لا يمكن للأبحاث تم الانتهاء من دون التفاني والجهود التي تبذلها العديد من الأشخاص في الزراعة والأغذية الزراعية ومركز بحوث كندا ، ليثبريدج ، ألبرتا ، كندا. في هذا الصدد ، ونحن نشكر : تارا لشيلتون قبل والرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية للحيوانات ، وإعداد الجراحية ، والتخدير ، وتحليل العينات ، والمساعدة في تصوير الفيديو ، راندي وايلد وكوستا استيلا للحصول على الرعاية قبل وبعد العملية ؛ جيني Gusse لتحليل العينات ؛ بايرون لي مبزل للصورة ، وبريان لتربية الأغنام Egland. ونحن نشكر أيضا برنت Selinger (قسم العلوم البيولوجية في جامعة ليثبريدج) لتوفير معدات الفيديو والمشورة ، فضلا عن المساعدات الأخرى (أي الإنتاج التنفيذية) ، والمناهج إعادة تطوير المركز. جامعة ليثبريدج للخبرة بالفيديو وأيد هذه الدراسة في جزء من المنح المقدمة من الأطعمة والمواد المتقدمة الشبكة (GDI) ، وصناعة لحوم البقر الكندية ألبرتا صندوق التنمية (GDI) ، والزراعة والأغذية الزراعية كندا (GDI وJPK).

