These experiments were funded by the NIH grant #RAI093634A. We express immense gratitude to Jenny Powers, DVM, PhD, for her assistance in muntjac milking.

1. עכבר חליבת פרוטוקול השיטות שתוארו בפרוטוקול זה אושרו על ידי IACUC. 1. הפרדה של הסכר מצאצאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את הסכר לחליבה. בחר סכר עם המלטה של ​​4 או יותר גורים שהוא 8-12 ימים שלאחר המלטה כדי לספק חלב מקסימאלי אוסף-למרות שהאוסף הוא אפשרי בכל נקודה שלאחר המלטה עד זמן 21 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את הסכר מההמלטה שלה לפחות 2 שעות לפני החליבה. הערה: יש רצון אחד לחלוב סכר יותר מפעם אחת בתקופת זמן נתונה, זה מקובל על בית הסכרים המופרדים באותו הכלוב עם אוכל הולם ואספקת מים. </li></ol> 2. מנהל של אוקסיטוצין, הרדמה ועיני חומר סיכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל 2 IU / קילוגרם של אוקסיטוצין intraperitoneally (IP). אוקסיטוצין הוא הורמון שפועל על בלוטות החלב של נקבות מניקות כדי לעורר את שחרורו של חלב. ניתן לרכוש אוקסיטוצין frאום וטרינר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל תערובת הרדמה המכילה 80-100 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין בשילוב עם 5-10 מ&quot;ג / IP xylazine קילוגרם. לדוגמא, תערובת הרדמה מיליליטר מניית 10 יכולה להיות מוכנה מראש לעכברים במשקל של כ 30 גרמו ותכלול 0.1 מיליליטר xylazine, 8.9 מיליליטר H 2 O, ו1.0 מיליליטר קטמין. 0.25 הרדמה כוללת מיליליטר תהיה להרדים את העכבר בגודל זה לכ 20-30 דקות, אשר אמור לספק מספיק זמן לאיסוף חלב. הערות: כדי לקבוע כי בעל החיים כבר הרדימו בהצלחה, מניחים בעדינות אותה על בטנה על משטח מוצק; היא לא צריכה להיות להזיז את רגליה או מנסה לקום על רגליה אם היא בהרדמה מלאה. במקרה של עכבר לא להיות מורדם באופן מלא עם המינון המקורי, החוקר רשאי לנהל אחר ¼ או ½ מהמינון המקורי של תערובת ההרדמה בהתאם לגודל של העכבר ו / או ברמה של הרגעה שהעכבר כבר השיג . עם זאת, זה אני יכולncrease הסיכוי של תגובה שלילית להרדמה, וגם עלול לגרום לעכבר להיות מורדם ו / או מורדם לתקופה ארוכה יותר של זמן עמוקים יותר. הערה: אם חליבת סכר יותר מאחד, יש צורך לזעזע אוקסיטוצין וזריקות הרדמה בשל זמן מחצית החיים הקצר של אוקסיטוצין ופעמים הרגעה לקטמין ו xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח כמות קטנה של חומר סיכה העין לפינה של כל עין והתפשט כדי למנוע את עיניו של העכבר מהתייבשות בזמן שתחת הרדמה. </li></ol> 3. אוסף חלב אוסף חלב מתבצע בקלות עם שני חוקרים: חוקר אחד להחזיק את העכבר הרדים תוך הבעת חלב (המכונה R1), וחוקר אחד כדי לאסוף את חלב (R2) באופן ידני. שיטה זו יכולה להתבצע גם עם אדם אחד, אם העכבר הוא מאובטח על משטח שטוח כדי למנוע נזק. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> R2 צריך להיות מצויד בכריות הכנת אלכוהול סטרילי, פיפס P-200etman, קצה פיפטה נקי לכל עכבר, ומכל להחזיק חלב, כגון צינור Eppendorf 1.5 מיליליטר או cryovial 1.2 מיליליטר (ראה טבלה של חומרים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו אוקסיטוצין מתחיל להיכנס לתוקף, האכזבה חלב תהיה גלויה באזור החלב של העכבר (ראה איור 1 א). R1: לגולל כרית הכנת אלכוהול סטרילי ולנגב בעדינות את אזור החלב של העכבר כדי לנקות את האזור לפני החליבה. ידני לשאוב חלב מהפטמה באמצעות האגודל והאצבע לעסות בעדינות ולסחוט את רקמת השד בתנועה כלפי מעלה עד שחרוז גלוי של חלב מתחיל להיווצר בבסיס הפטמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על בוכנת pipetman P-200 לתחנה הראשונה שלה לשחרר אוויר מקצה פיפטה ולהתכונן לאוסף חלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את קצה פיפטה בחלק העליון של טיפת חלב, ומשוך בעדינות את החלב לתוך קצה פיפטה ידי שחרור לאט את לחץ על הבוכנה. יש להיזהר שלא לשים את הקצה קרוב מדי לפטמה או העור (ראהאיור 1). אין זה הכרחי כדי לשחרר לחלוטין את הבוכנה כמו זה יהיה למשוך את חלב כל הדרך לחלק העליון של קצה פיפטה ויקשה לגרש את חלב לעתים קרובות צמיג לתוך המכל מחזיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרש את חלב לתוך המכל על ידי שימוש באגודל כדי ללחוץ על בוכנת עבר התחנה הראשונה (ראה תרשים 1C). כדי להקל על גירושם של נפחים קטנים, לחץ על קצה פיפטה נגד הצד של הצינור, כך שנוזל לא הולך לאיבוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך להביע באופן ידני חלב מפטמה, נע בכל כיוון השעון או נגד כיוון השעון כדי לא לדלג על כל פטמות. זה גם מקובל ושימושי לחזור וללשאוב חלב ללא הרף מאותו העטין זה צריך לייצר יותר חלב מאשר אחר. </li></ol> 4. היפוך הרדמה בסכר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברוב המקרים, זה נפוץ לסכר להתחיל להתחיל להתעורר במהלך תהליך החליבה. אם זה לא המקרה, הנח את הסכר בCAGדואר בעקיפין מתחת למקור חום, כגון שמיכה במחזור מחוממת, עד שהיא מתחילה להתעורר. הערה: כסכר מתחיל להתעורר, לשמור על התבוננות קרובה של פעילותה עד שהיא תוכל ללכת על הכלוב שלה בכוחות עצמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהסכר הוא נע על הכלוב בלי מאבק, הנח אותה בחזרה לכלוב המקורי שלה עם גוריה. השפעות שליליות לא כבר ציינו ביחס ליכולתם של הגורים כדי להאכיל לאחר איסוף חלב. </li></ol> 2. Muntjac חליבת פרוטוקול השיטות שתוארו בפרוטוקול זה אושרו על ידי IACUC. 