Diese Studien wurden von CIHR und CBCRA gewährt DWL finanziert. IP wurde durch Stipendien aus CIHR-STP, FRSQ und CIHR finanziert. MKGS wurde von OGS und CIHR-STP Stipendien finanziert. Die Autoren danken Kevin Barr für seine Unterstützung bei der Maus Zucht.

1. Brustdrüse Dissektion <ol><li> Euthanize der Maus unter Verwendung von CO 2-Inhalation. Vermeiden Sie Genickbruch, wenn möglich, da es große Blutgefäße im Hals und führen zu einer Akkumulation von Blut durch Brustdrüsen beschädigt werden kann, wodurch die Dissektion erschweren. Wenn jedoch andere Kriterien in die gleiche Maus, wie die Blutspiegel von Oxytocin ausgewertet werden sollen, können alternative Methoden Euthanasie notwendig sein, obwohl dies von Ihrem IACUC ausgewertet werden müssen. </li><li> Auf einer Polystyrol-Hartschaum in Folie verpackt, die Maus auf den Rücken und breitete die vier Gliedmaßen. Pin fest aller vier Gliedmaßen mit 16 bis 20 Gauge-Nadeln (Abbildung 1A). </li><li> Sprühen Sie die Maus großzügig mit 70% Ethanol. </li><li> Mit einer Pinzette, ziehen Sie die Bauchhaut an der Mittellinie und machen einen kleinen Schnitt mit einer scharfen Schere. </li><li> Ausgehend von der Schnittführung, schneiden Sie die Haut bis zum Hals des Tieres unter Vermeidung Punktion der Bauch-oder Brusthöhle (Abbildung 1B). </li><li> Schneiden Sie die Haut an den Vorderbeinen auf die Mittellinienschnitt, was zu einem &quot;Y-Form&quot; (Abbildung 1B). Schneiden Sie die Haut an den hinteren Gliedmaßen die gleiche Weise (Abbildung 1B). </li><li> Mit hämostatischen Zange vorsichtig schälen die Bauch-und Brust-Haut auf die Seite der Maus. Wenn nötig, vorsichtig schneiden Bindegewebe. </li><li> Fix die Haut um die Polystyrol-Hartschaum mit 16 bis 20 Gauge-Nadeln, Freilegung der Milchdrüsen an der Unterseite der Haut. Fahren und vollständige einseitig zu einer Zeit (Abbildung 1C). </li><li> Mit einer Pinzette vorsichtig aus der Brustdrüse von Interesse und zwischen der Drüse und die Haut mit kleinen, scharfen Schere, beginnend von außen auf die Wirbelsäule des Tieres. Stellen Sie sicher, schneiden sorgfältig, so dass kein Stück Haut oder Muskeln bleiben auf der Drüse. Alle Brustdrüsen (Abbildung 1) kann mit Hilfe dieses Protokolls werden, aber Bauchschmerzen Brustdrüsen (# 4) sind am besten für die ganze Montage. Die 2. und 3. Drüsen haben einige verzahnte Muskeln und während sie für den ganzen Berg und Histologie verwendet werden können, könnten sie nicht angemessen für alle Analysen. </li></ol> 2. Whole mount <ol><li> Mindestens einen Tag vor der Präparation vorzubereiten carmine Alaun-Lösung durch Auflösen von 1 g Karmin und 2,5 g Aluminiumkaliumsulfat in 500 ml destilliertem Wasser und kochen für 20 Minuten in einem 1-Liter-Erlenmeyerkolben. Passen Sie das endgültige Volumen auf 500 ml mit Wasser. Filter durch ein Whatman-Papier und eine kleine Menge von Thymol (einige Körner) als Konservierungsmittel. Kühlschrank. Nach der Färbung kann carmine Alaun-Lösung zurück zum Lager Flasche gegossen und wiederverwendet werden oft über mehrere Wochen. Machen Sie eine frische Lösung, wenn Farbe blass. </li><li> Nach Auslösen der Brustdrüse der Maus (Schritt 1), breitete sie direkt auf einen Objektträger. Versuchen Sie es so viel wie möglich glätten, unter Beibehaltung der ursprünglichen Form in situ. Die Drüse wird auf der Folie schön bleiben, wenn sie richtig gespannt. </li><li> Fix die Drüse durch Eintauchen, auf der Folie, in Carnoy Fixativ (100% EtOH, Chloroform, Eisessig; 6:3:1) für 4 Stunden im Abzug bei Raumtemperatur in einem Glas. Beachten Sie, dass andere haben 2 Stunden, die ausreichen zu sein scheint. Alternativ können Drüsen auch bei 4 ° C über Nacht behoben werden. </li><li> Wash in 70% Ethanol für 15 min. Dann, allmählich rehydrieren in Wasser, indem die Hälfte der Ethanol-Lösung aus dem Glas und ersetzt sie durch ddH 2 O. Inkubieren für 5 min. Wiederholen Sie die 3-fache. Alternativ können Sie 70% - 35% - 15% - Ethanol und Wasser Bäder für jeweils 5 Minuten. </li><li> Spülen in destilliertem Wasser für 5 Minuten. </li><li> Färben in Carmin Alaun über Nacht bei Raumtemperatur. Anzumerken ist, dass Färbung könnte länger dauern, abhängig von der Dicke der Drüse sein. </li><li> Nehmen Sie carmine Alaun Flecken die Wiederverwendung und allmählich austrocknen gefärbten Gewebeschnitten durch serielle Ethanol Bäder (50%, 70%, 95%, 100%) für jeweils 5 min und klar in Xylol oder in eine ungiftige Alternative wie Histo-clear, Übernachtung. Beide Entwässerung und Clearing kann auch eine längere Inkubationen mit dickeren Proben. </li><li> Tauchen Brustdrüse in Methylsalicylat. Brustdrüsen kann in Methylsalicylat in einem Abzug aufbewahrt werden, bis Bilder bereit zu fassen sind. </li><li> Bilder können in einem Abzug mit einer normalen Digitalkamera auf einem Stativ (verwenden Sie &quot;Makro&quot;-Funktion, wenn verfügbar), indem Sie die Dias auf einem Leuchttisch positioniert genommen werden. Verwenden Sie ein Binokular für höhere Vergrößerung. Alternativ können Milchdrüsen in Medien wie Permount montiert werden (nach Schritt 2,7) ermöglicht für Bilder außerhalb einer chemischen Abzugshaube auf jedem Imaging-Plattform bietet den Halterungen genommen werden sind ausreichend