ويدعم هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة(NIH)، ومنحة R00-DK114498، ووزارة الزراعة في الولايات المتحدة (وزارة الزراعة الأمريكية)، منحة CRIS: 3092-51000-062 إلى Y. Z.

يتم إيواء الحيوانات في ظروف موحدة بعد رعاية الحيوانات والبروتوكولات التجريبية التي وافقت عليها اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه في كلية بايلور للطب (BCM). يتم تغذية الحيوانات بنظام غذائي قياسي أو خاص ، و libitum إعلان الماء ، ويتم الاحتفاظ بها مع دورة نهارية / ليلية لمدة 12 ساعة.
1. قياس الدهون مصل الصيام
<ol><li>نقل الفئران إلى قفص جديد بعد الساعة 5 مساء وبسرعة مع حرية الوصول إلى الماء، بين عشية وضحاها (مع حوالي 16 ساعة من الصيام قبل التجربة). يضمن الصيام الليلي إفراغا كاملا لمسالك الجهاز الهضمي للفئران. ملاحظة: تأكل الفئران برازها أثناء الصيام، لذلك لا يمكن لسحب الطعام ضمان صيامها بشكل كاف.</li>
	<li>في صباح اليوم التالي، أمسك الماوس من الذيل ووضعه على السطح. سحب بلطف على ذيل الماوس لوضع الماوس في المقيد. ضع ضبط النفس الأنف لإعادة تدريب حركة الماوس في حين لا يزال يسمح الماوس للتنفس. شد مقبض الأنف. مراقبة حركات الصدر للتأكد من أن الحيوان يتنفس بشكل طبيعي وتقليل الوقت الذي يقضيه الفأر في التقييد.</li>
	<li>إجراء شق سطحي (نيك) في الوريد الذيل من الماوس حرة الحركة، ورسم 25 ميكرولتر من الدم من شق في الشعرية الزجاجية (ملء حوالي 1/3 من الشعرية) دون كبح جماح الماوس. بسرعة تفجير الدم في أنبوب الطرد المركزي الدقيق.</li>
	<li>وقف النزيف باستخدام مساحيق ستاستيك، وإعادة ملء الأعلاف في القفص، وتأكد من الفئران تظهر أي علامات الإجهاد.</li>
	<li>أكمل سحب الدم لجميع الفئران.</li>
	<li>السماح للدم لتجلط عن طريق تركها دون عائق في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. تدور عينات الدم المتخثر في 2000 x ز في 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق في جهاز الطرد الدقيق على مقاعد البدلاء المبردة، ونقل supernatant (المصل) للتحليل. ملاحظة: يمكن تخزين المصل عند -20 درجة مئوية لعدة أسابيع حتى التحليل. للتخزين على المدى الطويل، والحفاظ على المصل في -70 درجة مئوية.</li>
	<li>تحليل كل المستقلب الدهون باستخدام بروتوكول الشركة المصنعة المقدمة.</li>
</ol>2. اختبار التسامح داخل الدهون عن طريق الفم
<ol><li>بعد الساعة 5 مساء، قم بوزن الفئران لحساب الحجم داخل الدهون الذي سيتم إعطاؤه لهم في اليوم التالي. ثم، نقل الفئران إلى قفص جديد وسريع لهم بين عشية وضحاها (16 ساعة).</li>
	<li>في صباح اليوم التالي، وضع علامة ذيول الفئران الموجودة في قفص واحد للمساعدة في التعرف عليها في خطوات النزيف اللاحقة.</li>
	<li>جعل في الوريد الذيل ورسم 15 ميكرولتر من الدم من شق في الشعيرات الدموية الزجاجية (ملء حوالي 1/5 من الشعرية)، وتفجير الدم بسرعة في أنبوب الطرد الدقيق لT = 0 المصل. ملاحظة: ليست هناك حاجة لوقف النزيف أثناء الفحص ما لم تظهر الفئران النزيف الزائد.</li>
	<li>فئران Gavage 20٪ داخل الدهون باستخدام إبرة غافاج 18G بنسبة 15 ميكرولتر لكل غرام من وزن الجسم، وذلك باستخدام وزن الجسم قبل الصيام. مكدس كل ماوس من قبل 1 دقيقة. ملاحظة: وزن الحيوان وتحديد حجم إبرة gavage المناسبة. عموما، إبرة gavage قياس 18 مناسبة للفئران >25 غرام، وإبرة gavage قياس 20-22 سيكون أكثر ملاءمة للحيوانات الصغيرة. قف على الفأر، وأمسك الجلد على الكتفين لعقد رأس الحيوان في مكانه. ضع إبرة الغافاج في الفم ثم تقدم بلطف على طول الحنك العلوي ، حتى يتم الوصول إلى المريء. يجب أن يمر الأنبوب دون مقاومة. بمجرد الوصول إلى العمق المناسب ، يمكن إدارة Intralipid ببطء. إزالة بلطف الإبرة التالية نفس الزاوية أثناء إدخال إبرة بعد إدارة Intralipid. إعادة الحيوان إلى القفص ورصد لعلامات التنفس شاقة أو غيرها من الضيق. ملاحظة: يمكن للباحثين الذين يفتقرون إلى الخبرة مع تقنيات نزيف الفم أو الذيل كومة كل فأر من قبل 2 دقيقة أو حتى لفترة أطول.</li>
	<li>سحب الدم في T = 1 و 2 و 3 و 4 و 5 و 6 ساعات: ارسم 15 ميكرولتر من الدم (1/5 شعرية) لكل فأر من خلال نزيف الذيل ، وفجر الدم بسرعة في أنبوب الطرد المركزي الدقيق.</li>
