Method Article
Hintergrund Autofluoreszenz biologischer Proben erschwert oft Fluoreszenz basierende bildgebende Verfahren, vor allem im Alter menschlicher postmitotischen Gewebe. Dieses Protokoll beschreibt, wie die Autofluoreszenz aus diesen Proben effektiv entfernt werden kann mit einer handelsüblichen Licht emittierende Diode Licht Quelle zu Photobleach die Probe vor Immunostaining.
Immunfluoreszenz ist eine gängige Methode, verwendet um subzelluläre Kompartimente zu visualisieren und die Lokalisierung von bestimmten Proteinen innerhalb einer Gewebeprobe bestimmen. Ein großes Hindernis für die Übernahme von Bildern hoher Qualität Immunfluoreszenz ist endogene Autofluoreszenz des Gewebes durch Alterung Pigmente wie Lipofuszin oder gemeinsame Probe Verarbeitungsverfahren wie Aldehyd Fixierung. Dieses Protokoll beschreibt, wie Hintergrundfluoreszenz durch Immunofluoreszenz mit weißem Phosphor lichtemittierende Diode (LED) Arrays vor der Behandlung mit fluoreszierenden Sonden erheblich reduziert werden kann. Die Breitspektrum Emission von weißem Phosphor ermöglichen LEDs in einem Spektrum von Emission Gipfeln des Fluorophore bleichen. Immunofluoreszenz-Apparat aus Standardkomponenten zu sehr geringen Kosten aufgebaut werden kann und bietet eine zugängliche Alternative zu handelsüblichen chemischen stillt. Eine Immunofluoreszenz Vorbehandlung des Gewebes gefolgt von konventionellen Immunfluoreszenz Färbung erzeugt Bilder gratis Hintergrund Autofluoreszenz. Im Vergleich zu chemischen stillt die Sonde sowie Hintergrund reduziert Signale, Immunofluoreszenz Behandlung hatte keinen Einfluss auf Sonde Fluoreszenz-Intensität, während es effektiv Hintergrund und Lipofuszin Fluoreszenz reduziert. Obwohl Immunofluoreszenz mehr Zeit für die Vorbehandlung erfordert, können höhere Intensität LED-Arrays zur Immunofluoreszenz verkürzen. Diese einfache Methode kann potenziell zu einer Vielzahl von Geweben, insbesondere postmitotischen Gewebe, die ansammeln von Lipofuszin wie dem Gehirn und Herz- oder skelettartige Muskeln angewendet werden.
Fluoreszenz-Mikroskopie mit Antikörpern, die Ausrichtung auf bestimmte Proteine wird routinemäßig verwendet, um Proteine des Interesses in Zellkultur und Geweben zu visualisieren. Eine schwere Komplikation für den Erwerb der eindeutige und endgültige Bilder in Immunfluoreszenz ist Autofluoreszenz, die endogen im Säugetier-Gewebe durch die Alter Pigment Lipofuszin und Proteine wie Elastin und Kollagen1entstehen können, 2. Andere Quellen der Autofluoreszenz können durch Vorbereitung Beispielschritte z. B. Aldehyd Fixierung3eingeführt werden. Lipofuszin-Granulat, hauptsächlich bestehend aus oxidativ modifizierten Protein- und Lipid-Abbau-Rückstände, reichern sich in langlebigen Zellen mit zunehmendem Alter2. Dies bewirkt, dass Schwierigkeiten im Bereich der bildgebenden postmitotischen Gewebe wie Gehirn und Herz- oder skelettartige Muskeln, wie die Fluoreszenz Emissionsspektrum von Lipofuszin ist breit und variabel, oft zeitgleich mit der Emissionswellenlänge von gemeinsamen Fluorophore verwendet für 4Kennzeichnung. Diese Faktoren machen Bildgebung des menschlichen Hirngewebe von late-Onset neurodegenerativen Erkrankungen wie Frontotemporal lobar Degeneration (FTLD) besonders anspruchsvoll.
