Die Autoren möchten sich Jamie Thuy für technische Arbeit zu würdigen. Diese Arbeit wurde zum Teil durch Forschung gewährt SC CTSI NIH / NCRR / NCATS - UL1TR000130 (DLD), AA022448 (DLD) und der USC School of Pharmacy. Zusätzlich schnell auflösende orale Filme IVM enthielten, wurden freundlicherweise von Cure Pharmaceutical (Oxnard, CA) zur Verfügung gestellt.

Alle beschriebenen Verfahren wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) der University of Southern California genehmigt. 1. Tier Handhabung und Habituation <ol><li> Einführung <ol><li> Erlauben Mäuse auf die Haltungsbedingungen und Handhabungstechnik des Experiments zu akklimatisieren Stress während der nachfolgenden Verabreichung des Arzneimittels Verfahren zu verringern. Während dieser Zeit nehmen Sie das Körpergewicht und die Nahrungsaufnahme jeder Maus; falls gewünscht, können sie später als nicht-invasive Vergleichspunkt verwendet werden, Arzneimitteltoxizität (optional) zu beurteilen. Erstere können auch gewichtsbasierte Dosierung verwendet werden, Arzneimittel zu bestimmen. Anmerkung: Anecdotally, sollte die Länge der Gewöhnungsperiode basierend auf der Anzahl von Experimentatoren mit dem Tier in Wechselwirkung bestimmt werden. Nach unserer Erfahrung haben Mäuse des C57BL / 6J-Stamm beobachtet Schwierigkeiten Handhabung Gewöhnung von mehr als ~ 5 Personen innerhalb unserer typischen einwöchige Eingewöhnungszeit zu haben. Wenn möglich,Experimentator (en) sind auch aus der Verwendung von Duft Lotionen, Seifen zu verzichten , ermutigt und Parfüms vor , die Tiere betreuen wie frühere Berichte neuartige Reize zeigen, wie Gerüche, 11 , um die Eingewöhnungszeit behindern. </li></ol></li><li> Schritte <ol><li> Beginnend mindestens 5 Tage vor Beginn der Studie, übertragen die Tiere in den Raum, in dem die nachfolgenden Experimenten auftritt. </li><li> Nehmen Sie das Gewicht der Maus, indem Sie fest auf die Mitte der Schwanz greifen und sanft heben das Tier aus dem Käfig und in das Gewicht Boot. <ol><li> Platzieren Sie die Maus auf die Waage, sobald sie aus dem cagekeeping im Kopf angehoben wird , um richtig die mediale / proximalen Aspekt des Schwanzes zu erfassen, wie degloving Verletzungen zu vermeiden, die auftreten können , wenn das distale Aspekt des Schwanzes 12 zu erfassen. </li><li> Notieren Sie den Gewichtswert, wenn die Maus die in wiegen Boot sicher gestellt wurde. </li></ol></li><li> Das Gewicht des Lebensmittels für eine Empgeflickt 2 aufeinander folgenden Tagen, um Basisnahrungsmittelverbrauch zu schaffen , die 13 - Capture - Potential Toxizitäten während des Experiments zu helfen. </li></ol></li></ol> 2. Herstellung von Futter Nadel, Saccharose-Lösung und Einzel ODS <ol><li> Verwenden eines Autoklaven aus rostfreiem Stahl, die Schlundsonde Adeln in Vorbereitung für das Experiment zu sterilisieren. Bereiten Sie zwei Nadeln / Gruppe und 1 zusätzliche Nadel als Back-up verwendet werden, wenn es sein muss. Anmerkung: Diese Studie verwendete eine 1,5 Zoll, gebogen, 18 G, rostfreier Stahl mit einer 2,25 mm Kugel am Ende der Nadel Zufuhrnadel. </li><li> 20 ml Wasser und 0,85 g Saccharose einem 4,25% (w / v) Saccharoselösung zu schaffen. Hinweis: Je nach den Parametern unter Beurteilung anderen niedrigen Dosen von Saccharose könnte möglicherweise auch 14 verwendet werden. </li><li> Bereiten Sie die orale Lösestreifen (ODS) für jedes Tier durch den rechteckigen Standardteststreifen in ein Stück schneiden, die 0,5 cm Zoll im Durchmesser ist unsing ein handelsEinzel Viertel-Zoll-Loch-Puncher zur Verfügung. Der rechteckige Teststreifen in dieser Demonstration verwendet wurde 6 mg Ivermectin (IVM) zu enthalten, formuliert werden und bei dieser Größe geschnitten, weist eine 0,21 mg Dosierung für jeden einzelnen Kreisstück Annähern einer 10 mg / kg Dosis für jedes Tier (unser Wunsch Dosis / Tier). Diese Dosis kann durch die Konzentration / Verdünnung der Gesamtformulierung auf den rechteckigen Streifen und / oder Schneiden des Streifens in unterschiedlicher Größe eingestellt werden. </li></ol> 3. Drug Delivery - <ol><li> Notieren Sie die Gewichtswerte, wie zuvor in den Schritten 1.1-1.2. </li><li> Nachdem das Gewicht der Aufnahme, die Maus an den Metallgitterkäfig oben bewegen. Dort angekommen, die dominante Daumen, Zeigefinger, und 3. Finger, ziehen Sie es vorsichtig wieder auf den Schwanz. Dadurch wird die Maus versehentlich den Drahtkäfig oben greifen und strecken den Rücken, streckte seinen Körper weg von der Experimentator. </li><li> Fassen Sie das Genick mit dem nicht-dominante Daumen, Zeigefinger, und 3. Finger , um bequem das Tier mit einem Griff zurückhalten , die sicher ist. Hinweis: Ein Experimentator mit einer kleineren Hand auch die 4. Finger der gleichen Hand verwenden können, das Genick des nach hinten zu ziehen zurück und erhalten einen sicheren Halt der Maus. Darüber hinaus je nach individuellen Vorlieben, Ringfinger und / oder kleinen Finger auch den Schwanz jedoch verwendet werden, um zu sichern , ist diese 12 nicht erforderlich. </li><li> Halten Sie die Maus in eine aufrechte Position. </li><li> Achtung: Beachten Sie die Farbe der Schleimhäute der Maus. Ein lila / blau Aussehen ist ein Hinweis darauf, dass der Experimentator das Genick zu fest ist cinching und die Maus nicht mehr atmen kann. <ol><li> Wenn dies der Fall ist, setzen Sie sofort die Maus wieder auf den Metallkäfig oben und lassen Sie es für ~ 2-3 Minuten ruhen, bevor er erneut versucht, das Tier zu bändigen. </li></ol></li><li> Tauchen Sie die Lampe Spitze der Sondennadel in 4,25% Saccharose-Lösung als Geschmacksträger dienenKlebstoff auf die ODS. </li><li> Drücken Sie auf ein vorgeschnittenes ODS mit der Glühbirne Spitze der Sondennadel die oral Lösen Streifen zu befestigen. </li><li> Präsentieren Sie die ODS auf die Maus, indem sie es in der Nähe der Nase bringen und / oder in den Mund, und lassen Sie das Tier, den Film zu konsumieren. Alternativ können die ODS topisch in die Mundhöhle abgegeben werden, indem die dünnen Streifen direkt auf die Zunge für die Mäuse Platzierung zu schlucken. </li><li> Ersetzen Sie die Nadel Mitte Gruppe während der Arzneimitteldosierung Sitzung, um die Ausbreitung der Infektion zu verhindern. </li></ol>