dünn. </li><li> Um Brustdrüse Entwicklung mit whole mount, Messungen wie die Anzahl der Verzweigungen (oder Seite-Filialen) sowie Teile der Kanäle, die Länge des primären Kanälen, oder ein Verhältnis von Epithelzellen an Fettgewebe Bereich beurteilt werden zu quantifizieren. Endlich, nach fotografischen Dokumentationzung, Brustdrüse gesamte Halterung kann in Paraffin zum Schneiden und konventionellen histologischen Färbung eingebettet werden. </li></ol> 3. Oxytocin-induzierte Milchspendereflex <ol><li> Trennen Sie die Welpen von der Mutter nur, wenn sie gefüttert wurden. Warten Sie 1 Stunde vor dem Test. </li><li> Sacrifice der Mutter und setzen die Brustdrüsen, wie zuvor beschrieben (Schritte von 1,1 bis 1,8), ohne sie aus dem Tier. </li><li> Starten Sie den Test durch gleichmäßiges Ablegen entweder PBS oder der Oxytocin-Lösung direkt auf die Brustdrüse von Interesse, mit einem Transferpipette. Ein großes Spektrum von Dosen verwendet werden können; ~ 8 pg / ml (physiologische Dosis) wird in der Regel eingesetzt. Allerdings können hohe nicht-physiologischen Dosen (bis zu 1 mg / ml) verwendet werden, um das Fehlen der Reaktion in genetisch veränderter Mausmodelle zu gewährleisten. Für dieses Verfahren ist es empfehlenswert, Thorax (# 2-3) Drüsen zu benutzen, mit der einen Seite als Kontrolle (ausgesetzt PBS) und die andere Seite zu Milchspendereflex (Oxytocin Belichtung) zu testen. </li><li> Inkubation für 1 Minute und entfernen Sie die Lösung durch vorsichtiges Absaugen mit einer Transferpipette. Milk Einstieg in die Kanäle kann durch Videoband oder durch Aufnahme von Bildern vor und nach der PBS oder Oxytocin Exposition überwacht werden. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse: In einem guten ganze Berg ist der Brustdrüse schön ausbreiten und das Epithel Kanäle sind leicht zu beobachten (Abbildung 2A). Wenn die Drüse ist nicht gut verteilt, kann es heben zum Teil oder ganz von der Folie, wenn in der Fixierlösung gelegt. Die Drüse wird dann hart und unbrauchbar (Abbildung 2B). Ebenso wird, wenn die Drüse nicht gut präpariert, entweder einen Teil des Epithels können fehlen (Abbildung 2C) bzw. der übrigen Teile der Haut oder der Bauchmuskel mit der Analyse der Drüse (Abbildung 2D) stören. Für die Oxytocin-Assay, ist es wichtig, den Säugling Welpen aus der Talsperre für die gleiche Menge an Zeit bei jeder Gelegenheit zu trennen. Auf diese Weise werden Sie sicherstellen, dass keine Milch oder kleine Mengen von Milch in den Kanälen vor der Oxytocin-Exposition ist, sondern auch, dass genügend Milch vorhanden ist in den Alveolen, die in den Kanälen von myoepithelialen Kontraktionen (Abbildung 3A) ausgeworfen werden kann . Wenn Welpen zu früh entfernt werden, kann Milch in den Alveolen und in den Kanälen machen die Wirkung von Oxytocin schwer zu überwachen (Abbildung 3B) zu akkumulieren. Alternativ, wenn das Experiment ist zu früh, nach pup Entfernung durchgeführt wird Milch keine Zeit, um in die Alveolen und Oxytocin-induzierte Kontraktionen der Myoepithelzellen ansammeln wird nicht ausgelöst genug Milch Freisetzung in die Kanäle zu beobachten (Abbildung 3C) werden. <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig1.jpg" alt="Abbildung 1"/> Abbildung 1. Maus Brustdrüse Dissektion. Pin mit der Maus auf dem Rücken durch die vier Gliedmaßen (A). Schneiden Sie die Haut zunächst aus dem Bauch bis zum Hals. Dann machen Sie senkrecht Einschnitte von der Mitte des Bauches, um jedes Glied, wie durch die gestrichelte Linie (B) dargestellt. Vorsichtig schälen die Haut auf der Seite des Tieres und stecken Sie es, Freilegung der Brustdrüse (C). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig2.jpg" alt="Abbildung 2"/> Abbildung 2. Maus Brustdrüse ganze Berg. Epithel Kanälen (Pfeile) und der Lymphknoten (Pfeilspitze) sind leicht in einem schön verteilt Brustdrüse ganzen Berg Drüse # 4 beobachtet (A). Ein schlecht verteilt Brustdrüse kann von der Folie ablösen und zusammengebrochen, wodurch es unbrauchbar (B). Ein falsch ausgeschnitten Brustdrüse kann entweder fehlende Teile (C) oder Stücke von Muskel oder Haut verbleibenden (D). Beachten Sie, dass die 2 nd und 3 rd Drüsen Muskel verzahnt, kann aber immer noch für ganze Berg oder Histologie verwendet werden. <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig3.jpg" alt="Abbildung 3"/> Abbildung 3. Oxytocin-induzierte Milchspendereflex kann in Epithel Kanälen beobachtet werden (Pfeile) nach Oxytocin-Exposition (A). Allerdings, wenn Kanäle sind bereits mit Milch (Pfeile) am Anfang des Tests wegen einer unangemessen langen Latenzzeit nach der letzten Säugen der Welpen, weitere Akkumulation von Milch in den Kanälen (Pfeile) nach Oxytocin Exposition gefüllt ist schwer zu zu beobachten (B). Alternativ wird eine kurze Latenzzeit nach Welpen säugt nicht genug Ansammlung von Milch ermöglichen in die Alveolen richtig in die Gänge (Pfeile) werden nach Oxytocin-Exposition (C) beobachtet. Die Bilder wurden vor und nach Oxytocin-Exposition mit Hilfe eines numerischen Kamera (Cybershot, Sony) aufgenommen. <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig4.jpg" alt="Abbildung 4"/> Abbildung 4. Schematische Darstellungen von ganzen Montage und Oxytocin Behandlung Assays.

