通过质谱法对白细胞中的心磷脂进行指纹识别，以快速诊断巴特综合征

该方法通过MALDI-TOF质谱法生成白细胞的心磷脂指纹，并允许测量单心磷脂和心磷脂之间的比率，以快速诊断Barth综合征。该技术的主要优点是在从一毫升血液中分离白细胞后立即通过单轮质谱法检测诊断脂质物种。这些以及眼科敏感性和特异性使该测定成为一种合适的诊断测试，可以整合到临床实验室的常规工作中，以筛查Barth综合征。

首先将血液样本放在眼眶摇床上10分钟。接下来，在1.5毫升管中加入0.9毫升全血，加入0.1毫升20%葡聚糖。现在移液并轻轻分散悬浮液20次，同时避免气泡，让红细胞在室温下沉淀约一小时。

使用注射器，收集黄色上清液并将其转移到15毫升管中，然后在室温下以400倍G离心15分钟。弃去上清液后，将主要含有白细胞和残留红细胞的沉淀重悬于0.6毫升冰冷的双蒸馏水中。大约15秒后，向细胞悬浮液中加入0.2毫升0.6摩尔氯化钾以恢复正确的渗透压。

短暂的渗透性休克会裂解红细胞，使白细胞完好无损。然后用单强度PBS将最终体积调节至2.5毫升。接下来，在室温下以400倍G离心悬浮液15分钟。

然后丢弃上清液并用2.5毫升单强度PBS重新洗涤白细胞沉淀。重复离心并如上所述弃去上清液，并将含有白细胞的沉淀重悬于200微升灭菌的双蒸馏水中。将悬浮液在零下80摄氏度冷冻或直接进行脂质提取。

通过将20微升白细胞悬浮液转移到1.5毫升管中并以16， 000倍G旋转30秒来开始提取。弃去上清液后，向剩余的沉淀中加入10微升氯仿，反复移液以促进脂质提取。现在，向氯仿沉淀中加入10微升9-氨基吖啶基质溶液。

移液并反复分散以混合。将含有脂质和氯仿的溶液和9-氨基吖啶基质溶液以16， 000倍G旋转30秒。最后，将上清液作为0.35微升的液滴沉积在要分析的MALDI靶标上，并让液滴风干至少10至15分钟。

对于脂质分析，在MALDI-TOF质谱仪上一式三份地获取样品的质谱。使用脂质标准品校准后，将分析设置为负离子模式，并优化检测质量电荷比范围，范围从200汤姆森到2，000汤姆森进行小分子分析。将激光通量保持在阈值以上5%，以具有良好的信噪比。

对于每个质谱，平均应用2， 000个单激光镜头。使用延迟脉冲提取在反射器模式下采集频谱。将门控矩阵悬浮液应用于400 thomson，以防止探测器饱和。

该图显示，TAFAZZIN基因中的缺陷通常决定了Barth综合征特有的脂质谱，该血脂谱由单心磷脂和未成熟的心磷脂形式的出现以及心磷脂指纹中成熟心磷脂形式的减少来指示。此外，该图还显示，对对照组白细胞的MALDI-TOF/MS分析通常仅显示两种成熟的心磷脂。该图显示，单心磷脂加未成熟心磷脂对Barth综合征患者成熟心磷脂的比率高于健康受试者和心力衰竭患者。

这里，对照组和巴特综合征患者相隔一个数量级以上，表明该方法对巴特综合征具有很强的诊断能力。为确保良好的测定结果，仔细遵循从白细胞分离到单心磷脂-心磷脂比值计算的所有方案步骤至关重要。MALDI-TOF质谱法可用于获得少量各种生物样品的脂质谱，以鉴定脂质生物标志物或病理改变。