1. הפרדה של פלוני מצאצאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את האיילה לחליבה. צבי muntjac ריבס &#39;בדרך כלל ללדת אחד חום בהיר 2. לחלוב את האיילה ביום שלאחר לידה כדי לאפשר את ההזדמנות להתחנף כדי לקבל גישה לחומרים מזינים חיוניים בקולוסטרום 8. הערה: חום בהיר בדרך כלל מסתיר ולא מופיע שוב במהלך procedure; הפרדה של זוג אם הצאצאים אינה הכרחית. </li></ol> 2. מנהל של אוקסיטוצין, הרדמה ועיני חומר סיכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל 10 IU / קילוגרם של אוקסיטוצין לשריר (IM). אוקסיטוצין הוא הורמון שפועל על בלוטות החלב של נקבות מניקות כדי לעורר את האכזבה של חלב. אוקסיטוצין ניתן לרכוש מוטרינר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את ההרדמה BAM 11 IM מכיל 0.45 מ&quot;ג / קילוגרם butorphanol, azaperone מ&quot;ג / קילוגרם 0.25, medetomadine 0.07 מ&quot;ג / קילוגרם. מנה אחת של תערובת ההרדמה BAM תהיה להרדים muntjac לכ 20-30 דקות, המספקת מספיק זמן לאיסוף חלב מלא. אפשרות נוספת להרדמה היא midazolam ב1-2 מ&quot;ג / קילוגרם, אשר להרדים muntjac כ 10-15 דקות. אמנם זה מספק מספיק זמן לאיסוף חלב, הרדמה זה עובר מטבוליזם במהירות רבה יותר מאשר BAM ובעלי החיים עשויים לנסות לברוח בתום תקופת הזמן הקצר יותר. הערה: תגובה מינימאלית לכאב, רפלקסים קטין עם הנגיעה האוזניים, ואחריו את היכולת של R1 להחזיק MJ ללא מאבק מצביעים על כך שבעלי החיים כבר הרדימו בהצלחה. הערה: במקרה של muntjac לא להיות מורדם באופן מלא עם המינון המקורי, החוקר רשאי לנהל אחר ¼ או ½ מהמינון המקורי של תערובת ההרדמה בהתאם לגודלו של בעל החיים ו / או ברמה של הרגעה שכבר היה הושג. עם זאת, זה יכול להגדיל את הסיכוי לתגובה שלילית להרדמה, וגם עלול לגרום לmuntjac להיות עמוק יותר בהרדמה ו / או מורדם לתקופה ארוכה יותר של זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח כמות קטנה של חומר סיכה לפינה של כל עין והתפשטות כדי למנוע את עיניו של muntjac מהתייבשות בזמן שתחת הרדמה. </li></ol> 3. אוסף חלב אוסף חלב מתבצע בקלות עם שני חוקרים; חוקר אחד להחזיק muntjac הרדים בהברכיים תוך הבעת חלב (המכונה R1), וחוקר שני כדי לשמור על ראשו של muntjac בתנוחה נוחה ובטוחה ולאסוף את חלב (R2) באופן ידני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם להרדמה המשמשת, חליבה צריכה להתבצע גם 1) בעטים שלהם על מנת לספק מקום בטוח עבורם הם צריכים להתעורר במהלך ההליך (או מושרה midazolam) 2) בחדר המתנה ללא מצעים כדי לשמור על ניקיון (BAM- מושרה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> R1 ו R2 צריך להיות מצויד בגזה ספוגת אתנול וכמה מיליליטר 15 צינורות פוליפרופילן חרוטי להחזיק את חלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו אוקסיטוצין מתחיל להיכנס לתוקף, האכזבה חלב תהיה גלויה באזור החלב של muntjac. R1: לטהר את הידיים בכפפות ואצבעות, כמו גם את כל העטין וכל פטמה בודדת של בעלי החיים עם הגזה ספוגת אתנול. R2: החזק את ראשו של muntjac בעמדה בטוחה ונוחה כדי לאפשר להקל על נשימה ולעזור למנוע regurgitation כרס הפנימי. החזק את CL צינור האיסוף<html> OSE לפטמה שחלב מבלי לגעת בו על מנת למנוע זיהום פוטנציאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב חלב מפטמה אחת על ידי שימוש באגודל ובאצבע כדי לסחוט בעדינות את רקמת השד בתנועה כלפי מעלה עד שהפטמה היא צבה עם חלב, ובעדינות לגלגל את חלב מהפטמה ולתוך הצינור שR2 מחזיק (ראה איור 2 ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערה: חלב יוצא בזרם, ולכן חשוב לR2 כדי לקבל את צינור האיסוף מוקם כך שלא מעט חלב יהיה מבוזבז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העטין של muntjac מחולק לרבעים. R1: המשך להביע את חלב מכל רבע עד שהחלב כבר לא זורם בקלות. אם חלב לא יכול לבוא לידי ביטוי מפטמה אחת, להביע מכל הפטמות האחרות לפני ההחזרה לראשונה. זה גם מקובל ושימושי לחזור וללשאוב חלב ללא הרף מאותו העטין זה צריך לייצר יותר חלב מאשר אחר. </li></ol> 4. היפוך הרדמה בDoe t &quot;&gt; זה נפוץ איילה מושרה midazolam להתחיל להתעורר במהלך תהליך החליבה. ברוב המקרים, האיילה תנסה לברוח לפני שכל חלב כבר הביע. איפוק קטן משמש במאמץ להגביר את חלב תשואה, אך הבטיחות והנוחות של שני החוקרים והאיילה הן חשובים לא פחות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל atipamezole ב2.5 מ&quot;ג / מ&quot;ג medetomadine תת עורי להיפוך מהיר של BAM הרדימה איילה. שים לב: עם שני הסוגים של הרדמה, יש צורך לשמור על התבוננות קרובה של האיילה עד שהיא מסוגלת ללכת בכוחות עצמה בלי למעוד או ליפול, והוא מסוגל לאכול ולשתות ללא חשש של שאיפה או חנק. השפעות שליליות לא כבר ציינו ביחס ליכולתו של העופר להניק לאחר איסוף חלב. </li></ol>

