Modelo de ratón con herida de puñalada para estudiar la hemorragia y la inflamación en lesiones cerebrales traumáticas

Estamos interesados en desarrollar un método para detener la hemorragia y suprimir la inflamación en TVI, por lo que establecimos un protocolo para hacer fácilmente un modelo masivo de TVI usando solo una aguja. Nuestro modelo TVI de puñaladas es beneficioso porque lubrica la hemorragia y la activación de las canas. Nuestro protocolo tiene tres ventajas principales en comparación con otras técnicas.

No se requieren equipos ni herramientas específicas. Se puede hacer de forma fácil y rápida, y la herida es tan pequeña que no afecta al comportamiento del ratón, por lo que cualquiera puede realizarla con una alta reproducibilidad. Nuestro laboratorio se centrará en la comunicación de neuronas, glóbulos grises, células gliales y parásitos durante la reparación de lesiones cerebrales traumáticas.

La comunicación juega un papel fundamental en la reparación. Sin embargo, hasta ahora no se entiende del todo. Nuestro protocolo es muy útil para analizar la comunicación.

Para comenzar, coloque al ratón anestesiado sobre su lado ventral sobre una toalla de papel. Confirme que el ratón está profundamente anestesiado con una prueba de pellizco en los dedos de los pies. Desinfecte el sitio quirúrgico alternando rondas de Betadine y exfoliante con etanol al 70% tres veces cada una.

Ahora, agarre la piel occipital con pinzas romas y haga una incisión de 1,5 milímetros de ancho para exponer el hueso occipital sin dañar el cráneo ni ningún órgano. A continuación, abra suave y lentamente la incisión para observar el límite entre la corteza cerebral y el cerebelo a través del cráneo. Para realizar una craneotomía en ratón, cree un pequeño orificio en el hemisferio derecho del hueso occipital con una aguja.

Gire suavemente la aguja para hacer un punto de inserción para la punción de la herida punzante, teniendo cuidado de no dañar el parénquima cerebral. Para la herida punzante, inserte la aguja apropiada desde el punto de inserción y apuñale la corteza cerebral a lo largo del eje caudal rostral. Por último, sutura la incisión cutánea con una sutura de nylon 3-0 con una aguja de forma semicircular.

La herida después del procedimiento fue confirmada por microscopía. La extravasación de IGG alcanzó su punto máximo un día después de la lesión, seguida de una recuperación progresiva y una reducción de la intensidad de la tinción a los tres, cinco y siete días. La fuga de tinte azul de Evan en el parénquima cerebral ocurrió inmediatamente después de la lesión, y su concentración alcanzó su punto máximo en una hora.

La concentración de tinte disminuyó gradualmente después de uno y tres días. La acumulación máxima de microglía positiva para IBA1 y astrocitos positivos para GFAP se produjo a los cinco y tres días después de la lesión, respectivamente, y su presencia disminuyó a los siete días. Las citocinas inflamatorias, incluidos el factor de necrosis tumoral alfa, la interleucina seis y la interleucina uno beta, mostraron una expresión máxima de ARNm un día después de la lesión, mientras que el factor de crecimiento transformante beta uno alcanzó su punto máximo tres días después de la lesión.