג של קרומים פנימיים על ידי אנדוציטוזה. לאורך כל העבודה, להתמודד עם acini בעדינות ולהימנע pipetting מוגזם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שבמיקרוסקופ, acini תמונת המורפולוגיה שלו ברור, ולהימנע מהדמיה של acini המציג blebs basolateral או וקואולות תאית. הוסף טיפת secretagogue חכם או על ידי שימוש בתא זלוף, או במהלך או מייד לפני תחילתו של הדמיה. הערה: עדשות הגדלה גבוהות עם פתחים מספריים גבוהים (למשל × 63 / 1.4 או × 100 / 1.4) מומלץ לבחון מבני subcellular. </li></ol> 4. O / N תרבות של הלבלב acini (טכניקת תרבית תאים חלופי) הערה: O / culturing N משמש לעתים קרובות לזיהום בנגיף Adeno. הזיהום מתבצע ב10 6 -10 7 pfu מ&quot;ל / ל9 - 16 שעות לפני הבדיקה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> acini לבלב תרבות עד 20 שעה. acini Resuspended מתקבל מלבלב יחיד ב25 מ&quot;ל מדיום תרבות (DMEM בתוספת עוברי עגל בסרום (FCS) (5%), נתרן פירובט (1%), אנטיביוטיקה (1%), L-גלוטמין (0.5%), BSA (10 מ&quot;ג / מ&quot;ל) וSTI (0.2 מ&quot;ג / מ&quot;ל), ומחולק לחמש 10cm צלחות. להדביק acini עם וירוס בקבינט ביו בטיחות ברמת 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מודגרות acini הלבלב ב37ºC באוויר humidified 5% CO 2. לאפשר acini להתאושש במדיום resuspension מחומצן ל30 דקות לפני הבדיקה שלאחר מכן 3,8. </li></ol>

<ol>
	<li>Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+acinar+cell+function.">Regulation of pancreatic acinar cell function.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).</li><li>Schnekenburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+kinesin,+dynein+and+microtubules+in+pancreatic+secretion.">The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).</li><li>Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+exocrine+secretory+vesicles+to+the+apical+membrane+by+actin+cables+generated+by+the+formin+mDia1.">Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+secretagogues+on+a+new+preparation+of+functionally+intact,+isolated+pancreatic+acini.">Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini.</a> The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).</li><li>Jerdeva, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+non-muscle+myosin+II+facilitate+apical+exocytosis+of+tear+proteins+in+rabbit+lacrimal+acinar+epithelial+cells.">Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).</li><li>Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+pancreatic+acinar+cells+and+pancreatic+acini.">Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini.</a> Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).</li><li>Bi, Y., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Rho+and+Rac+in+secretagogue-induced+amylase+release+by+pancreatic+acini.">A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).</li><li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis.">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189, 867 (1975).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).</li><li>Petersen, H., Grossman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+secretion+in+anesthetized+and+conscious+rats.">Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats.</a> The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+for+the+actin+cytoskeleton+during+regulated+exocytosis.">Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).</li></ol>

The authors declare they have no competing financial interests.

