The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

بيان الأخلاق: بروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان من جامعة سيدني، لجنة الطاقة الذرية # 5657. وتمت الموافقة من قبل لجنة الأخلاق التخدير الحيوان (جامعة سيدني، لجنة الطاقة الذرية # 5657). 1. معدات إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الوقت الحقيقي تتبع درجة حرارة الجلد. التبديل على جهاز الكمبيوتر، والأجهزة الحصول على البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مفتوحة درجة الحرارة برنامج تسجيل وتعديل تحديد درجة الحرارة إلى ما بين 30-35 درجة مئوية، وتكرار أخذ العينات لكل 100 مللي ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري: إدراج مقياس الحرارة المستقيم لضمان درجة الحرارة الأساسية لا تزال مستقرة في 37.5 درجة مئوية. </li></ol> 2. معايرة دليل مقياس ضغط الدم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط حديثي الولادة الذراع الكفة لsphygmomanometer.Use حجم 2 صفعة ل250-550 ز الفئران. قد يكون محول من الضروري توصيل أنابيب صفعة لمقياس ضغط الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرغ الكفة إما عن طريق تخفيف صمام إطلاق الهواء أو فصل أنابيب صفعة من التكيفأو. ضمان عدم وجود ضغط يبقى في أنابيب وتقع على إبرة مقياس ضغط الدم عند مستوى الصفر داخل البيضاوي / المستطيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الضغط بين أنابيب، مقياس ضغط الدم والكفة. تضخيم الكفة مع مضخات لطيف من لمبة التضخم حتى يقرأ 100 مم زئبق على مقياس ضغط الدم. ضمان يبقى الضغط المستمر. فرغ الكفة عن طريق فتح ببطء القيمة إطلاق الهواء. </li></ol> 3. إعداد الحيوان ملاحظة: الحيوانات التي هي على الخضوع لإصابة خفيفة تتطلب التكيف الظلام في الليلة التي سبقت نقص التروية عن بعد. الحيوانات تمر الضرر ضوء تتطلب تربية الظلام (ضوء 12 ساعة: دورة الظلام (5 لوكس)) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء نقص التروية عن بعد في أي من القوارض مستيقظا أو anesthetised. تأكد من أن الحيوانات لديها قوة العضلات السليمة. ضمان ذلك عن طريق معسر هند الطرف العلوي للتأكد من وجود الوقت الحاضر العضلات كاف. وقد تم اختبار حماية RIP التي يسببها ضد الإصابة الخفيفة في الفئران المستقرة تصل إلى 6 أشهر من العمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد Anesthetised لRIP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الفئران مع حقنة داخل الصفاق من 60 ملغم / كغم من الكيتامين و 5 ملغ / كغ زيلازين. تحقق من عمق التخدير عن طريق تمديد الساق ومعسر الجلد على الجانب السفلي من القدم. الحيوان لا يوجد لديه رد الفعل إذا تم anesthetised بعمق. تطبيق الدموع الاصطناعية لتجنب جفاف القرنية في حين تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران إما على وسادة الحرارة أو تعميم سخان مياه الأنابيب للحفاظ على درجة حرارة الجسم ثابتة من 37.5 درجة مئوية. وضع الفئران في وضعية الانبطاح مع منصات القدم الأطراف السفلية &quot;مواجهة. إما اليمين أو اليسار أطرافهم قد يخضع لنقص التروية عن بعد. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مستيقظا لRIP ملاحظة: استيقظ التجارب على الحيوانات يتطلب شخصين. شخص واحد يقيد الحيوان والشخص الثاني يعمل مقياس ضغط الدم اليدوي. يجب أن يكون المجربون ثقة لتنفيذ الإجراء كما ضبط النفس يزيد من خطر إصابة معالجات. الفئران التي تمر نقص التروية عن بعد يجب أن تكون مشروطة رس ضبط النفس اليدوي. يجب اعتمادا على المبادئ التوجيهية حدسي أن يكون ضبط النفس اليدوي التقدم من 30 ثانية لمدة أقصاها 5 دقائق على مدى عدة أسابيع. ينبغي استبعاد الحيوانات الخجولة التي تفشل في التأقلم على ضبط النفس اليدوي من التجريب