<ol>
	<li>Dueling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , (2004).</li><li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+(Muntiacus+reevesi+micrurus)+in+northern+Taiwan,+Republic+of+China.">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li><li>Browning, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+prions+from+mule+deer+and+elk+with+chronic+wasting+disease+to+transgenic+mice+expressing+cervid+PrP.">Transmission of prions from mule deer and elk with chronic wasting disease to transgenic mice expressing cervid PrP.</a> J. Virol. 78 (23), 13345-13350 (2004).</li><li>Van de perre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+antibody+via+mother's+milk.">Transfer of antibody via mother's milk.</a> Vaccine. 21 (24), 3374-3376 (2003).</li><li>Maden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+mice+produce+human+milk+protein.">Genetically modified mice produce human milk protein.</a> BioNews. , (2009).</li><li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat.">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab. Anim. 29 (4), 450-455 (1995).</li><li>Depeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+collecting+milk+from+mice.">Methods for collecting milk from mice.</a> J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li><li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk+yield+and+composition+in+mice:+effects+of+litter+size+and+lactation.">Milk yield and composition in mice: effects of litter size and lactation.</a> 84 (1), 127-133 (1986).</li><li>Hedrich, H. J., Bullock, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+mouse.">The laboratory mouse.</a> , 735-736 (2004).</li><li>Nishimori, K., Young, L. J., Guo, Q., Wang, Z., Insel, T. R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+is+required+for+nursing+but+is+not+essential+for+parturition+or+reproductive+behavior.">Oxytocin is required for nursing but is not essential for parturition or reproductive behavior.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (21), 11699-11704 (1996).</li><li>Miller, B. F., Osborn, D. A., Lance, W. R., Howze, M. M., Warren, R. J., Miller, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Butorphanol-azaperone-medetomidine+for+immobilization+of+captive+white-tailed+deer.">Butorphanol-azaperone-medetomidine for immobilization of captive white-tailed deer.</a> 45 (2), 457-467 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

