وتم تمويل هذه الدراسات من جانب والمنح CIHR CBCRA لDWL. وقد تم تمويل الملكية الفكرية من خلال المنح الدراسية من CIHR - STP ، وFRSQ CIHR. وقد تم تمويل عن طريق المنح الدراسية MKGS معرض النفط والغاز وCIHR STP. المؤلفان بالشكر كيفن البر لمساعدته مع تكاثر الماوس.

1. الغدة الثديية تشريح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء باستخدام الماوس CO 2 الاستنشاق. تجنب التفكك عنق الرحم إذا كان ذلك ممكنا لأنه قد يؤدي إلى تلف الأوعية الدموية الرئيسية في الرقبة وتؤدي إلى تراكم الدم حول الغدد الثديية ، وجعل تشريح أكثر صعوبة. ومع ذلك ، إذا معايير أخرى وسيتم تقييمها في الماوس نفسه ، مثل مستويات الدم من الأوكسيتوسين ، قد أساليب القتل الرحيم بديل يكون من الضروري ، على الرغم من يجب أن يتم تقييم ذلك عن طريق IACUC الخاص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على رغوة البوليسترين ملفوفة في احباط ، ووضع الماوس على ظهرها ونشر أطرافه الأربعة. دبوس بقوة جميع الأطراف الأربعة باستخدام الإبر قياس 16-20 (الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رذاذ الماوس بسخاء مع الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط ، سحب ما يصل للجلد البطن في خط الوسط وجعل شق صغير مع مقص حاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدءا من شق ، وقطع الجلد تصل إلى عنق الحيوان مع تجنب ثقب تجاويف البطن أو الصدر (1B الشكل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الجلد على الأرجل الأمامية إلى شق خط الوسط ، مما أدى إلى &quot;شكل Y&quot; (1B الشكل). قطع الجلد على أطرافه الخلفية بنفس الطريقة (الشكل 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط مرقئ ، بلطف قشر الجلد في البطن والصدر ، إلى جانب الماوس. إذا لزم الأمر ، وقطع النسيج بلطف الموصول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح البشرة للرغوة البوليسترين باستخدام إبر عيار 16 إلى 20 فضح الغدد الثديية التي تعلق على السفلي من الجلد. المضي قدما واستكمال جانب واحد في وقت واحد (الشكل 1C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط ، ترفع بلطف الغدة الثديية لخفض الفائدة وبين الغدة والجلد مع مقص حاد الصغيرة ، بدءا من الخارج في اتجاه العمود الفقري للحيوان. تأكد من قطع بعناية ، حتى لا قطعة من الجلد أو العضلات تظل على الغدة. يمكن إزالة جميع الغدد الثديية (الشكل 1) باستخدام هذا البروتوكول ، ولكن الغدد الثديية في البطن (# 4) هي الأفضل لتركيب بأكملها. والثاني 2 و 3 الغدد الثالثة بعض العضلات interdigitated وبينما يمكن استخدامها لتحميل كامل والأنسجة ، لأنها قد لا تكون ملائمة لجميع التحليلات. </li></ol> 2. جبل بأكمله <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الأقل قبل يوم واحد لتشريح ، وإعداد القرمز حل الشب عن طريق إذابة 1g من القرمز و2.5G من كبريتات الالومنيوم البوتاسيوم في 500 مل من الماء المقطر ، ويغلي لمدة 20 دقيقة في دورق مخروطي 1 لتر. ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل من الماء. التصفية من خلال ورقة Whatman وإضافة كمية صغيرة من الثيمول (الحبوب قليلة) كمادة حافظة. الثلاجة. بعد التلوين ، ويمكن سكب اللون القرمزي حل الشب مرة أخرى إلى الزجاجة الأسهم وإعادة استخدامها مرات عديدة على مدى عدة أسابيع. جعل الحل الطازجة عندما يصبح لون خافت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد استئصال الغدة الثديية من الماوس (الخطوة 1) ، وانتشرت بشكل مباشر على شريحة زجاجية. محاولة لتمهيدها قدر الإمكان ، والحفاظ على الشكل الأصلي في الموقع. والغدة عصا على الشريحة لطيف