مستيقظا. وأخيرا، من المرجح أن يسبب الإجهاد (وربما إدخال يفند للدراسة) للحيوانات وفوج الشام (وضع الكفة دون التهاب) يجب أن تستخدم لتفسير بدقة نتائج الدراسة RIP ضبط النفس اليدوي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع منشفة الى 15 سم × 30-50 سم قطعة ووضعها على حافة قصيرة عمودي على العمود الفقري الفئران، وتغطية الرأس إلى أعلى أطرافه الخلفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دس حافة قصيرة تحت الجذع الفئران بإحكام والبدء في التفاف الفئران مع الحافة الطويلة المتبقية من منشفة. تأمين الحيوان ملفوفة تحت الذراع في موقف ضعيف. إذا تم عقد الفئران تحت الذراع الأيسر، حرر أطرافهم الفأر الأيمن من منشفة. </li></ol></li></ol> 4. تطبيق سو الجلد التحقيق في درجة الحرارة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمديد الساق من الفئران التي هي على الخضوع لنقص التروية ومكان التحقيق الجلد على قاطع الطريق. ضع التحقيق الجلد لتحقيق أقصى قدر من الاتصال بين التحقيق في درجة الحرارة والجلد. دفع بقوة التحقيق في قاطع الطريق ويضعوا التحقيق مع ورقة الشريط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق موضع التحقيق الجلد من خلال تتبع درجة الحرارة على برنامج تسجيل درجة الحرارة. تأكد من أن درجة حرارة الجلد ما بين 30-34 درجة مئوية، وتظل مستقرة. تتبع درجة حرارة الجلد لمدة 1-2 دقيقة. ضبط التحقيق الجلد إذا كانت درجة الحرارة غير مستقرة أو أقل من 30 ° C. </li></ol> 5. نقص التروية عن بعد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرغ الكفة والتأكد من إغلاق صمام ضغط الهواء. تمديد الساق وتطويق فضفاضة صفعة على هند الطرف العلوي. استخدام السبابة والإبهام على تمديد الساق وانخفاض أرقام للحفاظ على الكفة خففت في الموقف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع ضغط الكفة الحيوان anesthetised إلى 160 مم زئبق، والحيوانات المستيقظة increبورصة عمان ضغط الكفة إلى 180 مم زئبق. ملاحظة: ضغط الدم anesthetised من الفئران يتراوح 120-140 مم زئبق ويرتفع إلى 160 مم زئبق عند اعية. بدء الموقت ودرجة الحرارة القدم التسجيلات مرة واحدة يتم الوصول إلى الضغط الصحيح. ملاحظة: يجب إسقاط درجة حرارة القدم بنسبة 2 ° C بعد 5 دقائق من الضغط المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المحافظة على منصب الكفة فوق &quot;الركبة&quot; الحيوان في جميع أنحاء نقص التروية. وسوف يبدأ ضغط الكفة لإسقاط بعد بضع دقائق، أو إذا كان الطرف فأر يتحرك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ مرارا وتكرارا لمبة التضخم في رشقات نارية قصيرة للحفاظ على الضغط المطلوب صفعة انفجار قصيرة متكررة من الضخ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن أن يتم تسليم نقص التروية عن بعد بشكل مستمر لمدة تتراوح بين 5 و 15 دقيقة. ويتضمن البروتوكول نقص التروية ضخه 2 فترات 5 دقائق نقص التروية مع التدخل 5 دقائق ضخه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرغ ضغط الكفة عن طريق فك صمام ضغط الهواء. تحقق التغير في درجة الحرارة على مدار الموالية نقص الترويةtocol. الافراج عن صفعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تواصل مع التجريب الاصابة. والحيوانات تحت تأثير التخدير تحتاج إلى وضعها على وسادة الحرارة. تواصل رصد الحيوانات حتى العيادات الخارجية. لا يمكن أن تعاد الحيوانات في السكن حتى المشي. </li></ol> 6. الإصابة الخفيفة - الشبكية البقعي نموذج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الظلام التكيف مع الحيوانات بين عشية وضحاها (12-15 ساعة). مباشرة بعد بعد تكييف نقص التروية أو نقص التروية بعد الصوري (ضبط النفس الحيوانية) الحيوانات مكان في البرسبيكس الإسكان مع الغذاء والماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل إضاءة الفلورسنت (1000 لوكس) وتقع فوق البرسبيكس السكن في 09:00 لمدة 24 ساعة. بعد التعرض للضوء، وعودة الحيوانات خافت الإضاءة دوري لمدة 7 أيام. </li></ol> إجراءات نقص التروية 7. بعد النائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم الرؤية مع مخطط كهربية (أرج): ملاحظة: أرج انشاء وبروتوكول فلاش جاءت براندلي وستون 26. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الظلام التكيف مع الحيوانات بين عشية وضحاها (12-15 ساعة). تحتخافت الإضاءة الحمراء تخدير الحيوانات عن طريق الحقن داخل الصفاق من الكيتامين وزيلازين (60 ملغ / كغ و 5 ملغ / كغ على التوالي). موسع للحدقة (الأتروبين سلفات 1.0٪)، مخدر القرنية (proxymetacaine 0.5٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق ترطيب القرنية قطرات (كربومير البوليمر) العين على الفور إلى القرنية. تطبيق هلام العين في 20 دقيقة فترات للحفاظ على الماء القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم موضوع مرتبطة فضفاضة حول مقلة العين لمساعدة مستقرة تسجيلات أرج. مراقبة درجة الحرارة باستخدام مسبار المستقيم والحفاظ على درجة حرارة الجسم الحيوان في 37-37،5 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقف رئيس داخل المجال دمج فريق Ganzfeld. ملاحظة: فريق Ganzfeld هو التحفيز خفيفة للبرمجة بشكل كامل من شأنها أن توفر مضات مثقال ذرة موحدة من المصابيح للعين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل مخطط كهربية باستخدام 4 مم البلاتين الكهربائي حسب الطلب إيجابي لمس طفيفة القرنية و2 مم حج / أجكل بيليه القطب إدراجها في الفم. مرجع كل من الأقطاب الكهربائية إلى إبرة الفولاذ المقاوم للصدأإدراج تحت الجلد في الردف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إشارات سجل مع وضع الفرقة تمرير من 0.3-1،000 هرتز (-3 ديسيبل)، مع نسبة استحواذ 2 كيلو هرتز (الصكوك AD). بعد إنشاء تسجيل أرج مستقر موضوع الحيوان إلى التكيف مع الظلام 10 دقيقة قبل البدء في التسجيلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متابعة بروتوكول الفلاش كما هو موضح سابقا من قبل براندلي وستون 26. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برمجة مدة فلاش (كنا مضات 1-2 مللي ثانية في المدة)، ومجموعة شدته إلى -4.4 إلى 2.0 سجل الاسكتلندي cd.sm -2. استخدام مضات مشرقة (2.0 سجل الاسكتلندي cd.sm -2، 1 مللي ثانية) لقياس وظيفة الشبكية. في هذه الدراسة هو المقارنة بين السيطرة والإصابات الخفيفة وإصابة خفيفة مع RIP. </li></ol></li></ol></li></ol> 8. TUNEL الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الحيوانات عن طريق الحقن داخل الصفاق من جرعة زائدة من الفينوباربيتال (100 ملغ / كلغ). استأصل العينين وإصلاح في 4٪ امتصاص العرق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العينين في برنامج تلفزيوني قبل cyroprotectingعيون بين عشية وضحاها في السكروز 30٪ (ث / ت). تضمين عيون في أكتوبر مركب ومقطعة إلى 20 ميكرون أقسام السهمي باستخدام ناظم البرد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء فحص TUNEL على أقسام الشبكية مع تلوين دابي التالية بروتوكول Maslim وآخرون 27 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المجهر مضان لتهم TUNEL من شبكية العين. سجلت خلايا TUNEL من الطبقة النووية الخارجي (ONL)؛ الطبقة الخارجية للشبكية العين الذي يحتوي على نواة مبصرة. في هذه الدراسة، أدلى التهم TUNEL في ثلاث نسخ لكل عين، مع 5 لعيون كل مجموعة العلاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام في اتجاه واحد ANOVA لمجموعة إحصائية مقارنة يعني السيطرة والإصابات الخفيفة والخفيفة إصابة + RIP الفئران. </li></ol>