<ol>
	<li>Geddes, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+the+lactating+breast:+the+latest+anatomy+research.">Inside the lactating breast: the latest anatomy research.</a> J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).</li><li>Sternlicht, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development:+the+cues+that+regulate+ductal+branching+morphogenesis.">Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis.</a> Breast Cancer Res. 8, 201-201 (2006).</li><li>Silberstein, G. B., Flanders, K. C., Roberts, A. B., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+mammary+morphogenesis:+evidence+for+extracellular+matrix-mediated+inhibition+of+ductal+budding+by+transforming+growth+factor-beta+1.">Regulation of mammary morphogenesis: evidence for extracellular matrix-mediated inhibition of ductal budding by transforming growth factor-beta 1.</a> Dev Biol. 152, 354-354 (1992).</li><li>Daniel, C. W., Robinson, S., Silberstein, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TGF-beta+in+patterning+and+growth+of+the+mammary+ductal+tree.">The role of TGF-beta in patterning and growth of the mammary ductal tree.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 1, 331-331 (1996).</li><li>Neville, M. C., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mammary gland : development, regulation, and function. , (1987).</li><li>Oakes, S. R., Hilton, H. N., Ormandy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alveolar+switch:+coordinating+the+proliferative+cues+and+cell+fate+decisions+that+drive+the+formation+of+lobuloalveoli+from+ductal+epithelium.">The alveolar switch: coordinating the proliferative cues and cell fate decisions that drive the formation of lobuloalveoli from ductal epithelium.</a> Breast Cancer Res. 8, 207-207 (2006).</li><li>Anderson, S. M., Rudolph, M. C., McManaman, J. L., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development.+Secretory+activation+in+the+mammary+gland:+it's+not+just+about+milk+protein+synthesis!.">Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: it's not just about milk protein synthesis!.</a> Breast Cancer Res. 9, 204-204 (2007).</li><li>Reversi, A., Cassoni, P., Chini, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+receptor+signaling+in+myoepithelial+and+cancer+cells.">Oxytocin receptor signaling in myoepithelial and cancer cells.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 10, 221-221 (2005).</li><li>Haslam, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+to+cell+interactions+and+normal+mammary+gland+function.">Cell to cell interactions and normal mammary gland function.</a> J Dairy Sci. 71, 2843-2843 (1988).</li><li>Plante, I., Laird, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+levels+of+connexin43+result+in+impaired+development+of+the+mammary+gland+in+a+mouse+model+of+oculodentodigital+dysplasia.">Decreased levels of connexin43 result in impaired development of the mammary gland in a mouse model of oculodentodigital dysplasia.</a> Dev Biol. 318, 312-312 (2008).</li><li>Talhouk, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterocellular+interaction+enhances+recruitment+of+alpha+and+beta-catenins+and+ZO-2+into+functional+gap-junction+complexes+and+induces+gap+junction-dependant+differentiation+of+mammary+epithelial+cells.">Heterocellular interaction enhances recruitment of alpha and beta-catenins and ZO-2 into functional gap-junction complexes and induces gap junction-dependant differentiation of mammary epithelial cells.</a> Exp Cell Res. 314, 3275-3275 (2008).</li><li>Palmer, C. A., Neville, M. C., Anderson, S. M., McManaman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lactation+defects+in+transgenic+mice.">Analysis of lactation defects in transgenic mice.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 269-269 (2006).</li><li>Howlin, J., McBryan, J., Martin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pubertal+mammary+gland+development:+insights+from+mouse+models.">Pubertal mammary gland development: insights from mouse models.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 283-283 (2006).</li><li>You, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+mammary+gland+development+in+prepubertal+male+rats+exposed+to+genistein+and+methoxychlor.">Modulation of mammary gland development in prepubertal male rats exposed to genistein and methoxychlor.</a> Toxicol Sci. 66, 216-216 (2002).</li><li>Grill, C. J., Cohick, W. S., Sherman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postpubertal+development+of+the+rat+mammary+gland+is+preserved+during+iron+deficiency.">Postpubertal development of the rat mammary gland is preserved during iron deficiency.</a> J Nutr. 131, 1444-1444 (2001).</li><li>Hennighausen, L., Robinson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+globally,+act+locally:+the+making+of+a+mouse+mammary+gland.">Think globally, act locally: the making of a mouse mammary gland.</a> Genes Dev. 12, 449-449 (1998).</li><li>Aupperlee, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+differences+in+the+mechanisms+of+progesterone+regulation+of+murine+mammary+gland+development.">Strain-specific differences in the mechanisms of progesterone regulation of murine mammary gland development.</a> Endocrinology. 150, 1485-1485 (2009).</li><li>Montero Girard, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estrogen+receptor-alpha+and+progesterone+receptor+A+expression+with+hormonal+mammary+carcinogenesis:+role+of+the+host+microenvironment.">Association of estrogen receptor-alpha and progesterone receptor A expression with hormonal mammary carcinogenesis: role of the host microenvironment.</a> Breast Cancer Res. 9, R22-R22 (2007).</li><li>Moore, D. M., Vogl, A. W., Baimbridge, K., Emerman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+calcium+on+oxytocin-induced+contraction+of+mammary+gland+myoepithelium+as+visualized+by+NBD-phallacidin.">Effect of calcium on oxytocin-induced contraction of mammary gland myoepithelium as visualized by NBD-phallacidin.</a> J Cell Sci. 88, 563-563 (1987).</li></ol>