עכבר ישנם מספר גורמים לקחת בחשבון בעת ​​איסוף חלב מעכבר, כולל 1) כמות הזמן להפריש עבור אוסף, 2) במינון של אוקסיטוצין מנוהל, 3) כמה גורי הסכר הוא כיום סיעוד ו4) הסכום זמן שחלף מאז המלטה בזמן איסוף המידע. שימוש במחקרים קודמים כקווים מנחים, יצאנו כדי לייעל את התנאים לתנובת החלב. מחקר קודם שנעשה באופן ישיר יש קורלציה תנובת החלב עם גודל המלטה 8. למרבה הצער, גודל המלטה הוא משתנה שלא ניתן לשלוט. עם זאת, הזמן של פוסט המלטת חליבה יכול להיות נשלט. לדברי הפרשת חלב מרבי המעבדה מאוס הוא ב8-10 ימים לאחר המלטה 9. הניסיון שלנו הוא בהלימה עם הצהרה זו. הוכח שאוקסיטוצין משחק תפקיד אין לו תחליף בתפקיד את ייצור החלבהמלטה 10. מנות אוקסיטוצין החל 0.1 IU / קילוגרם 9-4 IU / קילוגרם 6 דווחו לאיסוף חלב ממכרסמים 6,7,9. התחלנו במחקר שלנו על ידי מתן המינון הנמוך ביותר שהוצע, 0.1 IU / קילוגרם 9. השימוש במינון זה, את כמות החלב המיוצר על ידי העכבר הייתה קטנה מדי כדי למדוד או לאסוף. עם הגדלת מינון האוקסיטוצין ל2 IU / קילוגרם 6,7, תנובת החלב הייתה גבוהה באופן משמעותי בכ 120 μl. מכיוון שאנו רוצים להשתמש במינון הנמוך ביותר של אוקסיטוצין כדי להשיג אוסף חלב אופטימלי, שלא לנהל מינונים גבוהים יותר מ -2 IU / קילוגרם. תנובת החלב היא גם תלויה בכמות הזמן שהוקצתה לאוסף. יש לנו קבענו כי מינימום של 3 שעות הוא הכרחי עבור שעות אוסף-2 אופטימליות לגורים להיות מופרדים מהסכר ו1 שעות להכנה ואיסוף חומר. איסוף חלב מכמה סכרים בפגישה אחת יקטין את הזמן הכולל הנחוץ כדילמסוק נפח מסוים של חלב, כלומר, 2 שעות להפריד גורים, 30 דקות לחומרי התקנה ו20-30 דקות כדי לאסוף את חלב מכל סכר. חייב להיות במעקב כל סכר עד שהם יתעוררו לפני שיוצבו בחזרה עם גוריהם. יש לנו לציין שיותר הזמן להפריש עבור חליבה מוביל לתשואות חלב גבוהות יותר, משום שעל העכבר ניתן חלב עד שהיא חוזר להכרה. מקרים שמתעוררים עם מודלים של בעלי חיים שישפיעו על תנובת החלב. בעיה נפוצה אחת היא הנוכחות של דם או exudate בחלב של סכרים מבוגרים שכבר גידלו שוב ושוב ויש לי המלטות גדולות, או בסכרים המניקים את הגורים הראשונים שלהם. זה צריך להתרחש, אנו מציעים הפסקת איסוף חלב מפטמה מסוימת. מומלץ להחליף טיפים pipet בשלב זה, ולבטל את כל exudate או דם. חוקרי ביצוע בשיטה זו צריכים גם להיות מודעים לכך, כפי שקורית לעתים קרובות בעת השימוש במודלים של בעלי חיים, תוצאות להשתנות (איור3). אם כמות אופטימלית מאשר פחות חלב נאסף בפגישה אחת, עדיף לחזור על ההליך במועד מאוחר יותר (למשל 24-48 hr) ולא לשנות את תנאי הניסוי לכפות שחרור חלב. Muntjac הנפח של חלב שנאסף מסכרי muntjac ריבס &#39;היה תלוי בהרדמה בשימוש. ההרדמה הראשונית שלנו של הבחירה הייתה midazolam. Midazolam סיפק הרגעה מספיק כדי לאפשר איפוק לתקופות קצרות של זמן, כלומר, אם היה לי R1 אופי רגוע ויכול לשמור על הרגיעה muntjac, R2 יכול להשתלט על החליבה כדי להגדיל את התשואה לפני muntjac יתעורר-הבטיחות והנוחות של שני בעלי חיים ומטפל היו בעל חשיבות עליונה ואנחנו נטשו את מאמץ החליבה אם אנחנו חשים או נפגעו. גילתה שאיילת muntjac להפוך במהירות סובלנית לmidazolam וכי מינונים גבוהים יותר יהיו צורך לאחר חשיפה חוזרת ונשנית,<html> מה שהופך את אוסף חלב פעמיים בשבוע קשה יותר ויותר. המחסור בmidazolam, יחד עם סובלנות בניין, הוביל אותנו למחקר הרדמה חלופית. תערובת של Butorphanol, Azaperone וMedetomadine (BAM) משמשת ביעילות לחוסר התנועה של צבאים זנב לבנים 11. בידיים שלנו, קוקטייל BAM סיפק הרדמה מספיק כדי לאפשר אוסף של כרכים מקובלים של חלב באופן בטוח, עם פחות סובלנות לסמים לאחר שימוש חוזר ונשנה, ועם שליטה טובה יותר בהיפוך ההשפעות של ההרדמה. סכרי muntjac כמה סבלו מעטינים רגישים ו / או היו בלידה הראשונה. muntjac אלה התפתח שטפי דם בפטמות במהלך תהליך החליבה, וזרימת החלב תואט או תופסק לחלוטין, מה שגרם לנו להפסיק את ההפעלה השוטפת. זה צריך להתרחש, יש להשתמש בטכניקת חליבה עדינה יותר בניסיון למנוע אי נוחות או שטפי דם בפטמות. e_content &quot;&gt; ייצור חלב הופיע לשעווה ולדעוך בכמה הזדמנויות. יבולי חלב נמוך עלולים להיגרם על ידי 1) מתרפק אחרי שטפל רק לפני אוספים או 2) ירידה בייצור חלב עקב התהליך הטבעי של גמילה חום בהיר. למרות שזה יכול להיות תהליך מנסה להשיג נפח גדול למדי של חלב ממודלים של בעלי חיים קטנים, העבודה שלנו ממחישה כי אכן אפשרות לשניהם עכבר ודגמי muntjac; לא דורש מיומנות רבה ולא כיסים עמוקים, פשוט התמדה.