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DD hat ein Patent als Co-Erfinder auf diese Methode angewandt und ist daran interessiert , diese Methode mit dem wissenschaftlichen Ausschuss zu teilen diese Technik gut bekannt und leicht zugänglich für chronische Tierversuche (orale Verabreichung von Arzneimittelwirkstoffe in Labortieren zu machen Verwendung von Fast- auflösende orale Filme (Davies, Co-Erfinder, Patentanmeldung eingereicht 2014.06.23). Keine anderen , konkurrierenden Interessen werden zur Kenntnis genommen.

Schlundsonde ist mit zahlreichen Komplikationen verbunden , die möglicherweise kompromittiert Datenerfassung führen und hohe Raten von Tier Abreibung 1. Hier ist eine einfache Methode der oralen Arzneimittelabgabe eingeführt, durch die Mäuse (und möglicherweise andere Tiere) können einfach und zuverlässig das Medikament der Wahl durch eine oral Lösen Streifen (ODS) verbrauchen. Bemerkenswert ist, stellt die Anwendung dieser Methode eine sichere, bequeme und humane Alternative zu Schlundsonde. Die sonstigen kurzfristigen Alternativen zu Schlundsonde, wenn auch etwas viel versprechend, sind mit verschiedenen Einschränkungen verbunden sind, die sie von die das gesamte Spektrum der Bedürfnisse im Zusammenhang mit Drogen-Dosierung Studien wie die Unfähigkeit, entgegen, in Mäusen verwendet werden, oder individuelle Präferenz für Geschmack, die machen Medikament weniger leicht 9 verbraucht. Im Gegensatz dazu kann ODS in einer breiten Vielfalt von Aromen formuliert werden, die als individuelle Präferenzen für den Geschmack wichtig ist, kann im Laufe der Zeit und Geschmack ändernPräferenzen können über verschiedene Stämme und Arten unterscheiden. Die richtige Behandlung der Tiere ist ein wesentlicher Bestandteil dieser Technik. Unter Hinweis auf die Bedeutung der Eingewöhnungszeit sollte beachtet werden, dass eine bestimmte Maus härter sein kann, zu begrenzen, wenn es besonders jung ist oder ungewohnte Handhabung. Jede Schwierigkeit mit der Maus greifen sollte im Laufe der Zeit nachlassen, wenn das Tier auf die Handhabung vertraut gemacht wird und wird weniger Angst vor der Experimentator (n). Die C57-Mausstamm in den repräsentativen Ergebnisse am Beispiel wurde an Manipulation relativ schnell eingewöhnen beobachtet werden (innerhalb von etwa 1-3 Handhabung Sitzungen). Obwohl diese Dauer auf verschiedene Arten und Stämme aufschieben, gibt es keinen Grund, die Akklimatisierung Zeitrahmen zu übernehmen würde erheblich eskalieren. Anfänger Techniker mit Nagern arbeiten sollte cognizant sein, dass, wenn suspendiert und baumelnden in der Luft für mehr als ein paar Sekunden, Mäuse auf die Entwicklung eines degloving anfälligVerletzungen des Schwanzes 12. Die Chancen, dass dieser auftretende Anstieg mit dem Gewicht der Maus als auch mit der Positionierung der Hand, mit einem Griff näher an der Spitze des Schwanzes wahrscheinlicher eine Verletzung zu verursachen. Spezifisch für den Rahmen dieses Protokolls ist es zwingend notwendig, dass die Maus auf dem Metallgitterkäfig oben platziert ist, oder in einer alternativen Vorrichtung, wenn sie von Käfig übertragen wird, sowie in Vorbereitung für Drug-Delivery maßstäblich. Restraint während des Drug-Delivery-Prozess ist ein weiterer wichtiger Schritt im Rahmen des Protokolls. ODS-Verbrauch kann auftreten, durch den Dünnfilm in der Nähe der Nase platzieren und / oder Mund der Maus, wobei in diesem Fall das Thema lehnen nach vorn, den Film zu konsumieren. Alternativ können die ODS topisch in die Mundhöhle abgegeben werden, indem man manuell die Folie direkt auf die Zunge für die Maus platziert zu schlucken. Die Untersuchungen, die zur Beurteilung von Stress empfindlichen Parameter beinhalten kann durch die Verwendung des Standard-Mann verwechselt werdenual Rückhaltetechniken in diesem Protokoll und einfache Anpassungen der Methode dargestellt leicht Studien zur Aufnahme gemacht werden, in der Zurückhaltung ist verboten. In diesem modifizierten Ansatz könnten die ODS direkt in den Käfig für das Tier zu konsumieren platziert werden. Beobachtungen aus Pilotstudien in unserem eigenen