تم دعم البحث من قبل منحة تطوير علماء أبحاث NHLBI (1K01HL135461-01) إلى JAG. شكرا لديفيد كارمونا - بيريو وإيزابيل أدارفي - رينجيفو على مساعدتهما التقنية.

تم إيواء الفئران ورعايتها في قسم رعاية الحيوان في المركز الطبي بجامعة فاندربيلت (VUMC) باتباع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ودليل رعاية واستخدام المختبر ، وزارة الصحة والخدمات الإنسانية الأمريكية. تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة VUMC المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات قبل بدء التجارب.
1. إعداد الحيوان وتشريحه
<ol><li>قم بتشغيل عامل النبت ومضخة المياه في وسادة التدفئة قبل حوالي 30 دقيقة من بدء الجراحة.</li>
	<li>قطع أنابيب البولي يوريثين بطول 0.5 مم باستخدام مشرط حاد. قم بإزالة 0.2 مم من المحيط عن طريق إجراء قطع بالطول لإنشاء كفة. ملاحظة: هذا جزء مهم من إجراء تضيق الشريان الكلوي الذي يتطلب دقة فائقة واهتماما بالتفاصيل والصبر. حاول قطع عدة قطع من أنابيب البولي يوريثين في وقت واحد. تنفيذ كل هذا الإجراء تحت المجهر.</li>
	<li>قبل المضي قدما ، ضع قفازات جراحية معقمة وقناعا جراحيا.</li>
	<li>استخدم الفئران C57BL/6 من النوع البري (WT) لمدة 6-8 أسابيع. استخدم عددا متساويا من الفئران الذكور والإناث لتجنب أي تحيز جنسي.</li>
	<li>سجل وزن الفئران قبل إجراء الجراحة. الوزن المثالي لأداء تضيق الشريان الكلوي مع أنبوب البولي يوريثين هو 18-22 جم. تعامل مع الفئران بلطف ولا تهيج أثناء حقن التخدير. إدارة مسكن ما قبل الجراحة (Ketofgen ، 5 ملغ / كغم من الجسم wieght). ملاحظة: أثناء نقل الفئران من غرفة السكن الخاصة بهم إلى غرفة الجراحة ، احملها بلطف وعناية كبيرين لتجنب الإثارة. يوصى بشدة بحمل أقفاص الفئران في اليدين بدلا من العربة.</li>
	<li>تخدير الفئران بمزيج من الكيتامين (100 مغ/كغ من وزن الجسم) وزيلازين (10 مغ/كغ من وزن الجسم) عن طريق الحقن داخل الصفاق (I.P).</li>
	<li>ضع الماوس مرة أخرى داخل القفص حتى يتم تخديره بالكامل. يستغرق الأمر حوالي 4-5 دقائق قبل أن يكون الماوس فاقدا للوعي تماما. قرصة الذيل أو إصبع القدم مع ملقط للتحقق مما إذا كان الماوس فاقدا للوعي تماما وجاهزا للجراحة.</li>
	<li>ضع الماوس على ظهره على منشفة ورقية. قم بإزالة شعر البطن الجانبي باستخدام ماكينة قص الشعر الكهربائية باتباع الاتجاه المعاكس لنمو الشعر. بعد حلاقة الموقع الجراحي ، قم بتنظيف المنطقة باستخدام مقشر جراحي يحتوي على اليود (أو الكلورهيكسيدين) يليه شطف بنسبة 70٪ من الإيثانول (أو محلول ملحي معقم).  كرر 3 مرات. ملاحظة: يجب إجراء عملية إزالة الشعر على مسافة ما أو يفضل أن تكون على مقعد مختلف عن مقعد إجراء الجراحة لتجنب أي تداخل في الشعر وتلوث الشعر أثناء إجراء الجراحة.</li>
	<li>قم بتغطية وسادة التدفئة بورقة معقمة. أحضر الماوس إلى المقعد الجراحي وضعه على الورقة المعقمة ، في مواجهة الجانب الجانبي الأيمن للفأر نحو المجهر. الحفاظ على درجة حرارة وسادة ثابتة من 37 درجة مئوية مع الماء المتداول.</li>
	<li>افتح الكيس المعقم الذي يحتوي على جميع المعدات الجراحية. باستخدام مجهر تشريح ومقص حاد معقم ، قم بعمل شق صغير في الجناح (بالقرب من الضلعالصدري 13 ، الضلع الأخير في الماوس) وعلى بعد حوالي 0.5 سم من الفقرات. المضي قدما على طول الفقرات القطنية وإجراء شق 1 بوصة.</li>
	<li>اسحب الجلد والعضلات إلى الخلف لفضح الكلى.</li>
	<li>تنظيف وإزالة الدهون المحيطة باستخدام مسحات القطن المعقمة لعزل الشريان الكلوي. عزل العصب الكلوي عن الشريان الكلوي باستخدام ملقط منحني.</li>
	<li>عند إجراء الجراحة الصورية ، ضع الغرز لإغلاق الجلد وتطبيق المضادات الحيوية على الجرح المغلق ، ثم انتقل إلى رعاية ما بعد الجراحة. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فتابع القسم التالي لتضيق الشريان. ملاحظة: يجب أن تحتوي كل تجربة على صورية كعناصر تحكم في الإجراء الجراحي. تتكون الحيوانات الوهمية من الفئران التي خضعت للإجراء الجراحي المتمثل في كشف الشريان الكلوي دون وضع الكفة عليه.</li>
</ol>2. تضيق الشريان الكلوي الأيمن
<ol><li>ضع غرطتين من النايلون تحت الشريان الكلوي الأيمن ، واصنع عقدة فضفاضة ، ثم ضع الكفة حول الشريان الكلوي الرئيسي على مسافة متساوية تقريبا بين تشعب الكلى والشريان الأورطي</li>
	<li>أغلق الكفة باستخدام خيوط النايلون. اصنع أربع عقد لكل خياطة لتجنب احتمال فقدان الغرز بعد الجراحة.</li>
	<li>أغلق الشق في العضلات عن طريق تطبيق خياطة مستمرة بسيطة.</li>
	<li>اصنع خيوط متقطعة بسيطة لإغلاق الجلد.</li>
	<li>إدارة المسكنات المعتمدة من IACUC. ملاحظة: أدوات الأوتوكلاف الجراحية قبل كل استخدام. إذا تم إجراء أكثر من عملية جراحية واحدة في وقت واحد ، فامسح جميع الأدوات المستخدمة باستخدام مقياس كحول معقم وضعها في نبات ساخن لمدة 15-30 ثانية بعد كل عملية جراحية. تغيير قفازات معقمة أيضا لكل ماوس.</li>
</ol>3. رعاية ما بعد الجراحة
<ol><li>أعد الفئران إلى قفصها واترك القفص نصفه قيد التشغيل ، ونصف ، وسادة تسخين المياه المتداولة لمدة 2-3 ساعات. إضافة هلام الغذاء استعادة النظام الغذائي داخل القفص.</li>
	<li>إعطاء مسكن الألم (كيتوبروفين) داخل الصفاق (الجرعة: 5 ملغ / كغ من وزن الجسم) في اليوم التالي.</li>
	<li>وزن الفئران لليومين المقبلين ؛ إذا فقدت بعض الفئران أكثر من 20٪ من وزنها ، فاستشر الطبيب البيطري وقرر ما إذا كان الحيوان بحاجة إلى القتل الرحيم باتباع الإجراء المناسب المعتمد من IACUC.</li>
