Quantifizierung von Adeno-assoziierten viralen Genomen in gereinigten Vektorproben durch digitale Tröpfchenpolymerase-Kettenreaktion

Die DD-PCR ist eine weit verbreitete Technik zur Bestimmung des AAV-Genomtiters, aber ein Konsensprotokoll fehlt derzeit. Unser Protokoll ist eine validierte Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Vorbereitung von Proben und zur Durchführung der DD-PCR für eine genaue Genomtitration. Im Vergleich zur QPCR bietet die DD-PCR mehrere Vorteile, darunter eine höhere Präzision, eine höhere Robustheit und eine absolutere und direktere Quantifizierung der Zielsequenzen, ohne dass Standardkurven erforderlich sind.

Darüber hinaus ermöglicht die DD-PCR mit einem gut konzipierten Primersondenset eine spezifische Tragödie beim Nachweis, im Gegensatz zu anderen Techniken, die die gesamte DNA nachweisen. Die Entwicklung eines standardisierten Konsensusprotokolls für die Quantifizierung des Vektorgenoms wird die Zuverlässigkeit und Einheitlichkeit der rekombinanten AAV-Qualitätskontrolle in verschiedenen Labors verbessern. Dies wird sowohl die Forschung als auch die klinische Anwendung von rekombinanten AAV-Vektoren für die breitere Gemeinschaft erleichtern.