Brustdrüse Entwicklung und Funktion sind eng orchestriert. Mutant Mäuse können Hafen-Gen-Mutationen, die Brustdrüse Entwicklung und Funktion Hervorhebung der Notwendigkeit, Drüse Architektur 13,12 bewerten beeinträchtigen können. Whole Montage kann wie in diesem Artikel auf allen Stufen der Brustdrüse Entwicklung beschrieben werden. Typischerweise wird die Entwicklung des Epithels zu Beginn der Pubertät (~ 4 Wochen alt) beurteilt, in der Mitte der Pubertät (~ 6 Wochen alt) und nach der Pubertät (~ 10-12 Wochen alt) 2,10. Auf diesen Stufen, die Höhe des Kanals Verzweigung, kann die Anzahl der terminalen Ende Knospen und Länge der Kanäle bestimmt werden, um den Grad der Drüse Entwicklung 14,15 quantifizieren. Ebenso ist alveologenesis (Entwicklung der Alveolen während der Schwangerschaft) in der Regel bei 2-3 Punkten in der Schwangerschaft bestimmt, die strukturellen Veränderungen, die während der Laktation und Involution auftreten können ebenfalls beobachtet und in whole mount Drüse Vorbereitungen 16 quantifiziert werden. Allerdings kann die Quantifizierung der ganzen mounts ab Ende schwangere und stillende Mäusen schwierig aufgrund der Dichte des Gewebes. Es wird empfohlen, ganze Berg mit histologischen Analysen zu kombinieren, vor allem für diejenigen Stufen 12. Für detaillierte histologische Beurteilung kann Brustdrüsen entfernt mit dem gleichen Protokoll in diesem Bericht erwähnt, in Formalin fixiert und einer Hämatoxylin und Eosin Färbung werden. Whole mount kann auch Paraffin eingebettet und verwendet für die Histologie einmal Bildgebung durchgeführt wurde. Bei beiden Verfahren ist die ordnungsgemäße und feinen Sezierung der Milchdrüsen von entscheidender Bedeutung. Wenn mutierten Mäusen beurteilt wird, ist es wichtig, dass diese Mäuse auf den nächsten Kontroll-Mäusen möglich zu vergleichen, da verschiedene Mausstämme variable Seiten-oder Tertiär-Verzweigungen, oder alveologenesis 17 zeigen kann. Zum Beispiel, wenn auf BALB / c-Mäusen verglichen, zeigen C57BL / 6 Mäusen reduziert Seitenverzweigung und alveologenesis 17,18. Daher sollten BALB / c Mäusen nicht als Kontrolle für genetisch veränderte Mäuse auf einem C57BL / 6 Maus Hintergrund erzeugt werden. Während ganze Montage bietet einen Einblick in grober Entwicklungsstörungen, kann die Funktion der Brustdrüse müssen auch unter Verwendung anderer ergänzender Techniken. Die wichtigste Funktion der Brustdrüse zu produzieren und liefern Milch an Welpen. Diese Verfahren erfordern nicht nur korrekte Differenzierung der sekretorischen luminalen Zellen während der Schwangerschaft, sondern auch zu koordinieren und effizienter Kontraktionen der Myoepithelzellen um die Alveolen und entlang der Kanäle für Transport der Milch 8. Während Milchproduktion und-qualität durch analytische Beurteilung der Zusammensetzung der Milch 12 ausgewertet werden können, ist unter anderem die Ursachen beeinträchtigt Milch Auslieferung an den Welpen schwieriger zu bewerten. In der Tat kann die beobachtete Fehlen von Milch in den Mägen von neugeborenen Welpen zu viele Defekte wie Beeinträchtigung der Milchproduktion, die Unfähigkeit der Welpen zu säugen, Verhaltens-Defekte der Mutter oder Milchspendereflex Mängel verknüpft werden. Eine Möglichkeit, Milch Transport und Auswurf Mängel aus den Alveolen in die Gänge zu myoepithelialen Kontraktionen mit Oxytocin, wie in diesem Artikel beschrieben zu induzieren. Allerdings ist die Quantifizierung der Transport der Milch und Auswurf schwierig, da die Wirkung von Oxytocin ex vivo ist schnell (in der Regel Milch kann in den Kanälen innerhalb von 1 Minute nach der Exposition beobachtet werden), auch bei Verwendung von niedrigen physiologischen Dosen von Oxytocin 10. So könnte ein geringfügiger Unterschied in der Effizienz der Milchspendereflex zwischen zwei Mauslinien nicht beobachtbar mit dieser Technik werden. Die Quantifizierung dieser Antwort ist schwierig, aber man semi-quantitative Methode zur Beurteilung Oxytocin-induzierter Milchspendereflex ist es, die Reaktion unter einer Vielzahl von Dosierungen zu untersuchen und die Behandlung notwendige Zeit zu Leitungsrohren mit Milch füllen zu bestimmen. . In allen Fällen ist die Konsistenz der Wartezeit zwischen der letzten Welpen säugt an den Anfang des Tests kritisch. Für eine genauere Quantifizierung der Stillzeit oder die Identifizierung eines Milchspendereflex Defekt, kann diese Methode durch die Quantifizierung der Milchproteine ​​und Signalwege, wie β-Casein und Stat5 bzw. ergänzt werden, oder in vitro myoepithelialen Zelle Kontraktion auf Oxytocin Belichtung 19 . Zusammenfassend sind transgenen Mausmodellen wichtige und weit verbreitete für das Studium Brustdrüse Funktion und Entwicklung sowie auf die Rolle der wichtigsten Gene in diese Prozesse zu beurteilen. Die Architektur der Brustdrüse Epithel kann leicht in richtig ausgeschnitten Drüsen mit whole mount in allen Phasen der Entwicklung beobachtet werden. Während der Stillzeit Mängel, die zu Welpen Unterernährung viele Ursprünge haben kann, kann ein Mangel an Milchspendereflex durch Oxytocin-induzierter synchronisiert Kontraktion der Myoepithelzellen in situ beurteilt werden. Zusammen können diese beiden Techniken (Abbildung 4) wichtige Einblicke in die Wirkung von bestimmten Gen Mutationen gebengen oder Streichungen auf Brustdrüse Entwicklung und Funktion.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagens </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> Karminrot </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C1022 </td></tr><tr><td> Aluminiumkaliumsulfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A6435 </td></tr><tr><td> Thymol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T0501 </td></tr><tr><td> Methylsalicylat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M6752 </td></tr><tr><td> Oxytocin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> O3251 </td></tr></tbody></table>