	<li>قم بتدفير عينات الدم عند 2000 × غرام في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق في جهاز طرد دقيق. نقل supernatant، بما في ذلك طبقة الدهون العائمة، إلى أنبوب PCR للتخزين. يمكن تخزين الناسخة الفائقة عند -20 درجة مئوية لعدة أسابيع حتى التحليل. ملاحظة: يجب أن يكون الناتسخة الفائقة البلازما. إذا كانت بعض العينات قد تخثرت بالفعل بحلول وقت الطرد المركزي ، فإنه لا يؤثر على قياس الدهون الثلاثية.</li>
	<li>بعد جمع الدم الأخير، وقف النزيف باستخدام مساحيق ستاستيك، إعادة ملء الأعلاف في القفص، وتأكد من الفئران تظهر أي علامات الإجهاد الشديد.</li>
	<li>تحميل 2 ميكرولتر من معيار الدهون الثلاثية وجمع الفلورات في لوحة 96 جيدا.</li>
	<li>إضافة 200 ميكرولتر من كاشف الدهون الثلاثية والسماح للوح حضانة لمدة 5 دقائق في 37 درجة مئوية لتطوير اللون.</li>
	<li>قياس الامتصاص في 500 نانومتر مع الطول الموجي المرجعي من 660 نانومتر في قارئ لوحة المختبر، وحساب تركيز العينة.</li>
</ol>3. β3 مستقبلات الأدرينالية ناهض CL 316,243 حفز تحلل الدهون المقايسة
<ol><li>إعداد CL 316,243 كمحلول مخزون من 5 ملغم/مل (50x) في المالحة المعقمة، وتخزينها في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.</li>
	<li>في الصباح ، وزن الفئران لحساب كمية محلول CL 316243 المخفف اللازم للتجربة. سوف يتلقى الماوس 10 ميكرولتر لكل غرام من وزن الجسم من CL المخفف 316,243، لجرعة نهائية من 1 ملغم/ كجم وزن الجسم.</li>
	<li>نقل الفئران إلى قفص جديد مع حرية الوصول إلى الماء، وبسرعة لهم لمدة 4 ساعات.</li>
	<li>جعل ما يكفي من محلول 1x CL 316,243 من المخزون 50x باستخدام المالحة. التركيز النهائي لل1x CL 316,243 الحل هو 0.1 ملغم/ مل. استخدام المالحة لمجموعة العلاج السيطرة.</li>
	<li>وضع علامة على ذيول الفئران الموجودة في نفس القفص لسهولة التعرف عليها أثناء خطوات النزيف.</li>
	<li>جعل في الوريد الذيل، ورسم 15 ميكرولتر من الدم من شق في الشعيرات الدموية الزجاجية (ملء حوالي 1/5 من الشعيرات الدموية)، وتفجير الدم بسرعة في أنبوب الطرد الدقيق لT = 0 عينة. ملاحظة: ليست هناك حاجة لوقف النزيف أثناء الفحص ما لم تظهر الفئران النزيف الزائد.</li>
	<li>حقن محلول CL 316,243 المخفف (أو التحكم إذا تم تضمينه في التجربة) intraperitoneally بحجم 10 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم. مكدس كل ماوس من قبل 1 دقيقة. استخدم 5 فئران كحد أقصى لكل تجربة مدتها 60 دقيقة، أو 10 فئران لفريق من شخصين.</li>
	<li>سحب الدم في T = 5، 15، 30، 60 دقيقة: رسم 15 ميكروغرام من الدم (1/5 الشعيرات الدموية) لكل فأر من خلال نزيف الذيل.</li>
	<li>بعد جمع الدم الأخير، وقف النزيف باستخدام مساحيق ستاستيك، إعادة ملء الأعلاف في القفص، وتأكد من الفئران تظهر أي علامات الإجهاد الشديد.</li>
	<li>تدور عينات الدم في 2000 x ز في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق في جهاز الطرد المركزي المبردة. نقل supernatant إلى أنبوب PCR للتخزين. يمكن تخزين الناسخة الفائقة عند -20 درجة مئوية لعدة أسابيع حتى التحليل.</li>
	<li>تحميل 1 ميكرولتر من 2x معايير الجلسرين المخففة تسلسليا (0.156, 0.312, 0.625, 1.25, و 2.5 ملغ / مل تركيزات مكافئ Trioleine) وجمعت الفلورات في لوحة 96 جيدا. إضافة 100 ميكرولتر من كاشف الجلسرين مجانا، والسماح للوح حضانة لمدة 5 دقائق في 37 درجة مئوية للون لتطوير.</li>
	<li>قياس الامتصاص في 540 نانومتر باستخدام قارئ لوحة المختبر، وحساب تركيز العينة.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+chylomicron+uptake+into+lacteals.">Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, 52-57 (2010).</li><li>Nuno, J., de Oya, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipoprotein+lipase:+review.">Lipoprotein lipase: review.</a> Revista Cl&#237;nica Espa&#241;ola. 170 (3-4), 83-87 (1983).</li><li>Williams, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+processes+that+handle+--+and+mishandle+--+dietary+lipids.">Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids.</a> Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).