عزل النوى من الخلايا السلفية القلبية للفأر من أجل التنميط فوق الجينوم والتعبير الجيني بدقة خلية واحدة

الهدف الرئيسي من هذا البروتوكول هو دراسة تفاعل العوامل الوراثية والبيئية في سياق نمو القلب ومساهمتها في عيوب القلب الخلقية. تظهر مناهج النوى المفردة مثل RNA-seq أحادي النوى وترنح النوى المفردة كطرق رئيسية لدراسة عدم التجانس الخلوي في الصحة والمرض أثناء نمو القلب. إحدى الخطوات المحددة لهذه التجارب هي أنه يجب تشغيل جميع العينات في وقت واحد.

أثناء العمل مع جميع الظروف التجريبية ، فإن جمع مواد جديدة كافية لجميع الحالات في وقت واحد قد يكون أمرا صعبا. على الرغم من إحراز تقدم كبير في هذا المجال في خلية واحدة خلال السنوات الأخيرة ، إلا أن الصعوبة الرئيسية تكمن في معالجة العينات المجانية. تجنب الصعوبة مفيد للغاية لتحديد الآلية الجزيئية الكامنة وراء عيوب أمراض القلب الخلقية.

يصف هذا البروتوكول الخطوات التي يجب اتباعها لعزل النوى عالية الجودة بنجاح من معلق خلايا القلب المجمدة التي تم الحصول عليها من أجنة الفئران. وبروتوكولنا متوافق مع المصب أحادي النواة RNA-seq وترنح أحادي النواة. نأمل أن يساعد هذا الإجراء الباحثين المهتمين ويشجعهم على استخدام هذه الطريقة القوية لأبحاثهم.