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Hier berichten wir über das Protokoll für die Herstellung von einer Nafion-beschichtet, Polyaniline funktionalisiert, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid Chemiresistive Mikro pH-Sensor. Diese Chemiresistor-basierte, Solid-State-Mikro-pH-Sensor erkennt pH-Wert-Änderungen in Echtzeit während Lactococcus Lactis Fermentationsprozess.
Hier berichten wir über das Engineering von einem Solid-State-Mikro pH-Sensor basiert auf Polyaniline funktionalisiert, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid (ERGO-PA). Elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid fungiert als leitende Schicht und Polyaniline als pH-Sensitive Schicht. Die pH-abhängige Leitfähigkeit des Polyaniline erfolgt durch doping Löcher während Protonierung und durch die dedoping Löcher während Deprotonierung. Wir fanden, dass eine Solid-State-ERGO-PA-Elektrode nicht als solche in Fermentationsprozessen funktionsfähig war. Elektrochemisch aktiven Spezies, die die Bakterien während der Gärung produzieren stören die Elektrode Antwort. Wir erfolgreich Nafion als protonenleitende Schicht über ERGO-PA. Die Nafion-beschichteten Elektroden (ERGO-PA-NA) zeigen eine gute Empfindlichkeit von 1,71 Ω/pH (pH 4 bis 9) für Chemiresistive Sensormessungen. Wir testeten die ERGO-PA-NA-Elektrode in Echtzeit in der Vergärung von Lactococcus Lactis. Während des Wachstums der L. Lactis, verändert der pH-Wert des Mediums von pH 7,2 pH 4,8 und den Widerstand der ERGO-PA-NA-Solid-State-Elektrode von 294.5 Ω in 288.6 Ω (5,9 Ω pro 2.4 pH-Einheit) geändert. Die pH-Reaktion der ERGO-PA-NA-Elektrode im Vergleich mit der Antwort von einem herkömmlichen Glas-basierten pH-Elektrode zeigt, dass Referenz-weniger Solid-State-Mikrosensor Arrays in eine mikrobiologische Fermentation erfolgreich operieren.
pH spielt eine wichtige Rolle in vielen chemischen und biologischen Prozessen. Selbst kleine Veränderungen in den pH-Wert ändern, den Prozess und das Ergebnis des Prozesses beeinträchtigen. Daher ist es notwendig, die Überwachung und Steuerung des pH-Wertes in jeder Phase der Experimente. Die Glas-basierten pH-Elektrode wird erfolgreich eingesetzt, pH in vielen chemischen und biologischen Prozessen zu überwachen obwohl der Einsatz von einer Glaselektrode mehrere Einschränkungen zur pH-Messung darstellt. Die Glas-basierten pH-Elektrode ist relativ groß, zerbrechlich, und kleine Leckagen des Elektrolyten in der Probe sind möglich. Darüber hinaus die Elektrode und die Elektronik sind relativ teuer, für Anwendungen in 96-Well-Screening Fermentationssysteme. Darüber hinaus die elektrochemischen Sensoren sind invasive und verbrauchen die Probe. Daher ist es vorteilhafter, nicht-invasive, Referenz-weniger Sensoren zu verwenden.
Heutzutage sind miniaturisierte Reaktionssysteme in viele chemische Technik und Biotechnologieanwendungen begünstigt, da diese Mikrosysteme verbesserte Prozesskontrolle, sowie viele weitere Vorteile gegenüber ihren Makro System Analoga bieten. Zur Überwachung und Kontrolle der Parameter in einem miniaturisierten System ist eine anspruchsvolle Aufgabe als die Größe des Sensors zu messen, zum Beispiel, pH-Wert und O2, sowie minimiert werden müssen. Die erfolgreiche Herstellung von Mikroreaktoren für biologische Systeme erfordern verschiedene Arten von Analyse-Tools zur Prozessüberwachung. Die Entwicklung von intelligenten Mikrosensoren spielt daher eine wichtige Rolle bei der Durchführung biologischer Prozesse in Mikroreaktoren.
