MAK تعترف بتقديم الدعم لهذا العمل من "المعاهد الوطنية للصحة"/منح المعهد الوطني للسرطان رقم-1R15CA152985-01A1. كما دعمت هذا المشروع "ميامي جامعة الدراسات الجامعية البحوث جائزة البرنامج"، الفرص الجامعية الدكتوراه جامعة ميامي لبرنامج المنح الدراسية وبرنامج الباحثين الصيف جامعة ميامي.

الإجراءات التي نفذت في شريط الفيديو وهو موضح أدناه عليها "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) في جامعة ميامي-
 1-إعداد واختبار التحفيز <ol><li>تأسيس اثنين مجالات متميزة لإجراء العمليات الجراحية وطاولة العمليات والجدول بعد انتهاء العملية. المرحلة كلا المجالين مع جميع المواد والأدوات اللازمة.
	الجدول <ol><li>المرحلة تعمل تحت غطاء التهوية. ترتيب الجدول بالمعدات بطريقة تسمح بأداء الإجراء مستمر ودون عوائق.</li>
		إنشاء <li>جدول بعد العملية الجراحية في نفس الغرفة والقرب من الجدول الرئيسي للعملية. الحفاظ على كلا الجدولين بيئات معقمة طوال فترة الإجراءات.</li>
	</ol></li> <li>مكان ما يلي اللوازم على طاولة العمليات: جرة زجاج واحد مع غطاء وأنبوب 15 مل واحد وزوج واحد من مقص الجراحة، وضغط واحد زجاجة من الإيثانول 70%، والمجلسين الرغوة، الملقط اثنين، هما محاقن قياس 1 مل 21، أنبوبين 50 مل، أنبوب أحد أجهزة الطرد المركزي ، قنينة المبردة واحدة وأربع منصات الجراحية والدبابيس عشرة، موزع مناديل تعقيم وحاوية الأدوات الحادة-</li>
	<li>وضع الإمدادات التالية على الجدول بعد انتهاء العملية: واحد تحليلية التوازن، أحد ديوار ل 4 من النتروجين السائل، ضحلة واسعة الفم ديوار ورف microtube عائمة وزوج واحد من مقص الجراحة، الملقط اثنين، أربعة قنينات المبردة وموزع ل مناديل معقمة.</li>
	<li>ملء واحدة 50 مل وأنبوب 15 مل واحد بحجم 75% مع الفورمالين.</li>
	<li>استخدام pin في كل زاوية، إلصاق لوحة الجراحية واحد إلى هيئة رغوة تقريبي 30 × 30 سم ليكون بمثابة مجلس تشريح. استخدام دبابيس الأربع المتبقية خلال العملية. إعداد لوحة رغوة أصغر مع لوحة العمليات جراحية لنقل الأجهزة إلى الجدول بعد العملية. 
	تنبيه: إيسوفلوراني (99.9%) المواد كيميائية سامة، وينبغي أن تستخدم في غطاء تنفيس لضمان أقصى مستوى من الأمان من مسح النفايات غاز مخدر 8. يمكن العثور على معلومات إضافية فيما يتعلق بالمخاطر التي يتعرض لها الباحثون المقترنة باستخدام الأسلوب فتح المنسدلة استخدام إيسوفلوراني في مقال ب تايلور وموك 8-</li>
	<li>وضع لوح الجراحية واحد في جرة زجاجية ونقع مع بضع قطرات من إيسوفلوراني (99.9%) ثم ضع منشفة ورقية عبر الجزء العلوي للحيلولة دون الاتصال المباشر للماوس مع إيسوفلوراني. وبالمثل، استخدام لوحة العمليات جراحية لخط الأنبوب المتبقي ونقع مع بضع قطرات من إيسوفلوراني ووضع لوحة إضافية عبر الجزء العلوي للحيلولة دون الاتصال المباشر بين الماوس وإيسوفلوراني.</li>
	<li>صب النتروجين السائل في فم واسعة الضحلة هو التوصل إلى ديوار حتى الحد الأقصى لملء خط-</li>
