L’évaluation des dyskinésies induites par la L-DOPA dans le modèle de la maladie de Parkinson chez le rat 6-hydroxydopamine est un outil préclinique important pour identifier des interventions antidyskinétiques efficaces. Ce modèle est relativement simple, présente un faible coût et présente des similitudes avec ce qui se passe en clinique. La procédure sera démontrée par Danilo Leandro Ribeiro, doctorant au laboratoire.
Commencez l’expérience avec des rats mâles Sprague-Dawley, pesant de 200 à 250 grammes. Hébergez deux à trois animaux par cage dans les conditions de laboratoire standard avec de la nourriture et de l’eau disponibles ad libitum. Avant la chirurgie, administrer l’inhibiteur du transporteur de la noradrénaline, l’imipramine, au rat par voie intrapéritonéale.
Après avoir confirmé l’anesthésie par l’absence de réponse au pincement des orteils, placez le rat en position couchée dans l’appareil stéréotaxique sur le dessus du coussin chauffant. Une fois le rat positionné, utilisez un scalpel pour faire une incision d’un centimètre de long dans la région où la micro-injection aura lieu. Ensuite, nettoyez la région du crâne avec des cotons-tiges et assurez-vous que le bregma et le lambda sont exposés.
Prenez le faisceau médian du cerveau antérieur, ou MFB, coordonnées stéréotaxiques du bregma à 4,3 millimètres antérieur, 1,6 millimètres latéral du côté droit et 8,3 millimètres ventral du duromètre. Lorsque les coordonnées sont décidées, administrer unilatéralement le 6-hydroxydopamine, ou 6-OHDA, à raison de 0,4 microlitre par minute dans le MFB droit, avec une seringue en verre Hamilton de 50 microlitres. À la fin de la chirurgie, suturez l’incision du cuir chevelu et réhydratez l’animal avec une solution saline chaude et stérile à 0,9% par voie sous-cutanée, à la dose de 10 millilitres par kilogramme.
Retirez l’animal du cadre stéréotaxique et placez-le dans une cage de récupération chaude, tout en surveillant jusqu’à ce que la conscience soit retrouvée. Quatre semaines après la lésion, mesurer l’efficacité de la lésion dopaminergique à l’aide d’un test de pas, en évaluant l’akinésie du membre antérieur controlatéral à la lésion. Les rats présentant trois étapes d’ajustement ou moins avec le membre antérieur controlatéral devraient être inclus dans l’étude en tant que rats putatifs, gravement lésionnés au 6-OHDA.
Quatre semaines après les lésions de 6-OHDA, commencez le traitement chronique lundi et enregistrez les mouvements involontaires anormaux le mercredi. Pour ce faire, placez le rat à l’intérieur d’un cylindre transparent de 20 centimètres de diamètre et 40 centimètres de hauteur et laissez-le s’acclimater pendant au moins 15 minutes. Assurez-vous que le plancher est recouvert du matériau de litière et que des miroirs sont placés derrière le cylindre pour observer l’animal sous tous les angles possibles.
Placez une caméra vidéo haute résolution pour permettre la visualisation des mouvements involontaires anormaux axiaux, des membres et orolingues. Les miroirs derrière le cylindre permettront de suivre les mouvements involontaires anormaux à un angle de 360 degrés. La caméra peut être positionnée légèrement en dessous du plan à un angle de 15 degrés par rapport aux animaux pour observer les mouvements involontaires anormaux orolingues.
Lorsque la position est décidée, fixez la caméra directement sur le banc. Une fois que l’animal est acclimaté pendant 15 minutes, retirez-le du cylindre et administrez cinq milligrammes par kilogramme de L-dopamine ou de L-DOPA fraîchement préparée combinée à 12,5 milligrammes par kilogramme de bensérazide, par voie sous-cutanée. Remettez l’animal dans le cylindre et démarrez une minuterie pour suivre les mouvements involontaires anormaux.
Utilisez une caméra vidéo pour enregistrer les mouvements involontaires anormaux pendant 180 minutes après l’injection, à intervalles de 30 minutes, afin d’effectuer un score hors ligne. Après les six périodes d’observation, les scores doivent être donnés sur des périodes d’une à deux minutes et classés comme axiaux, membres ou orolingues. Assurez-vous de ne pas inclure de comportements normaux.
Le traitement par L-DOPA et bensérazide doit être poursuivi pendant trois semaines, une fois par jour, du lundi au vendredi. Dans l’analyse représentative de l’évolution temporelle, les scores appliqués aux mouvements involontaires anormaux axiaux, des membres et orolingues sur trois semaines d’administration chronique de L-DOPA sont présentés. Il a été noté que les dyskinésies de pointe induites par la L-DOPA se produisent entre 30 et 90 minutes, avec une diminution progressive après 120 minutes après l’injection.
De plus, la somme des mouvements involontaires anormaux axiaux, des membres et orolingues a été présentée sur les individus, en marquant des jours et des semaines pendant trois semaines d’administration chronique de L-DOPA. Le protocole des mouvements involontaires anormaux est généralement destiné à l’étude de nouveaux outils thérapeutiques ayant un potentiel translationnel antidyskinétique.