عندما امتدت بشكل صحيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإصلاح الغدة بغمر ذلك ، على الشريحة ، في تثبيتي في Carnoy (100 ٪ EtOH والكلوروفورم وحمض الخليك الجليدية ؛ 6:03:01) لمدة 4 ساعات في غطاء الدخان في درجة حرارة الغرفة في وعاء. علما أن الآخرين قد استخدمت 2 ساعة وهو ما يبدو أن تكون كافية. بدلا من ذلك ، يمكن أيضا أن تكون ثابتة الغدد عند 4 درجات مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل في الإيثانول 70 ٪ لمدة 15 دقيقة. ثم ، ترطيب تدريجيا في الماء عن طريق إزالة نصف الحل الإيثانول من الجرة واستبدالها DDH 2 O. احتضان لمدة 5 دقائق. كرر 3 مرات. بدلا من ذلك ، استخدم 70 ٪ -- 35 ٪ -- 15 ٪ -- الايثانول والمياه الحمامات لمدة 5 دقائق لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف في الماء المقطر لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار في الشب القرمز بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة. وتجدر الإشارة إلى أن تلطيخ قد يستغرق وقتا أطول حسب سمك للغدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة اللون القرمزي الشب وصمة عار لإعادة يذوى تدريجيا من خلال نسيج ملون الحمامات الايثانول التسلسلي (50 ٪ ، 70 ٪ ، 95 ٪ و 100 ٪) لمدة 5 دقائق لكل منها واضحة في الزيلين ، أو في البديل غير سامة مثل Histo واضحة ، بين عشية وضحاها. ربما كل من الجفاف وتبادل المعلومات يتطلب وقتا أطول أيضا حضانات سمكا مع العينات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغدة الثديية تزج في ساليسيلات الميثيل. يمكن أن تبقى الغدد الثديية في ساليسيلات الميثيل في غطاء الدخان حتى الصور هي على استعداد لاتخاذها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن التقاط صور في غطاء الدخان مع الكاميرا الرقمية العادية وضعه على حامل ثلاثي (استخدام &quot;ماكرو&quot; وظيفة إن وجدت) ، وذلك بوضع الشرائح على منضدة خفيفة. استخدام مجهر تشريح للتضخم أعلى. بدلا من ذلك ، يمكن أن شنت وسائل الإعلام في الغدد الثديية مثل Permount (بعد الخطوة 2.7) السماح لاتخاذ الصور الكيميائية خارج غطاء الدخان على أي منصة التصوير توفير يتصاعد هي رقيقة بما فيه الكفاية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل تحديد الغدة الثديية التنمية باستخدام جبل بأكمله ، والقياسات مثل عدد من تشعبات (أو فروع جانبية) على طول أجزاء من القنوات ، وطول القنوات الرئيسية ، أو نسبة إلى منطقة الظهارية الأنسجة الدهنية يمكن تقييمها. أخيرا ، وبعد التصوير documenيمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ من tation ، كامل الغدة الثديية في جبل لsectioning البارافين وتلطيخ النسيجية التقليدية. </li></ol> 3. الأوكسيتوسين بفعل قذف اللبن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الجراء من السد بعد أن تم إطعامها. 1 ساعة الانتظار قبل تنفيذ الفحص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضحية الام وفضح الغدد الثديية كما هو موضح من قبل (الخطوات 1،1-1،8) ، دون إزالتها من الحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء الفحص عن طريق إسقاط بالتساوي إما الحل أو برنامج تلفزيوني الأوكسيتوسين مباشرة على الغدة الثديية من الفائدة ، وذلك باستخدام ماصة نقل. ويمكن استخدام جرعات كبيرة من الطيف ، وعادة ما تستخدم ~ 8 بيكوغرام / مل (الجرعة الفسيولوجية). ومع ذلك ، يمكن استخدام عالية غير جرعات الفيزيولوجي (حتى 1 ملغ / مل) لضمان عدم وجود استجابة الماوس في النماذج المعدلة وراثيا. لهذا الإجراء ، فمن المستحسن استخدام الصدري (# 2-3) الغدد ، باستخدام جانب واحد كعنصر تحكم (تتعرض لPBS) والجانب الآخر لاختبار قذف الحليب (الأوكسيتوسين التعرض). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 1 دقيقة وإزالة حل عن طريق الشفط بعناية مع ماصة نقل. يمكن رصد دخول الحليب في القنوات من خلال تسجيل شريط فيديو ، أو التقاط الصور قبل وبعد التعرض لبرنامج تلفزيوني أو الأوكسيتوسين. </li></ol> 4. ممثل النتائج : في جبل كلها جيدة ، وينتشر بشكل جيد في الغدة الثديية ، ويمكن ملاحظتها بسهولة القنوات ظهارة (الشكل 2A). إذا كانت الغدة ليس على ما يرام الانتشار ، يمكن أن يرفع جزئيا أو كليا من الشريحة عند وضعه في حل مثبت. وسوف تصبح غدة ثم الثابت وغير صالحة للاستعمال (2B الشكل). وبالمثل ، إذا لم يتم تشريح الغدة جيدا ، وإما جزء من ظهارة يمكن مفقودة (الشكل 2C) أو الأجزاء المتبقية من الجلد أو العضلات البطنية تتداخل مع تحليل للغدة (الشكل 2D). لمقايسة الأوكسيتوسين ، من المهم للفصل بين الجراء ترضع من السد لنفس المقدار من الوقت في كل مناسبة. في هذه الطريقة ، سيكون عليك التأكد من عدم وجود الحليب أو كميات صغيرة من الحليب موجود في القنوات قبل التعرض الأوكسيتوسين ، ولكن أيضا أن الحليب غير كافية موجودة في الحويصلات الهوائية التي يمكن إخراجه في القنوات التي تقلصات myoepithelial (الشكل 3A) . إذا أزيلت الجراء قريبا جدا ، ويمكن أن تتراكم في الحليب والحويصلات الهوائية في القنوات مما يجعل تأثير الأوكسيتوسين الصعب رصد (الشكل 3B). بدلا من ذلك ، إذا تم تنفيذ هذه التجربة في وقت مبكر جدا بعد ازالة الجرو ، والحليب لا نملك الوقت لتتراكم في الحويصلات الرئوية والأوكسيتوسين بفعل انكماش خلايا myoepithelial لن تؤدي ما يكفي من الحليب في إطلاق القنوات التي يجب مراعاتها (الشكل 3C). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. تشريح الفأر الغدة الثديية. دبوس الماوس على ظهرها من أطرافه الأربعة (A). قطع الجلد الأول من البطن في الرقبة. ثم جعل شقوق عمودية من وسط البطن إلى كل الأطراف ، كما يتضح من الخط المنقط (B). بلطف قشر الجلد على جانبي الحيوان ويعلقون عليه ، وفضح الغدد الثديية (C). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الشكل 2. ماوس كله الغدة الثديية جبل. ويلاحظ بسهولة القنوات ظهارة (الأسهم) والعقدة الليمفاوية (رأس السهم) في جبل الغدة الثديية لطيف كامل من انتشار الغدة # 4 (A). قد تصبح منفصلة غدة ثديية من انتشار سوء الشريحة وانهار ، مما يجعلها غير صالحة للاستعمال (باء) يمكن أن الغدة الثديية رفعه غير صحيح اما أن يكون الأجزاء الناقصة (C) أو قطعة من الجلد أو العضلات الباقية (D). علما أن الثاني 2 و 3 الغدد الثالثة وinterdigitated العضلات ، ولكن لا يزال من الممكن استخدامها لتحميل كامل أو الأنسجة. <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig3.jpg" alt="الشكل 3"/> الشكل 3. ويمكن ملاحظة الأوكسيتوسين بفعل طرد قنوات الحليب في الظهارة (الأسهم) بعد التعرض الأوكسيتوسين (A). ومع ذلك ، إذا تم شغلها بالفعل مع قنوات الحليب (الأسهم) في بداية الفحص نتيجة لفترة طويلة بشكل غير لائق للمشاركة الكمون بعد الرضاعة من الجراء ، وتراكم المزيد من الحليب في القنوات (الأسهم) بعد التعرض الأوكسيتوسين الصعب مراقبة (B). بدلا من ذلك ، فإن فترة كمون قصيرة بعد الرضاعة الجرو عدم السماح لتراكم ما يكفي من الحليب في الحويصلات الهوائية التي يتعين مراعاتها في القنوات بشكل صحيح (الأسهم) بعد التعرض الأوكسيتوسين (C). أخذت الصور قبل وبعد التعرض الأوكسيتوسين باستخدام كاميرا رقمية (سايبر ، سوني). <img src="/files/ftp_upload/2828/2828fig4.jpg" alt="الشكل 4"/> الشكل 4. التمثيل التخطيطي للفحوصات كاملة ومعالجة تصاعد الأوكسيتوسين.