Labor gewonnenen zeigen, dass dies am besten, indem man die Tiere in einem Käfig ohne Streu / Nistmaterial durchgeführt werden, nur für die Dauer der Arzneimittelabgabeverfahren, um die Leichtigkeit zu erhöhen, mit der ODS Verbrauch kann visuell durch den Experimentator (n) überwacht. Darüber hinaus könnte es angebracht sein , eine Einarbeitungszeit zu initiieren , während welcher Zeit die Tiere in das ODS eingeführt werden , so dass sie die anfängliche angeborene Vermeidung von neuartigen Lebensmitteln 4 überwinden kann. Natürlich weiteren Studien, eine Zurückhaltung freien Protokoll für ODS Lieferung zu optimieren jedoch erforderlich wäre, um es gibt keinen Grund zu glauben, dass ein solches Verfahren nicht mit Leichtigkeit getan werden könnte. <p class=&quot;Jove_content&quot;&gt; Es gibt einige Einschränkungen auf das Verfahren ODS. Zum Beispiel, da die ODS ein schnelles Lösen von bio-haftenden Polymer sind, wird der Experimentator müssen Probleme der Absorption und des Stoffwechsels in der von dem Streifen in Abhängigkeit von der Formulierung betrachten, könnte ein Teil der Droge potentiell ersten Bypass Stoffwechsel passieren aufgrund einer Teil des Medikaments wird über lingualen oder bukkalen Mechanismus absorbiert. Auf der anderen Seite, für ZNS zielgerichtete Medikamente, lingual oder bukkal Absorption von Vorteil sein könnte, mehr von der Verbindung ermöglicht das ZNS Ziel vor dem Stoffwechsel zu erreichen. Insgesamt kann dieses Problem durch Ändern der Formulierung der ODS behandelt werden, die in dem Arzneimittel führen entweder nicht leicht verfügbar sein, bis sie über den Darm absorbiert oder Vorteil der direkten Zugang zum ZNS zu nehmen. Zusätzlich können Mäuse konditionierten Geschmacksaversion entwickeln und aus freiwilligen ODS Konsum zurücktreten, wenn die Arzneimittelwirkungen aversiven Seite entlockt. Obwohl wir dies in unseren Studien nicht beobachtet haben, ein potenterial Methode, eine solche Situation zu verbessern wäre, den Geschmack des Teststreifens abwechselnd ein wenig Neuheit für das Versuchstier, um zu helfen. Schließlich bei hohen Konzentrationen könnten die ODS nicht schmackhaft sein. Allerdings könnte dieses Problem auch durch Veränderungen in der Formulierung behandelt werden, wo die Droge selbst verkapselt ist und somit Geschmack wäre nicht mehr ein Problem sein, oder alternativ, indem man einfach verschiedene aromatisierte Streifen Verabreichung, so dass es Neuheit im Geschmack für die Testperson bleibt . Bemerkenswert ist, in Hinblick auf die Reproduzierbarkeit Daten kann ODS formuliert werden, um die Zunge oder Wange des Tieres zu halten und für eine schnelle oralen Zerfalls entwickelt, um schnell den Wirkstoff freisetzen, wodurch eine korrekte Dosierung sichergestellt erreicht wird. Und mit ODS Verabreichung, die Notwendigkeit für eine Sonde und andere unangenehme invasive Erfahrungen für das Tier eliminiert. Dies ist nicht nur humaner sondern es minimiert auch die Auswirkungen von Stress als Variable in dem Experiment. Es ist zu beachten thbei der ODS Verfahren weiter optimiert werden, wie es in vielen neuen Herstellungsverfahren, die weiter auf die Pharmakokinetik der Testverbindung verbessern kann als ODS für zusätzliche Therapien erweitert wird. Eine Einschränkung, die sollte darauf hingewiesen werden hinsichtlich der Tatsache, dass die Entwicklung von ODS in den frühen Stadien der Entwicklung. Themen, die die Belastung der unterschiedlichen physiko-chemischen Kenn Medikamente über den Geschmacksstoff / ODS Plattform bezüglich bleibt eine Herausforderung für die Vielseitigkeit und Verallgemeinerung dieser Technik. Dies ist ein Bereich der laufenden Untersuchung. Die vorgeschlagene Technik ist eine einfache und neuartige Technik , die für die Verwendung in Kurz- und Langzeit vorklinischen Tierstudien und für die Lieferung von Medikamenten an Tiere angenommen werden können (zB Hunde). Drug-Delivery durch ODS steht für eine neue, schnelle, bequeme und humane Ansatz im Vergleich zu den bestehenden traditionellen Ansätzen wie Tabletten, Kapseln, Flüssigkeiten, Pulver und Gele und orale Gabe.

