Culture en suspension, production et purification de virus adéno-associés par centrifugation par gradient de densité d’iodixanol pour des applications in vivo

Nous utilisons une approche d’évolution dirigée pour identifier les capits viraux adéno-associés avec un tropisme plus élevé pour les types de cellules humaines cibles. Grâce à cette recherche, nous visons à produire des vecteurs viraux adéno-associés recombinants avec une meilleure transduction des cellules cibles et une pertinence clinique dans le domaine de la thérapie génique. Notre groupe a récemment déciblé plusieurs sérotypes AAV du foie en incorporant des résidus de capside originaux d’un sérotype AAV qui possède naturellement un tropisme hépatique réduit.

Si elle est étendue avec succès à d’autres sérotypes, cela fournit les bases pour réduire la dose clinique nécessaire de RAAV par injection périphérique et réduire les résultats indésirables pour les patients. La méthode de purification IODIXanol, bien qu’elle soit rentable, est difficile à mettre à l’échelle. De plus, dans les applications en aval, l’approche d’évolution dirigée est réalisée avec des modèles animaux ou in vitro.

Ainsi, la capside isolée par évolution dirigée peut ne pas transduire les cibles in vivo chez l’homme dans la même mesure que dans les modèles précliniques. Ce protocole est abordable et accessible aux petits laboratoires. De plus, cette méthode produit un virus adéno-associé recombinant de haute pureté qui peut être utilisé pour des applications précliniques in vivo en aval.