معظم النباتات في الطبيعة هي على الأرجح مترابطة من قبل الفطريات التي تسكن الجذر التكافلية تسمى الفطريات mycorrhizal. هذه الطريقة تدرس بوضوح كيف تؤثر شبكات mycorrhizal الشائعة على التفاعلات النباتية والعواقب الإيكولوجية اللاحقة. مع هذا الأسلوب، يمكننا أن ندرس صراحة دور شبكات mycorrhizal المشتركة مع السماح لجميع النباتات أن تكون مستعمرة من قبل الفطريات، بدلا من استبعاد الفطريات، مما يؤدي إلى نمو ضعيف النباتات.
للبدء في تعديل حاويات الشتلات الأنبوبية التجارية مع البلاستيك المرن ، استخدم مثقابًا وتمسك الحاوية مقابل سياج على معصر الحفر ، ويكون لديك موقف مع تعبئة قصيرة تناسب داخل الحاوية للمساعدة في الاحتفاظ بها في مكانها أثناء الحفر. ثم، حفر اثنين من الثقوب، واحد فوق الآخر، في جانبي الحاوية، بحيث تكون الثقوب حوالي سنتيمتر واحد على حدة. قطع قطعة رقيقة المتبقية من البلاستيك بين الثقوب لجعل فتحة واحدة ممدود، حوالي سنتيمترين، وخمسة سنتيمترات طويلة.
كرر قطع هذه الفتحات ممدود على الجانب الآخر من الحاوية. لتغطية فتحات مع شبكة النايلون، وقطع 40 ميكرومتر شبكة المسام في أكبر عدد كبير من 9.5 سنتيمتر في 8.5 قطعة سنتيمتر كما هناك حاويات. ثم، وذلك باستخدام الغراء الصناعي الساخن عالية القوة، وربط شبكة النايلون خارجيا على الحاويات لتغطية كل من فتحات، مع بعض التداخل الطفيف في النسيج.
تطبيق الغراء الساخن حول فتحات على الحاوية، وعلى طول حواف طويلة على شبكة النايلون، ولفة الحاوية على شبكة النايلون، والغشاء الماعور، عند استخدامها، لتجنب حرق أصابعك. إضافة طبقة من الغراء على طول حافة النسيج حيث تتداخل حواف شبكة، واضغط على حافة بعض الورق المقوى لختم بحزم. مرة واحدة وقد برد الغراء، واستخدام الشريط المرن لإرفاق نهايات أعلى وأسفل من النسيج للحاوية، لمنع حواف فضفاضة والتمزيق.
باستخدام الشريط نفسه، وتغطية الثقوب الصغيرة على جانبي نهاية مخروطية من كل حاوية لمنع نمو الجذر من الحاوية في بقية وعاء. ضع رخام زجاجي في قاع كل حاوية لمنع فقدان التربة مع توفير الصرف، ثم قم بتجميع الأواني كما هو موضح في المخطوطة. استخدام حاويات صلبة وغير معدلة لمعالجة التحكم التي لا تنطوي على أي احتمال لCMN لتشكيل بين النباتات.
إضافة فطر AM inoculum إلى التربة، عن طريق خلط موحد 1.2 القطع الجذر المفروم طولها سنتيمترا جيدا مع التربة. حدد التربة المطلوبة مختلطة مع السيليكا اللسيكا العقم الرمل أو حبات الزجاج لتقليل تركيز المواد الغذائية المعدنية المتاحة للنباتات. ضع الحاويات المملوءة في رغوة حفر تم بناؤها سابقًا في الأواني.
لجعل المغذيات الفقيرة خليط الرمل السيليكا من الصرف الكافي، مزيج الرمل حجم الجسيمات المتوسطة مع الرمل حجم الجسيمات الصغيرة في خلاط الأسمنت. ملء الفضاء الخلالي مع هذا الخليط باستخدام قمع للمساعدة في ملء المساحات الصغيرة. بعد ذلك ، معالجة ما قبل الزراعة ، أو ما يسمى بالنباتات الممرضة ، من الأنواع المطلوبة في كل حاوية للحفاظ على الفطريات AM ، والتي ستنتشر بين الحاويات وإنشاء شبكات mycorrhizal المشتركة.
تنمو النباتات لمدة شهرين إلى ثلاثة أشهر في حوالي 24 درجة مئوية في الدفيئة للسماح لإقامة CMN. خياطة النباتات التجريبية عن طريق البذر في حاويات. انتظر حتى تحتوي جميع الحاويات على شتلات منبتة قبل إزالة النباتات الممرضة المعالجة المسبقة ، عن طريق قص براعمها.
لإنشاء علاجات CMN، اترك بعض الحاويات غير المنتقلة طوال مدة التجربة. لقطع الهواي فعليا تمتد بين الحاويات المعدلة، تدوير بعض الحاويات أسبوعيا، مع التأكد من القيام بذلك من خلال تناوب كامل واحد، لتجنب غير قصد تغيير التفاعلات فوق الأرض. مباشرة بعد التناوب، والمياه بكثافة جميع الأواني لإعادة الاتصال بين الركيزة الخلالي والجانبين من الحاويات.