Um für die erfolgreiche Umsetzung eines Arzneimittels aus präklinischen (Tierversuche) für die klinische Entwicklung, eine Reihe von gut definierten, akute und chronische pharmakologische und toxikologische Studien an Tiermodellen durchgeführt werden müssen, um die beabsichtigte klinische Art der Verabreichung verwendet (was normalerweise die orale Verabreichung). Um dieses Ziel zu erreichen, die meisten präklinischen Studien derzeit eine orale Gabe Verfahren nutzen gegeben, dass diese Methode führt zu einer konsistenten und präzisen Lieferung der Testverbindung an das Tier. Jedoch in vielen Fällen ist eine orale Sonde nicht gut durch das Tier verträglich und Ansammeln Hinweise darauf , dass das Verfahren mit einer signifikanten Menge von Stress Induktions 1 zugeordnet ist. Dies gilt vor allem bei der Entwicklung von Behandlungen für chronische lebenslang Bedingungen, die längerfristige präklinischen Studien erfordern, wie es der Fall mit, aber nicht darauf beschränkt, nahezu jede neuropsychiatrischen Störung. für instung, in einem transgenen Mausmodell der Alzheimer-Krankheit, wurde kürzlich vorgeschlagen , dass die Magensonde Methode selbst experimentellen Ergebnisse zu 2 Stress induzierte Dosierung durch vermengen können. In ähnlicher Weise wurden in einem Mausmodell der Alkoholkonsum, nicht veröffentlichte Ergebnisse aus unserem eigenen Labor festgestellt, dass das wiederholte Einführen der Magensonde Rohr - an und für sich - deutlich über dem Niveau des Alkoholkonsums auf den Punkt zu gefährden die Integrität des experimentellen reduzieren Paradigma (siehe Abbildung 1). In Anbetracht der oben genannten Beschränkungen im Zusammenhang mit der Schlundsonde Verfahren wurde beträchtliche Mühe auf neuartige Verfahren zur präklinischen oralen Medikamentenverabreichung entwickeln. Aktuelle alternative Ansätze umfassen Einbeziehung der Testverbindung in Erdnussbutter Mischungen 3, gallertartig Formen 4-5, Schokolade Pellets 6, Trinkwasser 7 und Wafer Cracker 8, von denen alle sind associated mit Abschlüssen von Fragen , einschließlich der Unfähigkeit unterschiedlichen zuverlässig im Tiermodell, fehlende Annahme der Testverbindung , die Aufnahme durch den Probanden oder individuelle Vorliebe für den Geschmack verwendet werden , die das Medikament leicht 9 verbraucht weniger macht. Das Verfahren eingeführt beschreibt hierin ein Verfahren, bei dem das gewünschte Arzneimittel in einer aromatisierten, oral Auflösen Streifen eingearbeitet ist (ODS), die leicht und ohne weiteres oral verwendet werden, um die Testverbindung zu dem Testtier verabreichen. Dieser Beitrag konzentriert sich auf die Wirksamkeit des ODS-Methode demonstriert unter Verwendung von Mäusen. Allerdings gibt es keinen Grund zu erwarten, daß das gleiche Verfahren in ein anderes Nagetier auch nicht sinnvoll wäre, als auch größere Säugetieren. Klinisch ist die Verwendung von ODS beginnt bei pädiatrischen und geriatrischen Patienten angenommen werden, als eine Möglichkeit , zu überwinden Schwierigkeiten beim Schlucken 10. Wir schlagen vor, dass ODS kann auch erfolgreich in präklinischen Wirkstoffforschung als sicher, bequem verwendet werdenUnd humane Alternative zu Schlundsonde.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="948">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Orally Dissolving Strip&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Cure Pharmaceutical</td>
			<td style="width:89px;"></td>
			<td style="width:471px;">Available upon special request. Alternatively, ODS may also be prepared in-house.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Gavage Feeding Needle</td>
			<td style="width:185px;">VWR</td>
			<td align="right" style="width:89px;">7912</td>
			<td>Our rodent studies utilized a 18-gauge feeding needle. This size may need to be adjusted for use in other mammilian species.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:203px;">Sucrose</td>
			<td style="width:185px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:89px;">S0389-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing an orally dissolving strip for pharmacological and toxicological studies: a simple and humane alternative to oral gavage for animals

Vor dem Testen neuer Therapeutika bei Menschen, kurz- und langfristig präklinischen (dh Tier), repetitive pharmakologischen und toxikologischen Tests erforderlich. In den meisten Fällen ist der bevorzugte Weg der Verabreichung über die orale Verabreichung. In der heutigen Zeit ist die orale Verabreichung erreicht meist eine orale Gabe Verfahren unter Verwendung von, zum Teil, weil sie konsistent und präzise Dosierung im Tiermodell erreichen können. Obwohl dieses Verfahren gut etabliert ist es Komplikationen hat, die in einer hohen Rate von Tier Abrieb führen kann. Zu diesem Zweck führte die Verfahren hier beschrieben, eine Alternative zu der Schlundsonde Verfahren, bei dem das gewünschte Arzneimittel in einem Geschmacksstoff eingearbeitet wird, oral Streifen Auflösen (ODS), die einfach zu dem Testtier präsentiert werden können, wo sie dann rasch aufgenommen mit minimale Manipulation der Testperson. Hier zeigen wir, dass die präklinische, oralen Medikamentenverabreichung die ODS-Verfahren stellt eine sichere, bequeme und humane alternative auf orale Gabe.

