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Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire. Ici nous démontrons comment provoquer SRD actifs chez le rat Lewis et de surveiller la réponse inflammatoire.
Type de l'hypersensibilité retardée (DTH) est une réaction inflammatoire médiée par CCR7-lymphocytes T effecteurs mémoire qui infiltrent le site de l'injection d'un antigène contre lequel le système immunitaire a été amorcée. La réaction inflammatoire est caractérisée par une rougeur et une enflure du site de stimulation antigénique. C'est un modèle pratique pour déterminer l'efficacité in vivo d'immunosuppresseurs. SRD cutanée peut être induite soit par transfert adoptif de lymphocytes T spécifiques d'antigènes ou par l'immunisation active avec un antigène, et les suivantes défi intradermique avec l'antigène pour induire la réaction inflammatoire dans une zone de peau donnés. Réponses DTH peuvent être induites à des antigènes différents, par exemple l'ovalbumine, la tuberculine, anatoxine tétanique, ou hémocyanine de patelle (KLH).
Ici nous démontrons comment provoquer une réaction active SRD chez le rat Lewis. Nous allons d'abord préparer une émulsion eau dans huile de KLH, notre antigène d'intérêt, dans l'adjuvant complet de Freund et injecter cette émulsion sous-cutanée à des rats. Ce sera le système immunitaire pour développer des cellules T mémoires dirigés à la KLH. Sept jours plus tard, nous mettra au défi les rats par voie intradermique sur le dos avec KLH d'un côté et avec de l'ovalbumine, un antigène non pertinents, de l'autre côté. La réaction inflammatoire sera visible de 16 à 72 heures plus tard et la zone rouge et enflée sera mesuré comme une indication de la gravité de SRD.
1. Préparation de l'émulsion
2. L'immunisation des rats
3. Défi avec l'antigène dans le dos
4. Mesure de la SRD
Pour une mesure plus précise de la réaction de DTH, nous recommandons contester le rat avec l'antigène dans le pavillon de l'oreille. La réaction peut alors être mesurée comme une différence dans l'oreille de l'enflure entre les antigènes concernés a contesté l'oreille et l'oreille a contesté avec une solution saline seule ou avec l'antigène pertinent. Une démonstration de relever le défi de l'oreille est montré dans 1.
Utilisez stériles réactifs des solutions et des seringues. Les seringues en verre et les ponts 18G peuvent être autoclavés. Lire fiche signalétique avant de manipuler un réactif pour la première fois et porter un équipement protecteur.
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