تشكل طرق وطرق التصوير المستخدمة في هذا البروتوكول صورة ممتازة لسلامة وفعالية العلاج الجيني في القلب الإقفاري قبل الشروع في التجارب السريرية. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في انخفاض معدل غزو نموذج نقص التروية ، ولكن أيضا الاستهداف الدقيق للعلاج الجيني للمناطق التي تعاني من نقص الحركة ولكنها لا تزال قابلة للحياة في القلب. ابدأ بإجراء تخطيط صدى القلب عبر الصدر قبل عملية نقص التروية ونقل الجينات والقتل الرحيم لتقييم أي سائل تأموري يمكن اكتشافه وتحديد إجهاد عضلة القلب.
ضع محول الطاقة في الفضاء الوربي الثالث أو الرابع تحت إبط الخنزير بعلامة تشير إلى عظم الخنزير للوصول إلى مناظر المحور القصير شبه القصي على مستوى الصمام التاجي والعضلات الحليمية والمستويات القمية. ثم اضغط على اكتساب لحفظ مقطع. لإجراء تصوير الأوعية التاجية مباشرة قبل عملية نقص التروية ، استخدم قسطرة 6-F تحت توجيه التنظير الفلوري مع عامل تباين اليود لتصوير الشريان التاجي الأيمن والشريان التاجي الصاعد الأيسر والشريان النازل الأمامي الأيسر.
للتصوير السينمائي في الحاقن الذاتي ، اضبط مدة البلعة على ثلاث ثوان ، والحجم الإجمالي ل 21 ملليلتر ، ثم اضغط على مفرد ، ونعم لإدارة عامل تباين اليود في البطين الأيسر عبر قسطرة ضفيرة 5-F. إجراء التصوير السينمائي للحيوان أثناء الراحة ثم إعطاء الدوبوتامين عن طريق الوريد وجرعات متصاعدة لتحريض الإجهاد. بمجرد تحقيق معدل ضربات القلب المستهدف البالغ 160 نبضة في الدقيقة ، يقوم بإجراء تصوير سينمائي وإزالة قسطرة الضفيرة.
لحساب الكسر القذفي ، افتح برنامج القياس ، وحدد التحليل البطيني للصورة المعنية. قم بتمرير الصورة لتحديد إطار زمني ، واحد في الانبساط والآخر في الانقباض ، ثم حدد أداة لرسم الخطوط العريضة البطينية لكل إطار زمني. لإحداث نقص تروية عضلة القلب المزمن ، قبل 14 يوما من نقل الجينات ، ضع ملفا على الشريان التاجي الأيسر ، وحرك دعامة عنق الزجاجة إلى الشريان التاجي الأيسر ، وضع الدعامة بعيدا إلى القطر الأول.
قم بتضخيم الدعامة إلى الضغط الاسمي في الشريان ، باستخدام جهاز نفخ مع نسبة دعامة إلى تجويف تبلغ 1.3 لتثبيت عنق الزجاجة في مكانه. بعد 15 ثانية إضافية ، قم بتفريغ الدعامة ، واسحب الجهاز من الشريان ، وتأكد من الموضع الصحيح لدعامة عنق الزجاجة عن طريق تصوير الأوعية. بعد تصوير الأوعية والقياسات الوظيفية تحت التوجيه بالمنظار ، أدخل قسطرة رسم الخرائط للبطين الأيسر عبر غمد الفخذ لرسم الخرائط التشريحية الكهربائية ، وجمع ما لا يقل عن 100 نقطة من البطين الأيسر ، وانقر فوق قبول للموافقة على نقطة.
في الخريطة النهائية ، من أجل الجدوى ، استخدم جهدا أحادي القطب يزيد عن خمسة مللي فولت كمعيار. وبالنسبة لنقص الحركة ، حدد تقصيرا خطيا محليا منخفضا قدر الإمكان ، على الأقل يصل إلى 12٪ولكن يفضل أن يكون أقل من 6٪بعد القتل الرحيم للحيوان ، احصد القلب من التجويف الصدري. بمجرد شطف القلب المحصود ، ضع إبرة قياس 18 فوق الصمام الأبهري وقم بتوصيل الإبرة بمضخة التروية.
قم ببث القلب ب 750 ملليلتر من 1٪ بارافورمالدهيد. استخدم سكينا حادا لتقطيع القلب إلى شرائح بسمك سنتيمتر واحد ، وجمع العينات من منطقة نقل الجينات إلى 4٪ بارافورمالدهيد ونيتروجين سائل. قم بتخزين العينات للتلطيخ في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 48 ساعة عند أربع درجات مئوية.
تم تحليل فعالية العلاج الجيني عن طريق قياس الإجهاد المحيطي ، والكسر القذفي ، وتروية عضلة القلب عن طريق فحص التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني 15O-water. يمكن جمع عينات الأنسجة مباشرة من منطقة نقل الجينات ، من خلال مقارنة القلب بالخريطة التشريحية الكهروضوئية. تم تقييم التعبير الجيني التحوير وتكوين الأوعية العلاجية من خلال التحليل النسيجي المناعي من خلال تحليل عدد الخلايا الإيجابية بعد تلطيخ بيتا غالاكتوزيداز ، ومن خلال تحليل منطقة الشعيرات الدموية في عضلة القلب ، بعد تلطيخ جزيء التصاق الخلايا البطانية / الصفائح الدموية -1.
من المهم تأكيد وضع دعامة عنق الزجاجة عن طريق تصوير الأوعية الدموية وجمع العينات من منطقة نقل الجينات ، والتي يمكن تأكيدها من خلال مقارنة القلب بالخريطة التشريحية الكهربية. بشكل عام ، من الأهمية بمكان إجراء جميع القياسات بأكثر الطرق قابلية للتكرار.