חוץ תרבות vivo לשעבר, הגדרות חלופיות ללימוד הפרשת אקסוקרינית כוללות מיקרוסקופיה ומדידת intravital של נוזלים מצינור הלבלב. מיקרוסקופיה Intravital הוצגה לפעול גם בעכבר בלוטות רוק 10. שיטה זו יכולה להקליט את ההפרשה בזמן אמת בחיה שלמה, אבל מוגבלת ברזולוציה שלה ועל ידי האמצעי למניפולציה של רקמות אקסוקרינית. הערכת הפרשה על ידי איסוף נוזלים מצינור הלבלב הושגה בחולדות מורדמות 11. עם זאת, מאז cannulation של צינור הלבלב הוא קשה מאוד, הוא השתמש בשיטה זו רק לעתים רחוקות. לעומת הגדרות אלה, תרבות vivo לשעבר של acini הלבלב היא פשוטה, מהירה ומאפשרת אמצעי נגיש למעקב ולמניפולציה של התאים, מבלי להפריע לארגון של הרקמה שלמה 4,5. אף על פי כן, יש הגדרה זו חסרונותיו. לבלבתאי acinar הם עדינים בטבע ורגיש מאוד לשינויים בתנאי תרבות. מאז התאים נטענים עם אנזימי מפרקי חלבונים, הם נוטים תמוגה ומוות של תאים. כתוצאה מכך, תרבות זו היא קצרה מועד ובדרך כלל לא מחזיק מעמד מעל 20 שעה. זה תמיד הכי טוב כדי לזהות ולפתור בעיות כפי שהן עולות. הצעד מתודולוגית המפתח הוא לבודד acini לבלב שלם בלי סימנים משמעותיים של נזק לתאים ולתמותה. סימנים כאלה הם ברורים ממבט ראשונים, וכוללים פסולת מוגזמת תא וacini עם blebs basolateral או וקואולות תאית. בassay הפרשת עמילאז, נזק לתאים יביאו לנמוך מגורה / יחס הפרשה מגורה שאינו. כדי למנוע נזק כזה, מומלץ לטפל ברקמות בעדינות, להוסיף BSA וSTI למדיום, ולהעשיר אותו עם חמצן. לדוגמא, ללא חמצון, פריקת תא מוגזמת של מסכות עמילאז האפקט של גירוי secretagogue (איור3 ג). עם זאת, בשל שבריריותה של רקמת אקסוקרינית, כמה נזק לרקמות היא כמעט בלתי נמנעת - צריכים להיות מושלכים תכשירים כאלה. עבור assay הפרשת עמילאז, supernatant, אשר מכיל עמילאז מופרש אבל הוא ללא תאים, יכול להיות כל הזמן על 4 מעלות צלזיוס למשך 1 - 2 ימים. supernatant זה אמור להיות assayed ידי ערכה מסחרית. ערכות זמינות רבות מסתמכות על מחשוף של מצע עמילאז מלאכותי והשחרור לאחר מכן של chromophore. לפיכך, ריכוזי עמילאז גבוהים יותר יובילו לשינוי מהיר יותר בצבע של הפתרון. מאז עמילאז מופרש סופו של דבר לשחרר את כל chromophore מהמצע, זה חיוני כדי לעקוב אחר התגובה לאורך זמן, ולהשתמש רק בנתונים שנאספו במהלך השלב ליניארי. הדמיה חיה של acini לבלב יכולה להיות חוויה מתסכלת לחוקר. הכנות תא מסוימות, במיוחד אלה של acini הנגוע, לא יכולות להיות מתאימות לחייםהדמיה בשל מורפולוגיה התפשרה של acini או לרמות לא מספקות של חיישני הניאון. גם בהכנות מתאימות, זה עלול לקחת זמן כדי לאתר דגימות מתאימות. כך הדמיה עשויה לדרוש זמן רב. Lifeact-GFP, בדיקה F-אקטין, היא 12 ראויים לציון. כלי זה מאפשר לנו לעקוב אחר הדינמיקה של F-אקטין במהלך הפרשת לבלב עד 16 שעות לאחר הדבקה, ברמה של רזולוציה שלא ניתן הייתה להשיג בדגימות acinar קבועות. בנוסף, שימוש במעקב הבדיקה Lifeact אפשר אירועי exocytosis יחידים, כשלפוחית ​​zymogen לבלב עובר ציפוי אקטין זמן קצר לפני exocytosis 3,13. באופן קולקטיבי, כאשר משתלטים עליו, בטכניקות שתוארו כאן מציעות החוקר אומר להעריך את הפרשת לבלב, ועל ידי רתמת אותו לזהות משתתפי רומן בתהליך רב שלבים זה. בנוסף, לאור הדמיון המבני ותפקודי בין הלבלב ואיברי אקסוקרינית אחרים,ניתן ליישם את הטכניקות הללו לרקמות אקסוקרינית אחרות גם כן 3.