מודלים של בעלי החיים לספק תובנות לגבי הפתולוגיה מחלה שלא ניתן להשיג על ידי ניתוח במבחנה. כדי לספק את התוצאות יעילות ביותר, זה חשוב להשתמש במודל של בעלי חיים הקשור באופן הדוק למחלה והמינים של עניין. לדוגמא, muntjac &#39;ריבס (reevesi Muntiacus), צבאים קטנים אסיה 1,2, ועכברים מהונדסים המבטאים את חלבון cervid הפריון (CerTgPrP) 3 הם מודלים של בעלי חיים שימושיים למיני cervid. שני המינים הם polyestrous, המאפשרים גידול בכל ימות שנה, ולכן מקור עקבי לרקמות הקשורים להריון ונוזלים ללמוד מנגנונים ספציפיים בביולוגיה cervid. יש מחקרים על חלב מגוון רחב של יישומים, כי הם יותר פשוט (וזולים) השיגו במודלים של בעלי חיים מאשר בבני אדם. חוקרים יכולים לחקור חלב וקולוסטרום כמקור פוטנציאלי של 1 העברת מחלות מידבקת), 2) נוגדנים שהועברו מאם לצאצאים בdevelopment חסינות פסיבית 4 ו -3) לקטופרין, חלבון המצוי בחלב אם אנושי המעורב בחסינות פסיבית שחוקרים כעת מנסים לייצר באופן מסחרי 5. איסוף כמות משמעותית של חלב מבעלי חיים קטנים יכול להוכיח להיות משימה קשה. רוג&#39;רס הציע גישה לאיסוף חלב מחולדות 6, אשר לאחר מכן נעשה שימוש בעכברים. DePeters וHovey הציעו שתי שיטות לאיסוף חלב, אחד באמצעות ואקום שנוצר באופן ידני המיוצר על ידי הנורה פיפטה גומי המחובר לפיפטה פסטר, ושנייה המחייב את הבנייה של יחידת חליבה, אשר מחוברת אז למקור ואקום (כגון כרז) למסוק חלב עכבר 7. כאן אנו מציעים שיטה פשוטה, עלות נמוכה לאיסוף חלב משני עכברים והצבאים muntjac ריבס &#39;, אשר דורש ציוד מעבדה רק זמין וכישורים טכניים בסיסיים. השיטה שלנו מניבה כמויות מספיקות של חלב לשונהיישומים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1009">
	<tbody>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:360px;">Materials-Mouse</td>
			<td style="width:297px;"></td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:116px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>011075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)</td>
			<td>MWI/Vedco</td>
			<td>NADA 139236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eye lubricant</td>
			<td>MWI/Apexa</td>
			<td>701013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (2 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Materials- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Material/Reagent</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Midazolam (1-2 mg/kg)</td>
			<td>Amerisource Bergen Drug Corp</td>
			<td>924326</td>
			<td>optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)</td>
			<td>Fort Dodge Animal Health</td>
			<td>NADA 135-780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>NADA 141-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oxytocin (10 IU/kg)</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>501013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-200 Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200 &#956;L pipette tips</td>
			<td>Light Labs</td>
			<td>B-2004-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>005427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">27 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>002031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Equipment- Muntjac</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name of Equipment</td>
			<td>Vendor</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">22 gauge needles</td>
			<td>MWI</td>
			<td>873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 ml luer lock syringes</td>
			<td>MWI</td>
			<td>001377</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

