Name: isolation of giant lampbrush chromosomes from living oocytes of frogs and salamanders
Uploaded: 2016-12-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Giant Lampbrush Chromosomes from Living Oocytes of Frogs and Salamanders at JoVE.com

Research reported in this publication was supported by the National Institute of General Medical Sciences of the National Institutes of Health under award number R01 GM33397. The content is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health. J.G.G. is American Cancer Society Professor of Developmental Genetics.

<ol>
	<li>Purkinje, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Symbolae ad ovi avium historiam ante incubationem. , (1830).</li><li>R&#252;ckert, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zur+Entwickelungsgeschichte+des+Ovarialeies+bei+Selachiern.">Zur Entwickelungsgeschichte des Ovarialeies bei Selachiern.</a> Anat. Anz. 7, 107-158 (1892).</li><li>Callan, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lampbrush Chromosomes. 36, (1986).</li><li>Gall, J. G., Callan, H. G., Wu, Z., Murphy, C., Kay, B. K., Peng, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lampbrush+chromosomes.">Lampbrush chromosomes.</a> Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. Vol. 36 Methods in Cell Biology , 149-166 (1991).</li><li>Gall, J. G., Wu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+contents+of+isolated+Xenopus+germinal+vesicles.">Examining the contents of isolated Xenopus germinal vesicles.</a> Methods. 51, 45-51 (2010).</li><li>Penrad-Mobayed, M., Kanhoush, R., Perrin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tips+and+tricks+for+preparing+lampbrush+chromosome+spreads+from+Xenopus+tropicalis+oocytes.">Tips and tricks for preparing lampbrush chromosome spreads from Xenopus tropicalis oocytes.</a> Methods. 51, 37-44 (2010).</li><li>Morgan, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Working+with+oocyte+nuclei:+cytological+preparations+of+active+chromatin+and+nuclear+bodies+from+amphibian+germinal+vesicles.">Working with oocyte nuclei: cytological preparations of active chromatin and nuclear bodies from amphibian germinal vesicles.</a> Methods Mol. Biol. 463, 55-66 (2008).</li><li>Paine, P. L., Johnson, M. E., Lau, Y. T., Tluczek, L. J., Miller, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+oocyte+nucleus+isolated+in+oil+retains+in+vivo+structure+and+functions.">The oocyte nucleus isolated in oil retains in vivo structure and functions.</a> Biotechniques. 13, 238-246 (1992).</li><li>Handwerger, K. E., Cordero, J. A., Gall, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cajal+bodies,+nucleoli,+and+speckles+in+the+Xenopus+oocyte+nucleus+have+a+low-density,+sponge-like+structure.">Cajal bodies, nucleoli, and speckles in the Xenopus oocyte nucleus have a low-density, sponge-like structure.</a> Mol Biol Cell. 16, 202-211 (2005).</li><li>Patel, S., Novikova, N., Beenders, B., Austin, C., Bellini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+images+of+RNA+polymerase+II+transcription+units.">Live images of RNA polymerase II transcription units.</a> Chromosome Res. 16, 223-232 (2008).</li><li>Gall, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Octagonal+nuclear+pores.">Octagonal nuclear pores.</a> J Cell Biol. 32, 391-399 (1967).</li><li>L&#246;schberger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+imaging+visualizes+the+eightfold+symmetry+of+gp210+proteins+around+the+nuclear+pore+complex+and+resolves+the+central+channel+with+nanometer+resolution.">Super-resolution imaging visualizes the eightfold symmetry of gp210 proteins around the nuclear pore complex and resolves the central channel with nanometer resolution.</a> J Cell Sci. 125, 570-575 (2012).</li><li>Gottfert, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coaligned+dual-channel+STED+nanoscopy+and+molecular+diffusion+analysis+at+20+nm+resolution.">Coaligned dual-channel STED nanoscopy and molecular diffusion analysis at 20 nm resolution.</a> Biophys J. 105, L01-L03 (2013).</li><li>Wallace, R. A., Jared, D. W., Dumont, J. N., Sega, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+incorporation+by+isolated+amphibian+oocytes:+III.+Optimum+incubation+conditions.">Protein incorporation by isolated amphibian oocytes: III. Optimum incubation conditions.</a> J. Exp. Zool. 184, 321-333 (1973).</li><li>Bridger, J., Spector, D. L., Goldman, R. D., Leinwand, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+in+situhybridization+to+DNA.">Fluorescence in situhybridization to DNA.</a> Cells: A Laboratory Manual. 3, 111.111-111.136 (1998).</li><li>Singer, R. H., Spector, D. L., Goldman, R. D., Leinwand, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+to+RNA.">In situ hybridization to RNA.</a> Cells: A Laboratory Manual. 3, 111-116 (1998).</li><li>Gardner, E. J., Nizami, Z. F., Talbot, C. C., Gall, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+intronic+sequence+RNA+(sisRNA),+a+new+class+of+noncoding+RNA+from+the+oocyte+nucleus+of+Xenopus+tropicalis.">Stable intronic sequence RNA (sisRNA), a new class of noncoding RNA from the oocyte nucleus of Xenopus tropicalis.</a> Genes Dev. 26, 2550-2559 (2012).</li><li>Talhouarne, G. J., Gall, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lariat+intronic+RNAs+in+the+cytoplasm+of+Xenopus+tropicalis+oocytes.">Lariat intronic RNAs in the cytoplasm of Xenopus tropicalis oocytes.</a> RNA. 20, 1476-1487 (2014).</li><li>Duryee, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+nuclei+and+non-mitotic+chromosome+pairs+from+frog+eggs.">Isolation of nuclei and non-mitotic chromosome pairs from frog eggs.</a> Arch. Exp. Zellforsch. 19, 171-176 (1937).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