<ol>
	<li>Geddes, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+the+lactating+breast:+the+latest+anatomy+research.">Inside the lactating breast: the latest anatomy research.</a> J Midwifery Womens Health. 52, 556-556 (2007).</li><li>Sternlicht, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development:+the+cues+that+regulate+ductal+branching+morphogenesis.">Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis.</a> Breast Cancer Res. 8, 201-201 (2006).</li><li>Silberstein, G. B., Flanders, K. C., Roberts, A. B., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+mammary+morphogenesis:+evidence+for+extracellular+matrix-mediated+inhibition+of+ductal+budding+by+transforming+growth+factor-beta+1.">Regulation of mammary morphogenesis: evidence for extracellular matrix-mediated inhibition of ductal budding by transforming growth factor-beta 1.</a> Dev Biol. 152, 354-354 (1992).</li><li>Daniel, C. W., Robinson, S., Silberstein, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+TGF-beta+in+patterning+and+growth+of+the+mammary+ductal+tree.">The role of TGF-beta in patterning and growth of the mammary ductal tree.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 1, 331-331 (1996).</li><li>Neville, M. C., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mammary gland : development, regulation, and function. , (1987).</li><li>Oakes, S. R., Hilton, H. N., Ormandy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+alveolar+switch:+coordinating+the+proliferative+cues+and+cell+fate+decisions+that+drive+the+formation+of+lobuloalveoli+from+ductal+epithelium.">The alveolar switch: coordinating the proliferative cues and cell fate decisions that drive the formation of lobuloalveoli from ductal epithelium.</a> Breast Cancer Res. 8, 207-207 (2006).</li><li>Anderson, S. M., Rudolph, M. C., McManaman, J. L., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+stages+in+mammary+gland+development.+Secretory+activation+in+the+mammary+gland:+it's+not+just+about+milk+protein+synthesis!.">Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: it's not just about milk protein synthesis!.</a> Breast Cancer Res. 9, 204-204 (2007).</li><li>Reversi, A., Cassoni, P., Chini, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+receptor+signaling+in+myoepithelial+and+cancer+cells.">Oxytocin receptor signaling in myoepithelial and cancer cells.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 10, 221-221 (2005).</li><li>Haslam, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+to+cell+interactions+and+normal+mammary+gland+function.">Cell to cell interactions and normal mammary gland function.</a> J Dairy Sci. 71, 2843-2843 (1988).</li><li>Plante, I., Laird, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+levels+of+connexin43+result+in+impaired+development+of+the+mammary+gland+in+a+mouse+model+of+oculodentodigital+dysplasia.">Decreased levels of connexin43 result in impaired development of the mammary gland in a mouse model of oculodentodigital dysplasia.</a> Dev Biol. 318, 312-312 (2008).</li><li>Talhouk, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterocellular+interaction+enhances+recruitment+of+alpha+and+beta-catenins+and+ZO-2+into+functional+gap-junction+complexes+and+induces+gap+junction-dependant+differentiation+of+mammary+epithelial+cells.">Heterocellular interaction enhances recruitment of alpha and beta-catenins and ZO-2 into functional gap-junction complexes and induces gap junction-dependant differentiation of mammary epithelial cells.</a> Exp Cell Res. 314, 3275-3275 (2008).</li><li>Palmer, C. A., Neville, M. C., Anderson, S. M., McManaman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lactation+defects+in+transgenic+mice.">Analysis of lactation defects in transgenic mice.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 269-269 (2006).</li><li>Howlin, J., McBryan, J., Martin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pubertal+mammary+gland+development:+insights+from+mouse+models.">Pubertal mammary gland development: insights from mouse models.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 11, 283-283 (2006).</li><li>You, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+mammary+gland+development+in+prepubertal+male+rats+exposed+to+genistein+and+methoxychlor.">Modulation of mammary gland development in prepubertal male rats exposed to genistein and methoxychlor.</a> Toxicol Sci. 66, 216-216 (2002).</li><li>Grill, C. J., Cohick, W. S., Sherman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postpubertal+development+of+the+rat+mammary+gland+is+preserved+during+iron+deficiency.">Postpubertal development of the rat mammary gland is preserved during iron deficiency.</a> J Nutr. 131, 1444-1444 (2001).</li><li>Hennighausen, L., Robinson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+globally,+act+locally:+the+making+of+a+mouse+mammary+gland.">Think globally, act locally: the making of a mouse mammary gland.</a> Genes Dev. 12, 449-449 (1998).</li><li>Aupperlee, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+differences+in+the+mechanisms+of+progesterone+regulation+of+murine+mammary+gland+development.">Strain-specific differences in the mechanisms of progesterone regulation of murine mammary gland development.</a> Endocrinology. 150, 1485-1485 (2009).