	<li>راقب الفئران يوميا لتقييم الاحمرار أو التورم أو الألم أو العدوى.</li>
	<li>طلب استشارة بيطرية لمضاعفات ما بعد الجراحة وفقا لسياسات IACUC المؤسسية.</li>
</ol>4. حصاد الأنسجة
<ol><li>حصاد الأنسجة بعد 3 أسابيع من العملية الجراحية. سجل وزن كل ماوس.</li>
	<li>القتل الرحيم للفأر مع إجراء معتمد من IACUC.</li>
	<li>ضع الماوس على منصة معقمة في وضع ضعيف للتشريح.</li>
	<li>تأمين الأطراف وتمديدها للحد من الحركة.</li>
	<li>رش الفئران جيدا مع 70 ٪ من الإيثانول.</li>
	<li>قم بعمل شق في خط الوسط لفتح منطقة البطن والصدر باستخدام مقص حاد.</li>
	<li>اسحب الجلد والجدار البريتوني.</li>
	<li>كشف القلب بعناية وثقب البطين الأيمن وإخراج الماوس.</li>
	<li>إزالة كلتا الكليتين باستخدام الملقط. تقع الكلى على الجزء الخلفي من الفئران. ملاحظة: لا تخلط الكليتين. كن على دراية بالكلى الضيقة والزائفة والمعاكسة.</li>
	<li>إزالة كبسولة الكلى، وتنظيفها من أي دهون وتسجيل وزن كل كلية على حدة.</li>
	<li>قطع قسم طولي من كل من الكلى وثابتة في 4٪ PFA بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية لتتم معالجتها لاحقا لتضمين البارافين ، لإجراء التهجين في الموقع (ISH) والكيمياء النسيجية المناعية (IHC). اتبع بروتوكولات ISH و IHC كما ورد في23,24.</li>
	<li>عزل قشرة الكلى المتبقية وتجميد فلاش في النيتروجين السائل لأداء لطخة الغربية. تخزين العينات في -80 درجة مئوية حتى التحليل.</li>
	<li>حدد كميا الرينين ، وتعبيرات N-GAL مع لطخة غربية كما هو موضح في الأدب23,24.</li>
</ol>5. الإحصائيات
<ol><li>استخدم ANOVA أحادي الاتجاه أو ثنائي الاتجاه لإجراء تجارب مع ثلاثة شروط أو أكثر متبوعة باختبارات Bonferroni اللاحقة المخصصة للمقارنات بين المجموعات الفردية. ضع في اعتبارك قيمة p تساوي أو تقل عن 0.05 معنوية. استخدم البرامج (على سبيل المثال، GraphPad Prism 8.2) لإجراء جميع التحليلات الإحصائية.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kashyap, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+CCR2+reduces+macrophage+influx+and+development+of+chronic+renal+damage+in+murine+renovascular+hypertension.">Blockade of CCR2 reduces macrophage influx and development of chronic renal damage in murine renovascular hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 310 (5), 372-384 (2016).</li><li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+inflammatory+biomarkers+after+renal+revascularization+in+atherosclerotic+renal+artery+stenosis.">Changes in inflammatory biomarkers after renal revascularization in atherosclerotic renal artery stenosis.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 31 (9), 1437-1443 (2016).</li><li>Yerram, P., Karuparthi, P. R., Chaudhary, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+management+of+renovascular+hypertension+and+ischemic+nephropathy.">Pathogenesis and management of renovascular hypertension and ischemic nephropathy.</a> Minerva Urologica e Nefrologica. 64 (1), 63-72 (2012).</li><li>Covic, A., Gusbeth-Tatomir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+renin-angiotensin-aldosterone+system+in+renal+artery+stenosis,+renovascular+hypertension,+and+ischemic+nephropathy:+diagnostic+implications.">The role of the renin-angiotensin-aldosterone system in renal artery stenosis, renovascular hypertension, and ischemic nephropathy: diagnostic implications.</a> Progress in Cardiovascular Diseases. 52 (3), 204-208 (2009).</li><li>Barreras, A., Gurk-Turner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+receptor+blockers.">Angiotensin II receptor blockers.</a> Proceedings. 16 (1), 123-126 (2003).</li><li>Sica, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-converting+enzyme+inhibitors+side+effects--physiologic+and+non-physiologic+considerations.">Angiotensin-converting enzyme inhibitors side effects--physiologic and non-physiologic considerations.</a> Journal of Clinical Hypertension. 6 (7), 410-416 (2004).</li><li>Hill, R. D., Vaidya, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+Receptor+Blockers+(ARB,+ARb).">Angiotensin II Receptor Blockers (ARB, ARb).</a> StatPearls. , (2019).</li><li>Durante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+renin-angiotensin-aldosterone+system+in+the+pathogenesis+of+atherosclerosis.">Role of the renin-angiotensin-aldosterone system in the pathogenesis of atherosclerosis.</a> Current Pharmaceutical Design. 18 (7), 981-1004 (2012).</li><li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+reactive+carbonyl+species:+Potential+risk+factor+for+hypertension.">Plasma reactive carbonyl species: Potential risk factor for hypertension.</a> Free Radical Research. 45 (5), 568-574 (2011).</li><li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+receptor+blockade+has+protective+effects+on+the+poststenotic+porcine+kidney.">Angiotensin receptor blockade has protective effects on the poststenotic porcine kidney.</a> Kidney International. 