Mit einer 24 - Stunden - zwei-Flasche Wahl (TBC) Paradigma In den folgenden repräsentativen Untersuchungen wurde soziale Trinken gestaltet wie vorher 15 beschrieben. In Kürze, Mäuse hatten Zugang zu zwei Flaschen Lösung, von denen eine Wasser enthielt, und die andere eine 10% (v / v) ethanolischen Lösung. Probanden wurden anschließend Arzneimittelbehandlungsgruppen zugeordnet, so daß die durchschnittliche 10E (10% Ethanol / 90% Wasser v / v) Aufnahme in Gruppen ähnlich war. Abbildung 1 zeigt die Wirkung von Ivermectin (IVM) auf Trink bevorzugt , wenn es oral ein Sondenemährung Vehikel verabreicht werden. Diese Pilotstudie hatte drei Gruppen: N / A, Placebo- und IVM repräsentieren keine Schlundsonde, Maisöl (Vehikel) Schlundsonde und IVM (10 mg / kg, in Maisöl verdünnt), die jeweils eine Sonde. Die Mäuse wurden für 10 Tage behandelt, 5 aufeinanderfolgenden Tagen pro Woche für 2 Wochen. Wie weiter unten sehen werden, war IVM können 10E i deutlich reduzierenNtake für die Studie, wenn sie der Placebogruppe verglichen. Im Vergleich zu N / A, die eine Ethanolaufnahme Werten der Placebo-Gruppe (~ 5 g / kg), sind viel zu niedrig (48% niedriger als der nicht-Sonde ernährt N / A-Gruppe), und somit kann keine genaue Darstellung sein oder &quot;Modell&quot;, der sozialen Trinkverhalten (~ 10-15 g / kg). Was bedeutet, dass ein unbekannter Faktor mit der Schlundsonde Verfahren verbunden verwaltet die Integrität des Trink Paradigma zu gefährden. Figur 2 zeigt das gleiche Experiment durchgeführt , anschließend das ODS Verabreichungssystem 15 verwendet wird . Die Studie hatte drei Gruppen: 1) keine mündliche Film, 2) Key Lime aromatisierte Mund Film ohne IVM und 3) Limonen aromatisierte orale Film mit IVM (0,21 mg, die auf die in der oben genannten Studie verabreicht 10 mg / kg entspricht ) bezeichnet als Kontrolle, Placebo und IVM, respectively. Die Mäuse wurden für 20 Tage behandelt, 5 aufeinanderfolgenden Tagen pro Woche für 4 Wochen. Es gab keinen signifikanten differenz in Ethanolaufnahme zwischen dem N / A und Placebo-behandelten Mäusen, was darauf hinweist, dass die ODS Placebo-Gruppe eine gültige Steuer dargestellt, mit dem ein Vergleich mit der IVM Gruppe dann gemacht werden konnte. In Übereinstimmung mit früheren Arbeiten 13,15, IVM deutlich und konsequent 10E Aufnahme reduziert. Eine bildliche Darstellung der Technik ist in Abbildung 3 dargestellt. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/53770/53770fig1.jpg" /> Abbildung 1. Sonde ernährt Kontrollmäuse sind nicht möglich Ethanol Aufnahmemengen Vertreter der 24 - Stunden - TBC Paradigm zu halten. Männliche C57BL / 6J - Mäuse wurden für 10 Tage behandelt (5 aufeinanderfolgenden Tagen pro Woche für 2 Wochen). Fahrzeug Sondenemährung Behandlung der Placebo-Gruppe signifikant Ethanolaufnahme Werte um 48% verändert, wenn im Vergleich zu den nicht-Schlundsonde N / A-Gruppe. Obwohl IVM deutlich reduziert Aufnahme 10E im Vergleich zuPlacebo, die niedrigen 10E Aufnahme Werte der Placebo-Gruppe hinzugefügt, um eine zweite confound der Studie, die die Wirkung zu beeinträchtigen, die Nützlichkeit der Gruppe als adäquate Trinkkontrolle für die Studie haben könnte. Inset Diagramme veranschaulichen die durchschnittlichen 10E Aufnahme über die kommenden 10 Tage Behandlung. Die Werte stellen den Mittelwert ± SEM für n = 6-8 Mäuse / Gruppe. +++ P &lt;0,001 im Vergleich zu Placebo, und *** p &lt;0,001 im Vergleich zu N / A, Türkei Post-Hoc - Test. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53770/53770fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier</a> , um <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53770/53770fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/53770/53770fig2.jpg" /> Abbildung 2. ODS Behandlung von IVM. Weibliche C57BL / 6J - Mäuse für 20 Tage (4 Wochen 5 aufeinanderfolgenden Tagen pro Woche) behandelt wurden. Placebo ODS Behandlung hatte keine signifikante Wirkung auf 10E Aufnahme, bezogen auf die nicht behandelten N / A-Gruppe, die Aufrechterhaltung der validity von Placebo ODS als adäquate soziale Trinkkontrolle. IVM deutlich reduziert 10E Aufnahme im Vergleich zu Placebo-Kontrolle. Inset Diagramme veranschaulichen die durchschnittlichen 10E Aufnahme über die 20 Tage der Behandlung. Die Werte stellen den Mittelwert ± SEM für n = 6-8 Mäuse / Gruppe. *** P &lt;0,001 im Vergleich zu Placebo, Türkei Post-Hoc - Test .. Diese Zahl kann von Yardley modifiziert wurde , et al. 15 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53770/53770fig2large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53770/53770fig2large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/53770/53770fig3.jpg" /> Abbildung 3. Bildliche Darstellung der ODS Lieferung. Foto Darstellung des Verfahrens. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53770/53770fig3large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53770/53770fig3large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a>