The author has nothing to disclose.

وكان المستحث القوارض أطرافهم هند نقص التروية بنجاح مع مقياس ضغط الدم اليدوي وكفة تقديم العصبية إلى خلايا مستقبلة للضوء في شبكية العين. وكان من النتائج متسقة مع تكييف الناجم عن نقص تروية حماية خلايا مستقبلة للضوء من الإصابة الخفيفة 9،28. أساسا، نقص تروية بعيد يسبب نقص الأكسجين وجيزة إلى الأنسجة. ومن هنا، شروط مسبقة الدماغية عن بعد لديه العديد من أوجه التشابه مع تكييف الدماغية أو تسميته بدلا من التسامح الدماغية، شروط مسبقة ميتة، وإلى حد ما، وممارسة اللاهوائية. الخلايا تستجيب للتحدي الدماغية عن طريق الإفراج عن مجموعة كبيرة ومتنوعة من البروتينات، نوكليوسد والنسخ العوامل التي تقدم إما العصبية مباشرة أو تؤثر على الخلايا لتصبح تسامحا من الإجهاد الأيضي لاحق 13. في الأدب، وشملت بروتوكولات نقص التروية بعد مجموعة من فترات والترددات. لدينا مختبر اختبرت 5، 10،و2 × 5 بروتوكولات دقيقة نقص التروية على وظيفة شبكية العين العادية 26. من هذه البروتوكولات 2 × 5 دقائق تنتج أكبر تغيير السعة أرج في الفئران العادية واختير لاختبار في نموذج من الإصابة الخفيفة. وقد تبين أيضا 5 دقائق الأحداث الدماغية قصيرة ومتكررة لتكون وقائية في السكتات الدماغية المتكررة في البشر والحد من حجم احتشاء في السكتة الدماغية التجريبية في الخنازير 17،22. ومع ذلك، فإن مدة أنسب من شروط مسبقة الدماغية ومن المرجح أن تعتمد على النموذج الحيواني المستخدمة. على سبيل المثال، فقد لوحظ انخفاض في حجم احتشاء ضد نقص التروية التنسيق في أطول 2 × 15 دقيقة و 3 × 15 بروتوكولات دقيقة، ولكن ليس في 3 × 5 بروتوكولات دقيقة في الفئران (15). الوقت بين الملكية الفكرية والإصابات الدماغية يحتاج أيضا إلى النظر فيها لالعصبية فعالة. وقد صنفت نافذتين الوقت لكارديوبروتيكتيون الناجمة عن IP. هذه هي &quot;تكييف الكلاسيكية&quot; نافذة، والذي يحدث 0-12 ساعة بعد IP و&quot;نافذة ثانية&quot;، والذي يحدث 3-4 أيام بعد IP 29. في نموذج السكتة الدماغية البؤري، تم العثور على RIP إلى حماية عند نقاط زمنية متعددة، بما في ذلك خارج النوافذ الكلاسيكية والثانية 15. ومع ذلك، فقد كان هناك عدد قليل من الدراسات التي قارنت بين فترات زمنية من العصبية في RIP والملكية الفكرية. وثمة اعتبار آخر لحماية نقص التروية عن بعد هو توقيت تكييف، بما في ذلك ما إذا كان يتم تطبيقه قبل الإصابة (شروط مسبقة) أو بعد إصابة (postconditioning). غالبية اختبار نقص التروية بعد استخدمت شروط مسبقة على الرغم من postconditioning بعد أن تم مؤخرا وجدت الدراسات إلى حماية كل من الخلايا العصبية في شبكية العين والمخ 30،31. وباختصار، فإن تحريض العصبية في هند أطرافهم تكييف الدماغية تقتصر على نموذج المرض، والأنواع الحيوانية، ومدة نقص التروية، وتوقيت نقص التروية. مراجعة من قبل Kaniora وآخرون. صrovides مزيد من التفاصيل حول العديد من بروتوكولات النائية نقص التروية، بما في ذلك الأنواع، بروتوكولات RIP، مواقع RIP، ونماذج الإصابة، نتائج الإصابة وآليات الحماية المقترحة 32. صفعة طفيفة التوغل على الأطراف الخلفية تسمح RIP في كلا مستيقظا وقدمت الحيوانات يتم الحفاظ على درجة حرارة الجسم. في التجريب تخدير، ويجب الحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان لمنع انخفاض حرارة الجسم. ورصد درجات الحرارة الداخلية تمنع الحيوان تمر انخفاض حرارة الجسم أو ارتفاع الحرارة. انخفاض حرارة الجسم وارتفاع الحرارة والمعروفة المحفزات تكييف قبل في كلا النموذجين السكتة الدماغية والإصابة الخفيفة 33-36. طريقة إن الرب قدم لا يمكن أن يؤديها في الحيوانات المستيقظة وبالتالي منع يفند درجة حرارة الجسم. التخدير قد يعرض مجموعة مختلفة من يفند في RIP التجريب. يمكن الأيزوفلورين المشاركة في حماية عضلة القلب من خلال افتتاح الفصل البوتاسيوم ATP تراعيannels، آلية وقائية مماثلة ذكرت في نقص تروية تكييف 37. على الرغم من أن حجم احتشاء في نماذج السكتة الدماغية لا تزال كبيرة في الحيوانات المعالجة الصورية نظرا الأيزوفلورين، الآلية الجزيئية الكامنة تكييف الدماغية بعيد قد يكون ملثمين من آثار التخدير. الكيتامين، وهو خصم NMDA، لديها العديد من آثار وقائية في الجسم الحي 38، بما في ذلك القدرة على منع التحفيز الزائدة في الخلايا العصبية، وتفعيل مسار mTOR س والافراج عن BDNF في المصل 39-41. تم الإبلاغ عن الكيتامين لتعزيز بقاء الخلايا العصبية التالية ارتجاج المخ في الإنسان والحد من إصابة خفيفة في المستقبلات الضوئية القوارض 42،43. والتحقيق في آلية تكييف الدماغية عن بعد مع الدم مستيقظا الضغط استكفاف تجنب يفند التخدير. يعتمد الفعال نقص التروية هند أطرافهم على موضع الصحيح من الكفة، اتساق ضغط الكفة وارتفاع ضغط الكفة فوق systoيسانس ضغط الدم كما رأينا في الشكل 1. A صفعة وضعت تحت &quot;الركبة&quot; لا يحمي خلايا مستقبلة للضوء من إصابة خفيفة على النحو المبين في خفض مخطط كهربية (أرج) سعة. الاختلاف في تكييف على أساس الموقف من صفعة هو الأرجح بسبب الاختلافات في كتلة العضلات وقربها من الشريان الفخذي. بالإضافة إلى ذلك، يجب أن الحيوانات تكون موحدة بالنسبة للعمر والوزن ودرجة حرارة الجسم والجنس. باختصار، نقص التروية عن بعد يمكن أن يتسبب بها غير الغازية كفة ضغط الدم، والذي يتجنب اصابة في العضلات ولديه المرونة للتجريب مستيقظا أو تخدير. شروط مسبقة الدماغية البعيد هو استراتيجية اعصاب الناشئة ويدخل هذا البروتوكول تمكين مزيد من الدراسات في آليات وتطبيقاته.

