紫外和可见光的吸光度使用紫外-可见分光光度计测量。包括发射紫外线辐射的氘灯和产生可见光辐射的钨灯用作紫外-可见分光光度计的光源。单色仪或棱镜被用作衍射光栅,即将入射光分解成不同的波长。狭缝系统用于将所需波长聚焦在样品池上。紫外可见分光光度计的样品必须处于液相。因此,固体有机化合物应在分析前溶解在合适的溶剂中。然后将样品放入称为比色皿的样品容器中。根据样品和所用光的类型,比色皿可以由石英晶体、玻璃或塑料制成。玻璃或塑料样品池用于可见光谱分析,因为它们的光谱截止波长约为 350nm - 这意味着它们可以有效透射可见光但吸收紫外线。紫外光谱法则使用下限约为 200nm 的石英池来透射紫外光。
由于溶剂也会吸收光,因此在分析实际样品之前,需先使用仅含溶剂的空白样品进行测试。选择合适的溶剂对于紫外光谱法的准确吸光度测量至关重要。水、95% 乙醇和己烷是紫外可见光谱法中最常用的溶剂。合适的溶剂还有助于获得吸收带的精细结构。非极性溶剂不会与溶质形成氢键。因此,溶质的最终光谱将类似于在气相中观察到的光谱,其中通常存在精细结构。相反,极性溶剂会与溶质形成氢键,这意味着不会观察到吸收带的精细结构。
通常使用光电倍增管、电荷耦合器件和光电二极管或光电二极管阵列作为检测器。穿过样品池的光的强度称为 I。在单光束仪器中,所有光都会穿过样品池。在双光束仪器中,光被分成两束;一束用作参考,另一束穿过样品。在现代二极管阵列分光光度计中,光电二极管检测器用于一次性记录整个光谱。
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