Um Autofluoreszenz zu reduzieren, haben wir eine Technik entwickelt, in der wir die Rutsche montiert Gewebeschnitte mit weißem Licht emittierende (LED)-Diodenarray mit einem Haushalt Schreibtisch Lampe5bestrahlen. Diese einfache Technik bietet eine Alternative zu Techniken, mit denen chemische stillt z. B. CuSO4 in Ammoniumacetat, oder im Handel erhältlichen Farbstoffe wie Sudan schwarz-B und Eriochrome Schwarz T6abschrecken. Es hat auch erhebliche Kostenersparnis über multispektralen LED Lampe Immunofluoreszenz Techniken und vermeidet Komplikationen und Artefakte aus digitalen Autofluoreszenz Methoden der Haarentfernung wie spektrale un-Mischen7,8erzeugt. Weißer Phosphor haben LEDs eine breite Emissionsspektrum, hohe Leuchtkraft und niedrige Herstellungskosten, eignen sich ideal als handelsübliche Komponente für Immunofluoreszenz verschiedener Chromophore5,9.
In diesem Protokoll wir zeigen den Bau von einem Immunofluoreszenz-Apparat mit zugänglichen Komponenten und ein Fall von FTLD Gewebe mit Tau-positiver Einschlüsse (FTLD-T) mit einem Antikörper spezifisch für phosphorylierten Tau Immunofluoreszenz zuweisen. Wir zeigen die Wirkung der Immunofluoreszenz Fluoreszent-markierten Antikörpern beschäftigt zwei häufig verwendete Chromophore Imaging: Alexa 488 und Texas Red. Die Wirkung der Immunofluoreszenz im Vergleich zu unbehandelten Abschnitte oder die Behandlung mit einem kommerziellen chemische Quencher werden quantifiziert und verglichen. Diese Vorbehandlung Immunofluoreszenz kann in jedes standard Immunfluoreszenz-Färbung-Protokoll zu Autofluoreszenz in einer biologischen Probe entfernen aufzunehmen.
Hinweis: die vorliegende Arbeit wurde durchgeführt in Übereinstimmung mit den anerkannten internationalen Standards, einschließlich der internationalen Konferenz auf Harmonisierung (ICH), der Rat für internationale Organisationen der medizinischen Wissenschaften (zusammensetzte) , und den Grundsätzen der Erklärung von Helsinki. Verwendung von menschlichem Gewebe wurde mit Zustimmung der Universität Health Network Research Ethics Board. Die menschliche Gehirn Proben wurden als Bestandteil der maritimen Brain Tissue Bank gesammelt. Zum Zeitpunkt der Erhebung war die Einwilligung aller Patienten.
1. bauen Immunofluoreszenz Apparate-und Lösungen
2. Immunofluoreszenz Vorbehandlung von Gewebeschnitten
Hinweis: Gewebe Abschnitt Vorbereitung kann variieren, abhängig von der Quelle der Gewebe und Fixierung und Einbettungsmethoden verwendet. Hier wurde Hirngewebe (orbitofrontalen Windungen) Fall von FTLD-T ~ 2 Tage in Formalin, durchlaufen einen Farbverlauf von Saccharose, eingebettet im OAT und schneiden bis 10 µm dicke Abschnitte mit einem Kryostat behoben.
3. Immunfluoreszenz
4. Fluoreszenz-Mikroskopie
Immunofluoreszenz Vorbehandlung Schritt kann ein standard Immunfluoreszenz-Protokoll unmittelbar vor der Antigen-Retrieval und Immunostaining (Abbildung 1A) hinzugefügt werden. Montage des Gerätes Immunofluoreszenz kann auch durchgeführt werden, mit Hilfe verschiedener, preiswerte, handelsübliche Komponenten (Abbildung 1 b). Das Emissionsspektrum von weißem Phosphor LEDs deckt ein breites Spektrum von Wellenlängen macht sie geeignet für breite Palette Immunofluoreszenz zustimmen vorherige Berichte (Abbildung 1)5,11. Nach 48 h Immunofluoreszenz wurde die Intensität der Autofluorescent Flecken, die Lipofuszin sowie allgemeine Hintergrundfluoreszenz ähneln in beiden Emission Wellenlängen in einem ungefärbten Abschnitt von FTLD-T (Abbildung 1) erheblich reduziert. Die Wirksamkeit von Immunofluoreszenz demonstriert, gebeizt wir für hyperphosphoryliertem Tau, pathologische Tau Einschlüsse im Falle von FTLD-T mit zwei verschiedenen Sekundärantikörper zu visualisieren. Die klare Form des Tau Einbeziehungen und die Verwendung von zwei Chromophore zur Kennzeichnung auch können wir getrost Autofluorescent Merkmale unterscheiden die beabsichtigten Ziele um die Technik zu überprüfen.