بقاء معظم، وربما كل شيء، الأنسجة في مواجهة الإجهاد الأيضي يمكن تحسين تكييف مسبق مع فترة من دون المميتة نقص التروية 1،2. شروط مسبقة الدماغية (IP) من الناحية العملية هو تعرض الأنسجة لنقص التروية دون المميت، قبل تجارب الأنسجة الضغوطات أشد، مثل إهانة الدماغية اللاحقة. في النماذج الحيوانية، IP يوفر الحماية لفتا إلى الدماغ، شبكية العين والقلب والرئتين 3-6. في المقابل، أظهرت الملاحظات في مرضى السكتة الدماغية وجود صلة بين هجمات نقص تروية عابرة السابقة وأفضل النتائج السريرية 7،8. كما يحمي خلايا مستقبلة للضوء في شبكية العين IP من إصابات غير الدماغية 9. فعالية IP في الأنسجة وإصابات متنوعة تشير إلى أنه تم تفعيل آلية الفطرية للبقاء الخلية موجود في جميع الأنسجة. وقد اقترح شروط مسبقة نقص تروية عضلة القلب أن يكون لها تأثيرات وقائية من خلال upregulationنقص الأكسجة عامل محرض (مؤسسة الحرمين)، المعروف لتنظيم العديد من المسارات الأيضية من خلال الافراج عن الأدينوزين أو من خلال فتح قنوات البوتاسيوم الميتوكوندريا ATP 10،11. وتورط قنوات الإفراج الأدينوزين ATP والبوتاسيوم في نقص التروية الدماغية ولكن، وقد تركزت التحقيقات في آليات اعصاب تكييف الدماغية حتى الآن على تعديلات لمكافحة التحفيز الزائدة، مسارات مكافحة أفكارك والمضادة للالتهابات 12،13. عموما، فهم العملية الجزيئية للتكييف الدماغية لحماية الخلايا العصبية محدودة. محاولات شروط مسبقة الدماغية عن بعد إلى حالة بعيدة الأجهزة الهامة خطيرة (القلب والدماغ والرئة) عن طريق توليد نقص التروية في أنسجة أقل أهمية. وقد تجلى شروط مسبقة الدماغية عن بعد (RIP) باستخدام أطرافهم هند أن تكون اعصاب في نماذج القوارض من السكتة الدماغية 14-17. الطريقة الموصوفة من قبلنا يوفر البروتوكول الاضافي بسيطة وموثوق بها وغير الغازيةocol لإحداث RIP. الغالبية العظمى من بروتوكولات RIP تنطوي على أطرافه الخلفية، ربما لأن الشريان الفخذي تقع في هند الطرف العلوي يمكن التعرف عليها بسهولة والوصول إليها للقط الجراحية وتطبيق العاصبة. في الطرف الغازية الدراسات الدماغية لدراسة المخ وحماية الجلد، والتي يسببها نقص التروية عن طريق الفصل بين الشريان الفخذي من أربطة الفخذ وتحامل على الشريان الفخذي 2،15،18. وقد تم تأكيد نقص التروية الناتج إما عن الطرف استكفاف أو الفخذ الشريان لقط بالتغيرات في أطرافهم بما في ذلك فقدان النبض، وانخفاض في الأوكسجين وانخفاض في درجة حرارة الجلد. ويمكن التأكد من نقص التروية بعيد عن فقدان النبض باستخدام الليزر أو الموجات فوق الصوتية دوبلر دوبلر 17-19. درجة حرارة الجلد يمكن أن تستخدم كبديل للدوبلر على الرغم من أن العلاقة غير الخطية 20،21. تسجيلات دقيقة لدرجات الحرارة شائعة في المختبرات ويمكنيسهل إدراجها في الدراسات الدماغية النائية. بديلا للجراحة الفخذ تحامل هو تحريض نقص التروية باستخدام وقف النزف. تطبيق وقف النزف ينتج نقص التروية مماثلة لتلك التي تحققت مع سفينة لقط. Kutchner وآخرون. مقارنة الشريان الفخذي الغازية لقط لوقف النزف غير الغازية وجدت أوقفت كلا أساليب تدفق الدم إلى الأطراف وتقليل الأضرار التي تلحق بالبشرة في نموذج الجراحة التجميلية من دحرج الجلد نقص التروية 18. وقد وجد استكفاف إما الساق أو الذراع ورفع ضغط الكفة إليها أعلاه ضغط الدم الانقباضي لأنه يحمي من الضرر نقص تروية في الخنازير والبشر 17،19،22. نهج وقف النزف مختلفة لحمل جهاز التحكم عن بعد تشمل الدماغية استخدام كفة ضغط الدم أو الفرقة 17،22،23 مرونة. ومع ذلك، فإن استخدام شريط مطاطي للحث على نقص التروية هو وسيلة غير آمنة، مما قد يؤدي إلى وجود كمية غير المنظم للضغط فيأطرافهم، مع ارتفاع الضغط فوق 500 مم زئبقي يجري تسجيلها في البشر 24. وعلاوة على ذلك، نقص تروية الأطراف باستخدام شريط مطاطي يؤدي إلى تلف العضلات في الفئران بعد إزالة الفرقة 23، وفقا لتقييم ايفانز الأزرق صبغ، علامة في الجسم الحي من ليف عضلي نفاذية 25. في المقابل، لا يمكن أن يتحقق تسليم الضغط التي تسيطر عليها لوقف النزف باستخدام كفة ضغط الدم متصلة 17،19،22،26 مقياس ضغط الدم. في هذه الدراسة، تم استخدام نموذج إصابة خفيفة من انحطاط مبصرة لإثبات فعالية اعصاب من شروط مسبقة الدماغية بعيد. وكان المستحث نقص التروية البعيد مباشرة قبل الإصابة الخفيفة، ومنعت لاحقا انحطاط مستقبلة للضوء في شبكية العين على نحو ما أكده اختبار وظيفة. فإن الفيديو المرافق لشرح تطبيق نقص التروية عن بعد غير الغازية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