تجريبية الإجراء : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جميع الصكوك وتعقيمها ، ويتم تعقيم غير autoclaveable المواد في محلول التعقيم Germex البرد لمدة لا تقل عن 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخرفان قبل العلاج مع آسيبرومازين (0.05 ملغ / كلغ) ، غليكوبيرولات (0.005 ملغ / كلغ) ، وطرطرات بوتورفانول (0.2 ملغ / كلغ) الدردشة ، وتترك لمدة 15-20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وحلق العنق والجلد تنظيفها جراحيا. مرة واحدة في الوريد الوداجي هو تصور ، يتم حقن 0.1 مل من الليدوكائين SC عبر الوريد ، هو عرض القسطرة في الوريد والمضمون على الجلد باستخدام الاسمنت بطاقة تعريف الثروة الحيوانية و 2 الشريط المستشفى &quot;. وخلال الجراحة ، وتعطى للحيوانات 10 مل / كغ / ساعة من Plasmalyte 148 (بواسطة تدفق الجاذبية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يدار الديازيبام (0.2 ملغ / كلغ) رابعا ، والناجمة عن التخدير مع ثيوبنتال الصوديوم (10 ملغ / كلغ). يتم تطبيق يدوكائين رذاذ القصبة الهوائية إلى الطيات الصوتية ، وintubated الغنم ، وحافظت على isoflurane (1،5-2،5 ٪ في 100 2 O ٪ بمعدل 4 لتر ​​/ دقيقة) لمدة الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوضع الحيوان في الاستلقاء على ظهري حصيرة تسخينها إلى درجة حرارة الجسم يساعد في الحفاظ على أثناء الجراحة. يتم إدخال أنبوب المعدة إلى الكرش لمنع تطبل المفرطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وحلق البطن بطني ، وهي على استعداد لاجراء جراحة الجلد مع الدعك three Prepodyne الجراحية. البطن ومن ثم رايات ، وضمان أن التعرض المناسب للموقع الجراحي (السرة في البطن الذيلية) هو الحفاظ عليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إجراء شق خط الوسط 15-20 سم باستخدام electroscapel ، caudally من السرة ، ويقع اللفائفية أضعاف في الربع السفلي الأيمن من البطن. وexteriorized ثم الدقاق الذيلية والأعور. طوال هذا الإجراء ، يتم تصغير التعامل مع الأمعاء ، والحرص على ضمان أن يظل في الأمعاء exteriorized رطبة مع الدافئة (37-39 درجة مئوية) الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (PBS ؛ 7.2 درجة الحموضة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويقاس على قطعة الطول 85 من الدقاق (أي &quot;الجزء المعوية&#39;) ومن ثم فرضت بالملقط العميد (المشابك المعوية) وكبيرة ملقط كيلي في كل نهاية الجزء. في إطار الجزء المعوية ، سيتم إنشاء &#39;حلقات&#39; و &#39;interspaces&quot; بين الحلقات. توضع على ملقط عميد جانب الدقاق أن ينضم (مفاغرة) ، ويتم وضع ملقط كيلي على الجانب قطعة من الأمعاء الدقاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو قطع الدقاق عميد بين كل forcep وكيلي ويتم مسح الجزء بلطف المعوية المخصصة لحلقات مرتين مع 60 مل من برنامج تلفزيوني الدافئ لإزالة مأكولات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ووزع مزيج من المضادات الحيوية واسعة الطيف (200 ملغ و 250 enrofloxacin ميترونيدازول ملغ في برنامج تلفزيوني الدافئة ، و 60 مل الحجم الكلي) في جميع أنحاء الجزء المعوية وتترك لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وانضم نهايات قطع القريبة والبعيدة من اللفائفي (باستثناء الجزء المعوية) لتشكيل الجهاز الوظيفي المستمر والمعوية. الأول ، هو الانحياز الدقاق بواسطة الغرز مدة يومين ، وضعت على الحدود والمساريقي مقابل المساريق للأمعاء ، على التوالي. ثم ، يتم الانتهاء من خياطة بسيطة نمط مستمر (2-0 Vicryl) على كلا الجانبين من الأمعاء للانضمام الى الامعاء معا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم حقن PBS دافئة (3-5 مل) في موقع مفاغرة للتحقق من عدم التسرب وخياطة. إذن ، هو الضغط على طرف forcep كيلي ضد السطح مصلوي للأمعاء ، على مقربة من موقع لموقع مفاغرة ، والداخل في موقع متقدم لضمان مفاغرة تجويف الأمعاء كبير وبراءات الاختراع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة كوكتيل من المضادات الحيوية الجزء المعوية. تم إغلاق كل نهاية الجزء مع وجود نمط مستمر خياطة بسيطة (الدرز امتصاص ؛ Vicryl 2-0) ، يليه نمط خياطة عكس باستخدام Vicryl 2-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تقسيم ال 85 سم طويلة الجزء الأمعاء إلى &quot;حلقات&quot; 15 سم ثلاثة ، اثنان 15 سم طويلة &#39;interspaces&quot; بين الحلقات ، واثنين من 5 سم طويلة حادة في نهاية مقصورات في مصطلحات الجزء المعوية (الشكل 1) . يتم إنشاء حلقات من خلال وضع رباط حول الأمعاء باستخدام 2-0 الحرير. من الجدير بالذكر أنه لا ligated الأوعية المساريقي الرئيسية خلال هذا الإجراء ، كما هناك حاجة لتزويد هذه الأمعاء مع الدم ، والحفاظ على سلامة الأمعاء. أيضا ، يتم ترك الحروف المركبة طويلة ، حيث سيتم استخدامها لتأمين القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تحديدها بشكل فردي القسطرة (أي أنابيب silastic) باستخدام علامة دائمة. يتم وضع الكرة السيليكون (5 ملم القطر) تطويق القسطرة ، 4-5 سم من نهاية القسطرة للمساعدة على منع القسطرة من الانزلاق خارج الأمعاء (الشكل 1). بعد التعقيم التعقيم ، يتم إدراج جو معقم و مطهر مرهم مضاد حيوي غير (Orbeseal) في نهاية القسطرة (3-5 ملم) ، وهذا يضمن أن تبقى القسطرة البراءة (أي أنها لا تصبح موصولة بواسطة الغشاء المخاطي تنفصل داخل حلقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع شق صغير في الجمجمة الجانب كل من الحلقات الثلاث. هو كل ثقب موسع مع introducer القسطرة (&#39;موسع السفينة&quot; أي) ، ويتم إدراج شريحة الطول 6-8 في القسطرة في caudallyالحلقة ، حتى الكرة silcone