	<li>مكان الماوس المحدد للتشريح في التخدير للدائرة، أي قطرات جرة زجاج مع لوحة غارقة مع عدد قليل من إيسوفلوراني (99.9%) مغطاة بالغطاء، لدقيقة ~ 1 
	ملاحظة: يختلف هذا الوقت من الماوس. مرة واحدة الماوس فاقد الوعي، إزالته من الدائرة ووضعه على لوحة التشغيل.</li>
	<li>توجيه الماوس حيث أن ذلك هو الكذب الجانب البطني ومع رئيسها وأشار بعيداً عن العالم. وضع الرأس داخل أنبوب مبطنة بوسادة جراحية غارقة مع بضع قطرات من إيسوفلوراني (99.9%)، وإجراء اختبار تحفيز برشة سيرا على أقدام التأكد من أن الماوس لا يستجيب للمنبهات.
	<ol><li>إذا فشل هذا الاختبار والماوس يستجيب لاختبار قرصه سيرا على الأقدام، كرر الخطوة 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. الأولى شق وثقب القلب والقتل الرحيم <ol><li>دبوس أطرافه الماوس للمجلس رغوة الجراحية والرطب في الجانب البطني من الماوس مع الإيثانول 70%-</li>
	<li>قرصه الفراء/الجلد بالقرب من افتتاح الاحليل مع الملقط وسحب إلى أعلى قليلاً. جعل شق بالمقص الجراحي عن طريق تجويف البطن ابتداء من فتح الاحليل، خط الوسط وتنتهي في الذقن.
	<ol><li>قرب نقطة انطلاق لشق الأولى، الاستيلاء على جانب واحد من الجلد/الفراء مع الملقط وجعل شق آخر مع المقص إلى الأسفل وقطرياً نحو مخلب الظهر.</li>
		<li>كرر هذا بنفس الطريقة على الجانب الآخر- 
		ملاحظة: قد يكون تمركزها إلى خلق فرصة أوسع الفراء/الجلد، ولكن ليس من الضروري-</li>
	</ol></li> <li>موقع القلب وإزالة تامور، وهو الكيس حول القلب، لتجنب انسداد من إبرة المحقن.
	فهم تامور مع الملقط <ol><li>وقطع عليه مع المقص. إجراء ثقب القلب بإدخال إبرة حقنه بعناية في قلب ينبض وتبدأ ببطء لسحب المكبس.</li>
		<li>لجمع الدم الأمثل، واستخدام المكبس الإبرة لتقليد عمل الضخ للقلب وتجنب الرسم بسرعة كبيرة جداً- 
		ملاحظة: عادة حوالي 1 مل دم يمكن جمعها-</li>
		<li>بعد الانتهاء من جمع الدم، تبديد الدم في أنبوب جهاز الطرد المركزي والتخلص من المحاقن في حاوية الأدوات الحادة-</li>
		<li>بعد أن يتم إجراء ثقب القلب، القيام بالقتل الرحيم بإزالة المرفقات يربط القلب. 
		ملاحظة: لم يتم إضافة الهيبارين، تخثر المضادة، لحقنه في هذا الإجراء قبل ثقب القلب للسماح للدم يتجمد لجمع المصل في هذه الدراسة المحددة. ومع ذلك، إذا أراد الباحث أن منع تخثر الدم جمع البلازما، يمكن إضافة الهيبارين للمحاقن قبل ثقب القلب-</li>
	</ol></li> <li>إذا كان ينطوي الدراسة الوراثي للفأرة، قص جزء من الإذن مع المقص ووضع في أنبوب الطرد مركزي لتحقق وراثي.</li></ol>
 3-"استخراج البنكرياس" <ol><li>تحديد موقع المعدة على الجانب الأيسر للماوس. تبدأ بلطف (لتجنب تمزيق) فصل البنكرياس من المعدة والاثني عشر باستخدام الملقط اثنين. 
	ملاحظة: عند فصل البنكرياس من المعدة والأمعاء، من المهم جداً أن الملقط تستخدم بلطف دليل نسيج البنكرياس بعيداً عن الأجهزة وعدم سحق أو المسيل للدموع البنكرياس مع الملقط.