לבלב אקסוקרינית מהווה רוב המסה של הלבלב של היונקים והוא ייעודי לייצור והפרשה של אנזימי עיכול 1. היחידה התפקודית של לבלב אקסוקרינית, acinus, היא מקבץ של תאי האפיתל המהווה ומניות לומן משותף. על גירוי הורמונלי או עצבי, שלפוחית ​​מלאה באנזימים מועברות לתא שטח הפסגה, נתיך איתו ולגרש את התוכן שלהם לתוך לומן 1-3. אז האנזימים המופרשים מרוקנים על ידי קבוצה התגבשה של צינוריות למעי דק, שבו הם מאיצים את השבירה של מזון לחומרים מזינים. וידאו זה מדגים כיצד שלם acini מבודדים מכל הלבלב וכיצד ניתן להעריך את יכולת ההפרשה שלהם. באמצעות התקנה זו, הפרשת לבלב היא לכמת על ידי מדידת הכמות היחסית של עמילאז ששוחרר בעקבות גירוי. לחלופין, הפרשה ניתן הדמיה חי על ידי השימוש בשונהחיישנים וצבעים. התקנת vivo לשעבר של acini הלבלב היא יתרון שכן acini המבודד, אשר שומר על מאפיינים רבים של הלבלב שלם, ניתן להשפיע ופיקוח בקלות רבה יותר מאשר בכל בעלי החיים 4-6. התקנה זו פותחה במקור בסוף שנת 1970 והייתה מאז להארכה למחקר של כמה רקמות אקסוקרינית כגון הרוק ובלוטות החלב 3-7. יש לציין, שהוא מאפשר לימוד ההפרשה עם הפרעה מינימאלית לארגונים הסלולריים המורכבים האפיתלים מקוטבים אלה.

<table><tbody><tr><td>ICR mice</td><td>Harlan</td><td></td><td>Any strain will do</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H8264</td><td>Can substitude for KRB</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>Fraction V</td></tr><tr><td>Trypsin inhibitor</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9003</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase XI&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>Nylon mesh</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td>70-100&amp;micro;m</td></tr><tr><td>Amylase infinity reagent&amp;nbsp;</td><td>Thermo</td><td>TR25421</td><td></td></tr><tr><td>CCK</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2175</td><td></td></tr><tr><td>FM4-64</td><td>Lifetechnologies</td><td>F34653</td><td>Diluted to 16&amp;micro;M</td></tr><tr><td>20mL scintillation vial</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z190527</td><td></td></tr><tr><td>DeltaVision system&amp;nbsp;</td><td>Applied Precision</td><td></td><td>Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)</td></tr><tr><td>Zeiss 510 or 710 confocal microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td>60x/1.4 or 100x/1.4 objectives&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Ultra Microplate reader</td><td>BioTek</td><td>ELx808</td><td></td></tr></tbody></table>

assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells

תאי acinar לבלב לייצר ולהפריש אנזימי עיכול. תאים אלה מאורגנים כצביר אשר מהווה ומניות לומן משותף. עבודה זו מדגימה כיצד יכולת ההפרשה של תאים אלה יכול להיות מוערכת על ידי התרבות של acini המבודד. ההתקנה היא יתרון שכן acini המבודד, אשר שומר על מאפיינים רבים של לבלב אקסוקרינית שלם ניתן להשפיע ופיקוח בקלות רבה יותר מאשר בכל בעלי החיים. בידוד נכון של acini הלבלב הוא דרישת מפתח, כך שהתרבות vivo לשעבר תייצג את הטבע בvivo של acini. הפרוטוקול מדגים כיצד לבודד acini שלם מהלבלב של העכבר. בהמשך לכך, בשתי שיטות משלימות להערכת הפרשת לבלב מוצגות. Assay הפרשת עמילאז משמש כמדד גלובלי, תוך הדמיה ישירה של הפרשת לבלב מאפשרת האפיון של הפרשה ברזולוציה משנה הסלולר. באופן קולקטיבי, טכניקות presenטד כאן מאפשר קשת רחבה של ניסויים כדי ללמוד הפרשת אקסוקרינית.