يمر في تجويف (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تأمين جدار الأمعاء حول القسطرة مع محفظة درز السلسلة (2-0 Vicryl). يتم تأمين مزيد من القسطرة إلى الأمعاء من خلال ربط القسطرة مع ربطة الحرير التي رسمت نهاية الجمجمة من الحلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحقن كل حلقة وفرجة بين شيئين ، ويوضع في الأمعاء مرة أخرى في التجويف البطني ؛ الأمبيسيلين (100 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني الحارة 5 مل). يحقن في التجويف البريتوني عن طريق شق البطن ؛ سيفازولين (100 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني الدافئة 8 مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إجراء شق واحد طعنة الصغيرة من خلال جدار البطن المتاخمة للشق خط الوسط ، وexteriorized والقسطرة من خلال هذا الموقع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم ضبط الموقف والتوتر من القسطرة داخل التجويف البريتوني. يتم إغلاق عضلات البطن مع نمط بسيط خياطة توقف (الدرز امتصاص ؛ الوتر # 3) ، ويتم إغلاق الجلد مع نمط مقاطعة فراش الأفقي (غير قابل للامتصاص خياطة ؛ Supramid # 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إدخاله تحت الجلد بالقرب من شق البطن ، وعبر نفق تحت الجلد إلى موقع خروج الذيلية فقط في الرقبة والكتفين وبين المنحني جوفاء أنبوب الفولاذ المقاوم للصدأ (65 سم في الطول 7 ملم معرف ؛ ؛ 10 مم OD). تندس في أنبوب القسطرة ودفع ما لا يقل عن 50 ٪ من طول الأنبوب. ثم يتم سحب الأنبوب مع القسطرة من الجلد في موقع الخروج ، وتعريض القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم ضبط التوتر من القسطرة طعنة في موقع شق ، ويتم إغلاق الجلد مع Supramid # 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم تحديد القسطرة الفردية ووضعها ضمن &quot;الحقيبة&quot; الضمادة التي تخاط على الجلد مع Supramid # 1. الحقيبة القسطرة يحمي من الضرر اللاحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد العملية ، يتم حقن العضل الغنم مع فلونيكسين (SID) على الجرعة الأولي 2.2 ملغ / كلغ ، تليها جرعة صيانة SID ملغم / كغم من 1.1 لمدة 3 أيام. الغنم أيضا يتم حقن العضل مع Hemostam (3 مل) ، وenrofloxacin (2.5 ملغ / كلغ) SID عن 3 و 5 أيام على التوالي. تتم المحافظة على الحيوانات في الوريد Plasmalyte 148 مع الحل دكستروز 5 ٪ ، وتدار بشكل مستمر مع مضخة تمعجية لضمان تدفق (145 مل / ساعة) يستمر بغض النظر عن وضع الجسم. ما سمح لهم شرب الإعلانية بالمال وبالشهرة أيضا ، ولكن يقتصر تغذية حتى تتم استعادة وظائف عادية والكرش الامعاء. وتراقب عن كثب تناول الطعام واستهلاك المياه ، ودرجة حرارة الجسم ، مرور البراز والبول ، أصواتا الأمعاء ، ألم في البطن ، ومظهر ، وتركيزات غلوكوز الدم (محاولة) ؛ عند الضرورة ، ويتم ضبط تركيز السكر في السوائل في الوريد للحفاظ على تركيز السكر في الدم ضمن المعدل الطبيعي. كيمياء الدم وأمراض الدم (أي الزلال ، الفوسفاتيز القلوية ، ألانين ، الأميليز ناقلة أمين والكالسيوم والكوليسترول ، والكرياتينين ، والسكر والفوسفات غير العضوية ، والبيليروبين الكلي والبروتين الكلي واليوريا والجلوبيولين والصوديوم والبوتاسيوم والكلوريد وضغط الأكسجين الجزئي ، ودرجة الحموضة وجزئية يتم مراقبة ضغط ثاني أكسيد الكربون ، بيكربونات ، ومجموع ثاني أكسيد الكربون ، الحمراء وكريات الدم البيضاء ، الهيماتوكريت ، الهيموغلوبين ، الفرق عدد خلايا الدم البيضاء والصفائح الدموية) قبل وبعد عملية جراحية على الفور ، وبعد ذلك كل يوم. مرة واحدة وظيفة الامعاء طبيعية تبدأ ، يتم إنهاء العلاج عن طريق الوريد ويتم نقل السائل الحيوانات إلى المرعى (أي 5-7 أيام بعد الجراحة). تتم المحافظة على الحيوانات في حظائر الفردية (على مرمى البصر من الحيوانات الأخرى) ، مما يقلل من التوتر وفرصة للاستمرار الأضرار التي لحقت بهم الحقائب القسطرة (على سبيل المثال عن طريق المضغ penmate). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحقن العلاج في الحلقات الفردية ، يتم حقن 5 مل من العلاج في القسطرة باستخدام المحاقن المعقمة مزودة عيار 18 ، كليلة العضوية الإبرة. لضمان ترسب كل معاملة في حلقة ، ثم يتم حقن القسطرة مع 3 مل من برنامج تلفزيوني. </li></ol> الحرجة النقاط : إجراءات ذات أهمية حاسمة بالنسبة لنجاح هذه العملية الجراحية ما يلي : (1) التحقق من أن لا التواء الأمعاء على نفسها قبل تأسيس مفاغرة ، (2) ضمان سلامة والمباح من مفاغرة ؛ (3) تأمين كاف لقسطرة الجدار حلقة مع ربطة ترسم نهاية الجمجمة من الحلقة ، ولكن التأكد من أن المرفق لا يؤثر على سالكية من القسطرة ، (4) التقليل من التعامل مع الأمعاء ، وضمان أن يتم الاحتفاظ الأمعاء exteriorized رطبة ، (5) ضمان القسطرة المناسبة التوتر ؛ (6) ضمان أن لا يتأثر على سلامة العضلات والقسطرة خلال خياطة الجلد ؛ (7) منع من قبل التهام خروف بعد الجراحة (أي خلال فترة ما بعد الجراحة علوص) التي يمكن أن تسبب انحشار الكرش والإضرار الكرش وظيفة ، و (8) ضمان أن الحيوانات تلقي العلاج الكافي السوائل في الوريد في الأيام الأولى التي أعقبت 3-5 الجراحة ، وتتم مراقبتها بعناية وتركيز السكر في الدم ، وتركيز السكر في السوائل الوريدية وadjusتيد اذا لزم الامر لمنع نقص السكر في الدم. <img src="/files/ftp_upload/1301/1301fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. تمثيل التخطيطي حلقات اللفائفية مقسطر. علما الثلاثة 15 سم طويلة مقسطر &quot;حلقات&quot; ، وهما 15 سم لمدة غير مقسطر &#39;interspaces&quot; القائم بين الحلقات ، واثنين من 5 شرائح محطة الطول الطويل ، التي أنشئت داخل كل قطعة سم طويلة &#39;المعوية 85 &#39;لالدقاق الأغنام.