evaluation of mammary gland development and function in mouse models

Der menschliche Brustdrüse von 15-20 Lappen zusammengesetzt, die Sekretion von Milch in eine Verzweigung Kanalsystem Öffnung an der Brustwarze. Die Lappen selbst sind eine Reihe von Terminal Kanal lobulären Einheiten der sekretorischen Alveolen und konvergierenden Kanäle 1 zusammengesetzt. Bei Mäusen ist eine ähnliche Architektur an der Schwangerschaft in die Gänge und Alveolen in das bindegewebige Stroma eingestreut werden eingehalten. Die Maus Brustdrüse Epithel ist ein Baum wie Gangsystem aus zwei Schichten von Zellen, eine innere Schicht aus luminalen Zellen, die durch eine äußere Schicht aus Myoepithelzellen durch die Grenzen eines Basalmembran 2 bezeichnet umgeben ist. Bei der Geburt ist nur eine rudimentäre duktale Baum vorhanden ist, besteht aus einem primären Kanal und 15-20 Filialen. Niederlassung Dehnung und Verstärkung beginnen am Anfang der Pubertät, ca. 4 Wochen alt, unter dem Einfluss von Hormonen 3,4,5. Bei 10 Wochen, wird der Großteil des Stroma durch ein komplexes System von Kanälen, die Zyklen der Verzweigung und Regression in jeder Läufigkeit bis Schwangerschaft 2 wird zu unterziehen eingedrungen. Zu Beginn der Schwangerschaft, beginnt eine zweite Phase der Entwicklung, mit der Proliferation und Differenzierung des Epithels auf Trauben-förmige Milch sekretorischen Strukturen, so genannte Alveolen 6,7 bilden. Nach der Geburt und während der Stillzeit wird die Milch durch luminale sekretorische Zellen produziert und gelagert im Lumen der Alveolen. Oxytocin, ein neuronales Reflex Säugen der Welpen induzierte stimulierte, induziert synchronisiert Kontraktionen der Myoepithelzellen um die Alveolen und entlang der Kanäle, so dass Milch durch die Milchgänge zur Brustwarze, wo es verfügbar wird, um die Welpen 8 transportiert werden. Brustdrüse Entwicklung, Differenzierung und Funktion sind eng orchestriert und erfordern nicht nur Interaktionen zwischen Stroma und Epithel, sondern auch zwischen myoepithelialen und luminalen Zellen innerhalb des Epithels 9,10,11. Dabei können Mutationen in vielen Genen in diesen Interaktionen verwickelt beeinträchtigen entweder duktalen Dehnung während der Pubertät oder Alveolen Bildung in der frühen Schwangerschaft, Differenzierung während der späten Schwangerschaft und sekretorischen Aktivierung führt zu Laktation 12,13. In diesem Artikel beschreiben wir, wie man mit der Maus Milchdrüsen sezieren und beurteilen ihre Entwicklung mit ganzen mounts. Wir zeigen auch, wie man myoepithelialen Kontraktionen und Milchspendereflex mit einem ex-vivo Oxytocin-basierten funktionellen Assays zu bewerten. Der Effekt einer Genmutation auf Brustdrüse Entwicklung und Funktion kann also in situ, indem diese beiden Techniken in der Mutante und Wildtyp-Mäusen der Kontrollgruppe festgestellt werden.