وتمت هذه الملاحظات الأولى من LBCs &quot;الحياة&quot; من مشاهد عامة معزولة يد الضفادع والسلمندر قبل نحو 80 سنوات من قبل عالم الأحياء الأمريكي وليام Duryee، 19 قبل إدخال النقيض من مرحلة ومدينة دبي للإنترنت المجهر، قبل المناعية الفلورسنت، وقبل FISH. مزايا LBCs للتحقيق في تفاصيل هيكل كروموسوم والنسخ على مستوى الجينات الفردية تنمية المطلوب من تقنيات إرفاق LBCs على الشرائح الزجاجية، لمعالجتها بطريقة واقعية، وتطبيق التقنيات الجزيئية دون تدمير التشكل الأساسي. تقريبا كل تقنية لتحقيق هذه الأهداف يتطلب بعض التكيف مع الأنواع قيد التحقيق وبعض الحلول الوسط بين الحفاظ نابض بالحياة والتوصيف الجزيئي. على سبيل المثال، لقطات عامة وLBCs من البرمائيات الذيل من السهل على غير العادة للعمل مع لحجمها الهائل والسهولة التي محتويات GV تفريق في الوسط المناسب. Until الأخيرة، ومع ذلك، فإن القليل جدا من المعرفة حول علم الجينوم، مما يجعل من الصعب ربط ثروة من الميزات الخلوي مع التفاصيل الجزيئية. على العكس من ذلك، LBCs من القيطم صغيرة جدا مقارنة مع تلك التي البرمائيات الذيل (الشكل 5)، ولكن تم التسلسل جينومات كل من اكس مداري وعاشرا المورق وتوضع حواشي جيدا إلى حد معقول. بالنسبة لأولئك أول استخدام لقطات عامة من البرمائيات، فإن التحدي الرئيسي يتمثل في عزل GV وإزالة الغلاف النووي دون الإضرار LBCs. حتى الآن، لا أحد قد اكتشف طريقة لإزالة المغلف إلا باليد مع ملقط المجوهرات. سيكون من تقدم تقني كبير إذا وجدت وسيلة ل&quot;حل&quot; أو &quot;هضم&quot; المغلف ولكن ترك الكروموسومات والعضيات النووية الأخرى لم يلحق بها أذى. سيكون لهذه التقنية أن تكون مفيدة أيضا للدراسات الجزيئية. في تحقيقاتنا على الحمض النووي الريبي النووي وحشوية وجدنا أنه من الضروري لإزالة الغلاف النووي قبل تحليل الحمض النووي الريبي النووي (الشكل 2). 17،18 إذا لم يتم إزالة المغلف، وطغى على كمية صغيرة من الحمض النووي الريبي النووي RNA عن طريق تلويث حشوية أن تلتزم الخارجي للغلاف. سوف تحسن كبير آخر هو اكتشاف بعض الطريق إرفاق LBCs أكثر إحكاما على شريحة المجهر. الطرد المركزي من إعداد أمر بالغ الأهمية، ولكن حتى الطرد المركزي لفترة طويلة (1 ساعة في 4500 x ج) لا يضمن المرفق. يمكن للمرء أن أقول عادة عندما يتم LBCs تعلق بشكل جيد من قبل دراستها مع تباين مرحلة تحت التكبير المتوسط. حسنا المرفقة الكروموسومات لا تظهر أي حركة البراونية على الإطلاق. إن وجدت الحركة البراونية من الحلقات قابلا للاكتشاف، واللاحقة المناعية أو FISH بروتوكولات يؤدي إلى ضرر أو خسارة مادية جسيمة.