</li><li>Montero Girard, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+estrogen+receptor-alpha+and+progesterone+receptor+A+expression+with+hormonal+mammary+carcinogenesis:+role+of+the+host+microenvironment.">Association of estrogen receptor-alpha and progesterone receptor A expression with hormonal mammary carcinogenesis: role of the host microenvironment.</a> Breast Cancer Res. 9, R22-R22 (2007).</li><li>Moore, D. M., Vogl, A. W., Baimbridge, K., Emerman, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+calcium+on+oxytocin-induced+contraction+of+mammary+gland+myoepithelium+as+visualized+by+NBD-phallacidin.">Effect of calcium on oxytocin-induced contraction of mammary gland myoepithelium as visualized by NBD-phallacidin.</a> J Cell Sci. 88, 563-563 (1987).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وبإحكام الغدة الثديية التنمية وظيفة مدبرة. فئرانا معدلة وراثيا قد الميناء طفرات الجينات التي يمكن أن تعوق التنمية الغدة الثديية وظيفة تسليط الضوء على الحاجة إلى تقييم العمارة الغدة 13،12. لا يمكن أن يؤديها تصاعد كله على النحو المبين في هذه المادة في جميع مراحل التنمية الغدة الثديية. عادة ، يتم تقييم تطور ظهارة في بداية سن البلوغ (~ 4 أسابيع من العمر) ، في منتصف سن البلوغ (~ 6 أسابيع من العمر) وبعد سن البلوغ (~ 10-12 أسابيع من العمر) 2،10. في هذه المراحل ، وكمية من قناة متفرعة ، يمكن تحديد عدد من البراعم الطرفية ونهاية طول القنوات من أجل قياس درجة تطور الغدة 14،15. وبالمثل ، عادة ما يتم تحديده alveologenesis (تطوير الحويصلات أثناء الحمل) في 2-3 نقاط خلال فترة الحمل ، ويمكن أيضا أن التغيرات الهيكلية التي تحدث أثناء الرضاعة ، ويمكن ملاحظة أوب وكميا في كامل الاستعدادات الغدة جبل 16. ومع ذلك ، يمكن تقدير حجم يتصاعد كلها من أواخر الفئران الحوامل والمرضعات يكون صعبا نظرا لكثافة الأنسجة. فمن المستحسن أن الجمع بين جبل كامل مع التحليلات النسيجية ، وخاصة لتلك المراحل 12. النسيجي للتقييم أكثر تفصيلا ، يمكن إزالة الغدد الثديية باستخدام بروتوكول نفسه لاحظت في هذا التقرير ، ثابتة في الفورمالين وتعرض لالهيماتوكسيلين وتلطيخ يوزين. يمكن تحميل كامل أيضا جزءا لا يتجزأ من البارافين وتستخدم لمرة واحدة الأنسجة وقد تم إجراء التصوير. لكل من التقنيات ، وتشريح السليم والدقيق للغدد الثدي أمر بالغ الأهمية. إذا كان يجري تقييم فئرانا معدلة وراثيا ، فمن المهم للمقارنة بين هذه الفئران للفئران الأقرب الرقابة الممكنة ، لأن سلالات مختلفة يمكن أن تظهر الماوس الجانبية أو متغير تشعبات التعليم العالي ، أو alveologenesis 17. على سبيل المثال ، عند مقارنة BALB / ج الفئران ، C57BL / 6 الفئران يحمل الجانب وخفض المتفرعة alveologenesis 17،18. لذا ، لا ينبغي BALB / ج الفئران أن تستخدم كعنصر تحكم لتوليد فئران معدلة وراثيا على خلفية C57BL / 6 الماوس. بينما تصاعد كله رؤية ثاقبة العيوب الجسيمة التنموية ، قد وظيفة الغدة الثديية تحتاج أيضا إلى تقييم استخدام تقنيات تكميلية أخرى. الوظيفة الرئيسية للغدة الثديية في إنتاج وتوفير الحليب لالجراء. هذه العمليات لا تتطلب سوى تمايز الخلايا السليمة إفرازي اللمعية خلال فترة الحمل ، ولكن أيضا تقلصات تنسيق وكفاءة الخلايا myoepithelial حول الحويصلات الهوائية وعلى طول قنوات لنقل الحليب 8 بينما يمكن تقييم إنتاج الحليب والجودة من خلال التقييم التحليلي لتكوين الحليب 12 ، من بين أمور أخرى ، وأسباب ضعف تسليم الحليب إلى الجراء يصعب تقييمها. في الواقع ، يمكن ربط لاحظ عدم وجود الحليب في بطون الصغار حديثي الولادة إلى العديد من العيوب مثل ضعف إنتاج الحليب ، وعدم القدرة من الجراء ليرضع ، والعيوب السلوكية للأم أو عيوب قذف الحليب. طريقة واحدة لتقييم نقل الألبان والعيوب طرد من الحويصلات الهوائية في القنوات هو للحث على تقلصات myoepithelial باستخدام الأوكسيتوسين ، كما هو موضح في هذه المقالة. ومع ذلك ، القياس الكمي لنقل الحليب وطرد من الصعب منذ تأثير الأوكسيتوسين خارج الحي سريع (عادة يمكن ملاحظتها في قنوات الحليب في حدود 1 في الدقيقة بعد التعرض) ، حتى عند استخدام جرعات منخفضة من الأوكسيتوسين الفسيولوجية 10. وبالتالي ، قد لا اختلاف طفيف في كفاءة طرد الحليب بين خطوط الماوس اثنين يمكن ملاحظتها باستخدام هذه التقنية. قياس هذا الرد ولكن واحدة من الصعب نصف الكمية وسيلة لتقييم الأوكسيتوسين بفعل طرد الحليب هو دراسة استجابة في إطار مجموعة من الجرعات وتحديد وقت العلاج اللازم لملء قنوات مع الحليب. . في جميع الحالات ، والاتساق في فترة الانتظار بين الجرو الرضاعة الماضي إلى بداية الفحص أمر بالغ الأهمية. عن تقدير أكثر دقة من الرضاعة أو التعرف على الحليب عيب قذف ، ويمكن استكمال هذا الأسلوب من قبل الكمي للبروتينات الحليب ومسارات الإشارات ، مثل الكازين - β وStat5 ، على التوالي ، أو انكماش في المختبر على خلايا myoepithelial الأوكسيتوسين التعرض 19 . باختصار ، نماذج الماوس المعدلة وراثيا هي مهمة وتستخدم على نطاق واسع لدراسة ظيفة الغدة الثديية والتنمية ، وتقييم دور الجينات الرئيسية في هذه العمليات. يمكن أن تكون بنية ظهارة الغدة الثديية ملاحظتها بسهولة في الغدد رفعه بشكل صحيح باستخدام جبل كامل في جميع مراحل التنمية. بينما العيوب التي تؤدي إلى سوء التغذية الرضاعة الجراء يمكن أن يكون لها أصول كثيرة ، يمكن تقييم نقص في الحليب بنسبة طرد الأوكسيتوسين بفعل الانكماش المتزامنة من الخلايا myoepithelial في الموقع. معا ، ويمكن لهذه التقنيات اثنين (الشكل 4) تعطي معلومات مهمة عن تأثير جين معين مؤتةستعقد أو الحذف على التنمية الغدة الثديية وظيفة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> الكاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th></tr><tr><td> اللون القرمزي </td><td> سيغما الدريخ </td><td> C1022 </td></tr><tr><td> الألومنيوم كبريتات البوتاسيوم </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A6435 </td></tr><tr><td> الثيمول </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T0501 </td></tr><tr><td> ساليسيلات الميثيل </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M6752 </td></tr><tr><td> الأوكسيتوسين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> O3251 </td></tr></tbody></table>