In den zusammengesetzten Bildern bei niedriger Vergrößerung, die Morphologie der Tau-positiver Einschlüsse, gebeizt gelb aus der Kombination von Alexa 488 und Texas Red-Kanälen besteht aus ringförmigen Sammlungen von kurzen Zellprozesse, die genannt werden "astrocytic Plaketten (Abbildung 2a-C). Diese Morphologie ist charakteristisch für Kortiko Degeneration (CBD)12,13, der mit der Pathologie-Bericht von diesem Fall einverstanden ist. In der unbehandelten Probe, sind zahlreiche Strukturen in das zusammengesetzte Bild, keine Ähnlichkeit mit Tau Einbeziehungen und zeigte Fluoreszenz in erster Linie in den roten Kanal, was darauf hindeutet, dass es Autofluoreszenz ist beabsichtigten Antikörper Färbung. Eine spürbare Hintergrundfluoreszenz ist auch sichtbar in diesem Kanal in das Sichtfeld (Abbildung 2a). Diese Autofluorescent Funktionen werden entfernt und das Gesamtbild erscheint viel sauberer, wenn Proben mit Immunofluoreszenz (PB) und der chemischen Quencher (Abb. 2 b-c) behandelt wurden.
Wir dann quantifiziert die Fluoreszenz Unterschiede in diesen Proben durch Profilierung eine kleinere Region in jeder Probe. Eine einzelne astrocytic Tafel präsentiert in jeder Behandlung Zustand zum Vergleich (Abb. 2d-R). In der unbehandelten Probe Hintergrundfluoreszenz ist in allen drei Kanälen, aber sekundäre Antikörper Fluoreszenz Alexa 488 und Texas Red-Antikörper war relativ hoch (Abb. 2h). Allerdings hatte die Autofluorescent Strukturen in der unbehandelten Probe Fluoreszenz-Intensitäten im Texas Red Channel vergleichbar mit der Texas Red Sekundärantikörper, die für Tau (Abb. 2 h) gebeizt. Wenn das Zielprotein in unserem Fall keine ausgeprägte, vorhersehbare Morphologie wie Tau, würde die Autofluoreszenz im Gewebe das Bild nicht interpretierbar gemacht haben.
Im Gegensatz dazu gegenüber die unbehandelte Probe und die Fluoreszenz des Immunostained Tau als Immunofluoreszenz-Vorbehandlung vor Immunostaining, Hintergrundfluoreszenz in der Alexa 488 angewandt wurde und Texas Red-Kanäle wurde deutlich reduziert unberührt blieb (Abb. 2i-m). Die kommerzielle chemische Quencher abgeschreckt die Autofluoreszenz im Alexa 488 Kanal nur so effektiv wie Immunofluoreszenz. Es unterdrückt auch DAPI Hintergrundfluoreszenz, die 48 h Immunofluoreszenz Behandlung (Abbildung 2 m) nicht betroffen war. Jedoch verringert die chemische Quencher auch die Intensität der Texas Red sekundäre und DAPI Signale, was auf ein gewisses Maß an kontraproduktiv abschrecken (Abbildung 2n-R).