Vor kurzem gab es mehrere Versuche, intelligente pH-Sensoren mit Chemiresistive Materialien wie Kohlenstoff-Nanoröhren sensing und Durchführung von Polymeren1zu entwickeln. Diese Chemiresistive-Sensoren benötigen keine Bezugselektrode und sind einfach zu integrieren mit elektronischen Schaltungen. Erfolgreiche Chemiresistive Sensoren machen es möglich, intelligente Sensoren zu produzieren, die sind kostengünstig und einfach zu produzieren, benötigen eine kleine Menge zum Testen und sind nicht-invasiv.
Hier berichten wir über eine Methode, um eine Elektrode mit Polyaniline funktionalisiert, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid zu entwickeln. Die Chemiresistive Elektrode arbeitet als ein pH-Sensor während der Gärung ein L. Lactis . L. Lactis ist ein Milchsäure-Säure-produzierenden Bakterium in Essen Gärung und konservierende Verfahren verwendet. Während der Gärung die Produktion von Milchsäure senkt den pH-Wert, und das Bakterium aufhört zu wachsen in einem niedrigen pH-Wert2,3,4.
Ein Fermentationsmedium ist eine komplexe chemische Umgebung, die enthält Peptide, Salze und Redox-Moleküle, die dazu neigen, mit dem Sensor Oberfläche5,6,7,8,9stören. Diese Studie zeigt, dass ein pH-Sensor basiert auf Chemiresistive Material mit einer richtigen Oberflächenschutz Schicht verwendet werden, um pH in dieser Art von komplexen Gärung Medien zu messen. In dieser Studie verwenden wir erfolgreich Nafion als Schutzschicht für Polyaniline beschichtet, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid, Messen Sie den pH-Wert in Echtzeit während einer L. Lactis Gärung.
1. Vorbereitung von Graphit-Oxid
Hinweis: Graphit-Oxid ist im Sinne des Hummers Methode10,11bereit.
(2) GO-hinterlegt Elektrode Vorbereitung
3. Reduzierung von GO elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid
4. Polyaniline Funktionalisierung der ERGO Elektrode
(5) ERGO-PA Elektrode Tests bei verschiedenen pH-Werten (Vorkalibrierung vor Nafion Beschichtung)
6. Vorbereitung der Nafion-beschichtete ERGO-PA-Elektrode
7. Vorbereitung der L. Lactis Kulturmedium
8. Prüfung der ERGO-PA-NA-pH Antwort in einem L. Lactis Gärung Experiment
Das Aussehen eines starken Rückgangs Peaks rund -1,0 V (Abbildung 3) illustriert die Reduzierung von GO-ERGO12,13,14,22. Die Intensität des Peaks hängt von der Anzahl der GO-Schichten auf die Elektrode. Ein dicker schwarze Folie vollständig abgedeckt Golddrähten an der Elektrode. Zu diesem Zeitpunkt waren die zwei isolierte gold-Elektroden leitfähigen, weil unterwegs zwei gold Elektrodenleitungen verbunden. Electropolymerization von Anilin hinterlegt einen grünen Film auf ERGO15,16,17,18,19,20,21, 22. Diese grüne Farbe ist ein Hinweis auf die Bildung einer leitfähigen Polyaniline Schicht auf der ERGO. Die Leitfähigkeit der ERGO-Elektrode (Widerstand Abnahme) stieg nach der Funktionalisierung Polyaniline.
Wenn wir die ERGO-PA-Elektrode in einer Lösung mit einem pH-Wert zwischen 4 und 9 setzen, der aktuelle Wert erhöht (Abbildung 5) wegen der doping- und dedoping von Löchern bei der Protonierung/Deprotonierung in ERGO-PA (Abbildung 2)22. Der gewünschte pH-Wert für die Messung des aktuellen Wertes der ERGO-PA-Elektrode wurde durch die Britton-Robinson-Pufferlösung mit 0,2 M NaOH titrieren erhalten. Daher für jede Zugabe von 0,2 M NaOH, der aktuelle Wert der Elektrode erhöht (Abbildung 5 und Abbildung 6). Die Reaktion der Elektrode war sofort stabil, wenn die Zugabe von 0,2 M NaOH bei einem bestimmten pH-Wert gestoppt.
Ein dünner Film von Protonen leitenden Nafion gebildet, nachdem das Lösungsmittel bei Raumtemperatur verdunstet. Die Leitfähigkeit der Elektrode war nicht viel betroffen, aber ein paar Ohm Unterschied des Widerstandswertes aufgetreten ist und der aktuellen Basiswert der ERGO-PA-Elektrode geändert. Ähnlich wie bei der ERGO-PA-Elektrode, den Widerstand der ERGO-PA-NA-Elektrode geändert, wenn der pH-Wert der Pufferlösung von 4 bis 9, geändert, wie in Abbildung 618dargestellt.