evaluation of mammary gland development and function in mouse models

وتتألف الغدة الثديية البشرية من فصوص 15-20 التي تفرز الحليب في افتتاح نظام القناة المتفرعة في الحلمة. هذه الفصوص هي نفسها تتكون من عدد من وحدات محطة مفصص اصق مصنوع من الحويصلات الإفرازية والقنوات تتلاقى 1. في الفئران ، ولوحظ بنية مماثلة في الحمل التي يتم تتخللها قنوات والحويصلات الهوائية داخل سدى النسيج الضام. ظهارة الماوس الغدة الثديية هي شجرة من القنوات مثل نظام يتألف من طبقتين من الخلايا ، طبقة داخلية من الخلايا اللمعية محاطة طبقة خارجية من الخلايا التي تدل myoepithelial حدود غشاء سفلي 2. عند الولادة ، إلا شجرة اولى الأقنية هو الحاضر ، تتألف من الفروع الأساسية لاصق و 15-20. استطالة فرع وبدء التضخيم في بداية سن البلوغ ، وحوالي 4 أسابيع من العمر ، تحت تأثير الهرمونات 3،4،5. في 10 أسابيع ، وغزت معظم سدى بواسطة نظام معقد من القنوات التي سيخضع دورات متفرعة والانحدار في كل دورة ودقي الحمل حتى 2. في بداية الحمل ، والمرحلة الثانية تبدأ من التنمية ، مع انتشار والتفريق بين الظهارة على شكل العنب على شكل هياكل تسمى الحويصلات الإفرازية الحليب 6،7. بعد الولادة والرضاعة طوال ، يتم إنتاج الحليب بنسبة الخلايا الإفرازية اللمعية وتخزينها داخل تجويف الحويصلات الهوائية. الأوكسيتوسين الإفراج عنهم ، من خلال حفز المنعكس العصبي الناجم عن الرضاعة من الجراء ، يحرض تقلصات متزامنة من الخلايا myoepithelial حول الحويصلات الهوائية ، وعلى امتداد القنوات ، مما يسمح ليتم نقلها عن طريق القنوات الحليب إلى الحلمة حيث تصبح متاحة للالجراء 8. وبإحكام الغدة الثديية التنمية ، والتمايز وظيفة مدبرة وتتطلب ليس فقط التفاعلات بين ظهارة وسدى ، ولكن أيضا بين الخلايا وmyoepithelial اللمعية داخل ظهارة 9،10،11. وبالتالي ، قد الطفرات في الجينات المتورطة في العديد من هذه التفاعلات إما استطالة يضعف الأقنية خلال تشكيل سن البلوغ أو الحويصلات الهوائية أثناء الحمل في سن مبكرة ، والتمايز في أواخر الحمل ويؤدي إلى تفعيل إفرازي الرضاعة 12،13. في هذه المقالة ، ونحن تصف كيفية تشريح الغدد الثديية الماوس وتقييم نموهم يتصاعد به كله. كما تبين لنا كيفية تقييم تقلصات myoepithelial وقذف الحليب باستخدام السابقين فيفو الأوكسيتوسين المستندة إلى مقايسة وظيفية. ويمكن بالتالي تأثير طفرة الجين على التنمية وظيفة الغدة الثديية يتحدد في الموقع قبل تنفيذ هذه التقنيات اثنين في السيطرة على الفئران الطافرة والبرية من نوع.

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models at JoVE.com

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

هذه الطريقة توضح كيفية تشريح الثدي وتقييم وتطوير الغدة ظيفة من الفئران. ويتم تقييم الغدد الثديية رفعه لدرجة تطور استخدام جبل كامل بينما يتم تقييم قذف الحليب باستخدام الأوكسيتوسين المستندة إلى انكماش الخلية myoepithelial مقايسة.

تقييم التنمية وظيفة الغدة الثديية في نماذج الماوس

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

evaluation-of-mammary-gland-development-and-function-in-mouse-models

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

37.1K Views.  University of Western Ontario. هذه الطريقة توضح كيفية تشريح الثدي وتقييم وتطوير الغدة ظيفة من الفئران. ويتم تقييم الغدد الثديية رفعه لدرجة تطور استخدام جبل كامل بينما يتم تقييم قذف الحليب باستخدام الأوكسيتوسين المستندة إلى انكماش الخلية myoepithelial مقايسة.

Video: Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system is valuable for the pre-clinical in vivo evaluation of putative antitumor compounds.
The 4T1 cell line has been engineered to constitutively express the firefly luciferase gene (luc2). When mice carrying 4T1-luc2 tumors are injected with Luciferin the tumors emit a visual light signal that can be monitored using a sensitive optical imaging system like the IVIS Spectrum. The photon flux from the tumor is proportional to the number of light emitting cells and the signal can be measured to monitor tumor growth and development. IVIS is calibrated to enable absolute quantitation of the bioluminescent signal and longitudinal studies can be performed over many months and over several orders of signal magnitude without compromising the quantitative result.
Tumor growth can be monitored for several days by bioluminescence before the tumor size becomes palpable or measurable by traditional physical means. This rapid monitoring can provide insight into early events in tumor development or lead to shorter experimental procedures.
Tumor cell death and necrosis due to hypoxia or drug treatment is indicated early by a reduction in the bioluminescent signal. This cell death might not be accompanied by a reduction in tumor size as measured by physical means. The ability to see early events in tumor necrosis has significant impact on the selection and development of therapeutic agents.
Quantitative imaging of tumor growth using IVIS provides precise quantitation and accelerates the experimental process to generate results.