نقص التروية دون المميت يحمي أنسجة ضد لاحق، نقص التروية أكثر شدة من خلال upregulation من الآليات المحلية في الأنسجة المتضررة. وقد تبين أيضا نقص التروية دون المميت لupregulate آليات الحماية في أنسجة بعيدة. A فترة وجيزة من نقص التروية (5-10 دقيقة) في أطرافهم هند من الثدييات يستحث استجابات الحماية الذاتية في الدماغ والرئة والقلب وشبكية العين. ومن المعروف أن مفعول شروط مسبقة الدماغية عن بعد (RIP). بل هو وسيلة واعدة علاجيا لحماية الأجهزة الحيوية في الجسم، وبالفعل قيد التجارب السريرية لإصابات القلب والدماغ. يوضح هذا المنشور أو أسلوب مينيملي رقابة من صنع أحد أطرافه - على وجه التحديد أطرافهم هند من الفئران - الدماغية. تم توصيل كفة ضغط الدم تطويرها للاستخدام في حديثي الولادة الإنسان مقياس ضغط الدم اليدوي واستخدام تطبيق الضغط 160 ملم زئبقي حول الجزء العلوي من أطرافه الخلفية. ويستخدم المسبار تهدف إلى الكشف عن درجة حرارة الجلد للتحقق من ischemiلذلك، من خلال تسجيل انخفاض في درجة حرارة الجلد الناجم عن انسداد الضغط الناجم عن الشرايين الساق، وارتفاع درجة الحرارة الذي يتبع الافراج عن صفعة. هذا الأسلوب من RIP يوفر الحماية لشبكية العين الفئران ضد مشرق الأضرار الناجمة عن الضوء وانحطاط.

A كفة ضغط الدم مرتفعة إلى فوق 160 مم زئبقي وقفها تدفق الدم إلى الأطراف الخلفية كما يظهر بوضوح في الشكل 1B. أدى عدم الأوكسجين الأنسجة في خفض درجة حرارة القدم الحيوان لبروتوكول نقص التروية ضخه (الشكل 2). كانت درجة الحرارة القدم (33 ° C) أقل من درجة الحرارة الأساسية وخفضت بشكل موثوق خلال ارتفاع ضغط الكفة (31 ° C) ارتفاع عندما بددت الكفة (32 ° C). وقد وزعت واحدة 1000 لوكس إصابة خفيفة إلى الخافتة التي أثيرت الجرذان البيضاء مع أو بدون شروط مسبقة الدماغية بعيد. وسجلت وظيفة الشبكية وتقييمها باستخدام مخطط كهربية (أرج). وأرج هو محصلة الاستجابات الكهربائية التي تنشأ من الخلايا العصبية الداخلية والخارجية للشبكية العين لتحفيز الضوء كما هو مبين في الشكل (3). والموجي أرج لديه ذروة السلبية المبكرة الناجمة عن phototransduction (الحد الأدنى حوالي 10 مللي ثانية بعد من lighتي فلاش) وصفه لموجة وذروة إيجابية كبيرة من داخل شبكية العين (الحد الأقصى حوالي 80 مللي ثانية بعد ضوء فلاش) وصفته ب الموجة. وأرج تكييفها داكنة من قاتمة العادي أثار أظهرت الفئران مبصرة كبير واستجابة شبكية العين الداخلية إلى مشرق 2.0 سجل cd.sm -2 فلاش (الشكل 3A). أسبوع واحد بعد الاصابة الخفيفة كان التسجيلات ERG انخفاض حاد في السعة بالنسبة لضوابط، مما يعكس فقدان خلايا مستقبلة للضوء. انظر الشكل 3B. شروط مسبقة أطرافهم الخلفية مع نقص التروية باستخدام بروتوكول ضخه من 2 × 5 دقائق مباشرة قبل التروية حماية خلايا مستقبلة للضوء من الإصابة الخفيفة. كانت سعة RIP أرج أكبر من الإصابة الخفيفة وحدها، مع انخفاض طفيف على الكرسي على الموجة (الشكل 3C). وأكد محطة deoxynucleotidyl ترانسفيراز dUTP نيك وسم نهاية (النفق) مقايسة على أقسام cryopreserved الشبكية والحد من الخلايا أفكارك في ضوء الحيوانات التالفة تلقي يختلط RIPative إلى الشام معاملة الحيوانات الإصابة الخفيفة (الشكل 4). تحريض نقص التروية إلى أطرافه الخلفية