الهدف الرئيسي من هذه الدراسة هو إثبات منهجية مفصلة من الوفيات مرض تعفن الجذر الجاف، مثل تقنية الورق النشاف وتقنية وعاء المريض. هذه التقنيات سوف تكون مفيدة لدراسة التفاعل بين نبات الحمص و Rhizoctonia bataticola. فهم تفاعل نبات الحمص مع مسببات الأمراض الفطرية Rhizoctonia bataticola مهم زراعيا.
لهذا، هناك حاجة إلى مقايسات متعددة الاستخدامات وقابلة للاستنساخ للغاية. هنا، اثنين من المقايسات التي تستخدم على نطاق واسع في مختبرنا هي أظهرت. واحد منهم هو النشاف ورقة المستندة، والآخر هو المريض وعاء القائمة على المقايسة.
لتنفيذ مقايسة الورق النشاف، إعداد ريزوكتونيا bataticola الفطر من خلال التوسع من ثقافة مائلة إلى لوحة بيتري ومن ثم إلى الثقافة السائلة. إعداد حضانة الحمص من قبل، بذر البذور في وعاء كبير. اقتلاعهم ووضعهم في inoculum السائل ووضعها على ورقة النشاف.
مراقبة لأعراض المرض، وهي نخر على الجذر، تعفن الجذر، والأوراق اصفرار بعد ثمانية أيام من التطعيم. هو مبين هنا هو باختصار ، والخطوات في تقنية الورق النشاف. لتنفيذ جرعة المريضة وعاء، تلقيح وجبة الحمص مع الفطريات.
بعد الاحتضان في 30 درجة مئوية لمدة 15 يوما، يتم الحصول على الثقافة المريضة. ثم، مسحوق لهم وخلطها مع مزيج وعاء. زرع البذور على وعاء السيطرة ووعاء المرضى.
في الأيام التالية، لاحظ الأعراض، وهي النخر على الجذر، تعفن الجذر، وصفراء ورقة على النباتات المصابة، بعد 10 أيام من بذر. يمكن توسيع الوعاء المريض ويمكن استخدامه في الفحوصات واسعة النطاق. يظهر هنا هو باختصار من الخطوات في تقنية وعاء المريض.
Rhizoctonia bataticola هو الممرض النامية. هذا الفطر تنتج هيفا وميكروسكلروتيا، والتي تعمل كما inuclum الأولية خلال عدوى النبات. يتم استخدام الثقافة النقية التي تطبق من خلال طريقة العزل للتشكيلات.
النقطة الرئيسية لهذه المقايسات الناجحة هي الحمل الأمثل inoculum. مظاهرة من تقنية الورق النشاف يبدأ هنا. لإعداد السائل Rhizoctonia bataticola inoculum، تلقيح مرق 500 مل مع المكونات agar الفطرية من ثلاثة أيام ثقافة لوحة جديدة من العمر واحتضان القارورة في حاضنة في 28 درجة مئوية لمدة خمسة أيام.
تصفية المايسيليا الفطرية الرمادية الداكنة مع microsclerotia. التوقف المرحلي في الماء المُقلَد من الوُكّاف وإزالة الوسائط. مرة أخرى، تصفية من mycelia وإزالة الرطوبة عن طريق تجفيف البقعة mycelia لبضع دقائق.
تعليق 100 غرام من inoculum الفطرية في 200 مل من الماء autoclaved في زجاجة مربى وخلطه بشكل صحيح. تطوير حضانة الحمص عن طريق زرع البذور المعقمة السطحية في solerant. اقتلاع النباتات بعد ثمانية أيام من البذر ، وغسلها وشطفها بـ ro. خذ ورقة نشاف وأضعاف مرة واحدة ووضع نصفها على الدرج.
جعله الرطب مع الماء autoclaved. تأخذ النباتات وتراجع في inoculum لمدة 30 ثانية مع حركة متقطعة صعودا وهبوطا. وضع النباتات في مثل هذه الطريقة التي يتم تغطية الجذور داخل ورقة و folia يبقى خارج.
أضعاف النصف الآخر وثني ورقة. للسيطرة، تراجع النباتات في المياه autoclaved، والحفاظ على الصواني في غرفة النمو لمدة ثمانية أيام. نتائج. مراقبة لأعراض مثل ورقة اصفرار، تعفن الجذر، نخر في الجذر، والحد من عدد الجذر الجانبي.
مظاهرة من تقنية وعاء المريض يبدأ هنا. خذ كيلوغرام واحد من بذور الحمص التجارية. غسل البذور مع مياه الصنبور ويغسل مرة أخرى مع الماء RO.
نقع البذور لمدة خمس ساعات. مرة أخرى، وغسل البذور بالماء RO إضافة 300 غرام في زجاجة مربى. اُتّمَفّها في 121 LVS لمدة 15 دقيقة بشكل مستمر.
بعد التبريد، نقل الزجاجة من خلال تدفق لارينار. تلقيح الزجاجات مع ثلاثة agar الفطرية المقابس ما يقرب من أربعة ملليمتر مربع الأحجام وهز عليه جيدا لخلط بشكل صحيح. لف الزجاجات واحتضانها في حاضنة في 30 درجة مئوية لمدة 15 يوما.
مراقبة للزجاجات مع نمو داكنة حول بذور الحمص وإزالة البذور. جففها في درجة حرارة الغرفة ومسحوقها. خلط Rhizoctonia bataticola مسحوق مع سولوريت والاحتفاظ بها في درجة حرارة الغرفة لمدة خمسة أيام.
السطح تعقيم بذور GT62 وزرعها على عمق سنتيمترين. نتائج. مراقبة ل 90٪ وفيات في وعاء المرضى. بعد 10 أيام من البذر ، لاحظ لأعراض مثل النخر في الجذور والحد من عدد الجذر الجانبي واصفرار الورقة في الأيام التالية.
يمكن إعداد وعاء المريض في التربة الحقل كذلك. الجفاف و Rhizoctonia bataticola العدوى. فرض الإجهاد الجفاف في وعاء المرضى عن طريق حجب المياه.
تظهر هنا النباتات التي تخضع للسيطرة والجفاف، والعوامل المسببة للأمراض، والجفاف المتزامن والإجهاد الممرض. مراقبة لأعراض, وهي, المزيد من نخر, تعفن الجذر, والحد من عدد الجذر الجانبي, وطول الجذر في علاج الإجهاد مجتمعة بالمقارنة مع العلاج الممرض فقط. الاستنتاجات. يمكن تنفيذ تقنية الورق النشاف في ظروف في المختبر.
يمكن تنفيذ تقنية وعاء المريضة في ظروف في فيفو. في ميناء المرضى، يمكن فرض الإجهاد اللاأحيائي، أي الإجهاد الجفاف، جنبا إلى جنب مع العدوى المسببة للأمراض. باستخدام هذه التقنيات، يمكن للمرء أن دراسة نمط العدوى المسببة للأمراض.
تحدث معظم التغيرات الفسيولوجية أثناء تفاعل الحمص-ريزوكتونيا باتاتيتشولا، كما يتم فحص الأنماط الجينية للحمص من أجل المقاومة. إن تحليل الورق النشاف مفيد جدًا لتوليد عينات عالية الجودة للدراسات المجهرية والبيولوجيا الجزيئية. يتم تطبيق فحص الوعاء المريض ، الذي يحاكي حالات العدوى الطبيعية ، لفحص الجرثومة الحمصية.
