تحاكي نماذج التبرع بالأعضاء التجريبية بشكل عام الحالات المعزولة لإصابة الأنسجة المتعلقة بعملية الوفاة و / أو الأحداث المتعلقة بالحفاظ على العضو وزرعه. هذه النماذج مفيدة جدا في تطوير العلاجات التي تسعى إلى زيادة عدد التبرعات ، وبالتالي تقليل قائمة الترجيح للمتلقين المحتملين. وفقا لذلك ، أصبح من المهم تطوير نماذج مختلفة ، مثل تلك التي تحفز الموت الدماغي وموت الدورة الدموية.
نظرا لأن هذه الأحداث مرتبطة بعملية ضارة مختلفة تضر بوظائف الأعضاء والأنسجة المتبرع بها. التخدير والتحضير قبل الجراحة. ضع الجرذ في غرفة مغلقة مع 5٪ إيزوفلوران لمدة دقيقة إلى أربع دقائق.
تأكد من التخدير المناسب عن طريق التحقق من منعكس قرصة إصبع القدم. في حالة عدم وجود ردود فعل منعكسة ، قم بإجراء التنبيب الرغامي ، 14 مقياس Angiocath بمساعدة منظار الحنجرة للأطفال. مع جهاز التنفس الصناعي المعدل مسبقا وحجم المد والجزر 10 ملليلتر لكل كيلوغرام ، 90 دورة في الدقيقة ، و PEEP 3.0 سم H2O ، قم بتوصيل قسطرة القصبة الهوائية بجهاز التنفس الصناعي واضبط تركيز التخدير على 2٪إزالة الفراء من مناطق الاهتمام والرأس والرقبة والصدر والبطن.
ثم ، باستخدام الشاش ، وتنظيف المجال الجراحي وذيل بمحلول كحولي من الكلورهيكسيدين ديغلوكونات ، 2٪ تم تكرار إجراء التطهير ثلاث مرات. اقطع طرف ذيل ، ضع الإبهام والسبابة على قاعدة الذيل ، ثم اضغط عليها وحركها بعيدا عن القاعدة. جمع عينة الدم المحيطية ، 20 ميكرولتر من خلال الذيل لإجمالي عدد الكريات البيض. فغر القصبة الهوائية.
إجراء تشريح طولي للقصبة الهوائية عنق الرحم ، بدءا من الثلث الأوسط من الرقبة إلى الشق فوق القصي. حوالي 1.5 سم شق. بعد شق الجلد والأنسجة تحت الجلد ، تشريح عضلات عنق الرحم حتى تتعرض القصبة الهوائية.
ضع الرباط الحريري 2.0 أسفل القصبة الهوائية. باستخدام مقص صغير ، يقوم القصبة الهوائية بفغر القصبة الهوائية في الثلث العلوي من القصبة الهوائية لتحقيق تهوية موحدة. قطع القصبة الهوائية أفقيا بين حلقتين غضروفيتين لاستيعاب قطر قنية معدنية ، 3.5 سم.
أدخل أنبوب التهوية وثبته بأربطة معدة. قم بتوصيل أنبوب التهوية بنظام تهوية الصغيرة. تهوية الفئران مع حجم المد والجزر من 10 ملليلتر لكل كيلوغرام ، بمعدل 70 دورة في الدقيقة ، وزقزقة من 3 سم H2O.
قسطرة الشريان الفخذي والوريد. لذلك ، فضح مثلث الفخذ من خلال شق صغير ، حوالي 1.5 سم في المنطقة الأربية. تحديد وعزل الأوعية الفخذية.
لهذا الإجراء ، استخدم مجهر ستيريو 3.2 مرة تكبير. ضع اثنين من الأربطة الحريرية 4.0 تحت الأوعية الدموية أو الوريد أو الشريان ، أحدهما بعيد والآخر قريب. أغلق الرباط البعيد وضع عقدة مضبوطة مسبقا في الرباط القريب واسحبها.
أدخل القسطرة من خلال شق صغير مسبق التشكيل في الأوعية. ثبت القنية لتجنب الخلع. قم بتوصيل قسطرة الشريان بمحول ضغط ونظام مراقبة العلامات الحيوية لتسجيل MAP.
يجب وضع محول الطاقة على مستوى قلب. قم بتوصيل قسطرة الرماية بمحول ضغط ونظام مراقبة العلامات الحيوية لتسجيل MAP. يجب وضع محول الطاقة على مستوى قلب.
ضع قسطرة المحقنة 3 ملليلتر في الوريد ، بهدف الترطيب والاستنزاف عند الضرورة. تحريض الصدمة النزفية. من خلال المحور الوريدي وباستخدام حقنة هيبارين ، قم بإزالة كميات صغيرة من الدم حتى يتم الوصول إلى قيم MAP لحوالي 50 ملم من الزئبق.
وبالتالي ، إنشاء صدمة نزفية. لاحظ ، يجب أن تؤخذ حصص الدم على فترات 10 دقائق. حافظ على استقرار الضغط عند حوالي 50 ملليمترا من الزئبق لمدة 360 دقيقة.