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Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals

Das folgende Protokoll beschreibt ein neuartiges Verfahren zur chronischen oralen Medikamentenverabreichung eine oral Lösen Streifen (ODS) anstelle der häufiger verwendeten orale Gabe Methode. Wir zeigen, dass die präklinische, oralen Medikamentenverabreichung die ODS-Methode stellt eine sichere, bequeme und humane Alternative zu Schlundsonde verwendet wird.

Unter Verwendung eines Mündlich Dissolving-Streifen für pharmakologische und toxikologische Studien: Eine einfache und Humane Alternative zu Schlundsonde für Tiere

Prior to testing novel therapeutics in humans, short and long term preclinical (i.e., animal), repetitive pharmacological and toxicological testing is ...

utilizing-an-orally-dissolving-strip-for-pharmacological

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

12.6K Aufrufe.  University of Southern California School of Pharmacy.  Das folgende Protokoll beschreibt ein neuartiges Verfahren zur chronischen oralen Medikamentenverabreichung eine oral Lösen Streifen (ODS) anstelle der häufiger verwendeten orale Gabe Methode. Wir zeigen, dass die präklinische, oralen Medikamentenverabreichung die ODS-Methode stellt eine sichere, bequeme und humane Alternative zu Schlundsonde verwendet wird. 

Serie: Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Multi-Photonen-Imaging der Tumorzellinvasion in einem orthotopen Mausmodell des oralen Plattenepithelkarzinoms

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Forschung

Medizin

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma (glioma) and medulloblastoma. The widely used stereotactic approach only allows for the injection of a single animal at a time, is labor intensive and requires highly specialized equipment. The guide screw method, initially developed by Lal et al.,1 was developed to eliminate cumbersome stereotactic procedures. We now describe a modified guide screw approach that is rapid and exceptionally safe; both of which are critical ethical considerations. Notably, our procedure now incorporates an infusion pump that allows up to 10 animals to be simultaneously injected with tumor cells.
To demonstrate the utility of this procedure, we established human U87MG glioma cells as intracranial xenografts in mice, which were then treated with AMG102; a fully human antibody directed to HGF/scatter factor currently undergoing clinical evaluation2-5. Systemic injection of AMG102 significantly prolonged the survival of all mice with intracranial U87MG xenografts and resulted in a number of complete cures. 
This study demonstrates that the guide screw method is an inexpensive, highly reproducible approach for establishing intracranial xenografts. Furthermore, it provides a relevant physiological model for validating novel therapeutic strategies for the treatment of brain cancers.

In order to evaluate novel therapeutic paradigms for the treatment of glioma, physiological relevant models are essential. We utilize an implantable guide screw procedure for establishment of intracranial xenograft models that is more rapid and safer than stereotactic approaches.

Eine einfache Anleitung Screw Verfahren zur Intrakranielle Xenograft Studien an Mäusen

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been shown to effectively induce humoral and cellular responses at systemic and mucosal sites, namely the lungs and urogenital tract. Sublingual vaccination can promote protection against infections at the lower and upper respiratory tract; it can also promote tolerance to allergens and ameliorate asthma symptoms. Modulation of lung&#8217;s immune response by sublingual immunotherapy (SLIT) is safer than direct administration of formulations by intranasal route because it does not require delivery of potentially harmful molecules directly into the airways. In contrast to intranasal delivery, side effects involving brain toxicity or facial paralysis are not promoted by SLIT. The immune mechanisms underlying SLIT remain elusive and its use for the treatment of acute lung infections has not yet been explored. Thus, development of appropriate animal models of SLIT is needed to further explore its potential advantages. 
This work shows how to perform sublingual administration of therapeutic agents in mice to evaluate their ability to protect against acute pneumococcal pneumonia. Technical aspects of mouse handling during sublingual inoculation, precise identification of sublingual mucosa, draining lymph nodes and isolation of tissues, bronchoalveolar lavage and lungs are illustrated. Protocols for single cell suspension preparation for FACS analysis are described in detail. Other downstream applications for the analysis of the immune response are discussed. Technical aspects of the preparation of Streptococcus pneumoniae inoculum and intranasal challenge of mice are also explained.
SLIT is a simple technique that allows screening of candidate molecules to modulate lungs&#8217; immune response. Parameters affecting the success of SLIT are related to molecular size, susceptibility to degradation and stability of highly concentrated formulations.

The present work illustrates the convenience of using sublingual immunotherapy to boost the innate immune response in the lungs and confer protection against acute pneumococcal pneumonia in mouse.