<ol>
	<li>Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Clostridium+perfringens+beta-toxin+on+the+rabbit+small+intestine+and+colon.">Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon.</a> Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).</li><li>Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+molecular+characterization+of+Salmonella+typhimurium+infection+in+neonatal+calves.">Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves.</a> Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).</li><li>Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+enterica+serovar-host+specificity+does+not+correlate+with+the+magnitude+of+intestinal+invasion+in+sheep.">Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep.</a> Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).</li><li>Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).</li><li>Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+growth+and+differentiation+of+b+cells+isolated+from+follicles+from+ileal+Peyer's+patch+of+sheep.">An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep.</a> Immunology. 75, 601-607 (1992).</li><li>Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agents+that+activate+protein+kinase+C+resue+sheep+ileal+Peyer's+patch+B+cells+from+apoptosis.">Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis.</a> Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).</li></ol>

وقد وافق جميع الإجراءات على الحيوانات التجريبية لجنة رعاية الحيوان المؤسسية (الحيوان استخدام بروتوكول # 0609) وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعها المجلس الكندي لرعاية الحيوان. ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

في هذا الإجراء ، كنا قادرين على وضع القسطرة بنجاح في الحلقات التي أنشئت داخل الأمعاء الدقاق من الأغنام. من خلال الالتزام الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية صرامة ، والحيوانات تعافى سريعا من إجراءات واستأنف نشاطه المعتاد 5-7 أيام بعد الجراحة. عقدنا العزم على أن إنشاء القسطرة داخل الحلقات لا يؤثر على وظيفة الغشاء المخاطي في الأمعاء أو المناعي (لا تظهر البيانات) والحيوانات يمكن أن يعيش لمدة لا تقل عن 8 أسبوع بعد الجراحة. هذا الإجراء يسمح لنا أن نقدم علاجات مناعية متعددة في حجرات منفصلة على مدى فترة زمنية ممتدة ، مرة واحدة الحيوانات قد تعافى من الجراحة ، وتجريبيا لقياس التأثيرات الفسيولوجية والمناعية من هذه العلاجات. وهناك اعتبار مهم للتجارب في المستقبل هو موقع للجزء الأمعاء داخل الأمعاء الدقيقة. في هذا الإجراء أنشأنا جراحيا الجزء الأمعاء داخل &#39;مناعيا الدقاق وظيفية&quot; في كثير من الأحيان على النحو الذي حددته لفائفي بقع باير (مستمر) (5،6). ويمكن تمديد هذا المجال cranially لتصل إلى 2 متر وراء اللفائفية أضعاف. على الرغم من أن هذه المنطقة تعتبر تشريحيا والصائم ، في سياق وظيفة مناعية ، هو الدقاق ، مسلطا الضوء على أهمية النظر في وظيفة عند وصف المناطق المعوية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> الفئة / البند رقم </td><td> شركة </td><td> كتالوج </td></tr><tr><td colspan="3"> جراح وازم </td></tr><tr><td> القفازات الجراحية </td><td> WDDC a </td><td> 103091 </td></tr><tr><td> قناع جراحي </td><td> WDDC </td><td> MAX53013 </td></tr><tr><td> ثوب الجراحية </td><td> ب CDMV </td><td> 3365 </td></tr><tr><td> OB المئزر </td><td> WDDC </td><td> 900062 </td></tr><tr><td> الجراحية كاب </td><td> WDDC </td><td> 903271 </td></tr><tr><td> EZ فرك الفرشاة </td><td> WDDC </td><td> BDC377479 </td></tr><tr><td colspan="3"> التخدير والمخدرات </td></tr><tr><td> مخدر الآلة </td><td> بويل </td><td> </td></tr><tr><td> Sodasorb </td><td> WDDC </td><td> 108638 </td></tr><tr><td> منظار الحنجرة </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td> شفرة المنظار (ميلر شفرة # 4) </td><td> WDDC </td><td> 902667 </td></tr><tr><td> أنبوب القصبة الهوائية (7،0-8،5 ملم) </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td> يدوكائين رذاذ الرغامي </td><td> WDDC </td><td> 103364 </td></tr><tr><td> آسيبرومازين </td><td> WDDC </td><td> AUS01020 </td></tr><tr><td> غليكوبيرولات </td><td> WDDC </td><td> SAB2880 </td></tr><tr><td> بوتورفانول طرطرات </td><td> WDDC </td><td> AYE304541 </td></tr><tr><td> ديازيبام </td><td> WDDC </td><td> sab790 </td></tr><tr><td> ثيوبنتال الصوديوم </td><td> WDDC </td><td> 103508 </td></tr><tr><td> هيدروكلوريد الإيبينيفرين </td><td> WDDC </td><td> 103856 </td></tr><tr><td> دوكسابرام </td><td> ستراثكونا الصيدلة </td><td> </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> WDDC </td><td> 100339 </td></tr><tr><td> Hemostam </td><td> WDDC </td><td> 103857 </td></tr><tr><td> فلونيكسين </td><td> WDDC </td><td> sch140100 </td></tr><tr><td> Enrofloxacin </td><td> WDDC </td><td> hll0049 </td></tr><tr><td> ميترونيدازول </td><td> WDDC </td><td> 101653 </td></tr><tr><td> أمبيسيلين </td><td> WDDC </td><td> NOV67185 - 6 </td></tr><tr><td> سيفازولين </td><td> WDDC </td><td> nov69397 </td></tr><tr><td colspan="3"> الجراحية والمعدات واللوازم </td></tr><tr><td> Electroscapel </td><td> ماكان </td><td> MV8 </td></tr><tr><td> التدفئة حصيرة </td><td> كين </td><td> PHMD - 48 </td></tr><tr><td> أنبوب المعدة (Nalgene أنابيب 5 / 16 &quot;ID) </td><td> فيشر العلمية </td><td> </td></tr><tr><td> إبرة سائق </td><td> WDDC </td><td> 108338 </td></tr><tr><td> أديسون البني forcep </td><td> WDDC </td><td> 911075 </td></tr><tr><td> الفئران الأسنان forcep </td><td> CDMV </td><td> 5275 </td></tr><tr><td> كيلي forcep </td><td> WDDC </td><td> 901133 </td></tr><tr><td> البعوض مرقئ </td><td> WDDC </td><td> 108471 </td></tr><tr><td> Carmalt forcep </td><td> WDDC </td><td> 901225 </td></tr><tr><td> مشرط مقبض </td><td> WDDC </td><td> 900285 </td></tr><tr><td> مشرط شفرة # 22 </td><td> WDDC </td><td> 900511 </td></tr><tr><td> Metzenbaum مقص </td><td> WDDC </td><td> 901166 </td></tr><tr><td> مقص حاد حاد </td><td> WDDC </td><td> 108264 </td></tr><tr><td> منشفة المشبك </td><td> WDDC </td><td> 901213 </td></tr><tr><td> أليس الأنسجة forcep </td><td> WDDC </td><td> 901201 </td></tr><tr><td> عميد لforcep </td><td> WDDC </td><td> 904226 </td></tr><tr><td> الفولاذ المقاوم للصدأ وعاء </td><td> WDDC </td><td> 903601 </td></tr><tr><td> الفولاذ المقاوم للصدأ مبزل (المنحني) </td><td> المورد المحلي </td><td> </td></tr><tr><td> القسطرة introducer </td><td> WDDC </td><td> 11440 </td></tr><tr><td> منشفة الجراحية </td><td> CDMV </td><td> 7972 </td></tr><tr><td> المتاح ثنى </td><td> WDDC </td><td> 900035 </td></tr><tr><td> Steri ثنى </td><td> CDMV </td><td> 2323 </td></tr><tr><td> ثنى (40 × 40 سم) </td><td> CDMV </td><td> 8358 </td></tr><tr><td> الجراحية ثنى (7 &quot;س 11&quot; الافتتاحية) </td><td> CDMV </td><td> 2694 </td></tr><tr><td> Vicryl (2-0) </td><td> WDDC </td><td> JJMJ333H </td></tr><tr><td> الحرير 2-0 </td><td> WDDC </td><td> 105248 </td></tr><tr><td> كرومي # 3 </td><td> WDDC </td><td> CSL547 - 2070 </td></tr><tr><td> Supramid # 1 </td><td> WDDC </td><td> CSL547 - 3040 </td></tr><tr><td> الإبر (القطع وعدم قطع) </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td colspan="3"> القسطرة </td></tr><tr><td> Silastic أنابيب (0.040 &quot;معرف ، 0.085&quot; OD) </td><td> فيشر العلمية </td><td> 11-189 - 15D </td></tr><tr><td> Orbeseal مرهم </td><td> WDDC </td><td> 106344 </td></tr><tr><td> السيليكون واضحة (732 تسرب متعددة الأغراض) </td><td> المورد المحلي </td><td> </td></tr><tr><td> كليلة نهاية الإبرة </td><td> WDDC </td><td> 905035 </td></tr><tr><td> علامة (صناعي دائم) </td><td> المورد المحلي </td><td> </td></tr><tr><td> الحقيبة القسطرة (مصنوعة من الطول 7.5 Elastoplast) </td><td> WDDC </td><td> 104094 </td></tr><tr><td colspan="3"> الضمادات </td></tr><tr><td> مستشفى الشريط (2 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> 103842 </td></tr><tr><td> مستشفى الشريط (1 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> VLMRENF20 </td></tr><tr><td> الشاش الإسفنج 4X4 </td><td> WDDC </td><td> 107551 </td></tr><tr><td> الشاش تتشبث </td><td> WDDC </td><td> 107633 </td></tr><tr><td> Elastoplast 7.5cm </td><td> WDDC </td><td> 104094 </td></tr><tr><td> Elastoplast ضمادة rippable </td><td> WDDC </td><td> 104093 </td></tr><tr><td colspan="3"> نيedles والمحاقن </td></tr><tr><td> محقنة (60 مل) </td><td> WDDC </td><td> 104004 </td></tr><tr><td> محقنة (10 مل) </td><td> WDDC </td><td> bdc301604 </td></tr><tr><td> 25G إبرة </td><td> WDDC </td><td> BDC305122 </td></tr><tr><td> 20G إبرة </td><td> WDDC </td><td> BDC305175 </td></tr><tr><td> 18G إبرة </td><td> WDDC </td><td> 903353 </td></tr><tr><td colspan="3"> في الوريد </td></tr><tr><td> Intracath الرابع قسطرة (16G 8 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> bdc3831621 </td></tr><tr><td> رابعا ادارة مجموعة (10 قطرة) </td><td> WDDC </td><td> 101797 </td></tr><tr><td> 0.9 ٪ كلوريد الصوديوم الحل </td><td> WDDC </td><td> BAXJB1322P </td></tr><tr><td> حل Plasmalyte 148 </td><td> WDDC </td><td> BAXJB2534 </td></tr><tr><td> سكر العنب </td><td> WDDC </td><td> MCT60190 </td></tr><tr><td> مضخة تمعجية </td><td> كول Parmer </td><td> 7524-10 </td></tr><tr><td> الماشية الاسمنت تحديد سمة </td><td> المورد المحلي </td><td> </td></tr><tr><td colspan="3"> Sanatizers / المطهرات </td></tr><tr><td> Germex الحل </td><td> WDDC </td><td> mtc60270 </td></tr><tr><td> ايزوبروبيل </td><td> WDDC </td><td> 104590 </td></tr><tr><td> Stanhexidine المطهر </td><td> WDDC </td><td> 109248 </td></tr><tr><td> Prepodyne الحل </td><td> WDDC </td><td> 105710 </td></tr><tr><td> Prepodyne فرك </td><td> WDDC </td><td> 105711 </td></tr></table> توزيع المخدرات في الغرب مركز المحدودة ، ادمونتون ، AB. (ب) توزيع الأدوية البيطرية مركز شركة ، وسانت هياسنت ، QE.