معظم الفقاريات، مع استثناء ملحوظ من الجرابيات والثدييات المشيمية، وإنتاج البيض yolky كبيرة. وعلى الرغم من حجمها الهائل في بعض الأحيان، هذه البويضات هي الخلايا الوحيدة التي تصل إلى البعد النهائي في حين لا يزال في المبيض من الاناث. ودعا البيض المبيض البويضات وكل عادة ما تحتوي على نواة العملاقة واحدة، والمعروف منذ أوائل القرن ال 19 كما الحويصلة الجرثومية أو ببساطة GV. 1 البويضات من الضفادع مختبر المشتركة، القيطم المورق ومداري القيطم، يصل قطرها إلى أقصى حد من 1.2 ملم و 0.8 ملم على التوالي (الشكل 1). ومشاهد عامة من البويضات الناضجة من هذه الضفادع هما 0،3-0،4 مم في القطر (أرقام 2 و 3). السلمندر وعادة ما يكون البويضات حتى أكبر ومشاهد عامة. البويضات الناضجة تماما وقنفذ البحر المكسيكي، Ambystoma mexicanum، أكثر من 2 مم في القطر وGV حوالي 0.5 مم. وهكذا، هذه النوى مرئية بسهولة بالعين المجردة ويمكنيمكن التلاعب بها في العديد من الطرق التي من المستحيل مع نوى الخلايا الجسدية نموذجية. على قدم المساواة لافت للنظر هو حجم هائل من الكروموسومات داخل GV، وهذه حقيقة معترف بها بالفعل في نهاية القرن التاسع 19. الكروموسومات الفردية Ambystoma والسلمندر أخرى يمكن أن تصل إلى 1 ملم في الطول (أرقام 4، 5). تلك هي القيطم كبيرا أصغر، على الرغم من بأطوال تصل إلى 100 ميكرون أو أكثر، انها تفوق الكروموسومات الجسدية النموذجية لمعظم الكائنات الحية. سمة هامة من الكروموسومات بويضة هو النشاط النسخي غير عادي، مما يؤدي إلى واحدة من أهم سمات شكلية متميزة لهم - المئات من الحلقات الجانبية يقترن (الشكل 5). وتتكون كل حلقة واحدة أو عدد قليل من الوحدات النسخ أن تجميع بنشاط الحمض النووي الريبي. الحلقات تعطي بويضة صبغيات مظهر غامض، مما أدى إلى اسم كروموسوم &quot;فرجونية&quot; بعد سطحية بهاتشابه في الفرش المستخدمة في أوقات سابقة لتنظيف المداخن مصباح الكيروسين. 2 وتركز هذه الورقة على استخدام مشاهد عامة معزولة لدراسة LBCs والعضيات النووية (نويات والهيئات هيستون مكان، والبقع). ويمكن وصفها اثنين من تقنيات مختلفة نوعا ما. في أول تقنية، أكثر شيوعا، يتم عزل مشاهد عامة في محلول ملحي باستخدام ملقط الجواهري، وتشطف لفترة وجيزة لإزالة صفار ملتصقة، وإزالة الغلاف النووي، ومرة ​​أخرى مع ملقط المجوهرات. محتويات الجيلاتينية، التي تحتوي على LBCs والعضيات النووية، ويسمح ليستقر على شريحة المجهر والزجاج أو ساترة. هذه المستحضرات يمكن فحص مباشرة على النقيض من المرحلة أو مدينة دبي للإنترنت المجهر. بدلا من ذلك، يمكن طرد الاستعدادات لإرفاق LBCs والعضيات إلى الشريحة أو ساترة. ويمكن بعد هذه الاستعدادات تتم معالجتها للتحليل الجزيئي مفصل من الأحماض النووية والبروتينات، في المقام الأول المناعي وfluorescenتي في الموقع التهجين (FISH). 3-7 وتتضمن تقنية الثانية عزل GV في الزيوت المعدنية. تبقى 8 مشاهد عامة معزولة النفط النشطة transcriptionally لساعات طويلة ومفيدة محتملة للدراسات التي يكون فيها أحد يريد محتويات النووية ليكون نابض بالحياة قدر الإمكان. 9،10 لأن معامل الانكسار من &quot;ساب&quot; النووي هو قريب من ذلك من LBCs وغيرها من العضيات النووية (الشكل 3)، وتقنيات مجهرية يمكن أن يكون تحديا مع مشاهد عامة معزولة للنفط. أخيرا، بسبب حجمها وسهولة التلاعب، ومشاهد عامة هي المادة المثالية للدراسات على الغلاف النووي. وقد وصفت مجمع المسام النووي أولا من الدراسات المجهرية الإلكترون على المظاريف GV البرمائيات 11 وأكثر الملاحظات superresolution الأخيرة استخدمت نفس المادة. 12،13

<table><tbody><tr><td>Paraformaldehyde (reagent grade, crystalline)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-500G</td><td>Despite warnings in many protocols, a concentrated solution can be stored indefinitely at RT</td></tr><tr><td>Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040-100G</td><td>Sometimes referred to as MS-222</td></tr><tr><td>Ethicon RB-1 1/2 circle taper point 3-0 sutures</td><td>VWR&amp;nbsp;</td><td>95057-000</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast (paraffin wax)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3558-1KG</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;p&lt;/em&gt;-Phenylenediamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6001</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin</td><td>Grocery Store</td><td></td><td>Commercial Knox gelatin works fine</td></tr><tr><td>ProLong Gold antifade mountant</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P10144</td><td></td></tr><tr><td>Gold Seal cover glass&amp;nbsp; 22 x 22 mm #1 1/2 (0.16 - 0.19 mm thick)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>63786-01</td><td>These coverslips are the recommended thickness for superresolution microscopy</td></tr><tr><td>Dumont forceps #5</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72700-D</td><td>http://www.emsdiasum.com/microscopy/products/tweezers/dumont_positive_action.aspx</td></tr><tr><td>Paraffin oil (light)&amp;nbsp;</td><td>EMD Chemicals</td><td>PX0047-1</td><td>For isolating GVs in oil</td></tr><tr><td>Adhesive &lt;em&gt;in situ&lt;/em&gt; PCR and hybridization chambers (25 &amp;micro;L)</td><td>BioRad</td><td>Frame-Seal Slide Chambers #SLF0201</td><td>http://www.bio-rad.com/en-us/sku/slf0201-frame-seal-slide-chambers</td></tr><tr><td>Silicone isolators</td><td>Grace-Biolabs</td><td>select from catalog link</td><td>http://www.gracebio.com/life-science-products/microfluidics/silicone-isolators.html</td></tr><tr><td>Coplin jars and staining dishes</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>select from catalog link</td><td>http://www.emsdiasum.com/microscopy/products/histology/staining.aspx</td></tr></tbody></table>

isolation of giant lampbrush chromosomes from living oocytes of frogs and salamanders