acini הלבלב שבודדו כראוי להציג מורפולוגיה סטריאוטיפית כאשר נצפים על ידי אור מועבר. תחומים basolateral שלהם צריכים להופיע בסיבוב ונטול blebs. תחום הפסגה מוקף במאות שלפוחית ​​הפרשה ומופיע בצבע כהה (איור 2 א, ב &#39;). הגרעינים נמצאים בסיס לאזור לפוחי. פסולת תא ומרכיבים של מערכת ductal לבלב ושל הלבלב האנדוקרינית, אשר ניתן לאתרם בבידוד acini (איור 2 ג, ד) בשלבים מוקדמים, צריכה להיות נעדרה מהשעית acinar הסופית (איור 2 א, ב &#39;). בידוד נאות עלול לגרום לדור של blebs basolateral ושבירה של תאים אשר שחרור העיכול שלהם אנזימים לתוך המדיום (איור 2E, F). שחרור עמילאז מacini הלבלב מתאר עקומה דו phasic כאשר זמם נגד הריכוז של secretagogues (איור 3 א). Wגירוי ithout כ -5% מהתוכן הראשוני הוא שוחרר במהלך 30 דקות של דגירה. בעקבות גירוי, מספר זה גבוה בשיעור של עד 5 פי. Acini שהיה O תרבותי / N, להציג יחס נמוך יותר של גירוי לעומת שחרור עמילאז בסיסי בהשוואה לacini מבודד טרי. חשוב לציין, acini התרבותי שנדבקו בוירוסי Adeno להציג הפרשת עמילאז בסיס גבוהה ורגיש מגורה הפרשה (איור 3 ב, ג). זה ובכך קריטי כדי להדביק acini שליטה עם מנה דומה של וירוס שליטה. הדמיה חיה של acini צריכה לאפשר זיהוי ברור של תחומים basolateral ופסגה של תאי acinar. צבעי lipophilic יכולים להיות אינסטרומנטלי להבחנה בין תחום הצר הפסגה וההיבטים הרוחביים וbasolateral של התאים (איור 4). תחת גירוי פיסיולוגי, הפרשה מכוונת באופן בלעדי למשטח פסגת 1,9. שימוש בבדיקת F-אקטין Lifeact-GFPמאפשר הדמיה חיות של שלפוחית ​​הפרשה, שכן שלפוחית ​​zymogen לבלב עוברת ציפוי אקטין זמן קצר לפני exocytosis (איור 4). <img alt="איור 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51799/51799fig1highres.jpg" width="400" /> לוקליזציה .1 איור של הלבלב ואיברים סמוכים. (AC) הלבלב והאיברים סמוכים לאחר החתך של עור הבטן ושכבה התת עורית (), לפני ואחרי הפרדת לבלב מאיברים שכנים, (ב) ו (ג), בהתאמה. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51799/51799fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.</a> <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51799/51799fig2highres.jpg" width="500" /> איור 2 בידוד של acini לבלב. (א) ו (ב) הלבלב acini מבודד להציג מורפולוגיה סטריאוטיפית כראוי; תחומים basolateral להופיע בסיבוב נטול blebs ו, ואילו תחום הפסגה שלהם מוקפים במאות שלפוחית ​​הפרשה ומופיע בצבע כהה (חץ). (C) ושל (ד) פסולת נייד ורכיבים של המערכת של צינוריות הלבלב ניתן לאתרם בבידוד acini שלבים המוקדמים (נקודות חצים כדי צינור אקסוקרינית). (E) ו( F) תוצאות בידוד לא נכונה בדור של blebs basolateral (E, חץ), ושבירה של תאים, אשר פריקת העיכול שלהם אנזימים לתוך המדיום ( F, חץ). ברים סולם מייצגים 100 מיקרומטר. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51799/51799fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> </p&gt; <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51799/51799fig3highres.jpg" width="500" /> איור 3 מדידה של שחרור עמילאז מacini המבודד. () שחרור עמילאז מacini הלבלב מתארת ​​עקומה דו phasic כאשר זמם נגד הריכוז של secretagogue. Acini היו מבודדים ועזב להתאושש במשך 30 דקות לפני גירוי עם הריכוזים מצויינים של כולציסטוקינין (CCK). תוצאות מייצגות את הממוצע וSEM של שלושה ניסויים בלתי תלויים. (B) acini שהיו O התרבותי / N, להציג יחס נמוך יותר של גירוי לעומת שחרור עמילאז בסיסי בהשוואה לacini מבודד טרי. acini התרבותי שנדבקו בוירוסי Adeno להציג הפרשה גבוהה בסיסית עמילאז והפרשה עוררה רגישה. (C) ללא חמצון תנאי התרבות יובילו לdi מוגזםscharge של עמילאז, שמסכות האפקט של גירוי secretagogue. <img alt="איור 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51799/51799fig4highres.jpg" width="600" /> איור 4 הדמיה חיה של הפרשת לבלב. בשידור חי מגורה תאי acinar, להביע Lifeact-GFP (LA, ירוק, אפור) ומוכתם בצבע lipophilic FM4-64 (אדום). שימוש בבדיקת Lifeact מאפשרת הדמיה חיות של אירועי היתוך יחידים של שלפוחית ​​מצופה אקטין (חיצים). תאים נדבקו O / N עם אדנווירוס-Lifeact-GFP (Ad-Lifeact-GFP), מוכתמים ומגורה קצר עם CCK 100 PM לפני תחילתו של הדמיה. סרגל קנה מידה מייצג 5 מיקרומטר. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51799/51799fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

