نموذج التآكل الظهاري لدراسة التئام جروح القرنية

هذا البروتوكول مهم لأنه نموذج ممتاز لدراسة التهاب القرنية ومساهمته في التئام الجروح في ظل الظروف العادية والمرضية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تخلق جرحا ظهاريا دقيقا وقابلا للتكرار دون اختراق الغشاء السفلي. هذا النموذج من جرح القرنية مباشر وسريع الأداء.

سيوضح الإجراء الأمير أكووا ، طالب الدكتوراه من مختبري. للبدء ، قم بإعداد محلول فلوريسين بنسبة 1٪ عن طريق إذابة 10 ملليغرام من ملح فلوريسين الصوديوم في ملليلتر واحد من محلول ملحي معقم أو PBS. بعد ذلك ، للتخدير ، قم بإعداد 10 ملليلتر من كوكتيل الكيتامين - زيلازين عن طريق خلط ملليلترين من الكيتامين ، وملليلتر واحد من الزيلازين ، وسبعة ملليلتر من PBS المعقمة.

بعد تخدير فأر من النوع البري C57 أسود من النوع البري من نوع C57 يبلغ من العمر 8 إلى 12 أسبوعا ، قم بتقييم عمق التخدير عن طريق تقييم رد فعل الدواسة بعد قرصة إصبع القدم. لإنشاء جرح القرنية الظهاري ، ضع الفأر المخدر تحت مجهر تشريح. جرح العين اليمنى أو اليسرى فقط والحفاظ على الاتساق مع العين المصابة عند الانتقال من الماوس إلى الماوس.

أبق العين مفتوحة على مصراعيها عن طريق إمساك الجفون بالإبهام والسبابة. ثم، باستخدام تريفين معقم قطره مليمترين، قم بترسيم مركز القرنية وقم بتدوير التريفين بلطف لترك انطباع على ظهارة القرنية. لا تمارس ضغطا مفرطا ، لأن هذا يمكن أن يؤدي إلى ثقب القرنية.

بعد ذلك ، عقد سبود نادي الغولف الحاد المعقم بزاوية 45 درجة تقريبا من سطح القرنية ، وإزالة الظهارة عن طريق الكشط الدقيق والمستمر داخل المنطقة المحددة باستخدام spud. لا تستخدم القوة المفرطة وتحافظ على الترطيب باستخدام PBS المعقم إذا لزم الأمر. لمراقبة إغلاق الجرح وإعادة ظهارته ، ماصة 1 إلى 1.5 ميكرولتر من محلول الفلوريسين 1٪ على السطح المصاب وتصوير القرنية باستخدام مجهر رقمي مع مصدر ضوء أزرق.

صورة القرنية المصابة في أوقات محددة بعد الإصابة. التقط صورا خلال الدقيقة الأولى من محلول الفلوريسين بالإضافة إلى تجنب انتشار المحلول إلى الظهارة المحيطة ، مما قد يؤدي إلى المبالغة في تقدير حجم الجرح. بعد ذلك ، باستخدام برنامج تحليل الصور ، تتبع منطقة الجرح والتعبير عن منطقة الجرح في كل نقطة زمنية كنسبة مئوية من منطقة الجرح الأصلية في ساعة الصفر.

يوضح المجهر الإلكتروني الناقل لجرح القرنية أن الغشاء السفلي للظهارة لا يزال سليما حتى بعد الإصابة. في الفئران البرية التي يتراوح عمرها بين 8 و 12 أسبوعا ، يكتمل إغلاق الجرح بعد 24 ساعة من الإصابة. تتميز الاستجابة الالتهابية للجرح بتصوير الخلايا في الأطراف.

يظهر هنا الأوعية الدموية الطرفية للقرنية غير المصابة مع العدلات خارج الأوعية الدموية ، والقرنية المصابة مع الصفائح الدموية خارج الأوعية الدموية والعدلات بعد 30 ساعة من التآكل. لإعادة إنتاج هذا البروتوكول بنجاح ، يجب استخدام نفس السلالة في كل نطاق من الماوس ، ويجب إنشاء حجم الجرح وعمقه كما هو موضح.