وصفنا طرق لدراسة العملاقة الكروموسومات فرجونية النشطة transcriptionally (LBCs) وجدت في البويضة، أو بيضة unlaid، الضفادع والسلمندر. يمكن LBCs الفردية أن تصل إلى 1 ملم في الطول ويقيمون في نواة عملاقة، في حد ذاته ما يصل الى 0.5 ملم في القطر. حجم كبير من الكروموسومات يسمح الملاحظات لا مثيل لها من الجينات النشطة بواسطة المجهر الضوئي الضوء، ولكن في نفس الوقت هناك حاجة تقنيات خاصة لعزل نواة، وإزالة الغلاف النووي، ونشر الكروموسومات على شريحة المجهر. يتم عزل نواة البويضة، وتسمى أيضا الحويصلة الجرثومية (GV)، في وسيلة تسمح التبلور الجزئي للالأكتين النووية ويحافظ على هيكل الدقيق للLBCs. تتم هذه الخطوة يدويا تحت المجهر تشريح باستخدام ملقط صائغ. وبعد ذلك، تتم إزالة الغلاف النووي، ومرة ​​أخرى يدويا مع ملقط المجوهرات. يتم نقل محتويات النووية بسرعة إلى المتوسطة التي الدهاناتrses هلام الأكتين ويسمح للLBCs التالفة ليستقر على شريحة المجهر. عند هذه النقطة LBCs والعضيات النووية الأخرى ويمكن الاطلاع على النقيض من مرحلة أو تدخل الفرق المجهر النقيض من ذلك، على الرغم من أن التفاصيل الدقيقة يتم حجب من قبل الحركة البراونية. لارتفاع الملاحظة قرار المجهري أو تحليل الجزيئي، يتم طرد إعداد كله إرفاق LBCs الحساسة بحزم إلى الشريحة. ثم تبعتها وتثبيت وجيزة في امتصاص العرق من قبل تلوين مناعي أو التهجين. LBCs في حالة نشطة transcriptionally وحجمها الهائل يسمح التحليل الجزيئي على مستوى الجينات الفردية باستخدام متحد البؤر أو فائقة الدقة المجهر.

لفحص الكروموسومات فرجونية عملاقة واحدة تبدأ من خلال عزل البويضات من الضفادع أو السمندل. ويبين الشكل 1 مجموعة من البويضات الناضجة في محلول ملحي مخزنة بعد إزالة من المبيض من الضفادع، القيطم. لا تزال هذه البويضات في حالة جيدة لعدة أيام في درجة حرارة الغرفة. ثم تتم إزالة النواة (أو الحويصلة الجرثومية) من بويضة مع ملقط المجوهرات، سواء في محلول ملحي (الشكل 2) أو في مجال النفط (الشكل 3). محتويات النووية لنواة معزولة للنفط يمكن فحصها من قبل سحق بلطف نواة ومراقبة على النقيض من مرحلة أو فرق التدخل النقيض (DIC) المجهري. لفحص محتويات النواة التي تم عزلها في محلول ملحي، يجب على المرء أولا إزالة الغلاف النووي مع ملقط المجوهرات والسماح للمحتويات ليستقر على شريحة المجهر. ثم يتم طرد إعداد إرفاق رانه الكروموسومات بحزم إلى الشريحة، وبعد ذلك الكروموسومات يمكن ملطخة الأجسام المضادة (الشكل 4) أو يتعرضون لفي الموقع التهجين. الكروموسومات فرجونية من السلمندر هي أكبر بكثير من تلك الضفادع (الشكل 5). وفي كلتا الحالتين يمكن أن ينظر إلى وحدة النسخ الفردية (الجينات)، وحلقات من لونين إسقاط أفقيا من محور كروموسوم. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54103/54103fig1.jpg" /> الشكل 1: الناضجة البويضات من اكس مداري الضفدع. المبيض من الضفادع الإناث الناضجة على آلاف من البويضات في مراحل مختلفة من النضج. أصغر هي حجم الخلايا الجسدية ووصلت بالفعل إلى الطور الأول من الميتوزي الأول. كما تنمو البويضة، فإنه يتراكم تدريجيا صفار البيض، والذي يعطي الخلية مظهر أبيض معتم. أكبر حصيرةالبويضات لدى عودتهم، كما هو موضح هنا، يكتسب غطاء أغمق بسبب تراكم صبغة الميلانين. أكبر البويضات من اكس مداري حوالي 0.8 مم في القطر، وتلك التي عاشرا المورق حوالي 1.4 ملم، في حين أن من قنفذ البحر ما يقدر هائلة 2.2 مم. باستثناء حجم، كل الثلاثة متشابهة في المظهر العام. شريط مقياس = 1 مم. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54103/54103fig2.jpg" /> الشكل 2: إزالة من GV من سيت من اكس مداري. اليسار. وقدم ثقب صغير مع ملقط صائغ في القطب الحيواني المظلم من بويضة وكان GV مقذوف بلطف. في هذا المثال كان GV تقريبا خالية من صفار البيض لأنه خرج من البويضة. صفار ملتصقة يمكن إزالتها عن طريق مص GV داخل وخارج ماصة مع قطر الحافة فقط أكبر قليلا من قطر GV نفسها. حق. تhree مشاهد عامة من اكس مداري. تركت هذه لقطات عامة لبضع دقائق في المتوسط ​​(GV حل العزلة تعديلها لدرجة الحموضة 5.8) حامض قليلا، والذي يسبب الغلاف النووي إلى تضخم بعيدا عن محتويات النووية تبلور. ومشاهد عامة يعامل بهذه الطريقة لم تنتشر على الفحص الخلوي. ومع ذلك، هذه لقطات عامة مثالية للتحليل الجزيئي: يمكن إزالة المغلف مع المجوهرات ملقط، وتوفير عينة من محتويات النووية خالية تماما من التلوث حشوية. 17،18 شريط مقياس = 0.5 مم. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54103/54103fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/54103/54103fig3.jpg" /> الشكل (3): GV من اكس مداري المعزولة في النفط. اليسار. بعد أن تم عمل ثقب صغير في البويضة بالقرب من بو الحيوان الظلامجنيه، بدأت GV لبثق. في هذه الحالة جاء GV الخروج مع أي ما يقرب من صفار ملتصقة. الوسط. وGV هو الآن خالية تماما من السيتوبلازم البويضة. تستمر هذه مشاهد عامة لنسخ الحمض النووي الريبي لساعات. حق. بعد سحق وGV بلطف في النفط تحت ساترة، العضيات النووية يمكن عرضها من قبل مدينة دبي للإنترنت، كما هو موضح هنا، أو عن طريق النقيض من المرحلة. وGV كله هو أكبر بكثير من مساحة صغيرة كما هو موضح هنا. HLB = الجسم هيستون مكان مع ثلاث بقع على سطحها. شريط مقياس = 0.5 ملم لوحات الأولين، 10 ميكرون للثالث. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54103/54103fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/54103/54103fig4.jpg" /> الشكل 4: فرجونية الكروموسومات (LBCs) من قنفذ البحر A. mexicanum. اليسار. </stرونغ&gt; 14 كروموزوم من GV واحد في الطور الأول من الميتوزي الأول، immunostained مع الأجسام المضادة ضد الجيش الملكي النيبالي فسفرته البلمرة الثاني. و&quot;النقاط&quot; صغيرة ملطخة هي هيئات موضع هيستون. حق. إعداد نفسه ينظر اليه من جانب إضاءة الساحة المظلمة. يمكن للمرء أن يرى الآن العديد من نويات تضخيم غير ملوثين. شريط مقياس = 250 ميكرون. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54103/54103fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/54103/54103fig5.jpg" /> الرقم 5: LBC واحدة من قنفذ البحر A. mexicanum ومداري الضفدع اكس، في التكبير نفسه. هذه الصور توضح اختلاف حجم المدقع بين LBCs من السمندل والضفدع (الشكل). حجم مختلفام يرتبط المحتوى الكلي لمجموع الحمض النووي للجينوم (حوالي 30 زوج الجنيه الإسترليني لA. mexicanum مقابل 1.7 الجنيه الإسترليني لاكس مداري). الحلقات الجانبية الفردية (وحدات النسخ) هي أيضا وقتا أطول في السمندل مما كانت عليه في الضفدع. شريط مقياس = 100 ميكرون. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54103/54103fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Giant Lampbrush Chromosomes from Living Oocytes of Frogs and Salamanders at JoVE.com