acini לבלב המבודד לשמור המורפולוגיה שלהם in vivo ופעילות ומציע דרכים רבות עוצמה לניטור וטיפול הפרשה. עבודה זו מדגימה כיצד ניתן לבודד acini מלבלב העכבר, וכיצד ניתן להעריך את יכולות ההפרשה שלהם.

הערכת יכולת ההפרשה של תאי הלבלב Acinar

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

assessing-the-secretory-capacity-of-pancreatic-acinar-cells

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

16.6K Views.  Weizmann Institute of Science.  acini לבלב המבודד לשמור המורפולוגיה שלהם in vivo ופעילות ומציע דרכים רבות עוצמה לניטור וטיפול הפרשה. עבודה זו מדגימה כיצד ניתן לבודד acini מלבלב העכבר, וכיצד ניתן להעריך את יכולות ההפרשה שלהם. 

Video: Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires further study. To understand the mechanisms regulating acinar-to-ductal metaplasia (ADM), ex vivo 3D culture and differentiation of primary acinar cells to ductal cells offers many advantages over other systems. With the technique herein, modulation of protein expression is simple and quick, requiring only one day to isolate, stimulate or virally infect, and begin culturing primary acinar cells to investigate the ADM process. In contrast to using basement membrane matrix, the seeding of acinar cell clusters in collagen I extracellular matrix, allows acinar cells to retain their acinar identity before manipulation. This is vital when testing the contribution of various components to the induction of ADM. Not only are the effects of cytokines or other ectopically administered factors testable through this technique, but the contribution of common mutations, increased protein expression, or knockdown of protein expression is testable via viral infection of primary acinar cells, using adenoviral or lentiviral vectors. Moreover, cells can be re-isolated from collagen or basement membrane matrix at the endpoint and analyzed for protein expression.

Primary acinar cell isolation, protein expression or activity modulation, culture, and down-stream applications are abundantly useful in the ex vivo study of acinar-to-ductal metaplasia (ADM), an early event in the development of pancreatic cancer.

מחקה וטיפול מטפלזיה Acinar-כדי-Ductal הלבלב בתרבות תלת-ממדי תא

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires ...