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Mammary tumor cells expressing luciferase are implanted subcutaneously in mice and visualized using optical imaging to monitor tumor growth and development non-invasively in a longitudinal study.

في التصوير Bioluminescent المجراة من أورام الثدي باستخدام IVIS الطيف

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland undergoes extensive modeling and re-modeling, alter susceptibility to carcinogen-induced mammary tumors. Similar findings have been described in humans: for example, high birthweight increases later risk of developing breast cancer, and dietary intake of soy during childhood decreases breast cancer risk. It is thought that these prenatal and postnatal dietary modifications induce persistent morphological changes in the mammary gland that in turn modify breast cancer risk later in life. These morphological changes likely reflect epigenetic modifications, such as changes in DNA methylation, histones and miRNA expression that then affect gene transcription . In this article we describe how changes in mammary gland morphology can predict mammary cancer risk in rats. Our protocol specifically describes how to dissect and remove the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology according to three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use the data to predict risk of developing mammary cancer.

Our protocol describes how to dissect the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology using three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use these results to predict mammary cancer risk in rats which were exposed to dietary modifications in utero or during prepuberty.

التغيرات في الغدة الثديية المورفولوجيا واحتمال الاصابة بسرطان الثدي في الفئران

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

عزل الخلايا الجذعية ماوس اللعابية الغدة

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies. Many of these valuable animals exist only as live animals, with no backup plan in case of emergency. Cryopreservation of embryos can provide this backup, but is costly, can be a lengthy procedure, and generally requires a large number of animals for success. Since the discovery that mouse sperm can be successfully cryopreserved with a basic cryoprotective agent (CPA) consisting of 18&#37; raffinose and 3&#37; skim milk, sperm cryopreservation has become an acceptable and cost-effective procedure for archiving, distributing and recovery of these valuable strains.
 Here we demonstrate a newly developed I&bull;Cryo kit for mouse sperm cryopreservation. Sperm from five commonly-used strains of inbred mice were frozen using this kit and then recovered. Higher protection ratios of sperm motility (&gt; 60&#37;) and rapid progressive motility (&gt; 45&#37;) compared to the control (basic CPA) were seen for sperm frozen with this kit in 5 inbred mouse strains. Two cell stage embryo development after IVF with the recovered sperm was improved consistently in all 5 mouse strains examined. Over a 1.5 year period, 49 GM mouse lines were archived by sperm cryopreservation with the I&bull;Cryo kit and later recovered by IVF.

Here we demonstrate the newly developed I&#x2022;Cryo kit for mouse sperm cryopreservation. Two-cell stage embryo development with frozen-thawed sperm was improved consistently in 5 mouse strains with the use of this kit. Over a 1.5 year period, 49 genetically modified mouse lines were archived by sperm cryopreservation with the I&#x2022;Cryo kit and later successfully recovered by IVF.

الماوس حفظ بالبرودة والانتعاش الحيوانات المنوية باستخدام · لقد كرو كيت

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of genes within the mammary epithelium has been difficult to achieve due to the lack of appropriate targeting molecules that are independent of developmental stages such as pregnancy and lactation. Herein, we describe a technique for localized delivery of reagents to the mammary gland at any stage in adulthood via intraductal injection into the nipples of mice. The injections can be performed on live mice, under anesthesia, and allow for a non-invasive and localized drug delivery to the mammary gland. Furthermore, the injections can be repeated over several months without damaging the nipple. Vital dyes such as Evans Blue are very helpful to learn the technique. Upon intraductal injection of the blue dye, the entire ductal tree becomes visible to the eye. Furthermore, fluorescently labeled reagents also allow for visualization and distribution within the mammary gland. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents, and small molecules.

A protocol for the non-invasive intraductal delivery of aqueous reagents to the mouse mammary gland is described. The method takes advantage of localized injection into the nipples of mammary glands targeting mammary ducts specifically. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents and small molecules.

حقن ينترادوكتال لتسليم المخدرات المترجمة إلى ماوس الغدة الثديية

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of transporters. The phosphorylation and nucleotide dependent chloride channel activity of CFTR has been frequently studied in whole cell systems and as single channels in excised membrane patches. Many Cystic Fibrosis-causing mutations have been shown to alter this activity. While a small number of purification protocols have been published, a fast reconstitution method that retains channel activity and a suitable method for studying population channel activity in a purified system have been lacking. Here rapid methods are described for purification and functional reconstitution of the full-length CFTR protein into proteoliposomes of defined lipid composition that retains activity as a regulated halide channel. This reconstitution method together with a novel flux-based assay of channel activity is a suitable system for studying the population channel properties of wild type CFTR and the disease-causing mutants F508del- and G551D-CFTR. Specifically, the method has utility in studying the direct effects of phosphorylation, nucleotides and small molecules such as potentiators and inhibitors on CFTR channel activity. The methods are also amenable to the study of other membrane channels/transporters for anionic substrates.