Nach dem Platzieren der ERGO-PA-NA-Elektrode im Inneren der L. Lactis -Kultur, der Strom zunächst abgenommen und dann dauerte einige Zeit, um einen stabilen Wert zu erreichen. Einmal das Wachstum von L. Lactis begonnen, der Strom der ERGO-PA-NA allmählich verringert. Der Rückgang der Strom in der exponentiellen Wachstumsphase von L. Lactis beschleunigt und erreicht einen stabilen Wert am Ende des Wachstums (Abbildung 7)18. Der endgültige Wert des Stromes (oder Widerstand) ist vergleichbar mit dem aktuellen Wert der ERGO-PA-NA-Elektrode getestet in Pufferlösung (pH 4-7), wie in den Einschub von Abbildung 7dargestellt.
Abbildung 1: Bilder von unten (links) und das Oberteil (rechts) des Elektrodenhalters PDMS. (A) die montierten Zelle (B) und (C) die Gegenelektrode. (D) die die gold-Elektrode mit der Maßstabsleiste in Zentimetern. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2: Schematische ERGO-PA-hinterlegt die gold-Elektrode mit einer grafischen Darstellung der ERGO und PA. Das Bild zeigt auch Loch doping auf ERGO-PA bei Protonierung. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3: zyklischer Voltammetrie GO Reduktion mit verschiedenen GO-Konzentrationen mit einer Scanrate von 50 mV/s. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4: zyklischer Voltammetrie Polyaniline Ablagerung mit einer Scanrate von 50 mV/s. Die ersten 10 Scans von insgesamt 50 werden angezeigt. Der vertikale Pfeil markiert den Trend der Stromanstieg während der Scans und die horizontalen Pfeile markieren die Richtung der Spannung Scan. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 5: Widerstandswert der ERGO-PA-Elektrode gegen pH 4 bis 9. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 6: Widerstandswert der ERGO-PA-NA-Elektrode gegen pH 4 bis 9. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 7: Echtzeit-kontinuierliche pH-Änderung der ERGO-PA-NA während der Gärung L. Lactis . Der Inset zeigt den erwarteten Widerstandswert des ERGO-PA-NA für pH 4-7 in Britton-Robinson-Pufferlösung gemessen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Es ist wichtig, dass die GO "" vollständig Layers bedecken die gold Elektrodenleitungen nach der Absetzung von GO. Wenn der gold-Elektroden mit GO nicht abgedeckt sind, wird Polyaniline nicht nur auf ERGO, sondern auch auf die sichtbare gold Elektrodenleitungen direkt einzahlen. Ablagerung von Polyaniline auf gold Elektrodenleitungen möglicherweise Auswirkungen auf die Leistung der Elektrode. Nach der Reduktion des GO, ERGO wird die Elektrode bei 100 ° C zur Stärkung der Bindung zwischen der ERGO-Schicht und die gold Elektrodenleitungen getrocknet. Der Widerstand der einzelnen Elektrode variiert basierend auf der Anzahl von GO-Schichten, die auf die gold-Elektroden abgelegt werden. Daher, es ist wichtig, die gleiche Konzentration von GO für jede Elektrode, und es ist schwierig, die Elektrode mit einem Widerstand in einem vorbestimmten angegebenen Bereich zu fertigen, die kompatibel mit den Messkreis. Dies schränkt die einfache Massenproduktion der Elektroden.
Die Vorbereitung der reduzierten Graphene Oxid/Polyaniline durch eine elektrochemische Methode hat einige Vorteile gegenüber anderen gemeldeten Zubereitungsmethoden. Die hier vorgestellte elektrochemische Methode erfordert keine stark reduzieren und Oxidationsmittel (z. B.., Hydrazin und Ammonium Bleichen)23,26. Darüber hinaus das Material lagert sich direkt auf die Elektrode und keine weitere Verarbeitung erforderlich ist, den Fertigungsprozess schneller und einfacher machen. Wie gehen Sie elektrochemisch reduzierten in Situist, ist eine gute Verbindung zwischen dem Gold und den Graphen erreicht, machen die pH-Elektrode robuster.