Cancer Research

Coculture Analysis of Extracellular Protein Interactions Affecting Insulin Secretion by Pancreatic Beta Cells

Interactions between cell-surface proteins help coordinate the function of neighboring cells. Pancreatic beta cells are clustered together within pancreatic islets and act in a coordinated fashion to maintain glucose homeostasis. It is becoming increasingly clear that interactions between transmembrane proteins on the surfaces of adjacent beta cells are important determinants of beta-cell function.
Elucidation of the roles of particular transcellular interactions by knockdown, knockout or overexpression studies in cultured beta cells or in vivo necessitates direct perturbation of mRNA and protein expression, potentially affecting beta-cell health and/or function in ways that could confound analyses of the effects of specific interactions. These approaches also alter levels of the intracellular domains of the targeted proteins and may prevent effects due to interactions between proteins within the same cell membrane to be distinguished from the effects of transcellular interactions.
Here a method for determining the effect of specific transcellular interactions on the insulin secreting capacity and responsiveness of beta cells is presented. This method is applicable to beta-cell lines, such as INS-1 cells, and to dissociated primary beta cells. It is based on coculture models developed by neurobiologists, who found that exposure of cultured neurons to specific neuronal proteins expressed on HEK293 (or COS) cell layers identified proteins important for driving synapse formation. Given the parallels between the secretory machinery of neuronal synapses and of beta cells, we reasoned that beta-cell functional maturation might be driven by similar transcellular interactions. We developed a system where beta cells are cultured on a layer of HEK293 cells expressing a protein of interest. In this model, the beta-cell cytoplasm is untouched while extracellular protein-protein interactions are manipulated. Although we focus here primarily on studies of glucose-stimulated insulin secretion, other processes can be analyzed; for example, changes in gene expression as determined by immunoblotting or qPCR.

Transcellular protein interactions are important determinants of pancreatic beta-cell function. Detailed here is a method&#x2014;adapted from a coculture model of synaptogenesis&#x2014;for investigating how specific transmembrane proteins influence insulin secretion. Transfected HEK293 cells express proteins of interest; beta cells do not need to be transfected or otherwise directly perturbed.

ניתוח Coculture של אינטראקציות חלבון תאיות המשפיעות על הפרשת אינסולין על ידי תאים בטא בלבלב

Interactions between cell-surface proteins help coordinate the function of neighboring cells. Pancreatic beta cells are clustered together within ...

Medicine

Detergent-Free Decellularization of the Human Pancreas for Soluble Extracellular Matrix (ECM) Production

Islet transplantation (ITx) has the potential to become the standard of care in beta cell replacement medicine but its results remain inferior to those obtained with whole pancreas transplantation. The protocols currently used for human islet isolation are under scrutiny because they are based on the enzymatic digestion of the organ, whereby the pancreas is demolished, its connections to the body are lost and islets are irreversibly damaged. Islet damage is characterized by critical factors such as the destruction of the extracellular matrix (ECM), which represents the 3D framework of the islet niche and whose loss is incompatible with islet euphysiology. Researchers are proposing the use of ECM-based scaffolds derived from the mammalian pancreas to address this problem and ultimately improve islet viability, function, and lifespan. Currently available methods to obtain such scaffolds are harsh because they are largely detergent based. Thus, we propose a new, detergent-free method that creates less ECM damage and can preserve critical components of pancreatic ECM. The results show that the newly developed decellularization protocol allowed the achievement of complete DNA clearance while the ECM components were retained. The ECM obtained was tested for cytotoxicity and encapsulated with human pancreatic islets which showed a positive cellular behavior with insulin secretion when stimulated with glucose challenge. Collectively, we propose a new method for the decellularization of the human pancreas without the use of conventional ionic and non-ionic chemical detergents. This protocol and the ECM obtained with it could be of use for both in vitro and in vivo applications.

<meta charset="utf8"></head><body>דה-סלולריזציה ללא חומרי ניקוי של הלבלב האנושי לייצור ECM מטריצה חוץ-תאית מסיסה

The protocol described in this manuscript explains the steps for the fabrication of a soluble extracellular matrix (ECM) from the human pancreas. The solubilized ECM powder obtained through this protocol may be used for the recapitulation of pancreatic islets&#8217; microenvironment in vitro and, potentially, in vivo settings.