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models at JoVE.com

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

Diese Methode beschreibt, wie zu sezieren und zu bewerten Brustdrüse Entwicklung und Funktion von Mäusen. Abgeschnittene Milchdrüsen sind für den Grad der Entwicklung mit whole mount beurteilt, während Milchspendereflex wird ausgewertet, wobei Oxytocin-basierte myoepithelialen Zelle Kontraktion Assay.

Evaluation der Brustdrüse Entwicklung und Funktion in Mausmodellen

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

evaluation-of-mammary-gland-development-and-function-in-mouse-models

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

37.1K Aufrufe.  University of Western Ontario. Diese Methode beschreibt, wie zu sezieren und zu bewerten Brustdrüse Entwicklung und Funktion von Mäusen. Abgeschnittene Milchdrüsen sind für den Grad der Entwicklung mit whole mount beurteilt, während Milchspendereflex wird ausgewertet, wobei Oxytocin-basierte myoepithelialen Zelle Kontraktion Assay.

Serie: Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and genetic alterations. Mammary gland whole mounts are an inexpensive method to capture the progression of morphological changes that may arise after exposure. However, in later life, when abnormalities are more prone to develop, sole reliance on this one method may not always provide enough information to make a proper diagnosis of the abnormality. Historically, in chemical test guideline studies, a single mammary gland is removed at necropsy and prepared as a hematoxylin and eosin (H&#38;E)-stained section. The incorporation of contralateral mammary whole-mount collection and analysis decreases the likelihood of a false-negative assessment. Evaluation of the whole mount is limited by the presence of one or two entire mammary glands on a slide, and in some cases, the abnormalities observed in the whole mount are not uniformly represented in the H&#38;E section.&#160; The goal of this study was to develop a protocol for converting coverslipped mammary whole mounts to H&#38;E-stained sections so that lesions that would otherwise have been missed or that are difficult to diagnose can be identified. Here, we detail a method to produce a high-quality, paraffin-embedded H&#38;E section from a mammary gland that was initially prepared as a whole mount. In comparison to a tissue that was intentionally prepared for H&#38;E sectioning, the whole mount requires additional preparation for tissue removal and processing. However, this method is considered inexpensive, as it requires common lab reagents and little additional time. As a result, this method can provide invaluable information on how chemical and environmental exposures alter normal mammary development, as well as display changes that occur because of genetic modifications.

We developed a method to successfully remove, process, section, and stain, for histopathological evaluation, mammary tissue that had originally been fixed on slides as whole mounts. This method may promote the collection and evaluation of mammary gland whole mounts in reproductive and developmental test guideline studies.

Sektion Mammary Gland Ganze Mounts für Läsion Identifizierung

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Forschung

Krebsforschung

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are instrumental in gaining insights into these complex processes. Although many mouse models have been developed to study contributions of various oncogenic events and cells of origin to breast tumorigenesis, these models are often not cell-type or organ specific or cannot induce the initiation of mammary tumorigenesis in a temporally controlled manner. Here we describe a protocol to generate a new type of breast cancer mouse models based on the intraductal injection of Cre-expressing adenovirus (Ad-Cre) into mouse mammary glands (MGs). Due to the direct injection of Ad-Cre into mammary ducts, this approach is MG specific, without any unwanted cancer induction in other organs. The intraductal injection procedure can be performed in mice at different stages of their MG development (thus, it permits temporal control of cancer induction, starting from ~3-4 weeks of age). The cell-type specificity can be achieved by using different cell-type-specific promoters to drive Cre expression in the adenoviral vector. We show that luminal and basal mammary epithelial cells (MECs) can be tightly targeted for Cre/loxP-based genetic manipulation via an intraductal injection of Ad-Cre under the control of the Keratin 8 or Keratin 5 promoter, respectively. By incorporating a conditional Cre reporter (e.g., Cre/loxP-inducible Rosa26-YFP reporter), we show that MECs targeted by Ad-Cre, and tumor cells derived from them, can be traced by following the reporter-positive cells after intraductal injection.