Die ERGO-PA-Elektrode in einem Puffer mit einem pH-Wert zwischen 3 und 9 vor dem Auftragen der Nafion Äquilibrierung verbessert die Empfindlichkeit der Elektrode (Daten nicht gezeigt). Das Weglassen dieser Schritt erfordert ein Einweichen der ERGO-PA-NA-Elektrode in einem Puffer pH 5 mehr als 24 Stunden vor Gebrauch.
Darüber hinaus muss die ERGO-PA-Elektrode trocken sein, bevor man Nafion. Eine nasse ERGO-PA-Elektrode führte zu eine wässrige Schicht zwischen der ERGO-PA und Nafion und erhöht die Reaktionszeit des pH-Sensor. Den Widerstand oder gemessene Strom von ERGO-PA-NA-Lösungen mit unterschiedlichen pH-Werten variierten zwischen den Elektroden. Diese Variante im Widerstand oder Strom für jede Elektrode verursacht wahrscheinlich durch den Unterschied in der Anzahl der GO Schichten lagern sich auf den gold Elektrodenleitungen. Genau wie mit anderen pH-Elektroden ist korrekte Kalibrierung der ERGO-PA-NA-Elektrode erforderlich, um zuverlässige pH Werte zu erhalten.
Nach der Platzierung der Elektrode im Inneren der L. Lactis -Kultur, ist eine erste Stabilisierungszeit notwendig, einen konstanten Strom zu erhalten. Bei der Fermentation L. Lactis ist die anfängliche pH 7,2. Während des Wachstums der L. Lactiswird Glukose umgewandelt, in Biomasse und in Milchsäure, die die Gärsaft säuert. Wenn der pH-Wert des Mediums Gärung zu niedrig, um korrektes Wachstum unterstützt wird oder wenn es keine Glukose links, stoppt das Wachstum. Der Strom (oder Widerstand) Wert von ERGO-PA-NA vor und nach Wachstum sind gleich dem aktuellen (oder Widerstand) Wert der ERGO-PA-NA zuvor in verschiedenen Pufferlösungen kalibriert. Der anfängliche pH-Wert und Ende pH-Wert des Mediums L. Lactis Gärung wurde bestätigt mit einem herkömmlichen Glas-pH-Elektrode.
Die pH-Sensor kann leicht House mit billigen Chemikalien hergestellt werden. Die niedrigen Herstellungskosten erlauben Forschern, diese Elektrode in Anwendungen zu verwenden, wurden eine große Anzahl von pH-Elektroden notwendig sind (z. B.in einer bakteriellen Gärung-Screening-Plattform). Eine weitere Anwendung der pH-Elektrode ist in Situationen vorgesehen, wo die Verteilung von KCl aus einer herkömmlichen Glas-pH-Elektrode in die Messlösung nicht erwünscht ist. Die pH-Elektrode dieses Protokolls hat keine interne Flüssigkeiten, die in der Probe diffundieren können.
Kompatibilität des Chemiresistive Sensors mit derzeit verfügbaren drahtlosen elektronischen Schaltungen1,27 ermöglicht es auf einfache Weise Anwendungen mit Wireless-pH-Sensoren zu entwickeln.
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Die Autoren erkennen der Universität Groningen für finanzielle Unterstützung.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Graphite flakes | Sigma Aldrich | ||
Sulfuric acid (H2SO4) | Merck | ||
Sodium nitrite (NaNO2) | Sigma Aldrich | ||
Potassium permanganate (KMnO4) | Sigma Aldrich | ||
30 % H2O2 | Sigma Aldrich | ||
HCL | Merck | ||
Aniline | Sigma Aldrich | ||
5wt % Nafion | Sigma Aldrich | ||
M17 powder | BD Difco | ||
Phosphoric acid (H3PO4) | Sigma Aldrich | ||
Boric acid (HBO3) | Merck | ||
Acetic acid | Merck | ||
Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | ||
Potassium dihydrogen phosphate | Sigma Aldrich | ||
Dipostassium hydrogen phosphate | Sigma Aldrich | ||
Au Interdigitated electrodes | BVT technology - CC1 W1 | ||
Potentiostat | CH Instruments Inc (CH-600, CH-700) |
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