דה-סלולריזציה ללא חומרי ניקוי של הלבלב האנושי לייצור מטריצה חוץ-תאית מסיסה (ECM)

Islet transplantation (ITx) has the potential to become the standard of care in beta cell replacement medicine but its results remain inferior to those ...

Bioengineering

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing prevalence of diabetes, both immune-mediated type 1 and obesity-linked type 2, studies aimed at delineating diabetes pathophysiology and therapeutic mechanisms are of critical importance. The &#946;-cells of the pancreatic islets of Langerhans are responsible for appropriately secreting insulin in response to elevated blood glucose concentrations. In addition to glucose and other nutrients, the &#946;-cells are also stimulated by specific hormones, termed incretins, which are secreted from the gut in response to a meal and act on &#946;-cell receptors that increase the production of intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Decreased &#946;-cell function, mass, and incretin responsiveness are well-understood to contribute to the pathophysiology of type 2 diabetes, and are also being increasingly linked with type 1 diabetes. The present mouse islet isolation and cAMP determination protocol can be a tool to help delineate mechanisms promoting disease progression and therapeutic interventions, particularly those that are mediated by the incretin receptors or related receptors that act through modulation of intracellular cAMP production. While only cAMP measurements will be described, the described islet isolation protocol creates a clean preparation that also allows for many other downstream applications, including glucose stimulated insulin secretion, [3H]-thymidine incorporation, protein abundance, and mRNA expression.

Assaying in vitro &#946;-cell function using isolated mouse islets of Langerhans is an important component in the study of diabetes pathophysiology and therapeutics. While many&#160;downstream applications are available, this protocol specifically describes the measurement of intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) as an essential parameter determining &#946;-cell function.

שיטה לבידוד עכבר הלבלב איילט וקביעת תאית cAMP

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

The pancreatic acinar cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary role in the secretion of pancreatic enzymes into the pancreatic duct. It is also the site for the initiation of pancreatitis. Here we describe how acinar cells are isolated from whole pancreas tissue and intracellular calcium signals are measured. In addition, we describe the techniques of transfecting these cells with adenoviral constructs, and subsequently measuring the leakage of lactate dehydrogenase, a marker of cell injury, during conditions that induce acinar cell injury in vitro. These techniques provide a powerful tool to characterize acinar cell physiology and pathology.

We describe a reproducible method of preparing mouse pancreatic acinar cells from a mouse for the purpose of examining acinar cell calcium signals and cellular injury with physiologically and pathologically relevant stimuli. A method for adenoviral infection of these cells is also provided.

הכנת תאי לבלב acinar לצורך סידן ההדמיה, פגיעה בתא המדידות, וזיהום adenoviral

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one week. More than 20 x 106 acinar cells can be obtained from a single murine pancreas. This protocol offers the possibility to independently process as many as 10 pancreases in parallel. Because it preserves acinar architecture, this model is well suited for studying the physiology of the exocrine pancreas in vitro in contrast to cell lines established from pancreatic tumors, which display many genetic alterations resulting in partial or total loss of their acinar differentiation.

In this publication, we describe a rapid and convenient procedure for isolating and culturing primary pancreatic acinar cells from the murine pancreas. This method constitutes a valuable approach to study the physiology of fresh primary normal/untransformed exocrine pancreatic cells.

בידוד והתרבות של תאי לבלב הראשיים acinar עכבר

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Observing Islet Function and Islet-Immune Cell Interactions in Live Pancreatic Tissue Slices

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared from live human and mouse pancreatic tissue embedded in agarose and cut using a vibratome. This method allows for the tissue to maintain viability and function in addition to preserving underlying pathologies such as type 1 (T1D) and type 2 diabetes (T2D). The slice method enables new directions in the study of the pancreas through the maintenance of the complex structures and various intercellular interactions that comprise the endocrine and exocrine tissues of the pancreas. This protocol demonstrates how to perform staining and time-lapse microscopy of live endogenous immune cells within pancreatic slices along with assessments of islet physiology. Further, this approach can be refined to discern immune cell populations specific for islet cell antigens using major histocompatibility complex-multimer reagents.