עכבר מהניסויים שלנו, יש לנו קבענו כי ניתן לגבות כ 100-400 μl חלב מעכבר מעבדה אחד, תלוי במספר משתנה. משתנה אלו כוללים 1) כמות הזמן להפריש עבור אוסף, 2) במינון של אוקסיטוצין מנוהל, 3) כמה גורי הסכר הוא כיום סיעוד ו4) הסכום של הודעה המלטת זמן. המחקרים שלנו הראו כי את התשואה הגבוהה ביותר מתקבלת כאשר הסכרים מופרדים מצאצאיהם לפחות 2 שעות, ולפחות 45 דקות לשעה היא להפריש לכל עכבר לחליבה. כרכי חלב מרביים נקצרו 8-12 ימים שלאחר המלטה באמצעות 2 IU / קילוגרם של אוקסיטוצין. התוצאות שלנו הן בעיקר על פי מחקרים אחרים שבו גודל המלטה היה מתואם חיובי עם חלב תשואה 9 (ראה איור 3). Muntjac למרות הסכום של הר חלבקנויה מmuntjac היה משתנה מיום ליום, הצלחנו לאסוף 5-30 מיליליטר חלב / סכר / מושב, בהתאם להרדמה בשימוש ו / או הודעה בזמן הלידה. צבי Muntjac הוא polyestrous; חלב יכול להיות שנאסף בנקודות זמן שונות לאורך כל השנה 2 (ראה טבלה 1). איילה-Induced midazolam נשארה תחת הרדמה עבור קטן כמו 10 דקות, המאפשרת לאוספים קטנים יותר בנפח (בדרך כלל 5-30 מיליליטר), ואילו איילה מושרה BAM ספגה תקופה ארוכה יותר של השפעת הרדמה (20-30 דק &#39;), המאפשרת ביטוי חלב מלא (15-130 מיליליטר). אוספי חלב הופסקו כאשר החלב כבר לא מיוצר בכמויות מספיקות על ידי האיילה, והחום הבהיר המתאים היה להיות מוזן על דיאטה של ​​מזון בעיקר שחת. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51007/51007fig1highres.jpg" width="600" /> איור 1. () הסכר217; של הפטמות הופכות צבה עם חלב על הזרקת אוקסיטוצין (ב) אוסף של חלב מסכר הרדים באמצעות pipetman P-200 פליטה (C) של חלב לתוך 1.2 מיליליטר cryovial... <img alt="איור 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51007/51007fig2highres.jpg" width="400" /> איור 2. חלב Muntjac נאסף לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר. <img alt="איור 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51007/51007fig3highres.jpg" width="400" /> איור 3. תנובת החלב משוערת שנאסף מעכברים המבוססות על גודל המלטה, וגיל של גורים. <img alt="טבלת 1" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51007/51007table1.jpg" width="300" /> טבלת 1. קול חלבection תאריכי התחלה וסיום למניקות סכרי muntjac ריבס &#39;.

Watch this Scientific Journal Video about Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer at JoVE.com

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves&#8217; muntjac deer.