Isolation of Giant Lampbrush Chromosomes from Living Oocytes of Frogs and Salamanders

نقدم تقنيات بسيطة لعزل العملاقة الكروموسومات فرجونية النشطة transcriptionally من البويضات من الضفادع والسلمندر الحية. نحن تصف كيفية مراقبة هذه الكروموسومات &quot;على قيد الحياة&quot; على النقيض من مرحلة أو تفاضلي تدخل النقيض من ذلك، وكيفية اصلاحها لفلوري في التهجين الموضعي أو تلطيخ مناعي.

عزل العملاق فرجونية الكروموسومات من المعيشة البويضات من الضفادع والسلمندر

We describe methods for studying the giant transcriptionally active lampbrush chromosomes (LBCs) found in the oocyte, or unlaid egg, of frogs and ...

isolation-giant-lampbrush-chromosomes-from-living-oocytes-frogs

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Molecular Biology

Genetics

Unit 1

DNA and Chromosome Structure

SCIENTISTS IN ACTION

12.9K Views.  Carnegie Institution for Science.  نقدم تقنيات بسيطة لعزل العملاقة الكروموسومات فرجونية النشطة transcriptionally من البويضات من الضفادع والسلمندر الحية. نحن تصف كيفية مراقبة هذه الكروموسومات "على قيد الحياة" على النقيض من مرحلة أو تفاضلي تدخل النقيض من ذلك، وكيفية اصلاحها لف?...

Video: Isolation of Giant Lampbrush Chromosomes from Living Oocytes of Frogs and Salamanders

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during oogenesis. In order to study roles of such maternal factors in early embryonic development, it is desirable to manipulate their functions from the very beginning of embryonic development. Conventional ways of gene interference are achieved by injection of antisense oligonucleotides (oligos) or mRNA into fertilized eggs, enabling under- or over-expression of specific proteins, respectively. However, these methods normally require more than several hours until protein expression is affected, and, hence, the interference of gene functions is not effective during early embryonic stages. Here, we introduce an experimental system in which expression levels of maternal proteins can be altered before fertilization. Xenopus laevis oocytes obtained from ovaries are defolliculated by incubating with enzymes. Antisense oligos or mRNAs are injected into defolliculated oocytes at the germinal vesicle (GV) stage. These oocytes are in vitro matured to eggs at the metaphase II (MII) stage, followed by intracytoplasmic sperm injection (ICSI). By this way, up to 10% of ICSI embryos can reach the swimming tadpole stage, thus allowing functional tests of specific gene knockdown or overexpression. This approach can be a useful way to study roles of maternally stored factors in early embryonic development.

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

We describe methods of manipulating Xenopus laevis immature oocytes, in vitro maturation of oocytes to eggs, and intracytoplasmic sperm injection. This protocol allows degradation of some maternal proteins and overexpression of genes of interest at fertilization, and hence is valuable to study roles of specific factors in early embryonic development.