This study presents the application of live pancreatic tissue slices to the study of islet physiology and islet-immune cell interactions.

התבוננות בתפקוד אי ואינטראקציות תא חיסוני איון בפרוסות רקמת הלבלב חי

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared ...

Immunology and Infection

גרימת פגיעה בלבלב בעכברים באמצעות הזרקת תרופה תוך צפקית

Preparing a Mice Model of Severe Acute Pancreatitis via a Combination of Caerulein and Lipopolysaccharide Intraperitoneal Injection

The treatment of severe acute pancreatitis (SAP), with high mortality rates, poses a significant clinical challenge. Investigating the pathological changes associated with SAP using animal models can aid in identifying potential therapeutic targets and exploring novel treatment approaches. Previous studies primarily induced pancreatic injury through retrograde bile duct injection of sodium taviaurocholate, but the impact of surgical damage on the quality of the animal model remains unclear. In this study, we employed various frequencies of intraperitoneal Caerulein injections combined with different doses of LPS to induce pancreatic injury in C57BL/6J mice and compared the extent of injury across five intraperitoneal injection protocols. Regarding inducing acute pancreatitis in mice, an intraperitoneal injection protocol is proposed that results in a mortality rate as high as 80% within 5 days. Specifically, mice received ten daily intraperitoneal injections of Caerulein (50 &#181;g/kg), followed by an injection of LPS (15 mg/kg) one hour after the last Caerulein administration. By adjusting the frequency and dosage of injected medications, one can manipulate the severity of pancreatic injury effectively. This model exhibits strong controllability and has a short replication cycle, making it feasible for completion by a single researcher without requiring expensive equipment. It conveniently and accurately simulates key disease characteristics observed in human SAP while demonstrating a high degree of reproducibility.

מחבר זרקור: זיהוי המטרות הטיפוליות לפיתוח טיפולים חדשים לדלקת לבלב חריפה חמורה בעכברים

Intraperitoneal drug administration is a safe and effective non-invasive approach for inducing pancreatic injury. This study compared five distinct intraperitoneal injection protocols on mice to induce varying degrees of pancreatic injury and established a model of severe pancreatic injury to investigate the pathological changes and treatment strategies for severe acute pancreatitis (SAP).

הכנת מודל עכברים של דלקת לבלב חריפה חמורה באמצעות שילוב של Caerulein ו Lipopolysaccharide הזרקה intraperitoneal

The treatment of severe acute pancreatitis (SAP), with high mortality rates, poses a significant clinical challenge. Investigating the pathological ...

הערכת יכולת ההפרשה של תאי הלבלב Acinar

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מחקה וטיפול מטפלזיה Acinar-כדי-Ductal הלבלב בתרבות תלת-ממדי תא

ניתוח Coculture של אינטראקציות חלבון תאיות המשפיעות על הפרשת אינסולין על ידי תאים בטא בלבלב

דה-סלולריזציה ללא חומרי ניקוי של הלבלב האנושי לייצור מטריצה חוץ-תאית מסיסה (ECM)

דה-סלולריזציה ללא חומרי ניקוי של הלבלב האנושי לייצור מטריצה חוץ-תאית מסיסה (ECM)

שיטה לבידוד עכבר הלבלב איילט וקביעת תאית cAMP

הכנת תאי לבלב acinar לצורך סידן ההדמיה, פגיעה בתא המדידות, וזיהום adenoviral

בידוד והתרבות של תאי לבלב הראשיים acinar עכבר

התבוננות בתפקוד אי ואינטראקציות תא חיסוני איון בפרוסות רקמת הלבלב חי

הכנת מודל עכברים של דלקת לבלב חריפה חמורה באמצעות שילוב של Caerulein ו Lipopolysaccharide הזרקה intraperitoneal

הכנת מודל עכברים של דלקת לבלב חריפה חמורה באמצעות שילוב של Caerulein ו Lipopolysaccharide הזרקה intraperitoneal