84 (4), 767-775 (2013).</li><li>Zou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+scattered+tubular-like+cells+confer+protective+effects+in+the+stenotic+murine+kidney+mediated+by+release+of+extracellular+vesicles.">Renal scattered tubular-like cells confer protective effects in the stenotic murine kidney mediated by release of extracellular vesicles.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1263 (2018).</li><li>Kinra, M., Mudgal, J., Arora, D., Nampoothiri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+insight+into+the+role+of+cyclooxygenase+and+lipooxygenase+pathway+in+renal+ischemia.">An insight into the role of cyclooxygenase and lipooxygenase pathway in renal ischemia.</a> European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 21 (21), 5017-5020 (2017).</li><li>Cavalcanti, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+PDE5+Restores+Depressed+Baroreflex+Sensitivity+in+Renovascular+Hypertensive+Rats.">Inhibition of PDE5 Restores Depressed Baroreflex Sensitivity in Renovascular Hypertensive Rats.</a> Frontiers in Physiology. 7, 15 (2016).</li><li>Dias, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sildenafil+ameliorates+oxidative+stress+and+DNA+damage+in+the+stenotic+kidneys+in+mice+with+renovascular+hypertension.">Sildenafil ameliorates oxidative stress and DNA damage in the stenotic kidneys in mice with renovascular hypertension.</a> Journal of Translational Medicine. 12, 35 (2014).</li><li>Lerman, L. O., Chade, A. R., Sica, V., Napoli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+hypertension:+an+overview.">Animal models of hypertension: an overview.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 146 (3), 160-173 (2005).</li><li>Reckelhoff, J. F., Romero, D. G., Yanes Cardozo, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex,+Oxidative+Stress,+and+Hypertension:+Insights+From+Animal+Models.">Sex, Oxidative Stress, and Hypertension: Insights From Animal Models.</a> Physiology (Bethesda). 34 (3), 178-188 (2019).</li><li>Goldblatt, H., Lynch, J., Hanzal, R. F., Summerville, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Experimental+Hypertension+:+I.+The+Production+of+Persistent+Elevation+of+Systolic+Blood+Pressure+by+Means+of+Renal+Ischemia.">Studies on Experimental Hypertension : I. The Production of Persistent Elevation of Systolic Blood Pressure by Means of Renal Ischemia.</a> Journal of Experimental Medicine. 59 (3), 347-379 (1934).</li><li>Gollan, F., Richardson, E., Goldblatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+in+the+systemic+blood+of+animals+with+experimental+renal+hypertension.">Hypertension in the systemic blood of animals with experimental renal hypertension.</a> Journal of Experimental Medicine. 88 (4), 389-400 (1948).</li><li>Lewis, H. A., Goldblatt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Experimental+Hypertension:+XVIII.+Experimental+Observations+on+the+Humoral+Mechanism+of+Hypertension.">Studies on Experimental Hypertension: XVIII. Experimental Observations on the Humoral Mechanism of Hypertension.</a> Bulletin of the New York Academy of Medicine. 18 (7), 459-487 (1942).</li><li>Warner, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+deficiency+of+Smad3+protects+the+kidneys+from+atrophy+and+interstitial+fibrosis+in+2K1C+hypertension.">Genetic deficiency of Smad3 protects the kidneys from atrophy and interstitial fibrosis in 2K1C hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 302 (11), 1455-1464 (2012).</li><li>Lorenz, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renovascular+hypertension+using+a+modified+two-kidney,+one-clip+approach+in+mice+is+not+dependent+on+the+alpha1+or+alpha2+Na-K-ATPase+ouabain-binding+site.">Renovascular hypertension using a modified two-kidney, one-clip approach in mice is not dependent on the alpha1 or alpha2 Na-K-ATPase ouabain-binding site.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 301 (3), 615-621 (2011).</li><li>Ebina, K., Iwabuchi, T., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+change+in+permanently+clipped+or+ligated+cerebral+arterial+wall.+Part+II:+Autopsy+cases+of+aneurysmal+neck+clipping.">Histological change in permanently clipped or ligated cerebral arterial wall. Part II: Autopsy cases of aneurysmal neck clipping.</a> Acta Neurochirurgica. 66 (1-2), 23-42 (1982).</li><li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox6:+A+new+modulator+of+renin+expression+during+physiological+conditions.">Sox6: A new modulator of renin expression during physiological conditions.</a> bioRxiv. , (2019).</li><li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox6+as+a+new+modulator+of+renin+expression+in+the+kidney.">Sox6 as a new modulator of renin expression in the kidney.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2019).</li><li>Chade, A. R., Williams, M. L., Engel, J., Guise, E., Harvey, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+translational+model+of+chronic+kidney+disease+in+swine.">A translational model of chronic kidney disease in swine.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (2), 364-373 (2018).</li><li>Xue, Y., Xu, Z., Chen, H., Gan, W., Chong, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-energy+shock+wave+preconditioning+reduces+renal+ischemic+reperfusion+injury+caused+by+renal+artery+occlusion.">Low-energy shock wave preconditioning reduces renal ischemic reperfusion injury caused by renal artery occlusion.</a> Acta Cir&#250;rgica Brasileira. 32 (7), 550-558 (2017).</li><li>Lalanne, A., Beaudeux, J. L., Bernard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NGAL:+a+biomarker+of+acute+and+chronic+renal+dysfunction.">NGAL: a biomarker of acute and chronic renal dysfunction.</a> Annales de Biologie Clinique. 69 (6), 629-636 (2011).</li><li>Bolignano, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+gelatinase-associated+lipocalin+(NGAL)+as+a+marker+of+kidney+damage.">Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) as a marker of kidney damage.</a> American Journal of Kidney Diseases. 52 (3), 595-605 (2008).</li><li>Kashyap, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+renal+atrophy+in+murine+2+kidney+1+clip+hypertension+is+strain+independent.">Development of renal atrophy in murine 2 kidney 1 clip hypertension is strain independent.</a> Research in Veterinary Science. 107, 171-177 (2016).</li><li>Anderson, W. P., Woods, R. L., Kline, R. L., Korner, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+haemodynamic+responses+to+unilateral+renal+artery+stenosis+in+conscious+dogs.">Acute haemodynamic responses to unilateral renal artery stenosis in conscious dogs.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 12 (3), 305-309 (1985).</li><li>Imanishi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+degree+of+renal+arterial+stenosis+that+causes+hypertension+in+dogs.">Critical degree of renal arterial stenosis that causes hypertension in dogs.</a> Angiology. 43 (10), 833-842 (1992).</li><li>Ziecina, R., Abramczyk, P., Lisiecka, A., Papierski, K., Przybylski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenal-renal+portal+circulation+contributes+to+decrease+in+renal+blood+flow+after+renal+artery+stenosis+in+rats.">Adrenal-renal portal circulation contributes to decrease in renal blood flow after renal artery stenosis in rats.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 49 (4), 553-560 (1998).</li><li>Johnson, J. A., Ichikawa, S., Kurz, K. D., Fowler, W. L., Payne, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressor+responses+to+vasopressin+in+rabbits+with+3-day+renal+artery+stenosis.">Pressor responses to vasopressin in rabbits with 3-day renal artery stenosis.</a> American Journal of Physiology. 240 (6), 862-867 (1981).</li><li>Eirin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+glomerular+filtration+rate+after+renal+revascularization+correlate+with+microvascular+hemodynamics+and+inflammation+in+Swine+renal+artery+stenosis.">Changes in glomerular filtration rate after renal revascularization correlate with microvascular hemodynamics and inflammation in Swine renal artery stenosis.</a> Circulation: Cardiovascular Interventions. 5 (5), 720-728 (2012).</li><li>Ma, Z., Jin, X., He, L., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CXCL16+regulates+renal+injury+and+fibrosis+in+experimental+renal+artery+stenosis.">CXCL16 regulates renal injury and fibrosis in experimental renal artery stenosis.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory. 311 (3), 815-821 (2016).</li><li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analysis+of+signaling+pathways+activated+in+a+murine+model+of+two-kidney,+one-clip+hypertension.">Temporal analysis of signaling pathways activated in a murine model of two-kidney, one-clip hypertension.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (4), 1055-1068 (2009).</li><li>Wiesel, P., Mazzolai, L., Nussberger, J., Pedrazzini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-kidney,+one+clip+and+one-kidney,+one+clip+hypertension+in+mice.">Two-kidney, one clip and one-kidney, one clip hypertension in mice.</a> Hypertension. 29 (4), 1025-1030 (1997).</li><li>Johns, C., Gavras, I., Handy, D. E., Salomao, A., Gavras, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+experimental+hypertension+in+mice.">Models of experimental hypertension in mice.</a> Hypertension. 28 (6), 1064-1069 (1996).</li></ol>

ولا يعلن المؤلفون عن أي تضارب في المصالح، سواء كانت مالية أو غير مالية.

تضيق الشريان الكلوي هو سبب مهم لارتفاع ضغط الدم الثانوي أو المقاوم ، وإصابة الكلى 1,29. تم استخدام نموذج Goldblatt ثنائي الكلى مقطع واحد (2K1C) لدراسة ارتفاع ضغط الدم الوعائي الناجم عن RAStenosis 1،17،18،19.<...

تضيق الشريان الكلوي (RAStenosis) هو مشكلة مستعصية تؤثر على حوالي 6٪ من الأشخاص الذين تزيد أعمارهم عن 65 عاما وفي ما يصل إلى 40٪ من الأشخاص المصابين بأمراض الأوعية الدموية التاجية أو الطرفية 1,2. العلاجات الحالية للمرض محدودة. لذلك ، هناك حاجة ماسة لتطوير علاجات جديدة لعلاج ارتفاع ضغط الدم الوعائي أو ارتفاع ضغط الدم المقاوم الناجم عن RAStenosis. نظام الألدوستيرون أنجيوتنسين الرينين (RAAS) هو المسار الرئيسي المشارك في التسبب في ارتفاع ضغط الدم الناجم عن RAStenosis أو ارتفاع ضغط الدم الوعائي 3,4. العلاجات المعروفة التي تستهدف RAAS ، مثل مثبطات الإنزيم المحول للأنجيوتنسين أو حاصرات مستقبلات الأنجيوتنسين ، تخفف من ارتفاع ضغط الدم ، ولكنها تحتاج إلى فحص دقيق للفشل الكلوي وفرط بوتاسيوم الدم 5,6,7. الرينين يحفز خطوة الحد من المعدل في RAAS. يحول الأنجيوتنسينوجين إلى الأنجيوتنسين I. في تصلب الشرايين ، يسبب تكوين اللويحات تضييق الشريان الكلوي الذي يدفع إفراز الرينين ، مما يؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم الوعائي وتلف الكلى8. أبلغ عدد من الدراسات عن زيادة مستويات الإجهاد التأكسدي أثناء ارتفاع ضغط الدم الوعائي لدى البشر ، والتي تم تأكيدها بنموذج الفئران ذات المشبك الواحد (2K1C) بالإضافة إلى نماذج حيوانية أخرى لارتفاع ضغط الدم 2,9,10,11,12,13,14,15,16 . الآلية الجزيئية للتحكم في التعبير عن الرينين أثناء ارتفاع ضغط الدم الوعائي الناجم عن RAStenosis ليست مفهومة جيدا وتستدعي المزيد من التحقيق.
تعد النماذج الحيوانية التجريبية التي تلخص RAStenosis بشكل موثوق ومتكرر مهمة في توضيح الآليات الخلوية والجزيئية للتحكم في تعبير الرينين لتطوير علاجات جديدة. نموذج الفأر 2K1C هو نموذج تجريبي راسخ لدراسة التسبب في ارتفاع ضغط الدم الوعائي17،18،19،20. يتم إنشاء هذا النموذج عن طريق انقباض الشريان الكلوي باستخدام مقطع 17،20،21 ، وبالتالي إنتاج انسداد الشريان الكلوي الذي يؤدي إلى زيادة في التعبير عن الرينين وارتفاع ضغط الدم17،19،20،21. ومع ذلك ، لا توجد تقارير فنية متاحة ، والتي تصف إجراء خطوة بخطوة لتوليد تضيق الشريان الكلوي في النماذج الحيوانية.
تم استخدام مقاطع الفضة التقليدية على شكل حرف U وأنابيب البولي يوريثين وغيرها من المشابك لتضييق الشريان الكلوي للحث على تضيق الشريان الكلوي. أظهرت بعض الدراسات أن تصميم ومواد المقطع أمران حاسمان للحصول على بيانات موثوقة وقابلة للتكرار باستخدام النموذج الحيواني 2K1C. وفقا ل Lorenz et al. ، فإن استخدام مقاطع الفضة التقليدية المصممة على شكل حرف U يحفز معدل نجاح منخفض لارتفاع ضغط الدم (40-60٪)21. بسبب تصميم المشبك ، يتم الضغط على الشريان الكلوي أفقيا ، مما يؤدي إلى بعض الانقباضات واحتمال أكبر للإزاحة من الشريان الكلوي. قد تسمح مرونة الفضة وليونتها بإجراء تغييرات في عرض المشبك ؛ لذلك ، مما تسبب في مستويات مختلفة من ارتفاع ضغط الدم بين الفئران. يمكن أن تسبب ثاني أكسيد الفضة على المشبك التهابا حول الأوعية الدموية ، والانتشار الداخلي ، وتحبيب الأنسجة ، مما يغير قطر الشريان الكلوي22. نظرا للتباين في مستويات ارتفاع ضغط الدم التي تم الحصول عليها باستخدام المشبك الفضي التقليدي U-design ، نجح Warner et al. و Lorenz et al. في استخدام أنبوب البولي يوريثين ذو التصميم الدائري لبدء تضيق الشريان الكلوي في الفئران ، مما أدى إلى توليد تحريض أكثر موثوقية واتساقا للنموذج الحيواني للكليتين ذات المقطع الواحد20,21.
في هذا التقرير ، نصف بروتوكولا جراحيا لتوليد RAStenosis التجريبي في الفئران ، باستخدام أنبوب البولي يوريثين لتضييق الشريان الكلوي. الكفة ذات التصميم الدائري من البولي يوريثين هي مشبك أكثر قابلية للتكرار وموثوق به ومنخفض التكلفة لتوليد تضيق في الماوس. الهدف من هذا النموذج التجريبي هو دراسة وتحديد الآلية الجزيئية والخلوية للتحكم في تعبير الرينين أثناء تضيق الشريان الكلوي. لقد أكدنا نجاح نموذج الفئران RAStenosis عن طريق قياس تعبير الرينين وعلامة إصابة الكلى العدلات المرتبطة بالجيلاتيناز (N-GAL).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Diet Gel</td>
			<td>Clear H2O</td>
			<td>Diet-Gel 76A</td>
			<td>Surgery recovery diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMC Heated Hard pad</td>
			<td>Hallowell</td>
			<td>000A2788B</td>
			<td>Heating pads were used to keep mice warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>662G</td>
			<td>4-0 (1.5 metric), This suture was used to close the peritoneum, and skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethilon Nylon Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2815 G</td>
			<td>8-0 (0.4 metric), This suture was used to close cuff to tie and constrict the artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator 500</td>
			<td>Braintree Scientific Inc.</td>
			<td>GER 5287</td>
			<td>Sterilize surgical tools between surgeries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketoprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Ketofen</td>
			<td>Painkiller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyurethane</td>
			<td>Braintree Scientific Inc.</td>
			<td>MRE-025</td>
			<td>This tube was used to initiate stenosis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine antiseptic swabsticks</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS093901</td>
			<td>It was applied after hair removal and surgery on the skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7 Clip Applier</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>204-1000</td>
			<td>This clip applier was used to apply clip in case one or more sutures went off</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile towel drapes</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>4410</td>
			<td>It was used as a bedsheet for mice during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple antibiotic ointment</td>
			<td>Medi-First</td>
			<td>22312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water pump</td>
			<td>Stryker</td>
			<td>T/pump Professionals</td>
			<td>Used to warm and circulate water in the heating hard pad to keep mice warm during and post-surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified two kidney one clip mouse model of renin regulation in renal artery stenosis

تضيق الشريان الكلوي هو حالة شائعة في المرضى الذين يعانون من أمراض الأوعية الدموية التاجية أو الطرفية حيث يتم تنشيط نظام الألدوستيرون أنجيوتنسين الرينين (RAAS). في هذا السياق ، هناك تضييق في الشرايين الكلوية التي تحفز زيادة في التعبير عن الرينين وإطلاقه ، وهو البروتياز الذي يحد من المعدل في RAAS. الارتفاع الناتج في تعبير الرينين هو محرك معروف لارتفاع ضغط الدم الوعائي ، وغالبا ما يرتبط بإصابة الكلى وتلف الأعضاء النهائية. وبالتالي ، هناك اهتمام كبير بتطوير علاجات جديدة لهذه الحالة. الآلية الجزيئية والخلوية للسيطرة على الرينين في تضيق الشريان الكلوي ليست مفهومة تماما وتستدعي المزيد من التحقيق. للحث على تضيق الشريان الكلوي في الفئران ، تم تطوير نموذج فأر Goldblatt معدل 2 كليب الكلى 1 (2K1C). تم تضيق الكلى اليمنى في الفئران من النوع البري وتم استخدام الفئران التي تعمل بشكل صوري كسيطرة. بعد تضيق الشريان الكلوي ، حددنا تعبير الرينين وإصابة الكلى. تم حصاد الكلى ، وتم استخدام القشرة الطازجة لتحديد تعبير البروتين والحمض النووي الريبوزي المرسال عن الرينين. هذا النموذج الحيواني قابل للتكرار ويمكن استخدامه لدراسة الاستجابات الفسيولوجية المرضية والمسارات الجزيئية والخلوية المشاركة في ارتفاع ضغط الدم الوعائي وإصابة الكلى.

يزيد انقباض الشريان الكلوي من تعبير الرينين في الكلى الضيقة، بينما يقمع التعبير في الكلى المقابلة. الكلى اثنين من مقطع واحد (2K1C) أو نموذج Goldblatt من تضيق يحفز زيادة التعبير عن الرينين وإصابة الكلى. ومن المسلم به أن هذا هو أفضل نموذج تمثيلي لتضيق الشريان الكلوي من جانب واحد في البشر.
<p class="jove...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis at JoVE.com

A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

تم تطوير نموذج فأر Goldblatt معدل 2 كليب الكلى 1 (2K1C) باستخدام أنابيب البولي يوريثين لبدء تضيق الشريان الكلوي ، مما يؤدي إلى زيادة في التعبير عن الرينين وإصابة الكلى. هنا ، نصف إجراء مفصلا لإعداد ووضع الكفة على الشريان الكلوي لإنشاء نموذج ماوس 2K1C قابل للتكرار ومتسق.

نموذج فأر مصاب واحد من الكلى المعدل لتنظيم الرينين في تضيق الشريان الكلوي

Renal artery stenosis is a common condition in patients with coronary or peripheral vascular disease where the renin angiotensin aldosterone system (RAAS) ...

a-modified-two-kidney-one-clip-mouse-model-renin-regulation-renal

Research

JoVE Journal

Medicine

4.5K Views.  Vanderbilt University Medical Center. تم تطوير نموذج فأر Goldblatt معدل 2 كليب الكلى 1 (2K1C) باستخدام أنابيب البولي يوريثين لبدء تضيق الشريان الكلوي ، مما يؤدي إلى زيادة في التعبير عن الرينين وإصابة الكلى. هنا ، نصف إجراء مفصلا لإعداد ووضع الكفة على الشريان الكلوي لإنشاء نموذج ماوس 2K1C قابل للتكرار ومتسق.

Video: A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients revealed that only a mild increase in serum creatinine levels (0.3 to 0.4 mg/dl) is associated with a 70% greater risk of death than in persons without any increase 1. Along these lines, surgical procedures requiring cross-clamping of the aorta and renal vessels are associated with a renal failure rates of up to 30% 4. Similarly, AKI after cardiac surgery occurs in over 10% of patients under normal circumstances and is associated with dramatic increases in mortality. AKI are also common complications after liver transplantation. At least 8-17% of patients end up requiring renal replacement therapy 5. Moreover, delayed graft function due to tubule cell injury during kidney transplantation is frequently related to ischemia-associated AKI 6. Moreover, AKI occurs in approximately 20% of patients suffering from sepsis 6.The occurrence of AKI is associated with dramatic increases of morbidity and mortality 1. Therapeutic approaches are very limited and the majority of interventional trials in AKI have failed in humans. Therefore, additional therapeutic modalities to prevent renal injury from ischemia are urgently needed 3, 7-9. 
To elucidate mechanisms of renal injury due to ischemia and possible therapeutic strategies murine models are intensively required 7-13. Mouse models provide the possibility of utilizing different genetic models including gene-targeted mice and tissue specific gene-targeted mice (cre-flox system). However, murine renal ischemia is technically challenging and experimental details significantly influence results. We performed a systematic evaluation of a novel model for isolated renal artery occlusion in mice, which specifically avoids the use of clamping or suturing the renal pedicle 14. This model requires a nephrectomy of the right kidney since ischemia can be only performed in one kidney due to the experimental setting. In fact, by using a hanging-weight system, the renal artery is only instrumented once throughout the surgical procedure. In addition, no venous or urethral obstruction occurs with this technique. We could demonstrate time-dose-dependent and highly reproducible renal injury with ischemia by measuring serum creatinine. Moreover, when comparing this new model with conventional clamping of the whole pedicle, renal protection by ischemic preconditioning is more profound and more reliable. Therefore his new technique might be useful for other researchers who are working in the field of acute kidney injury.

A precise murine model for acute kidney injury (AKI) due to ischemia is an important tool to investigate acute kidney injury and possibly find therapeutic tools to treat renal injury. The hanging weight system offers a tool for immediate and reliable renal artery occlusion and reperfusion without causing renal congestion.