التلاعب و<em&gt; في المختبر</em&gt; نضوج<em&gt; القيطم المورق</em&gt; البويضات، تلاه سهم داخل الهيولى حقن الحيوانات المنوية، لدراسة التطور الجنيني

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

Developmental Biology

Reconstitution of Cell-cycle Oscillations in Microemulsions of Cell-free Xenopus Egg Extracts

Real-time measurement of oscillations at the single-cell level is important to uncover the mechanisms of biological clocks. Although bulk extracts prepared from Xenopus laevis eggs have been powerful in dissecting biochemical networks underlying the cell-cycle progression, their ensemble average measurement typically leads to a damped oscillation, despite each individual oscillator being sustained. This is due to the difficulty of perfect synchronization among individual oscillators in noisy biological systems. To retrieve the single-cell dynamics of the oscillator, we developed a droplet-based artificial cell system that can reconstitute mitotic cycles in cell-like compartments encapsulating cycling cytoplasmic extracts of Xenopus laevis eggs. These simple cytoplasmic-only cells exhibit sustained oscillations for over 30 cycles. To build more complicated cells with nuclei, we added demembranated sperm chromatin to trigger nuclei self-assembly in the system. We observed a periodic progression of chromosome condensation/decondensation and nuclei envelop breakdown/reformation, like in real cells. This indicates that the mitotic oscillator functions faithfully to drive multiple downstream mitotic events. We simultaneously tracked the dynamics of the mitotic oscillator and downstream processes in individual droplets using multi-channel time-lapse fluorescence microscopy. The artificial cell-cycle system provides a high-throughput framework for quantitative manipulation and analysis of mitotic oscillations with single-cell resolution, which likely provides important insights into the regulatory machinery and functions of the clock.

Reconstitution of Cell-cycle Oscillations in Microemulsions of Cell-free Xenopus Egg Extracts

We present a method for the generation of in vitro self-sustained mitotic oscillations at the single-cell level by encapsulating egg extracts of Xenopus laevis in water-in-oil microemulsions.

إعادة تشكيل ذبذبات دورة الخلية في ميكرومولسيونس مستخرجات البيض خالية من الخلية النمو

Real-time measurement of oscillations at the single-cell level is important to uncover the mechanisms of biological clocks. Although bulk extracts ...

Biochemistry

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

Much information about the coupling of presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained from invertebrate preparations, most notably the squid giant synapse1. However, except for the preparation described here, few vertebrate preparations exist in which it is possible to make simultaneous measurements of neurotransmitter release and presynaptic ionic currents. Embryonic Xenopus motoneurons and muscle cells can be grown together in simple culture medium at room temperature; they will form functional synapses within twelve to twenty-four hours, and can be used to study nerve and muscle cell development and synaptic interactions for several days (until overgrowth occurs). Some advantages of these co-cultures over other vertebrate preparations include the simplicity of preparation, the ability to maintain the cultures and work at room temperature, and the ready accessibility of the synapses formed2-4. The preparation has been used widely to study the biophysical properties of presynaptic ion channels and the regulation of transmitter release5-8. In addition, the preparation has lent itself to other uses including the study of neurite outgrowth and synaptogenesis9-12, molecular mechanisms of neurotransmitter release13-15, the role of diffusible messengers in neuromodulation16,17, and in vitro synaptic plasticity18-19.

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

This video demonstrates the procedures used to grow primary cultures of embryonic Xenopus nerve and muscle cells and the usefulness of this preparation for making simultaneous pre- and post-synaptic patch clamp recordings.

في وقت واحد قبل وبعد متشابك تسجيل الكهربية من<em&gt; القيطم</em&gt; العصبي العضلي المشارك الثقافات

Much information about the coupling of  presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained  from invertebrate preparations, ...

Neuroscience

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to generate maternal-effect mutant animals. Additionally, many of the techniques to overexpress or inhibit gene function in organisms such as Xenopus and zebrafish fail to sufficiently target critical maternal signaling pathways, such as Wnt signaling. In Xenopus, manipulating gene function in cultured oocytes and subsequently fertilizing them can ameliorate these problems to some extent. Oocytes are manually defolliculated from donor ovary tissue, injected or treated in culture as desired, and then stimulated with progesterone to induce maturation. Next, the oocytes are introduced into the body cavity of an ovulating host female frog, whereupon they will be translocated through the host's oviduct and acquire modifications and jelly coats necessary for fertilization. The resulting embryos can then be raised to the desired stage and analyzed for the effects of any experimental perturbations. This host-transfer method has been highly effective in uncovering basic mechanisms of early development and allows a wide range of experimental possibilities not available in any other vertebrate model organism.

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Procedure for fertilizing Xenopus oocytes by the host transfer method.

تسميد البويضات القيطم باستخدام أسلوب نقل المضيف

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes in cell surface area and cell height, and where cells undergo mitosis and migrate. Furthermore, epithelial cells can also regulate morphogenetic movements in adjacent tissues1. A traditional method to study epithelial cells and tissues involve chemical fixation and histological methods to determine cell morphology or localization of particular proteins of interest. These approaches continue to be useful and provide "snapshots" of cell shapes and tissue architecture, however, much remains to be understood about how cells acquire specific shapes, how various proteins move or localize to specific positions, and what paths cells follow toward their final differentiated fate. High resolution live imaging complements traditional methods and also allows more direct investigation into the dynamic cellular processes involved in the formation, maintenance, and morphogenesis of multicellular epithelial sheets. Here we demonstrate experimental methods from the isolation of animal cap tissues from Xenopus laevis embryos to confocal imaging of epithelial cells and simple measurement approaches that together can augment molecular and cellular studies of epithelial morphogenesis.