catheterization of intestinal loops in ruminants

الأمعاء هي بنية معقدة وتشارك ليس فقط في امتصاص العناصر الغذائية ، ولكن أيضا يعمل كحاجز بين الفرد والعالم الخارجي. على هذا النحو ، والأمعاء تلعب دورا محوريا في الترصد المناعي والحماية من الجراثيم المعوية. التحقيق في علم وظائف الأعضاء وعلم المناعة المعوية توظف عادة &#39;حلقات المعوية&quot; كنموذج تجريبي. غالبية هذه النماذج ليست حلقة استرداد العمليات الجراحية تلك الدراسة على المدى القصير (&lt;24 ساعة) التغيرات في الأمعاء (1-3). أنشأنا سابقا نموذج استرداد حلقة المعوية على وجه التحديد لقياس طويلة الأجل (&lt;6 مو) التغيرات المناعية في الأمعاء بعد التعرض الأغنام إلى اللقاحات ، المواد المساعدة ، والفيروسات (4). علاجات موضعية هذا الإجراء إلى &quot;حلقة&quot; محددة ، مما يسمح لنا لأخذ عينات من هذه المنطقة من الأمعاء. وعيب كبير من هذا الأسلوب هو نافذة واحدة من الفرص لإدارة العلاج (أي في وقت الجراحة). وعلاوة على ذلك ، لا يمكن إلا عينات من الغشاء المخاطي في الأمعاء ومحتويات كل من اللمعية تؤخذ عند انتهاء المشروع. القيود البارزة الأخرى في النموذج أعلاه هي أن التلاعب الجراحية المطلوبة وبعد العملية الجراحية التدابير (مثل المضادات الحيوية وإدارة المسكنات) يمكن أن تؤثر بشكل مباشر على العلاج نفسه و / أو تغيير وظيفة المناعة ، وبالتالي النتائج الملتبسة. ولذلك ، فإننا تعديل نموذجنا حلقة المعوية عن طريق إدخال القسطرة على المدى الطويل في الحلقات. الأغنام يشفون تماما من هذا الإجراء ، والتي لم تتأثر exteriorized القسطرة. خصوصا ، وإنشاء القسطرة في الحلقات تسمح لنا أن نقدم علاجات متعددة خلال فترة زمنية ممتدة ، وبعد الشفاء من الجراحة وإزالة المخدرات تدار أثناء الجراحة وفترة ما بعد الجراحة.

Watch this Scientific Journal Video about Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants at JoVE.com

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

نحن تصف أسلوب الرواية القسطرة الجراحية ل&#39;حلقات المعوية&quot; ضمن الدقاق من الأغنام. مرة واحدة الحيوانات قد تعافى من الجراحة والمضادات الحيوية ومسحت المسكنات ، ويمكن ان تودع مباشرة في معالجات متعددة الحلقات عن طريق القسطرة.

قسطرة من حلقات المعوية في المجترات

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

catheterization-of-intestinal-loops-in-ruminants

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

13.6K Views.  University of Alberta. نحن تصف أسلوب الرواية القسطرة الجراحية ل'حلقات المعوية" ضمن الدقاق من الأغنام. مرة واحدة الحيوانات قد تعافى من الجراحة والمضادات الحيوية ومسحت المسكنات ، ويمكن ان تودع مباشرة في معالجات متعددة الحلقات عن طريق القسطرة.

Video: Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD). Both UC and CD, when present in the colon, generate a similar symptom profile which can include diarrhea, rectal bleeding, abdominal pain, and weight loss.1 Although the pathogenesis of IBD remains unknown, it is described as a multifactorial disease that involves both genetic and environmental components.2
There are numerous and variable animal models of colonic inflammation that resemble several features of IBD. Animal models of colitis range from those arising spontaneously in susceptible strains of certain species to those requiring administration of specific concentrations of colitis-inducing chemicals, such as dextran sulphate sodium (DSS). Chemical-induced models of gut inflammation are the most commonly used and best described models of IBD. Administration of DSS in drinking water produces acute or chronic colitis depending on the administration protocol.3 Animals given DSS exhibit weight loss and signs of loose stool or diarrhea, sometimes with evidence of rectal bleeding.4,5 Here, we describe the methods by which colitis development and the resulting inflammatory response can be characterized following administration of DSS. These methods include histological analysis of hematoxylin/eosin stained colon sections, measurement of pro-inflammatory cytokines, and determination of myeloperoxidase (MPO) activity, which can be used as a surrogate marker of inflammation.6
The extent of the inflammatory response in disease state can be assessed by the presence of clinical symptoms or by alteration in histology in mucosal tissue. Colonic histological damage is assessed by using a scoring system that considers loss of crypt architecture, inflammatory cell infiltration, muscle thickening, goblet cell depletion, and crypt abscess.7 Quantitatively, levels of pro-inflammatory cytokines with acute inflammatory properties, such as interleukin (IL)-1&beta;, IL-6 and tumour necrosis factor (TNF)-&alpha;,can be determined using conventional ELISA methods. In addition, MPO activity can be measured using a colorimetric assay and used as an index of inflammation.8
In experimental colitis, disease severity is often correlated with an increase in MPO activity and higher levels of pro-inflammatory cytokines. Colitis severity and inflammation-associated damage can be assessed by examining stool consistency and bleeding, in addition to assessing the histopathological state of the intestine using hematoxylin/eosin stained colonic tissue sections. Colonic tissue fragments can be used to determine MPO activity and cytokine production. Taken together, these measures can be used to evaluate the intestinal inflammatory response in animal models of experimental colitis.