Abbildung 1 : Anwendung der Immunofluoreszenz Vorbehandlung in einem standard Immunfluoreszenz Workflow. (A) vereinfachte schematische Darstellung der standard Immunfluoreszenz-Protokoll aus Gewebe Erwerb Imaging. Anwendung der primären und sekundären fluoreszierende Antikörper wird durch Karikaturen dargestellt. Eine repräsentative Mikroskopbild wird produziert. Maßstabsleiste = 100 µm. B) eine repräsentative Immunofluoreszenz Apparat konstruiert, mit Standardkomponenten (reflektierende Deckel wird nicht angezeigt). (C) Emissionsspektrum von weißen LED-Array. Ein schmaler Emission Peak bei 450 nm und einer breiten Spitze bei 550 nm beobachtet. (D) Wirkung der Immunofluoreszenz auf endogene Hintergrundfluoreszenz von FTLD-T Gewebe bei Alexa 488 (493-570 nm) und Texas Red (601-635 nm) Emission Wellenlängen. Autofluorescent Flecken ähnlich Lipofuszin sind nach 48 h Immunofluoreszenz gemildert. Maßstabsleiste = 100 µm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2:Auswirkungen der Autofluoreszenz Entfernung auf die Bildqualität des Schrankes FTLD-t Gewebe mit Anti-phosphoryliert Tau Immunostaining. a-c) geringer Vergrößerung, zusammengesetzte Immunfluoreszenz Bilder von repräsentativen Gesichtsfelder in unbehandelt (a), behandelt Photobleached für 48 h (b) und chemische Quencher (c) Muster. Farben zeigen Fluoreszenz in den folgenden Kanälen über Anregung durch ihre jeweiligen Lichtquellen: Alexa 488 (grün): λex = 488 nm (Argonlaser) λEm = 493-570 nm; Texas Red (rot): λex = 561 nm (DPSS 561 nm Laser), λEm = 601-635 nm; DAPI (blau):ex λ = 405 nm (405 Diode Laser), λEm = 410-507 nm. Maßstabsleiste = 100 µm. d-R) Bilder mit höherer Vergrößerung der punktierten Regionen in unbehandelten (d-g), Photobleached (i-l) und chemische Quencher behandelt (n-Q) Proben mit separaten Fluoreszenz Kanäle, Bild zusammengeführt und Fluoreszenz-Signal Profile quantifiziert. Gepunktete Linien in den zusammengeführten Kanälen (g, l, Q) repräsentieren die Zeile, auf welches, die Signal Profile (h, m, R) generiert wurden. Maßstabsleiste = 50 µm. Autofluorescent Partikel (af)Immunolabeled Tau Fluoreszenz (Tau) und Kern-Signal (Nuc) werden angezeigt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Die Immunofluoreszenz Vorbehandlung des Gewebes in diesem Manuskript beschrieben ermöglicht eine effektive Beseitigung der Autofluoreszenz mit Standardkomponenten. Das Protokoll beschreibt Immunfluoreszenz Bildgebung der phosphorylierten Tau Aggregate in Formalin fixiert menschliche Gehirngewebe mit sekundären Antikörper konjugiert, Alexa 488 und Texas Red mit DAPI als eine nukleare Gegenfärbung. Um die Methode zu anderen Geweben anwenden, empfehlen wir eine 48 h Immunofluoreszenz Vorbehandlung der Probe als Ausgangspunkt. Führen Sie nach Immunofluoreszenz die standard Immunfluoreszenz Färbeprotokoll für die Features mit Antikörper-Verdünnungen, die nach den Empfehlungen des Herstellers. Wenn Hintergrundfluoreszenz noch vorhanden ist, muss die Immunofluoreszenz Dauer und/oder der Antikörper Färbung Schritte geändert werden. Die Dauer der Immunofluoreszenz variieren je nach der Lampe ausgewählt, um das Gerät und die Höhe der Autofluoreszenz in der Probe zu konstruieren. Die optimale bleichende Zeit für jedes einzigartige Lampe Apparat muss ermittelt werden. Dies kann durch Immunofluoreszenz eine ungefärbte, vorhanden Gewebekapitel in TBS-Azid montiert und misst die endogene Fluoreszenz der Folie im 12 h-Abstand mit einem Fluoreszenzmikroskop erfolgen. In früheren berichten wir von Partikelanalyse Lipofuszin Immunofluoreszenz überwacht und Kurvenanpassung an exponentiellen Zerfall Funktionen5, aber der Einfachheit halber visueller Beobachtung der Abschnitte in regelmäßigen Abständen kann gleichermaßen effektiv zu beurteilen, die Dauer auf die meisten der Fluoreszenz wird gestillt. In unserem Fall im Alter von Hirngewebe mit hohen Mengen an Lipofuszin Pigmente war 48 h Inkubation mit einer 800 Lux Lampe ausreichend. Wenn bestimmte das Signal schwach im Vergleich zu den Hintergrund nach Immunofluoreszenz bleibt, erwägen Sie, Erhöhung der Konzentration von primären und sekundären Antikörper während der Färbung. Es ist auch wichtig, dass ein Antikörper nur Sekundärregelung um sicherzustellen, dass das Hintergrundsignal nicht durch unspezifische Sekundärantikörper Bindung verursacht wird. Achten Sie darauf, die um Antikörper zu wählen, die keine Kreuzreaktion zu tun, vor allem, wenn für mehrere Ziele zu beflecken. Darüber hinaus sicherstellen Sie, dass die spezifische Signale nicht versehentlich bei der Färbung abgeschreckt werden. Nissl Fleck (für das Beflecken Neuronen) wird beispielsweise von BSA abgeschreckt. In diesem Fall sollte die BSA-Komponente der blockierenden Lösung mit Alternativen wie Fisch Haut Gelatine5ersetzt werden.
