Aislamiento de núcleos de tejido adiposo intermuscular humano y secuenciación de ARN de núcleos individuales posteriores

Nuestro grupo de investigación está tratando de comprender la composición celular y los perfiles transcripcionales específicos de las células del tejido adiposo intermuscular o IMAT en humanos. IMAT es en realidad un depósito adiposo ectópico que reside entre y alrededor de las fibras musculares. La tomografía computarizada y la resonancia magnética han sido capaces de cuantificar el volumen de IMAT y recientemente han demostrado que aumenta tanto con la edad como con el IMC, y también se asocia con enfermedades degenerativas musculares.

Los estudios de secretoma in vitro han demostrado recientemente que las proteínas secretadas por IMAT tienen la capacidad de influir en la sensibilidad a la insulina, los perfiles inflamatorios y también en la expresión de proteínas contráctiles en el músculo esquelético humano. La cantidad limitada de tejido IMAT recolectado durante las biopsias y la naturaleza cargada de lípidos de los adipocitos hacen que este tejido sea incompatible con la digestión tisular y la secuenciación de ARN de una sola célula. Por lo tanto, queríamos desarrollar un protocolo que realizara el aislamiento de núcleos en pequeñas cantidades de tejido que luego pudiera usarse en la secuenciación de ARN de un solo núcleo posterior.

Este protocolo permitirá a los investigadores determinar las alteraciones composicionales y transcripcionales específicas de la célula que ocurren en IMAT en diferentes estados de enfermedad metabólica y en respuesta a intervenciones. Esperamos que esta información sea crucial en el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas para ayudar a aliviar la enfermedad metabólica, ya sea dirigiéndose directamente a IMAT o a sus factores secretados. El campo carece gravemente de datos sobre la biología de IMAT, sus orígenes celulares y la comunicación con otras células, residentes tanto dentro como fuera de IMAT, así como sus respuestas moleculares a las intervenciones en el estilo de vida, como la dieta y el ejercicio o la farmacoterapia.

Todas estas son preguntas de investigación clave para nuestro grupo.