Sublinguale Immuntherapie als Alternative zum Schutz vor akuten Atemwegsinfektionen ausgelöst werden

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

Utilizing Murine Inducible Telomerase Alleles in the Studies of Tissue Degeneration/Regeneration and Cancer

Telomere dysfunction-induced loss of genome integrity and its associated DNA damage signaling and checkpoint responses are well-established drivers that cause tissue degeneration during ageing. Cancer, with incidence rates greatly increasing with age, is characterized by short telomere lengths and high telomerase activity. To study the roles of telomere dysfunction and telomerase reactivation in ageing and cancer, the protocol shows how to generate two murine inducible telomerase knock-in alleles 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT)-inducible TERT-Estrogen Receptor (mTERT-ER) and Lox-Stopper-LoxTERT (LSL-mTERT). The protocol describes the procedures to induce telomere dysfunction and reactivate telomerase activity in mTERT-ER and LSL-mTERT mice in vivo. The representative data show that reactivation of telomerase activity can ameliorate the tissue degenerative phenotypes induced by telomere dysfunction. In order to determine the impact of telomerase reactivation on tumorigenesis, we generated prostate tumor model G4 PB-Cre4 PtenL/L p53L/L LSL-mTERTL/L and thymic T-cell lymphoma model G4 Atm-/- mTERTER/ER. The representative data show that telomerase reactivation in the backdrop of genomic instability induced by telomere dysfunction can greatly enhance tumorigenesis. The protocol also describes the procedures used to isolate neural stem cells (NSCs) from mTERT-ER and LSL-mTERT mice and reactivate telomerase activity in NSCs in vitro. The representative data show that reactivation of telomerase can enhance the self-renewal capability and neurogenesis in vitro. Finally, the protocol describes the procedures for performing telomere FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) on both mouse FFPE (Formalin Fixed and Paraffin Embedded) brain tissues and metaphase chromosomes of cultured cells.

Telomere and telomerase play essential roles in ageing and tumorigenesis. The goal of this protocol is to show how to generate two murine inducible telomerase knock-in alleles and how to utilize them in the studies of tissue degeneration/regeneration and cancer.

Verwendung Murine induzierbare Telomerase Allele in den Studien von Tissue Degeneration / Regeneration und Krebs

Telomere dysfunction-induced loss of genome integrity and its associated DNA damage signaling and checkpoint responses are well-established drivers that ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe the use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations of superior and uniform quality to that which can be achieved by hand. The device comprises a base that holds 4 stainless steel rods and a top, which acts a cutting guide. The rods are inserted into the lumen of the small intestine [divided into thirds] and the colon. The rods and samples are then placed over a piece of filter paper or card into the holding slots in the base of the device. The top of the device is then positioned and serves as a cutting guide. The two angled sections in the center of the top piece are used to guide a knife or scalpel and cut the intestines longitudinally on the top of the rods. Once the intestinal sections have been cut, the top is removed and the card,&#160;tissue and rods gently removed from the device and placed on the bench. The rods are then gently rolled sideways to flatten and stick the intestinal segments onto the underlying piece of filter paper or card. The final preparation can then be examined or fixed and stored for later analysis. The preparations are invaluable for the study of intestinal changes in normal or genetically modified mouse models. The preparations have been used for the study and quantification of the effects of inflammation (colitis), damage, pre-cancerous lesions (aberrant crypt foci (ACFs) and mucin depleted foci (MDFs)) and polyps or tumors.

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Eine einfache Vorrichtung, um schnell vorbereiten Whole Mounts des Mausdarm

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on animal models. The identification of PD-associated genes has led to the development of genetic PD models. Most transgenic &#945;-SYN mouse models develop gradual &#945;-SYN pathology but fail to display clear dopaminergic cell loss and dopamine-dependent behavioral deficits. This hurdle was overcome by direct targeting of the substantia nigra with viral vectors overexpressing PD-associated genes. Local gene delivery using viral vectors provides an attractive way to express transgenes in the central nervous system. Specific brain regions can be targeted (e.g. the substantia nigra), expression can be induced in the adult setting and high expression levels can be achieved. Further, different vector systems based on various viruses can be used. The protocol outlines all crucial steps to perform a viral vector injection in the substantia nigra of the rat to develop a viral vector-based alpha-synuclein animal model for Parkinson&#39;s disease.

This manuscript describes how viral vector-mediated local gene delivery provides an attractive way to express transgenes in the central nervous system. The protocol outlines all crucial steps to perform a viral vector injection in the substantia nigra of the rat to develop a viral vector-based animal model for Parkinson's disease.

Entwicklung eines Alpha-Synuklein Based Rattenmodell für Parkinson-Krankheit durch stereotaktische Injektion eines rekombinanten Adeno-assoziierten viralen Vektor,

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study vasculogenesis, (tumor) angiogenesis, and atherosclerosis. The current standard for in vitro research on human endothelial cells (ECs) is the use of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVECs) and Human Umbilical Artery Endothelial Cells (HUAECs). For canine endothelial research, only one cell line (CnAOEC) is available, which is derived from canine aortic endothelium. Although currently not completely understood, there is a difference between ECs originating from either arteries or veins. For a more direct approach to in vitro functionality studies on ECs, we describe a new method for isolating Canine Primary Endothelial Cells (CaPECs) from a variety of vessels. This technique reduces the chance of contamination with fast-growing cells such as fibroblasts and smooth muscle cells, a problem that is common in standard isolation methods such as flushing the vessel with enzymatic solutions or mincing the vessel prior to digestion of the tissue containing all cells. The technique we describe was optimized for the canine model, but can easily be utilized in other species such as human.