</li><li>Burla, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MS-based+lipidomics+of+human+blood+plasma:+a+community-initiated+position+paper+to+develop+accepted+guidelines.">MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines.</a> Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).</li><li>Umpleby, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone+measurement+guidelines:+Tracing+lipid+metabolism:+the+value+of+stable+isotopes.">Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes.</a> Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).</li><li>Mitchell, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+paired+sibling+analysis+of+the+beta-3+adrenergic+receptor+and+obesity+in+Mexican+Americans.">A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).</li><li>Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caloric+restriction+in+C57BL/6J+mice+mimics+therapeutic+fasting+in+humans.">Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans.</a> Lipids in Health and Disease. 5, 13 (2006).</li><li>Hayek, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+increases+high+density+lipoprotein+(HDL)+levels+both+by+increasing+the+transport+rates+and+decreasing+the+fractional+catabolic+rates+of+HDL+cholesterol+ester+and+apolipoprotein+(Apo)+A-I.+Presentation+of+a+new+animal+model+and+mechanistic+studies+in+human+Apo+A-I+transgenic+and+control+mice.">Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).</li><li>Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+evidence+for+the+absence+of+a+functional+cholesteryl+ester+transfer+protein+gene+in+mice+and+rats.">Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats.</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry &amp; Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).</li><li>Tall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+cholesterol+ester+transfer+protein+and+relationship+to+coronary+artery+disease+risk.">Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk.</a> Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).</li><li>Singh, A. K., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglyceride+and+cardiovascular+risk:+A+critical+appraisal.">Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal.</a> Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).</li><li>Miller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triglycerides+and+cardiovascular+disease:+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).</li><li>Dron, J. S., Hegele, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+Hypertriglyceridemia.">Genetics of Hypertriglyceridemia.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 11, 455 (2020).</li><li>Dole, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relation+between+non-esterified+fatty+acids+in+plasma+and+the+metabolism+of+glucose.">A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose.</a> Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).</li><li>Bartelt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+adipose+tissue+activity+controls+triglyceride+clearance.">Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance.</a> Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).</li><li>de Souza, C. J., Burkey, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta+3-adrenoceptor+agonists+as+anti-diabetic+and+anti-obesity+drugs+in+humans.">Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans.</a> Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).</li><li>Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-adrenergic+control+of+lipolysis+and+thermogenesis+in+adipose+tissues.">Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues.</a> Journal of Experimental Biology. 221, (2018).</li></ol>

