Das folgende Experiment führt eine effektive Impf- und präzise Probenahmemethode für Phytophthora capsici an schwarzen Pfefferpflanzen ein. Schwarzer Pfeffer, eine typische holzige Rebe, ist eine wirtschaftlich wichtige Gewürzpflanze. Die Produktion von schwarzem Pfeffer ist hauptsächlich von der Wurzelfäulekrankheit betroffen, die durch Phytophthora capsici verursacht wird, und hat die industrielle Entwicklung ernsthaft beeinflusst.
Eine effektive Impfung und ein präzises Probenahmesystem für Phytophthora capsici an schwarzen Pfefferpflanzen ist wichtig für die Untersuchung der Pflanzen-Pathogen-Interaktion. Das Hauptziel dieser Studie ist es, eine detaillierte Methodik zu demonstrieren, bei der der basale Kopf von schwarzem Pfeffer mit Phytophthora capsici beimpft wurde, und auch eine Referenz für die Impfung von holzigen Rebpflanzen zu liefern. Diese Methode bietet eine bessere Möglichkeit, die Instabilität zu lösen, die durch die traditionelle Impfmethode verursacht wird, wie z. B. Bodendurchnässung oder Wurzeltauchen.
Experimentelle Verfahren. Die Stecklinge von schwarzen Paprikaschoten werden zwei Monate lang in der kontrollierten Umgebung gepflanzt. Subkulturieren Sie die Phytophthora capsici und inkubieren Sie fünf Tage lang unter 25 Grad Celsius.
Am Tag der Infektion sind die Agarblöcke auf den drei Löchern bedeckt, die von der Nadel kleben. Und schließlich, charakterisieren Krankheitssymptome. Vorbereitung von schwarzen Pfefferschneidepflanzen für Infektionen.
Schneiden Sie orthotrope Zweige in 40 Zentimeterlängen und 0,5 Zentimeter Durchmesser und entfernten Sie plagiotrope Äste an den unteren Knoten mit sterilem Messer und Gartenschere. Der geschnittene Zweig sollte zwei Knoten und fünf Blätter an der Oberseite enthalten, um den Wasserverlust zu reduzieren. Schneiden Sie den oberen Teil auf einen flachen Schnitt und den unteren Teil auf einen schrägen Schnitt.
Das Wurzelsubstrat des schwarzen Pfefferschneidens wurde zu einer Mischung hergestellt, die Erde und Tierdung wie Kuhdung, Schafdung usw. im Verhältnis eins zu eins enthielt. Der Boden wurde bei etwa 121 Grad Celsius für 20 Minuten autoklaviert. Verwenden Sie die Zuchtsäcke von 30 Zentimeter Durchmesser und 50 Zentimeter Höhe, um die Wurzelsubstrate zu platzieren.
Bereiten Sie eine Neigung von 50 Grad vor, um die Substrate aufzufüllen. Die Stecklinge wurden in einem Winkel von 50 Grad platziert, mit mehr als drei Knoten unter dem Substrat. Sie wurden mit dem Wurzelmedium bedeckt und der Hilfsteil sollte auf dem Medium haften.
Schließlich wurden die Stecklinge vollständig infiltriert. Das gerade Schneiden wurde verwendet, um den Schnitt einzufügen. Herstellung von Phytophthora capsici-Kulturen.
Wählen Sie krankheitsfreie Kartoffeln. Die Kartoffeln aufräumen und in kleine Quadrate schneiden. Geben Sie 200 Gramm Kartoffeln in 800 Milliliter doppelt destilliertes Wasser und kochen Sie für 20 Minuten.
Filtern Sie dann die Mischung. Fügen Sie 20 Gramm Dextrose hinzu. Füllen Sie die Mischung auf einen Liter mit doppelt destilliertem Wasser.
Fügen Sie 15 Gramm Agarpulver in das Filtrat hinzu. Dosieren Sie das Medium in Flaschen und verschließen Sie es mit Parafilm. Autoklavieren Sie das Medium bei 121 Grad Celsius für 20 Minuten.
Das berechnete Medium Kartoffelagar wurde in die Petrischalenteller gegeben und zur Erstarrung auf der sterilen Bank gekühlt. Die Impfnadel wurde durch Erhitzen mit alkoholverbrennender Lampe und Abkühlen für mehrere Sekunden desinfiziert. Nehmen Sie kleine Stücke Pilzproben mit steriler Impfung und legen Sie sie auf PDA.
Das Myzel bedeckt etwa drei Viertel der Platte. Kulturen sind bereit für weitere Experimente. Infektion von schwarzen Paprikaschoten.
Die Position, die fünf Zentimeter von der Oberfläche des Substrats entfernt ist, wurde als Inkubationspunkt betrachtet. Der Inkubationsort sollte nicht weit von der Wurzel entfernt sein, um eine Verlängerung der infektiösen Zeit zu vermeiden. Detaillierte Schritte des Nadelstichs sind wie folgt.
Ein Myzelpellet von Phytophthora capsici wurde mit einem Stopperbohrer gesammelt. Insbesondere neu entwickelte Myzelpellets am Rand der Platte wurden aufgrund ihrer höheren infektiösen Aktivitäten bevorzugt ausgewählt. Sterilisieren Sie einen Stiel mit 75% Ethanol und nehmen Sie drei dreieckige Poren an der sterilisierten Position mit der Impfnadel.
Drei dreieckige Poren an der Impfstelle wurden mit der Impfnadel geklebt, und Myzelpellets wurden auf den drei Poren bedeckt. Nach acht Stunden wurden die Poren im Allgemeinen schwarz. Die Dilatation wurde mit der Verlängerung der Inkubation erweitert.
Nach sieben bis zehn Tagen färbten sich die Blätter gelb und fielen ab, bis schwarzer Pfeffer abstarb. Die darstellbaren Ergebnisse lauten wie folgt. Nach der Infektion treten die Symptome bei den schwarzen Pfefferpflanzen auf, einschließlich Blattvergilbung und Welken, Xylembräunung und Gefäßschwärzung.
Die meisten Gene exprimierten nach der Impfung mit Phytophthora capsici anders als in der Kontrollgruppe. Die histopathologische Analyse infizierter Gewebe hat gezeigt, dass Phytophthora capsici im Xylem besiedelt ist. Schlussfolgerung. In dieser Studie wurde das Nadelstechen des Basalkopfes verwendet, um ihn zu schädigen, um eine wirksame Impfung zu gewährleisten, und das Verdopplungssystem in schwarzem Pfeffer.
In der Zwischenzeit stellt dieses Protokoll auch eine effizientere Möglichkeit dar, eine Referenz für die Inkubation mit bereitzustellen - Unsere Methode kann mehr Zeit geben und kürzer arbeiten. Dieses Protokoll liefert ein besseres Ergebnis, das eine starke Interaktion zwischen einer Pflanze und dem bodenbürtigen Erreger ermöglicht. Das ist sichtbar und ein bequemer, um den dynamischen Prozess zwischen Pflanzen und ihren Krankheitserregern zu erkennen.
Bei unserer Methode fangen wir an, den Basalkopf der schwarzen Pfefferpflanze zu stechen, damit er sie schädigt. Dann wird der beschädigte Bereich direkt mit dem Phytophthora capsici bedeckt und die Feuchtigkeit gehalten. Damit der Erreger die Pflanze infizieren könnte.
Wir bieten auch einen vielversprechenden Weg für die Untersuchung der Wirkungsweise zwischen Pflanzen und anderen bodenbürtigen Pflanzenpathogenen in der landwirtschaftlichen Präzisionszüchtung.