The goal of this protocol is to describe a new breast cancer modeling approach based on the intraductal injection of Cre-expressing adenovirus into mouse mammary glands. This approach allows both cell-type- and organ-specific manipulation of oncogenic events in a temporally controlled manner.

Modellierung von Brustkrebs über eine intraduktive Injektion des Cre-expressingAvirus in die Maus-Mammary Drüse

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary epithelium using transplantation techniques takes advantage of the hormonal environment provided by the adolescent rodent host. These studies are ideally suited to explore the impact of various biological manipulations on mammary gland development and dissect many aspects of mammary gland biology. A common, but limiting, feature is that transplanted epithelial cells are strongly influenced by the surrounding stroma and outcompeted by endogenous epithelium; to utilize native mammary tissue, the abdominal-inguinal white fat pad must be cleared to remove host mammary epithelium prior to the transplantation. A major obstacle when using the rat model organism is that clearing the developing mammary tree in post-weaned rats is not efficient. When transplanted into gland-free fat pads, donor epithelial cells can repopulate the cleared host fat pad and form a functional mammary gland. The interscapular fat pad is an alternative location for these grafts. A major advantage is that it lacks ductal structures yet provides the normal stroma that is necessary to promote epithelial outgrowth and is easily accessible in the rat. Another major advantage of this technique is that it is minimally invasive, because it eliminates the need to cauterize and remove the growing endogenous mammary tree. Additionally, the interscapular fat pad contains a medial blood vessel that can be used to separate sites for grafting. Because the endogenous glands remain intact, this technique can also be used for studies comparing the endogenous mammary gland to the transplanted gland. This paper describes the method of mammary epithelial cell transplantation into the interscapular white fat pad of rats.

This article describes a transplantation method to graft donor rat mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of recipient animals. This method can be used to examine host and/or donor effects on mammary epithelium development and eliminates the need for pre-clearing, thereby extending the usefulness of this technique.

Ratte Mammary Epithel Cell Transplantation in das interskapulierische weiße Fettpad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from different genetically engineered mouse models of breast cancer. For example, time between cell divisions (cell lifetimes), apoptotic cell numbers, evolution of morphological changes, and mechanism of colony formation can be quantified and compared in cells carrying specific genetic lesions. Primary mammary epithelial cell cultures are generated from mammary glands without palpable tumor. Glands are carefully resected with clear separation from adjacent muscle, lymph nodes are removed, and single-cell suspensions of enriched mammary epithelial cells are generated by mincing mammary tissue followed by enzymatic dissociation and filtration. Single-cell suspensions are plated and placed directly under a microscope within an incubator chamber for live-cell imaging. Sixteen 650 &mu;m x 700 &mu;m fields in a 4x4 configuration from each well of a 6-well plate are imaged every 15 min for 5 days. Time-lapse images are examined directly to measure cellular behaviors that can include mechanism and frequency of cell colony formation within the first 24 hr of plating the cells (aggregation versus cell proliferation), incidence of apoptosis, and phasing of morphological changes. Single-cell tracking is used to generate cell fate maps for measurement of individual cell lifetimes and investigation of cell division patterns. Quantitative data are statistically analyzed to assess for significant differences in behavior correlated with specific genetic lesions.

Time-lapse imaging is used to assess behavior of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer risk to determine if there are correlations between specific behavioral parameters and distinct genetic lesions.

Zeitraffer-Imaging of Primary Präkanzeröse Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen der Breast Cancer Abgeleitet

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

Medizin

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

Orthotope Transplantation von Brusttumoren als präklinische Modelle für Brustkrebs

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of dome shaped cell structures referred to as mammospheres 1. The HC11 cell line has been employed as a model system for the study of regulation of mammary lactogenic differentiation both in vitro and in vivo 2. The HC11 cells differentiate and synthesize milk proteins in response to treatment with lactogenic hormones. Following the growth of HC11 mouse mammary epithelial cells to confluence, lactogenic differentiation was induced by the addition of a combination of lactogenic hormones including dexamethasone, insulin, and prolactin, referred to as DIP. The HC11 cells induced to differentiate were photographed at times up to 120 hours post induction of differentiation and the number of mammospheres that appeared in each culture was enumerated. The size of the individual mammospheres correlates with the degree of differentiation and this is depicted in the images of the differentiating cells.

HC11 lactogenic differentiation can be characterized by the formation of domed structures referred to as mammospheres. The structures can be enumerated by phase contrast microscopy to aid in quantifying lactogenic differentiation.

Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

Biologie

Mammary Epithelial Transplant Procedure

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, followed by the mammary epithelial transplant procedure. The mammary transplant procedure is widely used by mammary biologists because it takes advantage of the fact that significant development of the mammary epithelium doesn't occur until after puberty. At 3 weeks of age, growth of the mammary epithelial tree is confined to the vicinity of the nipple and the fat pad is largely devoid of mammary epithelium, but by 7 weeks of age the epithelial ductal tree extends throughout the entire fat pad. Therefore, if this small portion of the fat pad containing epithelium, the region between the nipple and the lymph node, is removed at 3 weeks of age, the endogenous epithelium will never populate the mammary fat pad and the fat pad is described as "cleared". At this time, mammary epithelium from another source can be transplanted in the cleared fat pad where it has the potential to extend mammary ductal trees through out the fat pad. This procedure has been utilized in many experimental models including the examination of tumor phenotype in transgenic mammary epithelial tissue without the confounding effects of genotype on the entire animal3, in the identification of mammary stem cells by transplanting cells in limited dilution4,5, determining if hyperplastic nodules proceed to mammary tumors6, and to assess the effect of prior hormone exposure on the behavior of the mammary epithelium7,8.
Three week old host mice are anesthetized, cleaned and restrained on a surgical stage. A mid-sagittal incision is made through the skin, but not the peritoneum, extending from the pubis to the sternum. Oblique cuts are made through the skin from the mid-sagittal incision across the pelvis toward each leg. The skin is pulled away from the peritoneum to expose the 4th inguinal mammary gland. The fat pad is cleared by removing the fat pad tissue anterior to the lymph node. Epithelium fragments or epithelial cells are transplanted into the remaining cleared fat pad and the mouse is closed.