Der Einsatz von weißem Phosphor LEDs für Immunofluoreszenz hat gewisse Einschränkungen aufgrund seiner Emissionsspektrum von 420 nm bis 650 nm. Somit ist keine signifikante Immunofluoreszenz in der UV-Wellenlängen möglich. Auch aufgrund der breiten Emissionsspektrum Immunofluoreszenz Chromophore von bestimmten Wellenlängen erfordert Modifikationen wie überlagern Farbfilter Bogen über die LED-Arrays, um unerwünschte Emissionen Wellenlängen herauszufiltern. Darüber hinaus erfordern Immunofluoreszenz Gewebe längere Bearbeitungszeiten als andere Methoden. In diesem Fall durch das Alter des Hirngewebes (vom Individuum 89-jährige) und die lange Aldehyd Fixierung Zeitraum von mehr als 2 Tage war eine 48 h Immunofluoreszenz Dauer erforderlich. Obwohl keine aktive Verarbeitungszeit erforderlich ist, muss man berücksichtigen Immunofluoreszenz-Zeit und die Färbung Sitzung entsprechend zu planen. LED-Lampen von höheren Leuchtkraft oder der Einsatz von mehreren Lampen kann deutlich Immunofluoreszenz durch die einfache Erhöhung der Photon Flux verkürzen.
Im Vergleich zu bisherigen Methoden, bietet unsere Technik mehrere wesentliche Vorteile. Im Gegensatz zu Immunofluoreszenz mit Scan Lasern in der Fluoreszenzmikroskopie beobachteten wir keine Anzeichen für eine Foto-induzierten Schäden unserer Proben mit LED Immunofluoreszenz. Ein weiterer großer Vorteil von unserem Apparat ist die deutliche Reduzierung der Kosten gegenüber anderen Techniken. Montage von unserem Apparat kostet ca. $10 USD, und die Montage des Gerätes ist flexibel genug, so dass jedes Labor seine eigene Version der Photobleacher annehmen kann. Zum Vergleich: andere Methoden mit Mutispectral LED-Arrays mit benutzerdefinierten Objekthalter und Kühlkammern bis zu $1000 USD8bauen erfordert. Darüber hinaus sind kommerzielle chemische Quenchen Verbrauchsmaterialien, die Kosten von 120 US-Dollar für 100 Dias und potenziell unerwünschte Verbindungen in der Probe einführen. Die chemische Löscher verwendet für den Vergleich in der vorliegenden Studie wahrscheinlich enthält der Lipid-Bindung Sudan schwarzen Farbstoff, der Immunostaining Lipoproteine stören kann.
Insgesamt umfasst die wichtigsten Schritte in der Vorbehandlung Immunofluoreszenz und Immunostaining der Probe die Handhabung des Abschnitts beim Immunostaining. Es ist wichtig, dass nach Abschnitt während Immunofluoreszenz rehydriert, es nicht erlaubt ist, in den nachfolgenden Schritten austrocknen. Trocknung der Folie verursachen ungleichmäßige Verteilung von Antikörpern und nicht interpretierbar Artefakte zu schaffen. Zur Vermeidung von Zeitverlust und potenziell wertvollen Proben müssen in mehreren Schritten in das Protokoll zu achten. Lassen Sie nach Antigen-Retrieval das Gewebe vor der Übertragung an die TBS-Triton Permeabilisierung Lösung abkühlen. Auch kurzzeitige Exposition gegenüber Luft, wenn die Probe auf hohe Temperaturen erhitzt wird dazu führen, dass sofortige Trocknung des Gewebes. Auch sicherstellen Sie, dass Antikörper, die Sperrung oder die Gegenfärbung Lösungen vollständig das Gewebe während der Anwendung abdecken. Dies kann erreicht werden, indem sichergestellt wird, dass das Gewebe vollständig durch die hydrophobe Feder Lösung Stichwahl vermeiden umrissen wird und dass alle Lösungen in eine feuchte Kammer auf einer ebenen Fläche angewendet werden. Dies ist besonders wichtig während der Nacht Inkubationen (primären Antikörper-Bindung).