Novel isolation methods of primary endothelial cells from blood vessels are needed. This protocol describes a new technique that completely inverts blood vessels of interest, exposing only the endothelial side to enzymatic digestion. The resulting pure endothelial cell culture can be used to study cardiovascular diseases, disease modelling, and angiogenesis.

Isolierung und Kultur von primären Endothelzellen von Canine Arterien und der

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Oral Biofilm Sampling for Microbiome Analysis in Healthy Children

Oral biofilm and its molecular analysis provide a basis for investigating various dental research and clinical questions. Knowledge of biofilm composition leads to a better understanding of cariogenic and periopathogenic mechanisms. Microbial changes taking place in the oral cavity during childhood are of interest for several reasons. The evolution of the child oral microbiota and shifts in its composition need to be analyzed further to understand and possibly prevent the onset of disease. At the same time, advanced knowledge of the natural composition of oral biofilm is needed. Early stages of caries-free permanent dentition with healthy gums provide a widely unaffected subgingival habitat that can serve as an in situ baseline for studying features of oral health and disease. Analysis of children's oral biofilm during different stages in life is thus an important theme in the field. Modern molecular analysis methods can provide comprehensive information about the bacterial diversity of such biofilms. To enable microbiota data comparison, it is important to standardize each step in the procedure for molecular data generation. This procedure spans from clinical sampling, Next Generation Sequencing (NGS), bioinformatic data processing, to taxonomic interpretation. One of the most critical factors here is biofilm sampling. Sampling in children is even more challenging in particular due to limited space in subgingival areas. We thus focus on the use of paper points for subgingival sampling. This article provides a detailed protocol for oral biofilm sampling of the subgingival sulcus, the mucosa, and saliva in children.

Changes in the oral microbiome throughout childhood are of growing interest. Comparison of different microbiome studies reveals a lack of standardized sampling protocols. Limited space makes sampling the sound subgingival sulcus of children challenging. Paper point sampling is presented here in detail as the method of choice for this area.

Oralen Biofilm Sampling für Microbiome Analyse bei gesunden Kindern

Oral biofilm and its molecular analysis provide a basis for investigating various dental research and clinical questions. Knowledge of biofilm composition ...

Oral Health Assessment by Lay Personnel for Older Adults

Oral health is an often-undervalued contributor to overall health. The literature, however, underscores the myriad of systemic diseases influenced by oral health, including type II diabetes, heart disease, and atherosclerosis. Thus, assessments of oral health, called oral screenings, have a significant role in assessing risk of disease, managing disease, and even improving disease by oral care. Here we present a method to assess oral health quickly and consistently across time. The protocol is simple enough for non-oral health professionals such as students, family, and caregivers. Useful for any age of patient, the method is particularly key for older individuals who are often at risk of inflammation and chronic disease. Components of the method include existing oral health assessment scales and inventories, which are combined to produce a comprehensive assessment of oral health. Thus, oral characteristics assessed include intraoral and extraoral structures, soft and hard tissues, natural and artificial teeth, plaque, oral functions such as swallowing, and the impact this oral health status has on the patient&#39;s quality of life. Advantages of this method include its inclusion of measures and perceptions of both the observer and patient, and its ability to track changes in oral health over time. Results acquired are quantitative totals of questionnaire and oral screening items, which can be summed for an oral health status score. The scores of successive oral screenings can be used to track the progression of oral health across time and guide recommendations for both oral and overall health care.

The goal of this protocol is to enable non-dental professionals to assess oral health status for research or health-screening purposes. Aspects assessed include lips, tongue, soft and hard tissues, natural and artificial teeth, oral cleanliness, plaque, swallowing, and impact of oral health on quality of life.

Mundgesundheitsbewertung durch Laienpersonal für ältere Erwachsene

Oral health is an often-undervalued contributor to overall health. The literature, however, underscores the myriad of systemic diseases influenced by oral ...

A Standardized Approach to Extra-Oral and Intra-Oral Digital Photography

Contemporary dentistry mandates a more comprehensive and personalized analysis of each patient. Technological advances in digital photography have played vital roles in diagnostic accuracy, treatment planning, execution of therapies, and outcome evaluations, including esthetic enhancement. Digital photography also provides an excellent platform for patient education, communication, and co-management of cases with other healthcare providers. However, intra-oral photography often faces challenges such as inaccessibility of areas to be captured, different moveable vs. fixed tissues involved, contamination with saliva or blood, and differing illumination needs on various locations. Thus, a more standardized and systematic approach is proposed for intra- and extra-oral documentation via digital photography to overcome the existing technical challenges. The current work will outline the appropriate equipment specifications (camera bodies, macro lens, and flashes), positions and postures of the operator and patients, proper techniques of tissue retraction, the use of appropriate intra-oral mirrors, and the essential elements such as aperture settings (F-stop), ISO, shutter speed, and white balance. This article aims to provide all dental professionals with an approachable linear array of guidelines to produce simplified and standardized visual tools for more efficient and effective documentation.

The present protocol describes a method to capture intra- and extra-oral photographs for digital documentation in the clinical practice of dentistry. The protocol highlights all the critical components involved and the commonly utilized settings to capture dental photographs for clinical documentation.

Ein standardisierter Ansatz für die extraorale und intraorale Digitalfotografie

Contemporary dentistry mandates a more comprehensive and personalized analysis of each patient. Technological advances in digital photography have played ...