	<ol><li>الاستمرار في فصل البنكرياس من أقسام الأمعاء صائم والدقاق، وأخيراً من الأعور الأمعاء الغليظة.</li>
	</ol></li> <li>في الأعور، تغيير موضع الملقط ومواصلة الفصل بين البنكرياس على طول القولون المتبقية نحو المستقيم. 
	ملاحظة: عند هذه النقطة، أنها ملائمة لخفض وإزالة الجزء من المعدة إلى منطقة القولون السابقة مباشرة للمستقيم.</li>
	<li>تحديد موقع البنكرياس والطحال. شريحة البنكرياس نحو الجانب الأيمن من الماوس. فصل الاتصالات المتبقية بين البنكرياس وتجويف الصدر بالملقط لفصل كامل البنكرياس والطحال ملاصقة.</li>
	<li>إزالة البنكرياس وانتشرت للفحص. اترك الطحال يعلق على البنكرياس لأغراض تحديد الهوية.
	النسيج الضام <ol><li>إزالة الكل، والأنسجة والدهون والمساريقي العلوي من البنكرياس. 
		ملاحظة: هذا النسيج بياضا في اللون وهكذا يمكن تمييزها بسهولة عن أنسجة البنكرياس هو وردي اللون. هذا مهم خاصة إذا كان البنكرياس كله يحتاج إلى إزالة. على سبيل المثال، إذا كان البنكرياس بحاجة إلى موازنة ومقارنة مع وزن الجسم، أو بين مجموعات من الحيوانات. في Ptf1a cre/+؛ LSL-كراس G12D/+ نموذج الماوس، وعلى وجه التحديد في الشهور القديمة، يمكن أن تكون أنسجة البنكرياس الليفي الثابت الحالي. وفي هذه الحالة، يجب أن تتم إزالة حذراً من البنكرياس كما يمكن أن يكون متشابك الأمعاء في أنسجة الورم. في الحالات المتقدمة، الطحال غير طبيعي ونسيج الكبد قد يكون أيضا هذا-</li>
	</ol></li> <li>إذا كان مطلوباً، إزالة الأجهزة الأخرى عند هذه النقطة.</li></ol>
 4-جمع البيانات وتخزينها <ol><li>بعد استخراج الأجهزة، نقل العينات إلى منطقة ما بعد الجراحة للحفاظ على-</li>
	<li>تزن كل جهاز ووضعها في قنينة المبردة كل منهما. 
	ملاحظة: على طول فيتح الشامل لكل عينة، ينبغي أن تسجل أي مخالفات للرجوع إليها في المستقبل-</li>
	<li>حالما يتم وزن الأجهزة، وضعها في النيتروجين السائل لتجميد المفاجئة.</li>
	<li>بعد تجميد المفاجئة، تخزين الأجهزة في-80 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل.</li>
	<li>بوضع عينات الفورمالين المخزنة في أعلى هيئة بين عشية وضحاها، وصباح اليوم التالي بتغيير حل بهم من الفورمالين إلى إيثانول 70%- 
	ملاحظة: يجب تخزين هذه العينات عند 4 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل.</li>
	<li>للتخزين على المدى الطويل، تجميد لكمه الدم والإذن في-80 درجة مئوية. لجمع المصل من الدم، تسمح للدم أن يتجمد لمدة 30 دقيقة ثم الطرد المركزي أنه. إزالة الجزء المصل باستخدام ماصة ومن ثم تخزين في-80 درجة مئوية.</li>
</ol> 5. تنظيف <ol><li>سانيتيزي جميع تشريح مع مناديل تعقيم أدوات. غطاء أنبوب تصطف isoflurane غارقة في لوحة العمليات الجراحية. استبدال لوحة المفاتيح الجراحية على متن الرغوة مع لوحة جراحة طازجة. التصرف في أجزاء الماوس التي جمعت لا كل المرفق &#39; سياسة التخلص من الحيوانات s-</li>
</ol>

