使用 1-Cyano-4-二甲基亚胺四氟化物 （CDAP） 激活和结合可溶性聚糖

多糖免疫力差，除非与蛋白质有关，需要激活以进行衍生或与蛋白质结合。在此方法中，CDAP 用作砂提试剂。CDAP 激活多糖羟基进行衍生，或与用于疫苗或诊断试剂的蛋白质相关联。

CDAP已基本取代氰化物溴化物成为多糖砂提装试剂。CDAP 使用更简单、效率更高，并且可在比氰化溴更低的 pH 值下使用。这是一种更好的激活试剂。

CDAP 可用于大多数多糖，不像说还原，这需要静脉羟基。这种化学成分可以直接和间接地与蛋白质结合，并可用于制造诊断试剂。正如最初描述的那样，CDAP激活反应非常迅速，难以控制。

这里提供的协议使化学更容易执行，更可重复。在开始实验之前，通过在搅拌时以滴答声方式添加 200 微升二甲基苯丙胺库存溶液，将多糖溶液的 pH 值调整为 9。在整个激活过程中，将反应冷藏在冰水浴中。

在搅拌时将 100 微升 CDAP 转移到多糖溶液中，继续进行氰化物-二甲基丙胺-四氟化物或 CDAP 活化。启动定时器并在整个激活期间监控 pH 值变化 15 分钟。通过及时添加 0.1 摩尔氢氧化钠的 10 微升增量，保持目标 pH 值的反应。

达到最佳激活时间后，立即在激活的多糖中加入两毫升 0.5 摩尔二氢酰胺。检查 pH 值是否在氢氧化水功能化所需的范围内。在连续搅拌反应混合物至少一小时后，将反应混合物转移到摄氏四度。

为了降低产品中的ADH浓度，使用透析装置对粗衍生多糖溶液进行透析。从透析中恢复衍生的多糖，确定多糖和水合物的浓度，以计算水合物与多糖的比例。准备每毫升一毫克未修改的多糖溶液作为标准。

将加热块预热至 140 摄氏度，至少一小时，以实现稳定的均匀温度。在发生酸泄漏时，使用加热块下面和周围的保护垫。在三叶酸中加入每毫升碳水化合物标准1毫克的不同体积，加入标记的13 x 100玻糖酸盐试管，并将体积与水一起组成100微升，以达到预期的标准浓度。

同样，通过在三个样品管中添加含有五微克衍生多糖的体积来设置样本检测。在每根管子中加入100微升新制备的6毫克雷索西诺。使用重复管道，将准备好的 75% 硫酸的 300 微升添加到每个管子中，大力旋涡管，将管子指向外，然后按顺序将所有管子按顺序稳定地放置在加热器块中，并立即设置计时器三分钟。

在三分钟内，按相同顺序取出管子，并直接放在冰水浴的架子中。取出冰冷管，使其在室温下平衡五分钟。使用 10 毫米路径长度的 cuvette，在 430 纳米的 UV-Vis 光谱仪上读取所有管子的吸收度。

设置检测反应，对管架中标有的标准管进行排序和排列，以提高浓度。使用校准的微管，在每个相应的管子中加入 100 个标准微升。对于零标准，请使用样品缓冲器的 100 微升。

同样，准备和安排样品管。然后使用校准的 1000 微升微管，在所有检测管中加入 875 微升的检测缓冲器。要开始检测反应，在预定顺序下，在预定顺序中向每个检测管中加入25微升1%三硝基苯硫酸。

高速旋转测定管两秒钟，确保液体从管打开处旋转到半英寸高。记录测定开始时间，并将定时器设置为两小时。然后在室温下将检测管架放在黑暗中两小时。

时间结束后，旋涡管，开始数据收集。使用氧化硫酸检测对adHD脱氧核酸进行检测。绘制了一个典型的标准管，使用葡萄糖作为糖标准。

使用 TNBS 检测确定衍生多糖或脱氧三氯苯甲酸酯中的水合物含量。推导化水平被计算为每100千达吨脱氧核酸氢化物，以促进不同平均分子量的聚合物之间的比较。此处描述的协议可能需要针对特定的多糖进行调整。

CDAP 化学可用于多糖功能化，用于各种结合试剂。例如，它可以用于生物淀粉酸多糖，用于 ELISAs。蛋白质可以直接与CDAP激活的多糖相关联，但这通常需要对特定的多糖进行一些优化。

结合率可超过75%使用CDAP化学使低成本结合疫苗，如印度血清研究所制造的疫苗。