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonic epithelia are an ideal model system to study cell behaviors such as polarity development and shape change during epithelial morphogenesis. Traditional histology of fixed samples is increasingly being complemented by live-cell confocal imaging. Here we demonstrate methods to isolate frog tissues and visualize live epithelial cells and their cytoskeleton using live-cell confocal microscopy.

تعيش خلية التصوير والتحليل الكمي من الخلايا الظهارية في الجنينية القيطم المورق</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Analysis of Transforming Growth Factor &#223; Family Cleavage Products Secreted Into the Blastocoele of Xenopus laevis Embryos

The two arms of the Transforming Growth Factor &#223; (Tgf&#223;) superfamily, represented by Tgf&#223;/Nodal or Bone morphogenetic protein (Bmp) ligands, respectively, play essential roles in embryonic development and adult homeostasis. Members of the Tgf&#223; family are made as inactive precursors that dimerize and fold within the endoplasmic reticulum. The precursor is subsequently cleaved into ligand and prodomain fragments. Although only the dimeric ligand can engage Tgf&#223; receptors and activate downstream signaling, there is growing recognition that the prodomain moiety contributes to ligand activity. This article describes a protocol that can be used to identify cleavage products generated during activation of Tgf&#223; precursor proteins. RNA encoding Tgf&#223; precursors are first microinjected into X. laevis embryos. The following day, cleavage products are collected from the blastocoele of&#160;gastrula stage embryos and analyzed on Western blots. This protocol can be completed relatively quickly, does not require expensive reagents and provides a source of concentrated Tgf&#223; cleavage products under physiologic conditions.

Analysis of Transforming Growth Factor &#223; Family Cleavage Products Secreted Into the Blastocoele of Xenopus laevis Embryos

When Transforming Growth Factor &#223; family precursor proteins are ectopically expressed in Xenopus laevis embryos, they dimerize, get cleaved and are secreted into the blastocoele, which begins at the late blastula to early gastrula stage. We describe a method for aspirating cleavage products from the blastocoele cavity for immunoblot analysis.

تحليل تحويل عامل النمو ß منتجات الانقسام الأسرة تفرز في Blastocoele من الأجنة Xenopus laevis

The two arms of the Transforming Growth Factor &#223; (Tgf&#223;) superfamily, represented by Tgf&#223;/Nodal or Bone morphogenetic protein (Bmp) ligands, ...

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

Two electrode voltage clamp electrophysiology (TEVC) is a powerful tool to investigate the mechanism of ion transport1 for a wide variety of membrane proteins including ion channels2, ion pumps3, and transporters4. Recent developments have combined site-specific fluorophore labeling alongside TEVC to 
concurrently examine the conformational dynamics at specific residues and function of these proteins on the surface of single cells.
We will describe a method to study the conformational dynamics of membrane proteins by simultaneously monitoring fluorescence and current changes using voltage-clamp fluorometry. This approach can be used to examine the molecular motion of membrane proteins site-specifically following cysteine replacement and site-directed fluorophore labeling5,6. Furthermore, this method provides an approach to determine distance constraints between specific residues7,8. 
This is achieved by selectively attaching donor and acceptor fluorophores to two mutated cysteine residues of interest.
In brief, these experiments are performed following functional expression of the desired protein on the surface of Xenopus leavis oocytes. The large surface area of these oocytes enables facile functional measurements and a robust fluorescence signal5. It is also possible to readily change the extracellular conditions such as pH, ligand or cations/anions, which can provide further information on the mechanism of membrane proteins4. Finally, recent developments 
have also enabled the manipulation of select internal ions following co-expression with a second protein9.
Our protocol is described in multiple parts. First, cysteine scanning mutagenesis proceeded by fluorophore labeling is completed at residues located at the interface of the transmembrane and extracellular domains. Subsequent experiments are designed to identify residues which demonstrate large changes in fluorescence intensity (&lt;5%)3 upon a conformational change of the protein. Second, these changes in fluorescence intensity are compared to the kinetic parameters of 
the membrane protein in order to correlate the conformational dynamics to the function of the protein10. This enables a rigorous biophysical analysis of the molecular motion of the target protein. Lastly, two residues of the holoenzyme can be labeled with a donor and acceptor fluorophore in order to determine distance constraints using donor photodestruction methods. It is also possible to monitor the relative movement of protein subunits following labeling with a donor and acceptor fluorophore.

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

We will describe a method which measures the kinetics of ion transport of membrane proteins alongside site-specific analysis of conformational changes using fluorescence on single cells. This technique is adaptable to ion channels, transporters and ion pumps and can be utilized to determine distance constraints between protein subunits.

دراسة ديناميكية بتكوين جزئي للبروتينات الغشاء في الموقع مع الموقع الموجه وصفها الإسفار

Two electrode voltage clamp electrophysiology (TEVC) is a powerful tool to investigate the mechanism of ion transport1 for a wide variety of membrane ...

Production of Xenopus tropicalis Egg Extracts to Identify Microtubule-associated RNAs

Many organisms localize mRNAs to specific subcellular destinations to spatially and temporally control gene expression. Recent studies have demonstrated that the majority of the transcriptome is localized to a nonrandom position in cells and embryos. One approach to identify localized mRNAs is to biochemically purify a cellular structure of interest and to identify all associated transcripts. Using recently developed high-throughput sequencing technologies it is now straightforward to identify all RNAs associated with a subcellular structure. To facilitate transcript identification it is necessary to work with an organism with a fully sequenced genome. One attractive system for the biochemical purification of subcellular structures are egg extracts produced from the frog Xenopus laevis. However, X. laevis currently does not have a fully sequenced genome, which hampers transcript identification. In this article we describe a method to produce egg extracts from a related frog, X. tropicalis, that has a fully sequenced genome. We provide details for microtubule polymerization, purification and transcript isolation. While this article describes a specific method for identification of microtubule-associated transcripts, we believe that it will be easily applied to other subcellular structures and will provide a powerful method for identification of localized RNAs.