Die erfolgreiche Anwendung von Immunofluoreszenz mit weißem Phosphor LEDs vor Fleckenbildung kann die Anwendung von Immunfluoreszenz Methoden zur archivierten Gewebe erleichtern. Es ist eine vielseitige und kostengünstige Behandlung, die wir erwarten, offen für eine Vielzahl von Proben in der Zukunft sein. Obwohl wir diese Methode nur zum menschlichen Hirngewebe angewendet haben, kann diese Technik in jeder Färbung Protokoll leicht integriert werden in die Autofluoreszenz wünschenswerte Ergebnisse, vor allem in postmitotischen Gewebe wie Herz- oder Skelett verhindert wird Muskeln, wo Lipofuzin eher ist zu akkumulieren.
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Diese Studie wurde im ganzen oder in Teilen durch die kanadische Konsortium der Neurodegeneration und Alterung (CCNA), Canadian Institute der Gesundheit Forschung (CIHR), der ALS Society of Canada (ALS Kanada) und der Alzheimer-Gesellschaft von Kanada (ASC) unterstützt. Die Autoren möchten danke Sultan Darvesh und Andrew Reid von der Maritime Brain Tissue Bank für die Bereitstellung der FTLD Hirngewebe Mailand Ganguly aus der räumlich-zeitliche Ausrichtung und Verstärkung der Strahlung Reaktion (STTARR) Programm und seine angeschlossenen Förderorganisationen für Tissue, Einbettung und Dienstleistungen und die erweiterte optische Mikroskopie Facility (AOMF) für die Bereitstellung von Mikroskopie-Instrumente-Schnitt. Kevin Hadley wird für die kritische Durchsicht des Manuskripts gedankt.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Trizma Base | Sigma-Aldrich | T6066 | |
Sodium Choloride | Sigma-Aldrich | S7653 | |
Hydrochloric Acid | Caledon Laboratory Chemicals | 1506656 | |
Sodium Azide | BioShop Canada | SAZ001 | |
100 mm x 100 mm x 20 mm Pitri dish | Sarstedt | 82.9923.422 | All components of photobleacher can be substituted based on availability |
6 W LED Dimmable Desk Lamp | DBPower | DS501 | All components of photobleacher can be substituted based on availability |
Citric Acid | Sigma-Aldrich | C-2404 | |
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | BioShop Canada | EDT001 | |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P-7949 | |
Sodium Hydroxide | BioShop Canada | SHY700.1 | |
Water bath | Haake Fisons | K15 | |
Slide collector | FisherScientific | 12-587-17B | |
Staining Jar | FisherScientific | E94 | |
Orbital Shaker | Bellco Glass | 7744-08115 | |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T7878 | |
Bovine Serum Albumin | FisherScientific | BP1600-1 | |
Normal Goat Serum | Aurion | 905.002 | |
Hydrophobic pen | Sigma-Aldrich | Z672548-1EA | |
Phospho-Tau (Ser202, Thr205) Monoclonal Antibody (AT8) | ThermoFisher | MN1020 | |
Goat anti-Mouse Secondary Antibody, Texas Red-X | ThermoFisher | T862 | |
Goat anti-Mouse Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 | ThermoFisher | A-11029 | |
DAPI | Sigma-Aldrich | D9542 | |
Mounting medium | ThermoScientific | 28-600-42 | |
Glass soverslip | |||
Confocal Microscope | Zeiss | LSM710 | |
Imaging software ZEN 2012 Black Edition 11.0 | Zeiss | LSM710 | Software accompanies the Confocal Microscope |
ImageJ | NIH | https://imagej.nih.gov/ij/download.html | |
RGB Profile Tools macro | NIH | https://imagej.nih.gov/ij/macros/tools/RGBProfilesTool.txt | |
Commercial chemical quencher | Biotum | 23007 |
Genehmigung beantragen, um den Text oder die Abbildungen dieses JoVE-Artikels zu verwenden
Genehmigung beantragenThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten