وهو علاج بسيط يمكن تطبيقه على أي خط الخلايا الجذعية أو بروتوكول التمايز إلى الخلايا الرئيسية للتمايز. كل ما على المرء القيام به هو إضافة DMSO في 1-2٪ في شبكة الاتصالات الخلوية المتوسطة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح للمرء أن يزيد بشكل كبير من إمكانات التمايز للخلايا الجذعية متعددة القدرات في أي سلالة من اختيار عن طريق الخلايا فتيلة للتمايز.
يزيد علاج DMSO من فرصة أن الخلايا ستميز عن iPSCs المشتقة من المريض ، مما يسمح باستخدامها في العلاج ببدائل الخلايا ، ونمجة الأمراض ، وفحص الأدوية. ويمكن أن يؤدي إلى بداية مبكرة للتنظيم الذي يتحكم في الانتشار دون الانتشار والتمايز والمواصفات أثناء التطور الجنيني. وقد أثبتنا أن علاج DMSO يحسن التمايز في ما يقرب من 50 خط الخلايا الجذعية الجنينية والمستحثة.
في حين أظهرت مختبرات أخرى أنه مفيد للخلايا الجذعية من الأنواع الأخرى، مثل الفأر والرئيسيات. قبل يوم واحد من بداية التمايز، أضف دمسو بتركيز 1 أو 2٪ لمدة 24 ساعة في وسط الصيانة النموذجي. بعد 24 ساعة من علاج DMSO، استبدل المتوسط واعمل على بروتوكول التمايز المعتاد.
تنمو الخلايا وفقا لاتجاهات المخطوطات. عندما تصل الخلايا إلى التقاء مناسب ، افصلها وتعد تعليقًا وحيدًا للخلية. عد الخلايا الحية مع عداد الهيموسيتات أو عداد الخلايا التلقائي، وذلك باستخدام علامة قابلية البقاء مثل الأزرق trypan.
من أجل تحقيق 80-90٪ التقاء داخل 24 ساعة DMSO المعالجة المسبقة، لوحة الخلايا على لوحة ستة جيدا المغلفة في كثافة 500، 000 إلى 1 مليون خلية في البئر. احتضان الخلايا لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون. ثم، الطامح وسائل الإعلام واستبدالها مع حل DMSO 1-2٪.
السماح للخلايا لاحتضان لمدة 24-28 ساعة قبل التمايز. إذا احتضان لمدة 48 ساعة، استبدال وسائل الإعلام بعد 24 ساعة مع حل DMSO جديدة. لتحقيق تمايز ثقافة 3D، تنمو وجمع الخلايا في تعليق الخلية.
عد الخلايا الحية ولوح لهم في غير المصقول، وانخفاض المرفق ستة جيدا لوحة في وسائل الإعلام الخلايا الجذعية مع مثبط روك. عادة، 3D مجالات الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات سوف تشكل في غضون 24 ساعة. السماح للخلايا لاحتضان لمدة 24 ساعة في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون.
إعداد 1-2٪ DMSO في وسائل الإعلام الخلايا الجذعية ساخنة مسبقا وفقا لتوجيهات المخطوطات. لاستبدال الوسائط بعد الحضانة، قم بإمالة اللوحة إلى زاوية 30 درجة إلى 45 درجة، والسماح لزوايا الخلايا بالاستقرار في الجزء السفلي من البئر. استلهم الوسائط من الخلايا ثم قم بإعادة تعليقها بلطف في حل DMSO.
السماح للخلايا لاحتضان لمدة 24-48 ساعة في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون. قبل علاج الخلايا مع DMSO كما هو موضح للثقافات 2D، وإعداد noggin وحلول الأسهم SB431542. إعداد ما يكفي من 10٪ استبدال المصل بالضربة القاضية, أو KOSR, في DMEM خروج المغلوب لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام من تغيير وسائل الإعلام.
إعداد وسائط التمايز التمايز التحضيمي بإضافة noggin و SB431542 إلى DMEM الزخرفة من الـ KOSR التي تم تسخينها مسبقًا كما هو موضح في المخطوطة. بعد DMSO قبل المعالجة، استنشاق وسائل الإعلام من الخلايا وإضافة ملليلتر اثنين من وسائل الإعلام التمايز إلى كل بئر. السماح للخلايا بالاحتضان لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون، واستبدال وسائل الإعلام يوميًا بعوامل تمايز جديدة.
يؤدي العلاج المسبق لـ DMSO إلى انخفاض عابر ومعتمد على الجرعة في معدل نمو الخلايا مقارنة بالخلايا غير المعالجة. ويرتبط هذا الانخفاض في الانتشار مع زيادة في الاتصال من خلية إلى خلية، والتي هي واضحة بشكل خاص في الخلايا المعالجة DMSO 2٪. عندما تكون الخلايا ثابتة وملطخة لعلامات ا يسبق كل طبقة جرثومية، يمكن ملاحظة أن 2٪ DMSO نتائج ما قبل المعالجة في زيادة نسبة خلايا طبقة الجرثومية المتباينة.
على سبيل المثال، كان ملطخة SOX17 لتصور الخلايا أندودم. من أجل التحقيق في تأثير DMSO على التمايز لأنواع الخلايا السلف في الجهاز العصبي المركزي ، يمكن تمييز الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان إلى خلايا سلف عصبية أو خلايا سلف oligodendrocyte. بالمقارنة مع الخلايا التحكم, 2٪ DMSO المعالجة المسبقة يزيد من التعبير عن علامة الخلية السلف العصبي Pax6.
وبالمثل، فإن المعالجة المسبقة تزيد من نسبة الخلايا التي تعبر عن أوليجودندروسيت علامة الخلية السلف Olig2. وعلاوة على ذلك، يحسن العلاج الأولي من DMSO وظيفة الخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية بعد زرع الخلايا الجنينية في الجسم الحي. عندما يتم زرع خلايا السلف البنكرياسية المتمايزة في الفئران المناعية، يمكن اختبار وظائفها استجابة لتحدي الجلوكوز أو التحفيز KCl.
ويتضح من التحسينات في وظائف الخلايا من أسبوعين إلى 16 أسبوعا بعد زرع. الاعتبار الأكثر أهمية التي يجب أخذها في الاعتبار هو ركوب الدراجات أو مضاعفة الوقت للخلايا الجذعية. يجب أن يكون طول علاج DMSO هو نفس وقت ركوب الدراجات في الخلايا.
بعد العلاج الأولي DMSO، يمكن للمرء أن يفهم كيف يتم تنظيم انتشار الخلايا ودورة الخلية في الخلايا الجذعية، كما يساعد العلاج على تعزيز اعتقال النمو في مرحلة G1 من دورة الخلية. يمكن استخدام الخلايا المتمايزة لفهم الآليات المتعلقة بالمرض ، للمشاركة في الزراعة مع أنواع الخلايا الأخرى ، في مقايسات الأورام ، وفي التشايس الوظيفي أو دراسات الزرع لتحديد ما إذا كانت الخلايا المتمايزة يمكن أن تنقذ نوعًا من أنواع المرض الظاهرية.