שיטות איסוף חלב לעכברים וריבס &#39;Muntjac צביים

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

milk-collection-methods-for-mice-and-reeves-muntjac-deer

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

19.7K Views.  Colorado State University. Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer. 

Video: Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain quality. F. graminearum also causes stalk and ear rots of maize and is a producer of mycotoxins such as the trichothecenes that contaminate grain and are harmful to humans and livestock (Goswami and Kistler, 2004).

The fungus produces two types of spores. Ascospores, the propagules resulting from sexual reproduction, are the main source of primary infection.  These spores are forcibly discharged from mature perithecia and dispersed by wind (Francl et al 1999). Secondary infections are mainly caused by macroconidia which are produced by asexual means on the plant surface. To study the developmental processes of ascospores in this fungus, a procedure for their collection in large quantity under sterile conditions was required. Our protocol was filmed in order to generate the highest level of information for understanding and reproducibility; crucial aspects when full genome gene expression profiles are generated and interpreted. In particular, the variability of ascospore germination and biological activity are dependent on the prior manipulation of the material. The use of video for documenting every step in ascospore production is proposed in order to increase standardization, complying with the increasingly stringent requirements for microarray analysis. The procedure requires only standard laboratory equipment. Steps are shown to prevent contamination and favor time synchronization of ascospores.

To study the developmental processes of ascospores in Gibberella zeae, a procedure for collection under sterile conditions is filmed in order to generate the highest level of information for protocol description. This should facilitate the reproducibility of the experiment, a crucial aspect when full genome expression profile tests are implemented.

Gibberella zeae Ascospore ייצור אוסף לניסויים microarray.

Fusarium graminearum Schwabe (teleomorph Gibberella zeae) is a plant pathogen causing scab disease on wheat and barley that reduces crop yield and grain ...

Seawater Sampling and Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses. For today's demonstration samples were collected from the deck of the HMS John Strickland operating in Saanich Inlet. An A-frame derrick, with a multi-purpose winch and cable system, is used in combination with Niskin or Go-Flo water sampling bottles. Conductivity, Temperature, and Depth (CTD) sensors are also used to sample the underlying water mass. To minimize outgassing, trace gas samples are collected first.  Then, nutrients, water chemistry, and cell counts are determined. Finally, waters are collected for biomass filtration. The set-up and collection time for a single cast is ~1.5 hours at a maximum depth of 215 meters. Therefore, a total of 6 hours is generally needed to complete the collection series described here.

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass concentration, nucleic acid purification, cell abundance, nutrient and trace gas analyses.

מי ים דגימה אוסף

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Necropsy לאבחון רקמות אוסף נבחר מדגם של חולדות ועכברים

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

בסיסי<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound responses and repair in this model have illuminated our understanding of the cytoskeletal and genomic responses to tissue damage. The two most commonly used methods to wound the C. elegans adult skin are pricks with microinjection needles, and local laser irradiation. Needle wounding locally disrupts the cuticle, epidermis, and associated extracellular matrix, and may also damage internal tissues. Laser irradiation results in more localized damage. Wounding triggers a succession of readily assayed responses including elevated epidermal Ca2+ (seconds-minutes), formation and closure of an actin-containing ring at the wound site (1-2 hr), elevated transcription of antimicrobial peptide genes (2-24 hr), and scar formation. Essentially all wild type adult animals survive wounding, whereas mutants defective in wound repair or other responses show decreased survival. Detailed protocols for needle and laser wounding, and assays for quantitation and visualization of wound responses and repair processes (Ca dynamics, actin dynamics, antimicrobial peptide induction, and survival) are presented.

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

The adult C. elegans skin is a tractable model for studies of epithelial wound responses, including wound closure, scar formation, and innate immunity.

שיטות לעור פציעה ומבחנים לתגובות פצע ב<em&gt; C. elegans</em

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

Repeated Blood Collection for Blood Tests in Adult Zebrafish

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from zebrafish has not been established. The previous methods for blood collection from zebrafish are lethal, such as lateral incision, decapitation and tail ablation. Thus we have developed a novel &#8220;repeated&#8221; blood collection method, and present here a detailed protocol outlining this procedure. This method is minimally invasive and results in a very low mortality rate (2.3%) for zebrafish, thus enabling repeated blood sampling from the same individual. The maximum volume of blood sampling is dependent on body weight of the fish. The volume for repeated blood sampling at intervals should be&#160;&#8804;0.4% of body weight every week or &#8804;1% every 2 weeks, which were evaluated by measurements of blood hemoglobin. Additionally, hemoglobin, fasting blood glucose, plasma triacylglycerol (TG) and total cholesterol levels in male and female adult zebrafish were measured. We also applied this method to investigate the dysregulation of glucose metabolism in diet-induced obesity. This blood collection method will allow many applications, including glucose and lipid metabolism and hematological studies, which will increase the use of zebrafish as a human disease model organism.