للقيام بذلك ، قم بإزالة أو إضافة حصص من الدم إذا زاد الضغط أو انخفض على التوالي. ضع مصدرا للحرارة في مكان قريب لتجنب انخفاض حرارة الجسم. في نهاية البروتوكول ، احصد الكتلة الرئوية بسعة الرئة الإجمالية للتجميع ، وإما أن تجمد في النيتروجين السائل أو توضع في محلول التثبيت لمزيد من الدراسات.
تحريض الموت الدورة الدموية. للحث على موت الدورة الدموية ، يتم تطبيق 150 ملليغرام لكل كيلوغرام من ثيوبنتال الصوديوم من خلال الخط الوريدي. ثم قم بإيقاف تشغيل نظام التهوية.
لاحظ الانخفاض التدريجي في خطة عمل البحر الأبيض المتوسط. يجب أن يبقى في نقص التروية الدافئ في درجة حرارة الغرفة لمدة 180 دقيقة. في نهاية البروتوكول ، أعد توصيل الرئتين بجهاز التنفس الصناعي الميكانيكي ، واحصد الكتلة الرئوية بسعة الرئة الإجمالية للتجميع.
وإما تجميد فلاش في النيتروجين السائل ، أو وضعها في محلول التثبيت لمزيد من الدراسات. تحريض الموت الدماغي. ضع الفئران في وضعية الانبطاح.
إزالة الجلد من الجمجمة باستخدام مقص جراحي. حفر بئر عيار 1 ملم ، 2.8 ملم أمامي ، و 10 ملم بطني و 1.5 ملم جانبي للخياطة السهمية. أدخل قسطرة البالون بالكامل في تجويف الجمجمة ، وتأكد من أن البالون مملوء مسبقا بمحلول ملحي ، 500 ميكرولتر.
بمساعدة حقنة ، قم بتضخيم القسطرة بسرعة. تأكيد الموت الدماغي من خلال مراقبة الارتفاع المفاجئ ل MAP. منعكس كوشينغ ، وغياب ردود الفعل ، وتوسع الحدقة الثنائي ، وانقطاع النفس.
بعد التأكيد ، توقف عن التخدير واحتفظ بالحيوان على التهوية الميكانيكية لمدة 360 دقيقة. ضع مصدرا للحرارة في مكان قريب لتجنب انخفاض حرارة الجسم. في نهاية البروتوكول ، احصد الكتلة الرئوية بسعة الرئة الإجمالية للتجميع. النتائج.
بعد نفخ القسطرة ، شهدت مجموعة الموت الدماغي زيادة مفاجئة في مستويات ضغط الدم. ذروة ارتفاع ضغط الدم هي حدث غريب يتعلق بزيادة الضغط داخل الجمجمة ، ويمكن اعتباره أول دليل على إنشاء موت الدماغ. وأعقب ضغط الذروة هذا انخفاض سريع في خطة عمل البحر المتوسط.
استمر انخفاض ضغط الدم لمدة 50 دقيقة تقريبا ، وبعد ذلك ، عادت مستويات MAP إلى قيم قريبة من تلك الموجودة عند خط الأساس. على عكس مجموعة الموت الدماغي ، يرتبط الانخفاض في MAP في مجموعة الصدمة النزفية بسحب حصص الدم في أول 10 دقائق من التجربة. تم الحفاظ على صدمة نقص حجم الدم لمدة 360 دقيقة.
بعد ست ساعات من ظهور الصدمة النزفية ، أظهرت زيادة في مقاومة أنسجة الرئة ، تليها انخفاض امتثال الجهاز التنفسي. لتقييم التغيرات في وذمة الرئة ، تم فحص نسبة الوزن الرطب إلى الجاف. في هذا السياق ، أظهر الموت الدماغي وذمة أكبر مقارنة بمجموعة الصدمة النزفية وموت الدورة الدموية.
أخيرا ، ارتبطت مجموعة الصدمة النزفية بزيادة العدد الإجمالي للكريات البيض الجهازية مقارنة بالقيم الأساسية ، وفيما يتعلق بمجموعة الموت الدماغي. ورافق ذلك زيادة في مستويات تعبير IL1 Beta في مجموعة الموت الدماغي ومجموعة الصدمة النزفية مقارنة بموت الدورة الدموية. أظهرت مجموعة الصدمة النزفية أيضا مستويات أعلى من TNF Alpha مقارنة بمجموعة الموت الدماغي ومجموعة الموت الدوري.
نماذج التبرع بالأعضاء الموصوفة هنا هي أدوات محتملة في دراسة التغييرات المرتبطة بمنهجيات حصاد الكسب غير المشروع المختلفة ، ويمكن أن توفر وسائل يمكن من خلالها الحصول على فهم كامل لتأثير جودة هذه الأعضاء على نتائج ما بعد الزرع. بالنظر إلى قابلية استنساخ وموثوقية المنهجيات المعروضة هنا.