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

تعمل المقايسات الثلاثة الموصوفة بقوة في المختبر ، مع بعض الاعتبارات الحرجة. الصيام بين عشية وضحاها مطلوب لتحديد مستويات الدهون في مصل الصيام واختبار التسامح داخل الدهون عن طريق الفم. لاختبار التسامح داخل الدهون عن طريق الفم، فمن الأهمية بمكان أن تدور الدم في درجة حرارة الغرفة لتقليل تشكيل طبقة الدهون، وخاصة في 1- و 2 ساعة نقطة زمنية. من المهم عدم تجاهل هذه الطبقة الدهنية إذا كانت تتشكل. تأكد من نقل supernatant مع طبقة الدهون، وماصة بلطف لخلطها معا لتحديد الدهون الثلاثية.
تفسير مستويات الدهون المصل الصيام وقد ثبت الصيام لخفض مستويات الكولسترول الكلي في الفئران7, في حين تستهلك بشكل مزمن الوجبات الغذائية عالية المحتوى من الدهون يزيد من مستويات الكوليسترول الكلي8. هناك نوعان رئيسيان من الكوليسترول: البروتين الدهني عالي الكثافة -الكوليسترول (HDL-C) والكوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL-C). ويعتبر HDL-C والدهون "جيدة" في البشر. فإنه يحمل الكولسترول وينقله إلى الكبد ليتم مسحها من النظام. LDL-Cs تشكل معظم الكوليسترول في مصل الدم البشري، وأنها يمكن أن تتراكم في الشرايين، مما يؤدي إلى أمراض الشرايين الرئيسية. ومع ذلك، الفئران تفتقر إلى إنزيم مهم، cholesteryl استر نقل البروتين (CETP)9،أن يتوسط تبادل الدهون الثلاثية لالكوليسترول استرified بين HDL ويبوب-البروتيناتالدهنية 10. وهذا يعطي الفئران ملف تعريف جسيمات البروتين الدهني مختلفة تماما، مع HDL كونها الأنواع الرئيسية. ونتيجة لذلك، فإن التغيير في مستويات الكوليسترول في الدم الكلي يعكس في المقام الأول التغيرات في مستويات HDL-C.
في كل من الفئران والبشر، يمكن أن تزيد مستويات الدهون الثلاثية عالية المصل التهاب منخفض الدرجة وقد يضعف وظيفة القلب11،12. ومع ذلك، لا يزيد HFD مستويات الدهون الثلاثية المصل. العوامل الوراثية قد تلعب دورا مهيمنا في مستويات الدهون الثلاثية المصل على شروط التمثيل الغذائي13. NEFA في الدم يمكن استيعابها بشغف واستخدامها من قبل العديد من الأجهزة, قمعها عن طريق الأنسولين والتغذية, وزيادة الادرينالين14. تغذية HFD لا يغير مستوى NEFA المصل، مما يشير إلى جديلة الهرمونية تهيمن على تنظيم مستويات NEFA المصل.
تفسير اختبار إزالة الدهون عن طريق الفم يتم امتصاص داخل الدهون تدار شفويا من قبل الخلايا الظهارية المعوية ويحمل في جزيئات البروتين الدهني في مجرى الدم، حيث يتم تحريرها واستخدامها من قبل الأعضاء الطرفية. التغيرات في نشاط ليباز البروتين الدهني, امتصاص الدهون الثلاثية الأنسجة الطرفية, والأكسدة سوف تؤثر على ديناميات مستويات الدهون الثلاثية المصل. على سبيل المثال، الخلايا الدهنية البني والبيج تتأكسد بشغف الأحماض الدهنية لإنتاج الحرارة. التعرض للبرد يزيد بشكل كبير من نشاط الخلايا الدهنية البني والبيج ، وتسريع إزالة البلازما من الدهون الثلاثية15. كان اختبار إزالة التحمل داخل الدهون الفموية حاسما لتقييم آثار التعرض للبرد على استقلاب الدهون الثلاثية ، كما هو موضح في الورقة15.
تقييم المركبات التي تستهدف انحلال الدهون في الأنسجة الدهنية يتم نقل تنشيط تحلل الدهون عن طريق الجهاز العصبي المتعاطف وعوامل الغدد الصماء ومختلف الأيض. وقد وضعت العديد من المركبات في التنمية من قبل شركات الأدوية لتعزيز انحلال الدهون الأنسجة الدهنية16,17. تقييم فعاليتها في النماذج الحيوانية قبل السريرية مثل الفئران أمر بالغ الأهمية لتسهيل عملية التنمية. هنا نستخدم ناهض مستقبلات الأدرينالية β3- CL 316,243 ، كمثال لتوضيح كيف يمكننا تقييم كيفية استجابة الماوس للمجمع وما إذا كان الماوس يعرض مستويات مختلفة من الحساسية للمجمع في حالات التمثيل الغذائي المختلفة. كما رأينا في النتائج المثالية ، تسبب الاستخدام المتكرر ل CL 316243 في إزالة الحساسية للعلاج في الفئران. استخدمنا CL 316,243 لتوضيح كيف يمكننا تقييم استجابة الفأر للعلاج الحاد. والأهم من ذلك، يمكن تطبيق هذا المفهوم والتصميم بسهولة على جزيئات أخرى تستهدف التمثيل الغذائي للدهون الدهنية الأنسجة الدهنية.
القيود وهناك عدد قليل من أنواع الدهون المختارة تقدم معلومات محدودة حول التمثيل الغذائي للدهون في الفئران. نظرا لكمية المصل الصغيرة المتاحة من نزيف الذيل ، يقيس هذا البروتوكول الكوليسترول الكلي فقط ولا يميز HDL-C و LDL-C ، لأن تلك المقايسات تتطلب كميات كبيرة من الدم. لأن الفئران فريدة من نوعها في الطريقة التي تفتقر إلى CETP، والكوليسترول الكلي هو تقريب جيد، وأكثر HDL-C في الفئران لا يشير إلى ملف الدهون صحية، وبالتالي فإن المعلومات الإضافية التي تم الحصول عليها من خلال التمييز بين الكوليسترول في جزيئات البروتين الدهني المختلفة محدودة.
مستويات الدهون في الدم، بما في ذلك مستويات الدهون الثلاثية، وعادة ما تكون تأثير صافي من امتصاص ورحلة من قبل العديد من الأجهزة التي تعمل بطريقة ديناميكية جدا. تفسير النتائج عادة ما يتطلب إعداد تجريبي مع متغير واحد فقط. كما هو مبين في النتيجة المثالية، لا يمكن إجراء استنتاج محدد بشأن امتصاص الدهون أو رحلة بين C57BL/6J وC57BL/6N السلالات الفرعية من الفئران C57BL/6. ومع ذلك ، في دراسة التعرض للبرد المذكورة15، يمكن استخدام المعرفة السابقة والافتراضات في بعض الأحيان لاستبعاد المساهمات من متغيرات أخرى ، وتمكن المؤلفون من تثبيت أنسجة محددة واكتشفوا أن الأنسجة الدهنية البنية ساهمت في إزالة الدهون الثلاثية المعززة.
وأخيرا، التمثيل الغذائي هو عملية ديناميكية. تغيير مستقلب واحد في مسار التمثيل الغذائي الدهون يوفر سوى لقطة من الحالة العامة. ولفهم التدفق، يلزم إجراء دراسة تدفق أكثر تطورا باستخدام تقنيات تتبع النظائر.
وباختصار، فإن البساطة هي قوة وضعف هذا البروتوكول. لا يتم تصميم المقايسات الثلاثة المعروضة هنا لدراسة مسارات استقلاب الدهون المحددة ، ولكن بدلا من ذلك لتوفير فحص أولي أو نقطة انطلاق لتقييم استقلاب الدهون في أبحاث التغذية والسمنة العامة.