Production of Xenopus tropicalis Egg Extracts to Identify Microtubule-associated RNAs

We describe the collection of unfertilized Xenopus tropicalis eggs and production of a meiosis II-arrested egg extract. This egg extract can be used to purify microtubules and microtubule-associated RNAs.

إنتاج<em&gt; القيطم مداري</em&gt; البيض مقتطفات من التعرف على الرنا أنيبيب المرتبطة بها

Many  organisms localize mRNAs to specific subcellular destinations to spatially and  temporally control gene expression. Recent studies have demonstrated ...

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Protein synthesis is a fundamental process to gene expression impacting diverse biological processes notably adaptation to environmental conditions. The initiation step, which involves the assembly of the ribosomal subunits at the mRNA initiation codon, involved initiation factor including eIF4G1. Defects in this rate limiting step of translation are linked to diverse disorders. To study the potential consequences of such deregulations, Xenopus laevis oocytes constitute an attractive model with high degrees of conservation of essential cellular and molecular mechanisms with human. In addition, during meiotic maturation, oocytes are transcriptionally repressed and all necessary proteins are translated from preexisting, maternally derived mRNAs. This inexpensive model enables exogenous mRNA to become perfectly integrated with an effective translation. Here is described a protocol for assessing translation with a factor of interest (here eIF4G1) using stored maternal mRNA that are the first to be polyadenylated and translated during oocyte maturation as a physiological readout. At first, mRNA synthetized by in vitro transcription of plasmids of interest (here eIF4G1) are injected in oocytes and kinetics of oocyte maturation by Germinal Vesicle Breakdown detection is determined. The studied maternal mRNA target is the serine/threonine-protein-kinase mos. Its polyadenylation and its subsequent translation are investigated together with the expression and phosphorylation of proteins of the mos signaling cascade involved in oocyte maturation. Variations of the current protocol to put forward translational defects are also proposed to emphasize its general applicability. In light of emerging evidence that aberrant protein synthesis may be involved in the pathogenesis of neurological disorders, such a model provides the opportunity to easily assess this impairment and identify new targets.

Xenopus laevis as a Model to Identify Translation Impairment

Protein synthesis control occurs mainly at the translation initiation step, deficiencies in which are linked to diverse disorders. To better understand their etiology, we described here a protocol using Xenopus laevis oocytes assessing the translation of mos transcript in the presence of a mutant of translation initiation factor eIF4G1.

القيطم المورق نموذجا لتحديد الترجمة انخفاض قيمة

Protein synthesis is a fundamental process to gene expression impacting diverse biological processes notably adaptation to environmental conditions. The ...

A Cell Free Assay to Study Chromatin Decondensation at the End of Mitosis

During the vertebrate cell cycle chromatin undergoes extensive structural and functional changes. Upon mitotic entry, it massively condenses into rod shaped chromosomes which are moved individually by the mitotic spindle apparatus. Mitotic chromatin condensation yields chromosomes compacted fifty-fold denser as in interphase. During exit from mitosis, chromosomes have to re-establish their functional interphase state, which is enclosed by a nuclear envelope and is competent for replication and transcription. The decondensation process is morphologically well described, but in molecular terms poorly understood: We lack knowledge about the underlying molecular events and to a large extent the factors involved as well as their regulation. We describe here a cell-free system that faithfully recapitulates chromatin decondensation in vitro, based on mitotic chromatin clusters purified from synchronized HeLa cells and X. laevis egg extract. Our cell-free system provides an important tool for further molecular characterization of chromatin decondensation and its co-ordination with processes simultaneously occurring during mitotic exit such as nuclear envelope and pore complex re-assembly.

The molecular mechanisms of the decondensation of highly compacted mitotic chromatin are ill-defined. We present a cell-free assay based on mitotic chromatin clusters isolated from HeLa cells and Xenopus laevis egg extract that faithfully reconstitutes the decondensation process in vitro.

خلية الفحص مجاني لدراسة لونين Decondensation في نهاية الانقسام

During the vertebrate cell cycle chromatin undergoes extensive structural and functional changes. Upon mitotic entry, it massively condenses into rod ...

عزل العملاق فرجونية الكروموسومات من المعيشة البويضات من الضفادع والسلمندر

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

التلاعب و

إعادة تشكيل ذبذبات دورة الخلية في ميكرومولسيونس مستخرجات البيض خالية من الخلية النمو

في وقت واحد قبل وبعد متشابك تسجيل الكهربية من

تسميد البويضات القيطم باستخدام أسلوب نقل المضيف

تعيش خلية التصوير والتحليل الكمي من الخلايا الظهارية في الجنينية القيطم المورق

تحليل تحويل عامل النمو ß منتجات الانقسام الأسرة تفرز في Blastocoele من الأجنة Xenopus laevis

دراسة ديناميكية بتكوين جزئي للبروتينات الغشاء في الموقع مع الموقع الموجه وصفها الإسفار

إنتاج

القيطم المورق نموذجا لتحديد الترجمة انخفاض قيمة

خلية الفحص مجاني لدراسة لونين Decondensation في نهاية الانقسام