Described here is a rapid and effective procedure for functional reconstitution of purified wild-type and mutant CFTR protein that preserves activity for this chloride channel, which is defective in Cystic Fibrosis. Iodide efflux from reconstituted proteoliposomes mediated by CFTR allows studies of channel activity and the effects of small molecules.

إعادة إعماره الوظيفية وآخر قناة قياسات تنقية Wildtype والمسخ CFTR البروتين

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Evaluation of Zebrafish Kidney Function Using a Fluorescent Clearance Assay

The zebrafish embryo offers a tractable model to study organogenesis and model human genetic disease. Despite its relative simplicity, the zebrafish kidney develops and functions in almost the same way as humans. A major difference in the construction of the human kidney is the presence of millions of nephrons compared to the zebrafish that has only two. However, simplifying such a complex system into basic functional units has aided our understanding of how the kidney develops and operates. In zebrafish, the midline located glomerulus is responsible for the initial blood filtration into two pronephric tubules that diverge to run bilaterally down the embryonic axis before fusing to each other at the cloaca. The pronephric tubules are heavily populated by motile cilia that facilitate the movement of filtrate along the segmented tubule, allowing the exchange of various solutes before finally exiting via the cloaca2-4. Many genes responsible for CKD, including those related to ciliogenesis, have been studied in zebrafish5. However, a major draw back has been the difficulty in evaluating zebrafish kidney function after genetic manipulation. Traditional assays to measure kidney dysfunction in humans have proved non translational to zebrafish, mainly due to their aquatic environment and small size. For example, it is not physically possible to extract blood from embryonic staged fish for analysis of urea and creatinine content, as they are too small. In addition, zebrafish do not produce enough urine for testing on a simple proteinuria &#8216;dipstick&#8217;, which is often performed during initial patient examinations. We describe a fluorescent assay that utilizes the optical transparency of the zebrafish to quantitatively monitor the clearance of a fluorescent dye, over time, from the vasculature and out through the kidney, to give a read out of renal function1,6-9.

The zebrafish is a popular tool to model chronic kidney disease (CKD). However, their small size makes it impossible to evaluate renal function using traditional methods. We describe a fluorescent dye kidney clearance assay1 that allows quantitative analysis of zebrafish kidney function in CKD.

تقييم الزرد وظائف الكلى باستخدام التخليص الفحص الفلورسنت

The zebrafish embryo offers a tractable model to study organogenesis and model human genetic disease. Despite its relative simplicity, the zebrafish ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple method for the immune detection of proteins, the mouse lactating mammary gland being taken as an example. A protocol for the preparation of the tissue samples, especially concerning the dissection of mouse mammary gland, tissue fixation and frozen tissue sectioning, are detailed. A standard protocol to perform indirect immunofluorescence, including an optional antigen retrieval step, is also presented. The observation of the labeled tissue sections as well as image acquisition and post-treatments are also stated. This procedure gives a full overview, from the collection of animal tissue to the cellular localization of a protein. Although this general method can be applied to other tissue samples, it should be adapted to each tissue/primary antibody couple studied.

The indirect immunofluorescence protocol described in this article allows the detection and the localization of proteins in the mouse mammary gland. A complete method is given to prepare mammary gland samples, to perform immunohistochemistry, to image the tissue sections by fluorescence microscopy, and to reconstruct images.

المناعي غير المباشر على أقسام المجمدة من الماوس الغدة الثديية

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal architecture. Here, a small pocket below the skin was created using Mayo scissors, allowing separation of the glands within the subcutaneous tissue from the underlying peritoneum. Visualization of the glands was aided by the use of 3.5x-R surgical micro loupes. The pelt was inverted and pinned back allowing identification of the intact mammary fat pads. Each of the #4 abdominal glands was bluntly dissected by sliding the scalpel blade laterally between the subcutaneous layer and the glands. Immediately post-harvest, glands were placed in 10% neutral buffered formalin for subsequent tissue processing. Excision of the entire gland is advantageous because it primarily eliminates the risk of excluding important tissue-wide interactions between ductal epithelial cells and other microenvironmental cellular populations that could be missed in a partial biopsy. One drawback of the methodology is the use of serial sections from fixed tissues which limits analyses of ductal morphogenesis and protein expression to discrete locations within the gland. As such, changes in ductal architecture and protein expression in 3 dimensions (3D) is not readily obtainable. Overall, the technique is applicable to studies requiring whole intact murine mammary glands for downstream investigations such as developmental ductal morphogenesis or breast cancer.

Here, we present a protocol for the isolation of whole, intact mouse mammary glands to investigate extracellular matrix (ECM) expression and ductal morphology. Mouse #4 abdominal glands were extracted from 8-10 week old female nulliparous mice, fixed in neutral buffered formalin, sectioned and stained using immunohistochemistry for ECM proteins.

عزل الغدد الثديية الماوس سليمة، وكلها لتحليل التعبير المصفوفة خارج الخلية ومورفولوجية الغدة

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...