الكربوهيدرات والدهون هما ركائز رئيسية لعملية التمثيل الغذائي للطاقة. يؤدي التمثيل الغذائي للدهون الشاذة إلى العديد من الأمراض البشرية، بما في ذلك داء السكري من النوع الثاني، وأمراض القلب والأوعية الدموية، وأمراض الكبد الدهنية، والسرطانات. يتم امتصاص الدهون الغذائية ، والدهون الثلاثية بشكل رئيسي ، من خلال الأمعاء في الجهاز اللمفاوي وتدخل الدورة الدموية الوريدية في chylomicrons بالقرب من القلب1. يتم حمل الدهون بواسطة جزيئات البروتين الدهني في مجرى الدم ، حيث يتم تحرير مويتات الأحماض الدهنية من خلال عمل ليباز البروتين الدهني في الأعضاء الطرفية مثل العضلات والأنسجة الدهنية2. يتم مسح الجسيمات المتبقية الغنية بالكوليسترول من الكبد3. وقد استخدمت الفئران على نطاق واسع في المختبرات كنموذج للبحوث لدراسة التمثيل الغذائي للدهون. مع مجموعة أدوات وراثية شاملة متاحة ودورة تربية قصيرة نسبيا ، فهي نموذج قوي لدراسة كيفية امتصاص الدهون وتوليفها واستقلابها.
نظرا لتعقيد عملية التمثيل الغذائي للدهون ، وعادة ما تستخدم دراسات الدهون المتطورة أو دراسات التتبع النظيري لتحديد مجموعات من أنواع الدهون أو التدفقات الأيضية ذات الصلة بالدهون والمصائر4،5. وهذا يخلق تحديا هائلا للباحثين دون معدات متخصصة أو خبرة. في هذه الورقة، نقدم ثلاثة اختبارات يمكن أن تكون بمثابة اختبارات أولية قبل استخدام التقنيات الصعبة تقنيا. وهي إجراءات غير نهائية للفئران ، وبالتالي مفيدة للغاية لتحديد الاختلافات المحتملة في قدرة التعامل مع الدهون وتضييق العمليات المتأثرة.
أولا، يمكن لقياس جزيئات الدهون في مصل الصيام أن يساعد المرء على التأكد من الملف الشخصي العام للدهون في الماوس. يجب صائم الفئران ، لأن العديد من أنواع الدهون ترتفع بعد الوجبات ، ويتأثر مدى الزيادة بشدة بتكوين النظام الغذائي. يمكن قياس العديد من جزيئات الدهون، بما في ذلك الكوليسترول الكلي والدهون الثلاثية والأحماض الدهنية غير الم استرضد (NEFA)، باستخدام عدة تجارية وقارئ لوحة التي يمكن قراءة امتصاص.
ثانيا، يقوم اختبار التسامح داخل الدهون عن طريق الفم بتقييم القدرة على التعامل مع الدهون كأثر صافي للامتصاص والتمثيل الغذائي. يسبب الدهون الداخلية المدارة عن طريق الفم ارتفاعا في مستويات الدهون الثلاثية المتداولة (1-2 ساعة) ، وبعد ذلك تعود مستويات الدهون الثلاثية في المصل إلى المستويات القاعدية (4-6 ساعات). يقدم هذا المقايسة معلومات حول مدى تمكن الماوس من التعامل مع الدهون الخارجية. القلب والكبد والأنسجة الدهنية البنية هي المستهلكين النشطين من الدهون الثلاثية، في حين أن الأنسجة الدهنية البيضاء يخزن كاحتياطي للطاقة. ستؤدي التغييرات في هذه الوظائف إلى اختلافات في نتائج الاختبار.
وأخيرا، يعتبر تعزيز تحلل الدهون لتعبئة الدهون المخزنة استراتيجية محتملة لفقدان الوزن. مستقبل β3-adrenergic مسار الإشارات في الأنسجة الدهنية يلعب دورا هاما في انحلال الدهون الدهون, وعلم الوراثة البشرية قد حددت فقدان وظيفة تعدد الأشكال Trp64Arg في مستقبلات β3-الأدرينالية المرتبطة السمنة6. CL 316,243, محددة وقوية β3-adrenergic مستقبلات ناهض, يحفز تحلل الدهون الأنسجة الدهنية والإفراج عن الجلسرين. تقييم استجابة الماوس لCL 316,243 يمكن أن توفر معلومات قيمة عن تطوير, تحسين, وفهم فعالية المركب.
بشكل جماعي ، يمكن استخدام هذه الاختبارات كشاشة أولية للتغيرات في الحالة الأيضية للدهون للفئران. ويتم اختيارهم لسهولة الوصول إلى الأجهزة والكواشف. مع النتائج المستمدة من هذه المقايسات، يمكن للباحثين تشكيل صورة عامة للياقة الأيضية لحيواناتهم واتخاذ قرار بشأن نهج أكثر تطورا واستهدافا.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20% Intralipid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml</td>
			<td>Shaotong</td>
			<td>B07F1KRMYN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL 316,243 Hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Feeding Needles (18 Gauge)</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>FNC-18-2-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free Glycerol Reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol Standard Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>999-34691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>991-34891</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>995-34791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>993-35191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>50989-161-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrix Plus Chemistry Reference Kit</td>
			<td>Verichem</td>
			<td>9500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-222-168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-362-574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEFA STANDARD SOLUTION</td>
			<td>Fujifilm Wako Diagnostics</td>
			<td>276-76491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Boston Bioproducts</td>
			<td>BM-220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Triglycerides Reagent</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TR22421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total Cholesterol Reagents</td>
			<td>Thermo Scientifi</td>
			<td>TR13421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>11695-4022-1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing whole-body lipid-handling capacity in mice