<ol>
	<li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer.">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li><li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+in+mice.">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li><li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse.">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin.">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li><li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li><li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras(G12D)+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li><li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method.">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein.">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li><li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics.">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li><li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-&#946;+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression.">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-&#946; signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer.">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li><li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data.">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li><li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis:+Clinical+Profile,+Histology,+and+Natural+History+After+Resection.">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

أهمية فيما يتعلق بالأساليب القائمة على الرغم من وجود أشرطة فيديو أخرى غير رسمية لتشريح الفأر، توفر هذه المقالة الفيديو الجودة الفنية الأولى، واستعراض النظراء، مظاهرة البصرية لجميع الخطوات التفصيلية المطلوبة للاستخراج وحصاد البنكرياس الماوس بتشريح10 . مع البنكري?...

وبرز الماوس حيوان نموذجا هاما لسرطان البنكرياس البشرية1،2. في Ptf1acre/+؛ LSL-كراسG12D/+ طراز الماوس، كريستين السرطاني كابوزي (ك-Ras) الفئران يتم تنشيط حصرا في البنكرياس، أسفر عن البدء بأورام في البنكرياس، المعروف باسم نيوبلاسياس للسيتولوجيا البنكرياس (بانينس)، أن التقدم للبنكرياس adenocarcinomas الأقنية، يشار إليها باسم بدأكس3. ويتيح هذا النظام النموذجي الماوس واحدة من أفضل النماذج الحيوانية المتاحة لسرطان البنكرياس البشرية4،5، مع ميزة إضافية التي تظهر بانينس خلال الأشهر الخمسة الأولى من الحياة، وكثيراً ما تقدم إلى بدك داخل واحد السنة4،5، في حين أن سرطان البنكرياس يحدث غالباً في البشر 60-70 سنة عمر.
استخراج البنكرياس بالتشريح من Ptf1acre/+؛ LSL-كراسG12D/+ الفئران في مختلف الإعمار يسمح لدراسة نسيجية طولية تفصيلية للتنمية سرطان في البنكرياس، بدءاً من أولى مراحل بانين من خلال التقدم إلى بدك3،4 , 5-حصاد البنكرياس في سن تتراوح ما بين خمسة إلى خمسة عشر شهرا يمكن أن تستخدم أيضا لإعداد الأنسجة مقتطفات لتوصيف التغيرات العالمية في البنكرياس4 الأيض التي تحدث أثناء الانتقال من صحية إلى الأنسجة المريضة 6،7.
هذه المقالة يعرض دليل مرئي كاملة للخطوات المطلوبة للقيام استخراج بنكرياس ماوس ويوفر مبادئ توجيهية للتخزين البنكرياس لمزيد من التحليل. هذا الدليل سوف تكون ذات قيمة متساوية للأفراد إجراء بحوث بشأن أمراض البنكرياس الأخرى، بما في ذلك مرض السكري من النوع الأول، وينبغي أن يكون مفيداً بشكل خاص للطلاب والباحثين جديدة للأبحاث المتعلقة بحصاد من البنكرياس الماوس باستخدام تشريح للتنميط الأيضية أو تحليلات النسيجي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Jar&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3140-150</td>
			<td style="width:167px;">The glass jar used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Lid of Glass Jar</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">9985-150</td>
			<td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Squeeze bottle&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">03-409-10DD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">100% Ethanol</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-032-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">245-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foam Boards</td>
			<td style="width:288px;">Therapak</td>
			<td style="width:119px;">562908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">200205SHN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL 21G Syringes</td>
			<td style="width:288px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.0 mL Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">02-681-258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Pads</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S67011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T-Pins Length:&#160; 2&#34;&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Advance Store Products</td>
			<td>X32T-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sterilizing Wipes</td>
			<td style="width:288px;">Professional Disposables International Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Q85084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Analytical Balance</td>
			<td style="width:288px;">Marshall Scientific</td>
			<td style="width:119px;">ME-AE200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4L Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Taylor-Wharton</td>
			<td style="width:119px;">4LD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shallow Wide Mouth Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F3087-V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Floating Microtube Rack</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">60986-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10-500-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isothesia (Isoflurane)&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">050033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liquid Nitrogen</td>
			<td style="width:288px;">Wright Brothers</td>
			<td style="width:119px;">NIT-60-XX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Kras Strain</td>
			<td style="width:288px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">OO8179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Cre Strain</td>
			<td style="width:288px;">MMRRC</td>
			<td style="width:119px;">OOO435-UNC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

لقد تم التحقيق عامل النسخ المحددة البنكرياس، 1a cre-ريكومبيناسي؛ ساركومه لوكس-توقف-لوكس-كريستين الفئران، جليكاين لحمض الأسبارتيك في كودون 12 (Ptf1acre/+؛ لسلكراسG12D/+) الفأر سلالة كنموذج للبشرية سرطان البنكرياس. لدينا الدراسات الحالية يهدف إلى تحديد المؤشرات الحيوية الأيضية رواية لتطور سرطان البنكرياس. وقد أجرينا التنميط الأيضية للبول، والبراز، والدم، ومقتطفات أنسجة البنكرياس، فضلا عن تحليلات النسيجي لمرحلة تطور سرطان البنكرياس. البنكرياس الماوس ليس جهازا صلبة محددة تحديداً جيدا مثل البشر، ولكن بدلاً من ذلك هو أنسجة ناعمة تصطبغ موزعة التي لم تحدد بسهولة من الأفراد غير مألوف مع الماوس التشريح الداخلي أو عن طريق الأفراد التي لديها القليل أو لا القيام بتجربة تشريح جهاز الماوس. والغرض من هذه الوثيقة تقديم مفصل المجوعات مظاهرة البصرية دليل المبتدئين في إزالة البنكرياس الماوس بالتشريح. ينبغي أن تكون هذه المادة ذات قيمة خاصة للطلاب والباحثين جديدة للبحوث التي يتطلب الحصاد البنكرياس الماوس بتشريح للتنميط الأيضية أو تحليلات النسيجي.