This article demonstrates the procedure developed by DeOme KB et al. (1959) and the sparing procedure developed by Brill B et al. (2008) for clearing the 4th inguinal mammary fat pad of a pubescent mouse in preparation for transplantation of mammary fragments, mammary epithelial cells, or mammary tumor cells.

Brustepithelzellen Transplantation

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Generation of Mosaic Mammary Organoids by Differential Trypsinization

Organoids offer self-organizing, three-dimensional tissue structures that recapitulate physiological processes in the convenience of a dish. The murine mammary gland is composed of two distinct epithelial cell compartments, serving different functions: the outer, contractile myoepithelial compartment and the inner, secretory luminal compartment. Here, we describe a method by which the cells comprising these compartments are isolated and then combined to investigate their individual lineage contributions to mammary gland morphogenesis and differentiation. The method is simple and efficient and does not require sophisticated separation technologies such as fluorescence activated cell sorting. Instead, we harvest and enzymatically digest the tissue, seed the epithelium on adherent tissue culture dishes, and then use differential trypsinization to separate myoepithelial from luminal cells with ~90% purity. The cells are then plated in an extracellular matrix where they organize into bilayered, three-dimensional (3D) organoids that can be differentiated to produce milk after 10 days in culture. To test the effects of genetic mutations, cells can be harvested from wild type or genetically engineered mouse models, or they can be genetically manipulated prior to 3D culture. This technique can be used to generate mosaic organoids that allow investigation of gene function specifically in the luminal or myoepithelial compartment.

The mammary gland is a bilayered structure, comprising outer myoepithelial and inner luminal epithelial cells. Presented is a protocol to prepare organoids using differential trypsinization. This efficient method allows researchers to separately manipulate these two cell types to explore questions concerning their roles in mammary gland form and function.

Generierung von Mosaik-Mammary-Organoiden durch Differential-Trypsinisierung

Organoids offer self-organizing, three-dimensional tissue structures that recapitulate physiological processes in the convenience of a dish. The murine ...

Entwicklungsbiologie

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple method for the immune detection of proteins, the mouse lactating mammary gland being taken as an example. A protocol for the preparation of the tissue samples, especially concerning the dissection of mouse mammary gland, tissue fixation and frozen tissue sectioning, are detailed. A standard protocol to perform indirect immunofluorescence, including an optional antigen retrieval step, is also presented. The observation of the labeled tissue sections as well as image acquisition and post-treatments are also stated. This procedure gives a full overview, from the collection of animal tissue to the cellular localization of a protein. Although this general method can be applied to other tissue samples, it should be adapted to each tissue/primary antibody couple studied.

The indirect immunofluorescence protocol described in this article allows the detection and the localization of proteins in the mouse mammary gland. A complete method is given to prepare mammary gland samples, to perform immunohistochemistry, to image the tissue sections by fluorescence microscopy, and to reconstruct images.

Die indirekte Immunfluoreszenz auf Gefrierschnitte von Mäusemilchdrüse

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal architecture. Here, a small pocket below the skin was created using Mayo scissors, allowing separation of the glands within the subcutaneous tissue from the underlying peritoneum. Visualization of the glands was aided by the use of 3.5x-R surgical micro loupes. The pelt was inverted and pinned back allowing identification of the intact mammary fat pads. Each of the #4 abdominal glands was bluntly dissected by sliding the scalpel blade laterally between the subcutaneous layer and the glands. Immediately post-harvest, glands were placed in 10% neutral buffered formalin for subsequent tissue processing. Excision of the entire gland is advantageous because it primarily eliminates the risk of excluding important tissue-wide interactions between ductal epithelial cells and other microenvironmental cellular populations that could be missed in a partial biopsy. One drawback of the methodology is the use of serial sections from fixed tissues which limits analyses of ductal morphogenesis and protein expression to discrete locations within the gland. As such, changes in ductal architecture and protein expression in 3 dimensions (3D) is not readily obtainable. Overall, the technique is applicable to studies requiring whole intact murine mammary glands for downstream investigations such as developmental ductal morphogenesis or breast cancer.

Here, we present a protocol for the isolation of whole, intact mouse mammary glands to investigate extracellular matrix (ECM) expression and ductal morphology. Mouse #4 abdominal glands were extracted from 8-10 week old female nulliparous mice, fixed in neutral buffered formalin, sectioned and stained using immunohistochemistry for ECM proteins.

Isolierung von intakt, ganze Maus Milchdrüsen zur Analyse der extrazellulären Matrix Ausdruck und Drüse Morphologie

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...