إن نقع جميع الأواني بالماء بعد قطع شبكات mycorrhizal الشائعة أمر بالغ الأهمية لإعادة الاتصال بين الحاوية والركيزة الخلالية ، وبالتالي منع التهوية غير المقصودة للحاويات. اخصب النباتات المجاورة مع 0.5٪ نيتروجين 15 نترات البوتاسيوم المخصب، وكلوريد الأمونيوم. اخصّي الفرد المستهدف بسماد نيتروجين 14 بتركيز متساوٍ.
إعادة العشوائية مواقف الأواني على مدار التجربة، على الأقل شهريا. قياس النمو أسبوعيا عن طريق قياس طول ورقة أطول، لرصد عندما يبدأ النمو في التباطؤ، والتأكد من الحصاد قبل أن تصبح النباتات ملزمة الجذر. للحصاد، مقطع جميع الأنسجة فوق الأرض، ووضع النباتات الفردية في مغلفات وصفت مع علاجها، وعاء، والموقف.
ثم تجف الأنسجة فوق الأرض عند 60 درجة مئوية في فرن تجفيف الهواء القسري ، إلى وزن ثابت ، ثم قياس الوزن الجاف لكل نسيج نباتي. السماح للتربة لتجف يومين إلى ثلاثة أيام قبل إزالة الحاويات، والحصاد الجذور. بعد الحصاد، فرشاة بلطف قبالة التربة قدر الإمكان من أنظمة الجذر.
اغسل الجذور على منخل بحجم 250 ميكرون من المسام، لتجنب فقدان الجذر. بعد السماح للجذور للهواء الجاف، وزن النظام الجذر كله. قص نظام الجذر بشكل عشوائي، ووضع الأجزاء في 50٪ الإيثانول.
إعادة وزن نظام الجذر المتبقي، وتخزينها في مغلف ورقة المسمى لتجف في 60 درجة مئوية لتقييم الوزن الجاف. عندما تزايد Andropogon gerardii Vitman في تجربة النبات المستهدف ، وقطع أو منع CMNs تقلص الوزن الجاف فوق الأرض الهدف ، مما يشير إلى أن CMNs سليمة عززت نمو النبات. النباتات مع CMNs مقطوعة ولا CMNs استجابت بالمثل لعلاجاتها.
المنافسة، التي نمو فرد واحد يقمع نمو آخر قريب الفرد، تم الكشف في العلاج CMN سليمة، ولكن ليس في العلاجات CMN مقطوعة أو لا. وكانت المقارنات الشاملة لمختلف تركيزات الأنسجة النسيجية للأوراق الغذائية المعدنية، مقابل تركيزات المنغنيز ذات الحجم النباتي فقط، مرتبطة بشكل إيجابي بالأوزان الجافة للنباتات المستهدفة فوق الأرض، على جميع العلاجات. تم تقييم الأنسجة النباتية المستهدفة للنيتروجين 15 في أنسجة الأوراق مقابل حجم النبات ، بعد إضافة النيتروجين 15 ملصق فقط إلى حاويات الجيران.
وكان النباتات المستهدفة مع CMNs سليمة أعلى تركيزات النيتروجين 15، مقارنة مع كل العلاجات الأخرى. كان ل CMNs سليمة إيجابية للغاية ، منحدر مختلف إلى حد كبير من كمية النيتروجين ، من ذلك من العلاج CMNs مقطوعة ، مما يشير إلى أن النباتات الكبيرة حصلت على المزيد من النيتروجين من CMN تصل إلى الحاويات المجاورة ، من الأفراد المستهدفين الصغيرة. في تجربة ميدانية باستخدام النوى الدورية المصنوعة من الأنابيب البلاستيكية، mycelium خارج التطرف وراء الأنابيب كان لها تأثير يذكر على نمو soapberry خلال تجربة 13 شهرا.
ومع ذلك، قطع ذلك عن طريق دوران الأنابيب خفض النيتروجين الورقي، والفوسفور، والنحاس، والتي أظهرت بشكل كبير من قبل النباتات الكلوروتيك. تدوير الحاويات في نفس الاتجاه الذي يتم لصقها النسيج على كل حاوية لتجنب تمزق النسيج، وتدوير 360 درجة للحد من التغييرات فوق الأرض إلى النباتات. يمكن استخدام هذا الإجراء في هذا المجال مع أنابيب PVC المعدلة مليئة بالتربة العقيمة لدراسة دور الميسيليوم خارج نطاق التطرف في الاستعمار الجذري ، وتأثيره على امتصاص المغذيات.
هذه التقنية تسمح للمقارنة بين النباتات مع شبكات mycorrhizal المشتركة، إلى نباتات mycorrhizal التي لا ترتبط بالشبكات، بدلا من النباتات الصغيرة دون mycorrhizas، كما هو الحال في معظم الأحيان.