ويبين الشكل 1 نظرة عامة مجال البيئة التشغيلية، ويبين الشكل 2 في مجال تشغيل وظيفة. وبينما يوفر هذا الإعداد الحد الأدنى من المعدات والتدريج، يجوز اختيار الأفراد لتغيير هذا لتناسب الاحتياجات الفردية. ينبغي أن يكون الأمثل في البروتوكول وفقا ل...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling at JoVE.com

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

توفر هذه المقالة الفيديو مظاهرة تفصيلاً الإجراءات اللازمة لإزالة البنكرياس بنجاح من ماوس بتشريح للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية.

تشريح البنكرياس الماوس للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Research

JoVE Journal

Medicine

36.2K Views.  Miami University. توفر هذه المقالة الفيديو مظاهرة تفصيلاً الإجراءات اللازمة لإزالة البنكرياس بنجاح من ماوس بتشريح للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية.

Video: Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions between vitreous substructures and the retina underlie several vitreoretinal diseases, including retinal tear and detachment, macular pucker, macular hole, age-related macular degeneration, vitreomacular traction, proliferative vitreoretinopathy, proliferative diabetic retinopathy, and inherited vitreoretinopathies. 1,2 The molecular composition of the vitreous substructures is not known. Since the vitreous body is transparent with limited surgical access, it has been difficult to study its substructures at the molecular level. We developed a method to separate and preserve these tissues for proteomic and biochemical analysis. The dissection technique in this experimental video shows how to isolate vitreous base, anterior hyaloid, vitreous core, and vitreous cortex from postmortem human eyes. One-dimensional SDS-PAGE analyses of each vitreous component showed that our dissection technique resulted in four unique protein profiles corresponding to each substructure of the human vitreous body. Identification of differentially compartmentalized proteins will reveal candidate molecules underlying various vitreoretinal diseases.

This video shows an effective technique for differentiating and dissecting the various semi-transparent structures of the human vitreous body in post mortem eyes.

تشريح الإنسان عناصر الجسم الزجاجي لتحليل البروتين

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

بروتوكول لجمع البنكرياس الإنسان

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

زجاجي كله فكاهة تشريح لتحليل Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide new expandable sources of beta cells to alleviate the donor scarcity in human islet transplantation as therapy for diabetes. Although recent advances have been made towards this aim, mechanisms that regulate beta cell expansion and differentiation from a stem/progenitor cell remain to be characterized. Here, we describe a protocol for an injury model in the adult mouse pancreas that can function as a tool to study mechanisms of tissue remodeling and beta cell proliferation and differentiation. Partial duct ligation (PDL) is an experimentally induced injury of the rodent pancreas involving surgical ligation of the main pancreatic duct resulting in an obstruction of drainage of exocrine products out of the tail region of the pancreas. The inflicted damage induces acinar atrophy, immune cell infiltration and severe tissue remodeling. We have previously reported the activation of Neurogenin (Ngn) 3 expressing endogenous progenitor-like cells and an increase in beta cell proliferation after PDL. Therefore, PDL provides a basis to study signals involved in beta cell dynamics and the properties of an endocrine progenitor in adult pancreas. Since, it still remains largely unclear, which factors and pathways contribute to beta cell neogenesis and proliferation in PDL, a standardized protocol for PDL will allow for comparison across laboratories.

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

الإصابات الجراحية للماوس البنكرياس من خلال من ربط والبنكرياس القناة نموذجا للالغدد الصماء وخارجية الإفراز إعادة برمجة وانتشار

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of neuromuscular disorders. However, in order to do so, proper care needs to be taken when excising and preserving tissues to achieve optimal staining. One method of tissue preservation involves fixing tissues in formaldehyde and then embedding them with paraffin wax. This method preserves morphology well and allows for long-term storage at RT but is cumbersome and requires handling of toxic chemicals. Further, formaldehyde fixation results in antigen cross-linking, which necessitates antigen retrieval protocols for effective immunostaining. On the contrary, frozen sectioning does not require fixation and thus retains biological antigen conformation. This method also provides a distinct advantage in quick turn around time, making it especially useful in situations needing quick histological evaluation like intraoperative surgical biopsies. Here we describe the most effective method of preparing muscle biopsies for visualization with different histological and immunological stains.

Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.

ما يفعل وما يترك في إعداد العضلات Cryosections للتحليل النسيجي

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

نموذج الماوس لزرع البنكرياس باستخدام تقنية تعديل الكفة

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed in mice is high. Phenotypic characterization of these mouse models also requires the examination of cardiac function and morphology. Echocardiography and magnetic resonance imaging (MRI) are commonly used approaches to characterize cardiac function and morphology in mice. Echocardiographic and MRI equipment specialized for use in small rodents is&#160;expensive and requires a dedicated space. This protocol describes cardiac measurements in mice using a clinical echocardiographic system with a 15 MHz human vascular probe. Measurements are performed on anesthetized adult mice. At least three image sequences are recorded and analyzed for each animal in M-mode in the parasternal short-axis view. Afterwards, cardiac histological examination is performed, and cardiomyocyte diameters are determined on hematoxylin-eosin- or wheat germ agglutinin (WGA)-stained paraffin sections. Vessel density is determined morphometrically after Pecam-1 immunostaining. The protocol has been applied successfully to pharmacological studies and different genetic animal models under baseline conditions, as well as after experimental myocardial infarction by the permanent ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD). In our experience, echocardiographic investigation is limited to anesthetized animals and is feasible in adult mice weighing at least 25 g.

Echocardiographic examination is frequently used in mice. Expensive high-resolution ultrasound devices have been developed for this purpose. This protocol describes an affordable echocardiographic procedure combined with histological morphometric analyses to determine cardiac morphology.

دراسة مورفولوجيا القلب مشخصين وغذائها في الماوس

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental insults that disturb placenta development or function can cause early pregnancy loss in mice and humans. Nevertheless, simple in vitro assays to screen for potential effects on placenta formation are lacking. Here, we focus on modeling the first and critical step in placenta formation, which consists of the attachment of the allantois to the chorion. We describe a method to rapidly assess the attachment of allantoic explants on immobilized &#945;4&#946;1 integrin, which serves as a chorio-mimetic substrate.This in vitro approach enables a qualitative evaluation of the attachment and spreading behavior of multiple allantois explants at different consecutive time points. The protocol may be used to investigate the effect of targeted mouse mutations, drugs, or various environmental factors that have been linked to pregnancy complications or fetal loss on allantois attachment ex vivo.

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

We describe an in vitro assay to model chorioallantoic attachment, the first step in placenta formation. The protocol demonstrates the dissection and explant culture of murine allantoides on immobilized &#945;4&#946;1 integrin. Allantois attachment is evaluated microscopically at pre-determined time points.

تشريح وثقافة Explant موريني Allantois للتحليل في المختبر للحجز الانتويك

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of aortic disease exist, in vivo imaging of the vasculature has been limited. In recent years, micro-computerized tomography (micro-CT) has emerged as a preferred modality for imaging both large and small vessels both in vivo and ex vivo. In conjunction with a method of vascular casting, we have successfully used micro-CT to characterize the frequency and distribution of aortic pathology in &#946;-aminopropionitrile-treated C57/Bl6 mice. Technical limitations of this method include variations in the quality of the perfusion introduced by poor animal preparation, the application of proper methodologies for vessel size quantification, and the non-survivability of this procedure. This article details a methodology for the intravascular perfusion of a lead-based radiopaque silicone rubber for the quantitative characterization of aortopathy in a mouse model of aneurysm and dissection. In addition to visualizing aortic pathology, this method may be used for examining other vascular beds in vivo or vascular beds removed post-mortem.

This article describes a detailed methodology of using a radiopaque lead-based silicone rubber to perfuse the murine vasculature for aortic diameter quantification in a mouse model of aortic aneurysm and dissection.

التحليل الكمي للأشعة المقطعية الصغرى من أورتوباثي في نموذج ماوس β-أمينوبروبيونيتريلي-المستحث الابهر والتشريح

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

الآليات الأساسية لإفراز هرمون الأمعاء التي تستخدم عزل Perfused الفئران الأمعاء

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...