يعد تصنيف خلل الحركة الناجم عن L-DOPA في نموذج الفئران 6-hydroxydopamine لمرض باركنسون أداة مهمة قبل السريرية لتحديد التدخلات الفعالة المضادة لخلل الحركة. هذا النموذج بسيط نسبيا ، ويقدم تكلفة منخفضة ، وله أوجه تشابه مع ما يحدث في العيادة. سيتم عرض الإجراء من قبل دانيلو لياندرو ريبيرو ، طالب دكتوراه في المختبر.
ابدأ التجربة مع ذكور الفئران Sprague-Dawley ، التي يتراوح وزنها بين 200 و 250 جراما. إيواء اثنين إلى ثلاثة لكل قفص في ظل ظروف المختبر القياسية مع الغذاء والماء المتاحين حسب الطلب. قبل الجراحة ، قم بتطبيق مثبط ناقل النورإبينفرين ، إيميبرامين ، على الفئران داخل الصفاق.
بعد التأكد من التخدير بسبب عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم ، ضع الجرذ في وضع عرضة في الجهاز المجسم أعلى وسادة التدفئة. بمجرد وضع الجرذ ، استخدم مشرطا لعمل شق بطول سنتيمتر واحد في المنطقة التي سيحدث فيها الحقن المجهري. بعد ذلك ، قم بتنظيف منطقة الجمجمة بمسحات القطن وتأكد من تعرض bregma و lambda.
خذ حزمة الدماغ الأمامي الإنسي ، أو MFB ، الإحداثيات المجسمة من bregma عند 4.3 ملم أمامي ، و 1.6 ملم جانبي إلى الجانب الأيمن ، و 8.3 ملم بطني من مقياس التحمل. عندما يتم تحديد الإحداثيات ، قم بإدارة 6-هيدروكسي دوبامين ، أو 6-OHDA ، من جانب واحد بمعدل 0.4 ميكرولتر في الدقيقة في MFB الأيمن ، مع حقنة زجاجية هاملتون سعة 50 ميكرولتر. في نهاية الجراحة ، قم بخياطة شق فروة الرأس وإعادة ترطيب الحيوان بمحلول ملحي دافئ ومعقم بنسبة 0.9٪ تحت الجلد ، بجرعة 10 ملليلتر لكل كيلوغرام.
أخرج الحيوان من الإطار المجسم وضعه في قفص استرداد دافئ ، مع المراقبة حتى يتم استعادة الوعي. في أربعة أسابيع بعد الآفة ، قم بقياس فعالية آفة الدوبامين باستخدام اختبار تدريجي ، من خلال تقييم حركية الطرف الأمامي المقابل للآفة. يجب تضمين الفئران التي تقدم ثلاث خطوات أو أقل للتكيف مع الطرف الأمامي المقابل في الدراسة كفئران مفترضة وشديدة الآفة 6-OHDA.
بعد أربعة أسابيع من آفات 6-OHDA ، ابدأ العلاج المزمن يوم الاثنين وسجل حركات لا إرادية غير طبيعية يوم الأربعاء. للقيام بذلك ، ضع الجرذ داخل أسطوانة شفافة بقطر 20 سم وارتفاع 40 سم ، واتركه يتأقلم لمدة 15 دقيقة على الأقل. تأكد من تغطية الأرضية بمواد الفراش ووضع المرايا خلف الأسطوانة لمراقبة الحيوان من جميع الزوايا الممكنة.
ضع كاميرا فيديو عالية الدقة للسماح بمشاهدة الحركات اللاإرادية غير الطبيعية المحورية والأطراف والفموية. ستسمح المرايا الموجودة خلف الأسطوانة بتتبع الحركات اللاإرادية غير الطبيعية بزاوية 360 درجة. يمكن وضع الكاميرا أسفل الطائرة بقليل بزاوية 15 درجة من الحيوانات لمراقبة الحركات اللاإرادية غير الطبيعية الفموية.
عندما يتم تحديد الموضع ، ثبت الكاميرا مباشرة على مقاعد البدلاء. بمجرد تأقلم الحيوان لمدة 15 دقيقة ، أخرج الحيوان من الأسطوانة وقم بإدارة خمسة ملليغرام لكل كيلوغرام من L-dopamine أو L-DOPA الطازج مع 12.5 ملليغرام لكل كيلوغرام من benserazide ، تحت الجلد. ضع الحيوان مرة أخرى في الأسطوانة وابدأ مؤقتا لتتبع الحركات اللاإرادية غير الطبيعية.
استخدم كاميرا فيديو لتسجيل الحركات اللاإرادية غير الطبيعية لمدة 180 دقيقة بعد الحقن ، كل 30 دقيقة ، لإجراء التسجيل دون اتصال بالإنترنت. بعد فترات المراقبة الست ، يجب إعطاء الدرجات على مدى دقيقة إلى دقيقتين وتصنيفها على أنها محورية أو أطراف أو لغوية. تأكد من عدم تضمين السلوكيات الطبيعية.
يجب أن يستمر العلاج باستخدام L-DOPA و benserazide لمدة ثلاثة أسابيع ، مرة واحدة يوميا ، من الاثنين إلى الجمعة. في تحليل الدورة الزمنية التمثيلية ، يتم عرض الدرجات المطبقة على الحركات اللاإرادية غير الطبيعية المحورية والأطراف واللسانية على مدى ثلاثة أسابيع من إدارة L-DOPA المزمنة. لوحظ أن خلل الحركة الناجم عن L-DOPA ، يحدث خلل الحركة بجرعة الذروة بين 30 إلى 90 دقيقة ، مع انخفاض تدريجي بعد 120 دقيقة بعد الحقن.
بالإضافة إلى ذلك ، تم تقديم مجموع الحركات اللاإرادية غير الطبيعية المحورية والأطراف واللسانية على الأفراد ، وتسجيل الأيام وأسبوعيا على مدى ثلاثة أسابيع من إعطاء L-DOPA المزمن. عادة ما يكون بروتوكول الحركات اللاإرادية غير الطبيعية مخصصا للتحقيق في أدوات علاجية جديدة ذات إمكانات متعدية مضادة للحركة.