Experimental models of inflammatory bowel disease have allowed us to examine the complex innate and adaptive immune responses associated with pathogenesis. Using histological scoring, quantification of pro-inflammatory cytokines and myeloperoxidase activity, one can begin to assess these responses seen in inflammatory bowel disease.

التحقيق في الالتهابات المعوية الناجمة عن مفاجآت صيف دبي موديل IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

A Video Protocol of Retroviral Infection in Primary Intestinal Organoid Culture

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding primary 3D epithelial structures in vitro. Both the architecture and physiological properties of these &#39;mini-guts&#39;, also called organoids, closely resemble their in vivo counterparts. This makes them an attractive model system for the small intestinal epithelium. Using retroviral transduction, functional genetics can now be performed by conditional gene overexpression or knockdown. This video demonstrates the procedure of organoid culture, the generation of retroviruses, and the retroviral transduction of organoids to assist phenotypic analysis of the small intestinal epithelium in vitro. This novel organotypic model system in combination with retroviral mediated gene expression provides a valuable tool for rapid analysis of gene function in vitro without the need of costly and time-consuming generation for transgenic animals.

This protocol explains primary Lgr5-positve organoid culture and the subsequent performance of retroviral transduction. This enables Cre-inducible overexpression or knockdown of the delivered transgene and allows functional studies to be carried out in the novel in vitro organotypic model system.

بروتوكول الفيديو من عدوى فيروسات الرجعية في الابتدائية المعوية عضي الثقافة

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and composed of mature enterocytes, goblet cells and enteroendocrine cells; and crypts, residing proximal to the submucosa and the muscularis, harboring adult stem and progenitor cells and mature Paneth cells, as well as stromal and immune cells of the crypt microenvironment. Until the last few years, in vitro studies of small intestine was limited to cell lines derived from either benign or malignant tumors, and did not represent the physiology of normal intestinal epithelia and the influence of the microenvironment in which they reside. Here, we demonstrate a method adapted from Sato et al. (2009) for culturing primary mouse intestinal crypt organoids derived from C57BL/6 mice. In addition, we present the use of crypt organoid cultures to assay the crypt metabolic profile in real time by measurement of basal oxygen consumption, glycolytic rate, ATP production and respiratory capacity. Organoids maintain properties defined by their source and retain aspects of their metabolic adaptation reflected by oxygen consumption and extracellular acidification rates. Real time metabolic studies in this crypt organoid culture system are a powerful tool to study crypt organoid energy metabolism, and how it can be modulated by nutritional and pharmacological factors.

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Small intestinal crypt organoids cultured ex vivo provide a tissue culture system that recapitulates growth of crypts dependent on stem cells and their niche. We established a method to assay the metabolic profile in real time in primary mouse crypt organoids. We found organoids maintain physiological properties defined by their source.

تحليل الوقت الحقيقي ايض الملف في<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الثقافات ماوس المعوية سرداب عضي

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth factors. Since organoids are highly similar to the original tissue in terms of homeostatic stem cell differentiation, cell polarity and presence of all terminally differentiated cell types known to the adult intestinal epithelium, they serve as an essential resource in experimental research on the epithelium. The possibility to express transgenes or interfering RNA using lentiviral or retroviral vectors in organoids has increased opportunities for functional analysis of the intestinal epithelium and intestinal stem cells, surpassing traditional mouse transgenics in speed and cost. In the current video protocol we show how to utilize transduction of small intestinal organoids with lentiviral vectors illustrated by use of doxycylin inducible transgenes, or IPTG inducible short hairpin RNA for overexpression or gene knockdown. Furthermore, considering organoid culture yields minute cell counts that may even be reduced by experimental treatment, we explain how to process organoids for downstream analysis aimed at quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry. Techniques that enable transgene expression and gene knock down in intestinal organoids contribute to the research potential that these intestinal epithelial structures hold, establishing organoid culture as a new standard in cell culture.

In this video protocol we give a step by step explanation of lentiviral transduction in organoids of primary intestinal epithelium and of processing and downstream analysis of these cultures by quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry.

بروتوكول لLentiviral تنبيغ وتحليل المصب من المعوية Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the mouse provides great potential to explore cardiac function at the molecular level. The mouse&#39;s small size does present some challenges in regards to performing detailed cardiac phenotyping. Miniaturization and other advancements in technology have made many methods of cardiac assessment possible in the mouse. Of these, the simultaneous collection of pressure and volume data provides a detailed picture of cardiac function that is not available through any other modality. Here a detailed procedure for the collection of pressure-volume loop data is described. Included is a discussion of the principles underlying the measurements and the potential sources of error. Anesthetic management and surgical approaches are discussed in great detail as they are both critical to obtaining high quality hemodynamic measurements. The principles of hemodynamic protocol development and relevant aspects of data analysis are also addressed.

This manuscript describes a detailed protocol for the collection of pressure-volume data from the mouse.

قياس حجم حلقات الضغط في الماوس

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and epithelial cell integrity, and disruption of the intestinal barrier function contributes to progression of gastrointestinal and systemic disease. Two simple methods are described here to measure the permeability of intestinal epithelium. In vitro, Caco-2BBe cells are plated in tissue culture wells as a monolayer and transepithelial electrical resistance (TER) can be measured by an epithelial (volt/ohm) meter. This method is convincing because of its user-friendly operation and repeatability. In vivo, mice are gavaged with 4 kDa fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran, and the FITC-dextran concentrations are measured in collected serum samples from mice to determine the epithelial permeability. Oral gavage provides an accurate dose, and therefore is the preferred method to measure the intestinal permeability in vivo. Taken together, these two methods can measure the permeability of the intestinal epithelium in vitro and in vivo, and hence be used to study the connection between diseases and barrier function.