استخدام نظام تعليق الوزن المعزولة عن انسداد الشريان الكلوي

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI we need better knowledge about pathophysiology of myocardial ischemia. This knowledge may be valuable to define new therapeutic targets for innovative cardiovascular therapies4. Experimental MI model in mice is an increasingly popular small-animal model in preclinical research in which MI is induced by means of permanent or temporary ligation of left coronary artery (LCA)5. In this video, we describe the step-by-step method of how to induce experimental MI in mice.
The animal is first anesthetized with 2% isoflurane. The unconscious mouse is then intubated and connected to a ventilator for artificial ventilation. The left chest is shaved and 1.5 cm incision along mid-axillary line is made in the skin. The left pectoralis major muscle is bluntly dissociated until the ribs are exposed. The muscle layers are pulled aside and fixed with an eyelid-retractor. After these preparations, left thoracotomy is performed between the third and fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The proximal segment of LCA artery is then ligated with a 7-0 ethilon suture which typically induces an infarct size ~40% of left ventricle. At the end, the chest is closed and the animals receive postoperative analgesia (Temgesic, 0.3 mg/50 ml, ip). The animals are kept in a warm cage until spontaneous recovery.

The surgical procedure used to induce experimental myocardial infarction in mice begins with left thoracotomy between the third and the fourth ribs in order to visualize the anterior surface of the heart and left lung. The left coronary artery is ligated, the chest is closed and the mouse is allowed to recover spontaneously.

تقنية لربط تعديل الشريان التاجي في الفئران

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this is only partially explained by traditional CVD risk factors. Vascular dysfunction is an important non-traditional risk factor, characterized by vascular endothelial dysfunction (most commonly assessed as impaired endothelium-dependent dilation [EDD]) and stiffening of the large elastic arteries. While various techniques exist to assess EDD and large elastic artery stiffness, the most commonly used are brachial artery flow-mediated dilation (FMDBA) and aortic pulse-wave velocity (aPWV), respectively. Both of these noninvasive measures of vascular dysfunction are independent predictors of future cardiovascular events in patients with and without kidney disease. Patients with CKD demonstrate both impaired FMDBA, and increased aPWV. While the exact mechanisms by which vascular dysfunction develops in CKD are incompletely understood, increased oxidative stress and a subsequent reduction in nitric oxide (NO) bioavailability are important contributors. Cellular changes in oxidative stress can be assessed by collecting vascular endothelial cells from the antecubital vein and measuring protein expression of markers of oxidative stress using immunofluorescence. We provide here a discussion of these methods to measure FMDBA, aPWV, and vascular endothelial cell protein expression.

The degree of vascular dysfunction and contributing physiological mechanisms can be assessed in patients with chronic kidney disease by measuring brachial artery flow-mediated dilation, aortic pulse-wave velocity, and vascular endothelial cell protein expression.

تقييم وظيفة الأوعية الدموية في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable during renal transplantation. Experimental models that accurately and reproducibly recapitulate renal IRI are crucial in dissecting the pathophysiology of AKI and the development of novel therapeutic agents. Presented here is a mouse model of renal IRI that results in reproducible AKI. This is achieved by a midline laparotomy approach for the surgery with one incision allowing both a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia of the left kidney. By careful monitoring of the clamp position and body temperature during the period of ischaemia this model achieves reproducible functional and structural injury. Mice sacrificed 24 hr&#160;following surgery demonstrate loss of renal function with elevation of the serum or plasma creatinine level as well as structural kidney damage with acute tubular necrosis evident. Renal function improves and the acute tissue injury resolves during the course of 7 days following renal IRI such that this model may be used to study renal regeneration. This model of renal IRI has been utilized to study the molecular and cellular pathophysiology of AKI as well as analysis of the subsequent renal regeneration.

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

الكلوي ونقص الأوكسجين إعادة إشباع الخلايا الإصابات: نموذج الفأر من الإصابات والتجديد

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

الكلى الفئران زرع تقنية

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

تقييم لوظيفة الكلي في نماذج الماوس من المرض الكبيبي

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by proteinuria which can eventually lead to chronic and end-stage renal disease. The glomerulus is a complex apparatus responsible for the filtration of plasma from the body. In disease, structural integrity is lost and allows for the abnormal leakage of plasma contents into the urine. A method to isolate and examine glomeruli in culture is critical for the study of these diseases. In this protocol, an efficient method of retrieving intact glomeruli from adult rat kidneys while conserving structural and morphological characteristics is described. This process is capable of generating high yields of glomeruli per kidney with minimal contamination from other nephron segments. With these glomeruli, injury conditions can be mimicked by incubating them with a variety of chemical toxins, including protamine sulfate, which causes foot process effacement and proteinuria in animal models. Degree of injury can be assessed using transmission electron microscopy, immunofluorescence staining, and western blotting. Nephrin and Wilms Tumor 1 (WT1) levels can also be assessed from these cultures. Due to the ease and flexibility of this protocol, the isolated glomeruli can be utilized as described or in a way that best suits the needs of the researcher to help better study glomerular health and structure in diseased states.

The main focus of this protocol is to efficiently isolate viable primary glomeruli cultures with minimal contaminants for use in a variety of downstream applications. The isolated glomeruli retain structural relationships between component cell types and can be cultured ex vivo for a short time.

طريقة سيفينج فعالة لعزل Glomeruli سليمة من الفئران الكبار الكلي

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

توصيل الأدوية مباشرة إلى الكلى عبر الشريان الكلوي

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...