Quantification de génomes viraux adéno-associés dans des échantillons de vecteurs purifiés par réaction en chaîne par polymérase numérique en gouttelettes

La PCR DD est une technique largement utilisée pour déterminer le titre du génome de l’AAV, mais il n’existe actuellement aucun protocole consensuel. Notre protocole est un guide étape par étape validé sur la façon de préparer des échantillons et d’effectuer une PCR DD pour un titrage précis du génome. Par rapport à la QPCR, la PCR DD offre plusieurs avantages, notamment une précision accrue, une plus grande robustesse et une quantification plus absolue et directe des séquences cibles sans avoir besoin de courbes standard.

De plus, avec un ensemble de sondes d’amorce bien conçues, la PCR DD permet une détection spécifique tragique, par opposition à d’autres techniques qui détectent tout l’ADN. L’élaboration d’un protocole de consensus normalisé pour la quantification du génome du vecteur améliorera la fiabilité et l’uniformité du contrôle de la qualité des AAV recombinants dans différents laboratoires. Cela facilitera à la fois la recherche et les applications cliniques des vecteurs AAV recombinants pour l’ensemble de la communauté.