ويعتمد على موضع الصحيح من الكفة، كما رأينا في الشكل 1. A صفعة وضعت تحت &quot;الركبة&quot; لا يحمي خلايا مستقبلة للضوء من إصابة خفيفة على النحو المبين في تخفيض سعة أرج، انظر الشكل 3D. في الختام، عندما تدار بشكل صحيح وهند أطرافهم نقص التروية قادرة على حماية الخلايا العصبية للشبكية من الإصابة الخفيفة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52213/52213fig1highres.jpg" width="600" /> الشكل 1: وضع الكفة وتأثير ضغط الكفة فوق 160 مم زئبقي (A) ويبين أطرافهم هند والقدم قبل الكفة ارتفاع الضغط. (B) معارض القدم خلال ارتفاع ضغط الكفة فوق 160 مم زئبقي. علما أن موقف الكفة فوق &quot;ك<html> ني &quot;. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52213/52213fig1highres.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/52213/52213fig2highres.jpg" width="600" /> الشكل 2: يتم تخفيض درجة حرارة القدم خلال التضخم الكفة التضخم من صفعة على أطرافهم هند لمدة 2 × 5 دقائق عند 160 مم زئبق انخفاض درجة حرارة الجلد أثناء نقص التروية. (A) ويبين متوسط ​​مجموعة ل2 × 5 دقائق القدم RIP التغيرات في درجات الحرارة. (B) يدل على درجة حرارة القدم التمثيلية (° C) تتبع ل2 × 5 دقائق نقص التروية. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52213/52213fig2highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <html> 00 &quot;/&gt; الرقم 3: RIP يحفظ وظيفة شبكية العين كما هو موضح في أرج بالمقارنة مع الفئران الأضرار الخفيفة التعرض للضوء الساطع لمدة 24 ساعة الأضرار المستقبلات الضوئية في شبكية العين. وأرج يقيس صحة شبكية العين الداخلية والخارجية كرد فعل الكهربائية (microvolts [μV]) لتحفيز الضوء. واستجابة طبيعية الشبكية إلى 2.0 سجل cd.sm -2 التحفيز ضوء ينظر في (A). الضرر مبصرة من النتائج الضوء الساطع في ERG السعة الصغيرة (B). كان قادرا على إنقاذ خلايا مستقبلة للضوء بعد الاصابة الخفيفة (C) RIP. وضع الكفة غير صحيحة أثناء RIP لا يحمي خلايا مستقبلة للضوء من الاصابة (D). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52213/52213fig3highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 4highres.jpg &quot;العرض =&quot; 600 &quot;/&gt; الرقم 4: TUNEL + خلية التهم الموجهة إليه. رسم بياني شريط مقارنة نتيجة مجموعة لإصابة خفيفة، وإصابة + RIP إظهار انخفاض في موت الخلايا المبرمج مع RIP. TUNEL + خلية احصي عبر فترة كاملة من شبكية العين (8000 ميكرون). وكانت مجموعة من المتوسط ​​TUNEL + خلايا أقل للRIP الفئران المعالجة (210 ± 4.9، ن = 5) مقارنة الإصابة الخفيفة وحدها (255 ± 10، ن = 5)، p &lt;0.01، في اتجاه واحد ANOVA: أعلى اللوحة. كان شبكية العين التالفة (أي إصابة خفيفة) منخفضة جدا (3.0 ± 1.4، ن = 5) خلايا أفكارك. (A) صورة الممثل الضوء متفوقة أصيب شبكية العين. (B) صورة الممثل من أعلى RIP الضوء أصيب شبكية العين. (C) صورة الممثل من أدنى جرح ضوء شبكية العين. (D) صورة الممثل من أدنى RIP الضوء أصيب شبكية العين. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52213/52213fig4highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا</a>الشكل.