تقييم التمثيل الغذائي للدهون هو حجر الزاوية في تقييم وظيفة التمثيل الغذائي، ويعتبر أساسيا لدراسات التمثيل الغذائي في الجسم الحي. الدهون هي فئة من العديد من الجزيئات المختلفة مع العديد من المسارات المشاركة في التوليف والتمثيل الغذائي. هناك حاجة إلى نقطة انطلاق لتقييم الهموستاسي الدهون للتغذية والسمنة البحوث. تصف هذه الورقة ثلاث طرق سهلة ويمكن الوصول إليها تتطلب القليل من الخبرة أو الممارسة لإتقانها ، ويمكن تكييفها من قبل معظم المختبرات لفحص تشوهات التمثيل الغذائي للدهون في الفئران. هذه الطرق هي (1) قياس العديد من جزيئات الدهون في مصل الصيام باستخدام مجموعات تجارية (2) القياس لقدرة على التعامل مع الدهون الغذائية من خلال اختبار التسامح داخل الدهون عن طريق الفم، و (3) تقييم الاستجابة لمجمع الصيدلانية، CL 316،243، في الفئران. معا، ستوفر هذه الطرق نظرة عامة عالية المستوى على قدرة التعامل مع الدهون في الفئران.

نظهر مع ثلاثة مقتطفات أن كل مقايسة تقدم معلومات قيمة حول التمثيل الغذائي للدهون الفئران. بالنسبة للفئران الذكور C57BL/6J ، التي تواجه تحديا من ثمانية أسابيع من التغذية الغنية بالدهون (HFD) بدءا من عمر ثمانية أسابيع ، كانت مستويات الكوليسترول الإجمالي مرتفعة بشكل كبير ، في حين أن ثلاثي الدهون في الدم وNEFA لم تكن(الجدول 1)، مما يشير إلى أن الدهون الثلاثية وNEFA في الدم لا ينظمها في الغالب تحدي الدهون الغذائية. وفي الفوج الثاني من الفئران، تم تغذية السلالات الفرعية C57BL/6J وC57BL6/N من C57BL6 بHFD لمدة ثمانية أسابيع، بدءا من عمر ثمانية أسابيع. تمت مقارنة مستويات الدهون الثلاثية في المصل بعد تحدي داخل الدهون عن طريق الفم. وأظهرت النتائج فرقا مذهلا بين 6N و 6J السلالات الفرعية، مع 6J وجود ذروة أعلى بكثير في مستويات الدهون الثلاثية المصل بعد الإدارة داخل الدهون، مما يدل على امتصاص معززة أو إزالة الدهون الثلاثية أبطأ بكثير (الشكل 1). وأخيرا، بالنسبة للفئران C57BL/6J الذكور البالغ من العمر ثمانية أسابيع التي تتغذى على الطعام العادي (NC)، أدى علاج CL 316,243 واحد (1 ملغم/كجم من وزن الجسم) إلى زيادة كبيرة في الجلسرين المصلي. ومع ذلك، أدى المعالجة اليومية داخل الصفاق للفئران مع 1 ملغم/كغ وزن الجسم CL 316,243 لمدة أسبوع واحد إلى رد فعل حاد على CL 316,243، مما يشير إلى تطور المقاومة لCL 3116,263 في تلك الفئران(الشكل 2).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="always" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>معلمات المصل</td>
			<td>NC</td>
			<td>HFD</td>
			<td>قيمة P</td>
		</tr>
<tr>
<td>الكوليسترول (ملغم/ ديسيلتر)</td>
			<td>132.7±10.3</td>
			<td>202.3±8.4</td>
			<td>0.0002</td>
		</tr>
<tr>
<td>الدهون الثلاثية (ملغم/ديسيلت)</td>
			<td>91.7±9.1</td>
			<td>79.3±4.5</td>
			<td>0.26</td>
		</tr>
<tr>
<td>الأحماض الدهنية غير المهترة (ملليمول/لتر)</td>
			<td>1.47±0.12</td>
			<td>1.48±0.08</td>
			<td>0.73</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: أنواع الدهون الصيام في الفئران تتغذى على الطعام العادي (NC) أو النظام الغذائي الغني بالدهون (HFD) لمدة ثمانية أسابيع. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط القيم ± SEM. N = 6 لمجموعة NC، n = 12 لمجموعة HFD. تم تحديد قيمة Pباستخدام اختبار Tللطالب ذو الذيلين.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61927/61927fig1v3.jpg"> الشكل 1: مثال على النتائج التي تظهر الفرق في الدهون الثلاثية المصل من السلالات الفرعية C57BL/6 بعد تحدي داخل الدهون عن طريق الفم. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط القيم ± SEM. N = 5 لكل مجموعة. تم تحديد قيمة Pباستخدام اختبار tللطالب ذو الذيلين في كل نقطة زمنية. * ع <.05 ، ** ع <.01. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61927/61927fig1v3large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61927/61927fig2v3.jpg"> الشكل 2: مثال على النتائج التي تظهر تطور المقاومة للعلاج CL 316,243 في الفئران C57BL/6J بعد أسبوع واحد من العلاج اليومي CL 316,243. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط القيم ± SEM. N = 5 لكل مجموعة. تم تحديد قيمة Pباستخدام اختبار tللطالب ذو الذيلين في كل نقطة زمنية. ** ص <.01. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61927/61927fig2v3large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice at JoVE.com

Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

توفر هذه الورقة ثلاثة اختبارات سهلة ويمكن الوصول إليها لتقييم استقلاب الدهون في الفئران.

تقييم قدرة معالجة الدهون في الجسم كله في الفئران

Assessing lipid metabolism is a cornerstone of evaluating metabolic function, and it is considered essential for in vivo metabolism studies. Lipids are a ...

assessing-whole-body-lipid-handling-capacity-in-mice

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

3.8K Views.  Baylor College of Medicine. توفر هذه الورقة ثلاثة اختبارات سهلة ويمكن الوصول إليها لتقييم استقلاب الدهون في الفئران.

Video: Assessing Whole-Body Lipid-Handling Capacity in Mice

Transthoracic Echocardiography in Mice

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene expression. Transgenic and gene targeting methods can be used to generate mice with altered cardiac size and function,1-3 and as a result, in vivo techniques are needed to evaluate their cardiac phenotype. Transthoracic echocardiography, pulse wave Doppler (PWD), and tissue Doppler imaging (TDI) can be used to provide dimensional measurements of the mouse heart and to quantify the degree of cardiac systolic and diastolic performance. Two-dimensional imaging is used to detect abnormal anatomy or movements of the left ventricle, whereas M-mode echo is used for quantification of cardiac dimensions and contractility.4,5 In addition, PWD is used to quantify localized velocity of turbulent flow,6 whereas TDI is used to measure the velocity of myocardial motion.7 Thus, transthoracic echocardiography offers a comprehensive method for the noninvasive evaluation of cardiac function in mice.

Transthoracic echocardiography offers a noninvasive method for the evaluation of cardiac function in mice. A combination of ultrasound and Doppler imaging modalities can be used to obtain dimensional measurements of the heart and intracardiac blood flow, which together provide an assessment of cardiac systolic and diastolic performance.

ضربات القلب عبر الصدر في الفئران

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

تقييم التغييرات المشوهة في نموذج الزرد من التعرض الكحول الجنينية

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body temperature that is observed during fever. The use of hyperthermia as an adjuvant has emerged as a promising procedure for tumor regression in the field of cancer biology. For this purpose, the most important requirement is to have reliable and uniform heating protocols. We have developed a protocol for hyperthermia (whole body) in mice. In this protocol, animals are exposed to cycles of hyperthermia for 90 min followed by a rest period of 15 min. During this period mice have easy access to food and water. High body temperature spikes in the mice during first few hyperthermia exposure cycles are prevented by immobilizing the animal. Additionally, normal saline is administered in first few cycles to minimize the effects of dehydration. This protocol can simulate fever like conditions in mice up to 12-24 hr. We have used 8-12 weeks old BALB/Cj female mice to demonstrate the protocol.

This paper describes a protocol for whole body hyperthermia in mice that can stimulate fever like conditions up to 12-24 hr.

بروتوكول لونغ ارتفاع الحرارة المدة الجسم الجامع في الفئران

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Use of genetically modified mice enhances our understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders such as a spinal cord injury (SCI). Freehand manual control used to produce a laceration model of SCI creates inconsistent injuries often associated with a crush or contusion component and, therefore, a novel technique was developed. Our model of cervical laceration SCI has resolved inherent difficulties with the freehand method by incorporating 1) cervical vertebral stabilization by vertebral facet fixation, 2) enhanced spinal cord exposure, and 3) creation of a reproducible laceration of the spinal cord using an oscillating blade with an accuracy of &plusmn;0.01 mm in depth without associated contusion. Compared to the standard methods of creating a SCI laceration such as freehand use of a scalpel or scissors, our method has produced a consistent lesion. This method is useful for studies on axonal regeneration of corticospinal, rubrospinal, and dorsal ascending tracts.

A novel technique to create a reproducible in vivo model of cervical spinal cord laceration injury in the mouse is described. This technique is based on spine stabilization by fixation of the cervical facets and laceration of the spinal cord using an oscillating blade with an accuracy of &plusmn;0.01 mm.