Repeated blood sampling is necessary and important in animal research. We developed a novel, non-lethal and reliable method for repeated blood collection from adult zebrafish, and applied this method to the study of blood biochemistry, including glucose metabolism.

איסוף דם חוזרים ונשנים לבדיקות דם בדג הזברה למבוגרים

Repeated blood collection is one of the most common techniques performed on laboratory animals. However, a non-lethal protocol for blood collection from ...

Milk Collection in the Rat Using Capillary Tubes and Estimation of Milk Fat Content by Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.

Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.

אוסף חלב בעכברוש שימוש נימי צינורות והערכה של שומן חלב תוכן על ידי Creamatocrit

Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). These pacemaker APs reflect the coordinated activity of numerous membrane currents and intracellular calcium cycling. However the precise mechanisms that drive spontaneous pacemaker activity in SAMs remain elusive. Acutely isolated SAMs are an essential preparation for experiments to dissect the molecular basis of cardiac pacemaking. However, the indistinct anatomy, complex microdissection, and finicky enzymatic digestion conditions have prevented widespread use of acutely isolated SAMs. In addition, methods were not available until recently to permit longer-term culture of SAMs for protein expression studies. Here we provide a step-by-step protocol and video demonstration for the isolation of SAMs from adult mice. A method is also demonstrated for maintaining adult mouse SAMs in vitro and for expression of exogenous proteins via adenoviral infection. Acutely isolated and cultured SAMs prepared via these methods are suitable for a variety of electrophysiological and imaging studies.

Methods are demonstrated for the isolation of sinoatrial node myocytes (SAMs) from adult mice for patch clamp electrophysiology or imaging studies. Isolated cells can be used directly or can be maintained in culture to permit expression of proteins of interest, such as genetically encoded reporters.

שיטות הבידוד, תרבות האפיון פונקציונלי של myocytes צומת Sinoatrial של עכברים בוגרים

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in mammals. However, humans cannot oxidize cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid to cytidine monophosphate-N-glycolylneuraminic acid due to a primary exon deletion of the CMAH gene. To understand the effects and implications of the lack of CMAH activity in more detail, a Cmah knock-out model in mice is of keen interest in basic and applied research. The analysis method to determine the phenotype of this mouse model is herein described in detail, and is based on the detection of both N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in the liver and milk of wild-type and Cmah knock-out mice. Endogenous sialic acids are released and derivatized with o-phenylenediamine to generate fluorogenic derivatives, which can be subsequently analyzed by HPLC. The presented protocol can be also applied for the analysis of milk and tissue samples from various other origins, and may be of use to investigate the nutritional and health effects of N-glycolylneuraminic acid.

Determination of Sialic Acids in Liver and Milk Samples of Wild-type and CMAH Knock-out Mice.

We describe a HPLC-based method for the determination of N-acetylneuraminic acid and N-glycolylenuraminic acid in mouse liver and milk.

קביעת חומצות סיאליות בדגימות כבד וחלב של סוג הבר<em&gt; CMAH</em&gt; נוק- out עכברים.

CMAH (cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase) is responsible for the oxidation of cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acids in ...

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish species is that it possesses interfertile cave and river-dwelling populations. This enables the genetic mapping of heritable traits that were fixed during adaptation to the different environments of these populations. While this species can be maintained and bred in the lab, it is challenging to both obtain embryos during the daytime and create hybrid embryos between strains. In vitro fertilization (IVF) has been used with a variety of different model organisms to successfully and repeatedly breed animals in the lab. In this protocol, we show how, by acclimatizing A. mexicanus to different light cycles coupled with changes in water temperature, we can shift breeding cycles to a chosen time of the day. Subsequently, we show how to identify suitable parental fish, collect healthy gametes from males and females, and produce viable offspring using IVF. This enables related procedures such as the injection of genetic constructs or developmental analysis to occur during normal working hours. Furthermore, this technique can be used to create hybrids between the cave and surface-dwelling populations, and thereby enable the study of the genetic basis of phenotypic adaptations to different environments.

Gamete Collection and In Vitro Fertilization of Astyanax mexicanus

In vitro fertilization is a commonly used technique with a variety of model organisms to maintain lab populations and produce synchronized embryos for downstream applications. Here, we present a protocol that implements this technique for different populations of the Mexican tetra fish, Astyanax mexicanus.

אוסף המשחק ו הפריה חוץ גופית של Astyanax מקסיאנוס

Astyanax mexicanus is emerging as a model organism for a variety of research fields in biological science. Part of the recent success of this teleost fish ...