Watch this Scientific Journal Video about Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents at JoVE.com

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

شروط مسبقة الدماغية عن بعد (RIP) هي طريقة لأنسجة تكييف ضد الإجهاد الضار. أنشأنا وسيلة لنقص التروية عن بعد في أطرافهم الخلفية، من خلال تضخيم صفعة مقياس ضغط الدم لمدة 5-10 دقيقة. وقد أثبتت قدرات اعصاب من RIP في نموذج من تنكس الشبكية في القوارض.

أطرافهم بعد الدماغية شروط مسبقة: تقنية اعصاب في القوارض

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

remote-limb-ischemic-preconditioning-neuroprotective-technique

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

10.9K Views.  University of Sydney.  شروط مسبقة الدماغية عن بعد (RIP) هي طريقة لأنسجة تكييف ضد الإجهاد الضار. أنشأنا وسيلة لنقص التروية عن بعد في أطرافهم الخلفية، من خلال تضخيم صفعة مقياس ضغط الدم لمدة 5-10 دقيقة. وقد أثبتت قدرات اعصاب من RIP في نموذج من تنكس الشبكية في القوارض. 

Video: Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

نقل الجينات لقصور القلب الدماغية في نموذج ما قبل السريرية

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

أسلوب مبسط لإنتاج نموذج الجرح الدماغية

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

The lower urinary tract (LUT) functions as a dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a convenient time. While storing urine, however, the bladder is exposed for prolonged periods to waste products. By acting as a tight barrier, the epithelial lining of the LUT, the urothelium, avoids re-absorption of harmful substances. Moreover, noxious chemicals stimulate the bladder's nociceptive innervation and initiate voiding contractions that expel the bladder's contents. Interestingly, the bladder's sensitivity to noxious chemicals has been used successfully in clinical practice, by intravesically infusing the TRPV1 agonist capsaicin to treat neurogenic bladder overactivity1. This underscores the advantage of viewing the bladder as a chemosensory organ and prompts for further clinical research. However, ethical issues severely limit the possibilities to perform, in human subjects, the invasive measurements that are necessary to unravel the molecular bases of LUT clinical pharmacology. A way to overcome this limitation is the use of several animal models2. Here we describe the implementation of cystometry in mice and rats, a technique that allows measuring the intravesical pressure in conditions of controlled bladder perfusion.
	After laparotomy, a catheter is implanted in the bladder dome and tunneled subcutaneously to the interscapular region. Then the bladder can be filled at a controlled rate, while the urethra is left free for micturition. During the repetitive cycles of filling and voiding, intravesical pressure can be measured via the implanted catheter. As such, the pressure changes can be quantified and analyzed. Moreover, simultaneous measurement of the voided volume allows distinguishing voiding contractions from non-voiding contractions3.
	Importantly, due to the differences in micturition control between rodents and humans, cystometric measurements in these animals have only limited translational value4. Nevertheless, they are quite instrumental in the study of bladder pathophysiology and pharmacology in experimental pre-clinical settings. Recent research using this technique has revealed the key role of novel molecular players in the mechano- and chemo-sensory properties of the bladder.

Cystometry is an efficient technique to measure bladder function of small animals in vivo. The bladder is continuously infused at rates controlled through an intravesical catheter, whereas the urethra is left free for micturition. This allows for repetitive filling and emptying of the bladder, while intravesical pressure and voided volume are recorded.

استعمال قياس المثانة في القوارض الصغيرة: دراسة في Chemosensation المثانة

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

الثنائية انسداد الشريان السباتي المشترك باعتباره المحفز شروط مسبقة كافية للحث على التسامح الدماغية المبكرة إلى نقص التروية الدماغية البؤري

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

الأوعية الدموية في الرئة الجرذ الدماغية

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

أداء تحت الشبكية الحقن في القوارض لتسليم خلايا الظهارة الصبغية الشبكية في تعليق

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

A الخنزير الصغير نموذج من الأطفال حديثي الولادة نقص الأوكسجين، اعتلال الدماغ الإقفاري

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

مثلي هند الاطراف زرع في ماوس

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. It has become important to measure a person's activities in daily life, and not just measure their capacity for activity in the structured environment of a clinic or laboratory. A wearable sensor that is now enabling measurement of daily movement is the accelerometer. Accelerometers are commercially-available devices resembling large wrist watches that can be worn throughout the day. Data from accelerometers can quantify how the limbs are engaged to perform activities in peoples' homes and communities. This report describes a methodology to collect accelerometry data and turn it into clinically-relevant information. First, data are collected by having the participant wear two accelerometers (one on each wrist) for 24 h or longer. The accelerometry data are then downloaded and processed to produce four different variables that describe key aspects of upper limb activity in daily life: hours of use, use ratio, magnitude ratio, and the bilateral magnitude. Density plots can be constructed that visually represent the data from the 24 h wearing period. The variables and their resultant density plots are highly consistent in neurologically-intact, community-dwelling adults. This striking consistency makes them a useful tool for determining if upper limb daily performance is different from normal. This methodology is appropriate for research studies investigating upper limb dysfunction and interventions designed to improve upper limb performance in daily life in people with stroke and other patient populations. Because of its relative simplicity, it may not be long before it is also incorporated in clinical neurorehabilitation practice.

This protocol describes a method to quantify upper limb performance in daily life using wrist-worn accelerometers.

A طريقة لقياس أداء الطرف العلوي في الحياة اليومية عن طريق التسارع

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular disease is the development of ischemia. In severe cases, patients can develop critical limb ischemia in which they experience constant pain and an increased risk of limb amputation. Current therapies for peripheral ischemia include bypass surgery or percutaneous interventions such as angioplasty with stenting or atherectomy to restore blood flow. However, these treatments often fail to the continued progression of vascular disease or restenosis or are contraindicated due to the overall poor health of the patient. A promising potential approach to treat peripheral ischemia involves the induction of therapeutic neovascularization to allow the patient to develop collateral vasculature. This newly formed network alleviates peripheral ischemia by restoring perfusion to the affected area. The most frequently employed preclinical model for peripheral ischemia utilizes the creation of hind limb ischemia in healthy rabbits through femoral artery ligation. In the past, however, there has been a strong disconnect between the success of preclinical studies and the failure of clinical trials regarding treatments for peripheral ischemia. Healthy animals typically have robust vascular regeneration in response to surgically induced ischemia, in contrast to the reduced vascularity and regeneration in patients with chronic peripheral ischemia. Here, we describe an optimized animal model for peripheral ischemia in rabbits that includes hyperlipidemia and diabetes. This model has reduced collateral formation and blood pressure recovery in comparison to a model with a higher cholesterol diet. Thus, the model may provide better correlation with human patients with compromised angiogenesis from the common co-morbidities that accompany peripheral vascular disease.

We describe a surgical procedure used to induce peripheral ischemia in rabbits with hyperlipidemia and diabetes. This surgery acts as a preclinical model for conditions experienced in peripheral artery disease in patients. Angiography is also described as a means to measure the extent of introduced ischemia and recovery of perfusion.

نموذج قبل السريرية من نقص التروية الأطراف هند في الأرانب السكري

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...