تسيطر الاصابات تهتك عنق في الفئران

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

One desirable endpoint of general anesthesia is the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is less straightforward than it is in human patients. A widely used behavioral surrogate for hypnosis in rodents is the loss of righting reflex (LORR), or the point at which the animal no longer responds to their innate instinct to avoid the vulnerability of dorsal recumbency. We have developed a system to assess LORR in 24 mice simultaneously while carefully controlling for potential confounds, including temperature fluctuations and varying gas flows. These chambers permit reliable assessment of anesthetic sensitivity as measured by latency to return of the righting reflex (RORR) following a fixed anesthetic exposure. Alternatively, using stepwise increases (or decreases) in anesthetic concentration, the chambers also enable determination of a population's sensitivity to induction (or emergence) as measured by EC50 and Hill slope. Finally, the controlled environmental chambers described here can be adapted for a variety of alternative uses, including inhaled delivery of other drugs, toxicology studies, and simultaneous real-time monitoring of vital signs.

Loss of the righting reflex has long served as a standard behavioral surrogate for unconsciousness, also called hypnosis, in laboratory animals. Alterations in volatile anesthetic sensitivity caused by pharmacological interventions can be detected with a carefully controlled high-throughput assessment system, which may be adapted for delivery of any inhaled therapeutic.

تقييم التغيرات في المتطايرة العام التخدير حساسية من الفئران بعد التدخل الدوائي المحلي أو الجهازية

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in post-menopausal women has not been adequately studied. Accordingly, we investigated the impact of voluntary cage-wheel exercise and forced treadmill exercise on cardiac adaptation in menopausal mice. The most commonly used inducible model for mimicking menopause in women is the ovariectomized (OVX) rodent. However, the OVX model has a few dissimilarities from menopause in humans. In this study, we administered 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) to female mice, which accelerates ovarian failure as an alternative menopause model to study the impact of exercise in menopausal mice. VCD selectively accelerates the loss of primary and primordial follicles resulting in an endocrine state that closely mimics the natural progression from pre- to peri- to post-menopause in humans. To determine the impact of exercise on exercise capacity and cardiac adaptation in VCD-treated female mice, two methods were used. First, we exposed a group of VCD-treated and untreated mice to a voluntary cage wheel. Second, we used forced treadmill exercise to determine exercise capacity in a separate group VCD-treated and untreated mice measured as a tolerance to exercise intensity and endurance.

Two exercise paradigms were tested on a newly developed chemically induced menopausal mouse model to examine the impact of menopause on exercise capacity and cardiac adaption to exercise.

طريقة لدراسة تأثير كيميائيا التي يسببها الفشل المبيض على القدرة على ممارسة الرياضة والقلب التكيف في الفئران

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

منتبذ عنق الرحم القلب زرع في الفئران

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key element is the quantitative determination of a tumor-specific genetic alteration in relation to a universal sequence using a dual-probe digital PCR assay and the subsequent calculation of the proportion of tumor cells. The assay is carried out on a culture containing tumor cells of an established line and spiked-in non-tumor cells. The mixed culture is treated with a test drug at various concentrations. After the treatment, DNA is prepared directly from the survived adhesive cells in wells of 96-well plates using a simple and inexpensive method, and subjected to a dual-probe digital PCR assay for measuring a tumor-specific genetic alteration and a reference universal sequence. In the present demonstration, a heterozygous deletion of the NF1 gene is used as the tumor-specific genetic alteration and a RPP30 gene as the reference gene. Using the ratio NF1/RPP30, the proportion of tumor cells was calculated. Since the dose-dependent change of the proportion of tumor cells provides an in vitro indication for specificity of the drug, this genetic and cell-based in vitro assay will likely have application potential in drug discovery. Furthermore, for personalized cancer-care, this genetic- and cell-based tool may contribute to optimizing adjuvant chemotherapy by means of testing efficacy and specificity of candidate drugs using primary cultures of individual tumors.

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

The goal of this protocol is to assess specificity of anticancer drugs in vitro using mixed cultures containing both tumor and non-tumor cells.

تقييم خصوصية المضاد للسرطان المخدرات<em&gt; في المختبر</em

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to expend energy has made it a potential target for novel therapies to ameliorate obesity and associated metabolic disorders in humans. Though this tissue has been well studied in small animals, BAT&#39;s thermogenic capacity in humans remains largely unknown due to the difficulties of measuring its volume, activity, and distribution. Identifying and quantifying active human BAT is commonly performed using 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography and computed tomography (PET/CT) scans following cold-exposure or pharmacological activation. Here we describe a detailed image-analysis approach to quantify total-body human BAT from 18F-FDG PET/CT scans using an open-source software. We demonstrate the drawing of user-specified regions of interest to identify metabolically active adipose tissue while avoiding common non-BAT tissues, to measure BAT volume and activity, and to further characterize its anatomical distribution. Although this rigorous approach is time-consuming, we believe it will ultimately provide a foundation to develop future automated BAT quantification algorithms.

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Using free, open-source software, we have developed an analytical approach to quantify total and regional brown adipose tissue (BAT) volume and metabolic activity of BAT using 18F-FDG PET/CT.

الجسم كله والإقليمية الكمي لنشاط الإنسان براون الأنسجة الدهنية باستخدام 18وفدج PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...