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

Two methods are presented here to determine intestinal barrier function. An epithelial meter (volt/ohm) is used for measurements of transepithelial electrical resistance of cultured epithelia directly in tissue culture wells. In mice, the FITC-dextran gavage method is used to determine the intestinal permeability in vivo.

في المختبر و في فيفو النهج لتحديد نفاذية الخلايا الظهارية المعوية

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

نموذج الفأر من انسداد الأمعاء الجزئي

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Apoptosis Induction and Detection in a Primary Culture of Sea Cucumber Intestinal Cells

Primary cultured cells are used in a variety of scientific disciplines as exceptionally important tools for the functional evaluation of biological substances or characterization of specific biological activities. However, due to the lack of universally applicable cell culture media and protocols, well described cell culture methods for marine organisms are still limited. Meanwhile, the commonly occurring microbial contamination and polytropic properties of marine invertebrate cells further impede the establishment of an effective cell culture strategy for marine invertebrates. Here, we describe an easy-to-handle method for culturing intestinal cells from sea cucumber Apostichopus japonicus; additionally, we provide an example of in vitro apoptosis induction and detection in primary cultured intestinal cells. Moreover, this experiment provides details about the appropriate culture medium and cell collection method. The described protocol is compatible with a variety of widely available tissue samples from marine organisms including Echinodermata, Mollusca, and Crustacea, and it can provide sufficient cells for multiple in vitro experimental applications. This technique would enable researchers to efficiently manipulate primary cell cultures from marine invertebrates and to facilitate the functional evaluation of targeted biological materials on cells.

This protocol provides an easy-to-handle method to culture the intestinal cells from sea cucumber Apostichopus japonicus and is compatible with a variety of widely available tissue samples from marine organisms including Echinodermata, Mollusca, and Crustacea.

الحث المبرمج والكشف في الثقافة الاساسيه للخلايا المعوية الخيار البحر

Primary cultured cells are used in a variety of scientific disciplines as exceptionally important tools for the functional evaluation of biological ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is compartmentalized into crypts and villi: the stem and proliferating cells are confined to the crypts, whereas the villi epithelium contains only differentiated cells. Hence, the normal intestinal crypts, but not the villi, can give rise to organoids in 3D cultures. The procedure described here is applicable only to villus epithelium undergoing dedifferentiation leading to stemness. The method described uses the Smad4-loss-of-function:&#946;-catenin gain-of-function (Smad4KO:&#946;-cateninGOF) conditional mutant mouse. The mutation causes the intestinal villi to dedifferentiate and generate stem cells in the villi. Intestinal villi undergoing dedifferentiation are scraped off the intestine using glass slides, placed in a 70 &#181;m strainer and washed several times to filter out any loose cells or crypts prior to plating in BME-R1 matrix to determine their organoid-forming potential. Two main criteria were used to ensure that the resulting organoids were developed from the dedifferentiating villus compartment and not from the crypts: 1) microscopically evaluating&#160;the isolated villi to ensure absence of any tethered crypts, both before and after plating in the 3D matrix, and 2) monitoring the time course of organoid development from the villi. Organoid initiation from the villi occurs only two to five days after plating and appears irregularly shaped, whereas the crypt-derived organoids from the same intestinal epithelium are apparent within sixteen hours of plating and appear spherical. The limitation of the method, however, is that the number of organoids formed, and the time required for organoid initiation from the villi vary depending on the degree of dedifferentiation. Hence, depending upon the specificity of the mutation or the insult causing the dedifferentiation, the optimal stage at which villi can be harvested to assay their organoid forming potential, must be determined empirically.

The procedure describes isolation of the villi from the mouse intestinal epithelium undergoing dedifferentiation to determine their organoid forming potential.

3D زراعة الأجهزة العضوية من ظهارة سيلي المعوية التي تخضع للتمايز

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Generation of Murine Primary Colon Epithelial Monolayers from Intestinal Crypts

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in the continuity of this barrier can result in inflammatory disorders such as inflammatory bowel disease. One of the limitations in the study of intestinal epithelial biology has been the lack of primary cell culture models, which has obliged researchers to use model cell lines derived from carcinomas. The advent of three dimensional (3D) enteroids has given epithelial biologists a powerful tool to generate primary cell cultures, nevertheless, these structures are embedded in extracellular matrix and lack the maturity characteristic of differentiated intestinal epithelial cells. Several techniques to generate intestinal epithelial monolayers have been published, but most are derived from established 3D enteroids making the process laborious and expensive. Here we describe a protocol to generate primary epithelial colon monolayers directly from murine intestinal crypts. We also detail experimental approaches that can be used with this model such as the generation of confluent cultures on permeable filters, confluent monolayer for scratch wound healing studies and sparse and confluent monolayers for immunofluorescence analysis.

In this protocol, we describe how to generate murine primary epithelial colon monolayers directly from intestinal crypts. We provide experimental approaches to generate confluent monolayers on permeable filters, confluent monolayers for scratch wound healing and biochemical studies, and sparse and confluent monolayers for immunofluorescence analysis.

جيل من المورين الأولي القولون الظهارية Monolayers من سرداب الأمعاء

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in ...