Tümör nüksü, doğum rezeksiyonunun çok belirgin bir sorunudur. Bu çalışmada, rejeneratif bir ortamda tümör büyümesi hakkında daha fazla bilgi edinmeye çalışıyoruz. Tümör organoidlerinin hasta tümörünü histolojik ve genetik olarak özetlediği gösterilmiştir, ancak in vivo modeller azdır ve stabiliteden yoksundur.
Hastadan elde edilen organoidi farenin karaciğerine başarılı bir şekilde aşıladık. Bunu iki örnek durum için gösterdik. Histolojik immünohistokimyasal boyamalar, organoidlerin ve ksenogreftin orijinal hasta tümörüne benzediğini göstermektedir.
Orijinal tümörden organoidlerin geliştirilmesi, 2D hücre kültürleri gibi diğer olasılıklara kıyasla daha doğru bir hasta tümörü modeline benzer. Bu modeli karaciğer rejenerasyonunun karmaşık ortamına yerleştirmek, tümör hücreleri ve rejeneratif ortam arasındaki mevcut etkileşimler hakkında daha fazla bilgi edinmeye yardımcı olacaktır. Karaciğer rezeksiyonunda HCC'nin nüksünün anlaşılması konusunda alanımıza bilgi kazandıracağımızı umuyoruz.
Bu nedenle, bu model ile gelecekteki araştırma projeleri için temel oluşturmak istiyoruz. Başlamak için, hasat edilen karaciğer kanseri dokusunu bir ila iki milimetre karelik küçük parçalara kesmek için bir neşter ve forseps kullanın. Doku parçalarını beş mililitre ayrışma tamponu içeren 15 mililitrelik bir tüpe aktarın.
Tüpü 37 santigrat derecede bir döndürme cihazına yerleştirin. İnkübe ettikten sonra, hücre karışımını 50 mililitrelik bir tüpün üzerine yerleştirilmiş 100 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin. Doku parçalarını filtreden geçirmek için beş mililitrelik bir şırınganın pistonunu kullanın.
Şimdi yıkamak için filtrenin üzerine beş mililitre takviye edilmiş gelişmiş DMEM ekleyin. Süzüntüyü 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Süpernatanı aspire ettikten sonra, peleti beş mililitre kırmızı kan hücresi lizis tamponunda yeniden süspanse edin.
Süspansiyonu tekrar 300 g'da beş dakika santrifüjleyin. Ardından, saymadan önce peleti bir mililitre PBS'de yeniden süspanse edin. Hücre kaplamasından önce, süpernatanı santrifüj hücresi süspansiyonundan çıkarın.
Yaklaşık bir mililitre bazal membran matrisi ile tüpe tekrar süspanse edin ve buzun üzerine yerleştirin. Damlalar oluşturmak için 20 mikrolitre hücre süspansiyonunu önceden ısıtılmış altı oyuklu bir plakanın kuyucuklarına pipetleyin. İki ila üç dakika bekledikten sonra, plakayı beş dakika boyunca bir akış kabinine ters konumda yerleştirin.
Ardından plakayı katılaşması için bir inkübatöre aktarın. Son olarak, her bir oyuğa iki mililitre organoid kültür ortamı ekleyin. Hasta kaynaklı organoid hat, orijinal hasta tümörünün morfolojik özelliklerini sundu.
Başlamak için, anestezi uygulanmış bir fareyi uzuvları bantlanmış olarak sırtüstü pozisyona getirin. Alt karın bölgesinden ksifoid kıkırdağa kadar lineer alba boyunca tükenmiş cerrahi bölgede bir kesi yapmak için forseps ve mikrocerrahi makas kullanın. Üst karın bölgesinin en iyi şekilde maruz kalmasını sağlamak için çekiş yönünü ayarlayarak ekartörleri insizyona yerleştirin.
Kesi yerinin hemen yanına tuzlu su ile ıslatılmış temiz bir peçete yerleştirin. Şimdi, ince bağırsağı ve çekumu ıslak peçetenin dışına çıkarın. Enjeksiyon mümkün olana kadar sağ üst lobu açığa çıkarın.
Organoid karışımı durulama işaretli bir Hamilton şırıngasına çekin. İğneyi hareket ettirmeden süspansiyonu işarete kadar fareye sabit bir şekilde enjekte edin. Enjeksiyon bölgesine pamuklu çubukla baskı uygulayın.
Ardından karında herhangi bir lob yırtılması veya geri akışı olup olmadığını kontrol edin. Karnı 0,5 mililitre steril tuzlu su ile durulayın. Karnı kapatmak için emilebilir bir dikişle çalışan bir sütür yerleştirin.
Farede gelişen tümör, hem hasta kaynaklı organoidlere hem de orijinal hasta tümörüne benziyordu. Minör karaciğer rezeksiyonuna başlamak için, sırtüstü pozisyonda anestezi uygulanmış bir farede laparotomi yapın. Nemli pamuklu çubuklarla, cerrahi alanda daha fazla alan yaratmak için medial lobu kraniyal olarak itin.
Kaudat lobu ve ligamenti ortaya çıkarmak için sol lateral karaciğer lobunu kraniyal olarak çevirin. Bağı tamamen kesin. Sonra lateral karaciğer lobunun altına bir ligatür yerleştirin.
Şimdi sol lateral karaciğer lobunu kaudal olarak çevirin ve bağın sol serbest ucunu sol lateral karaciğer lobunun sol ucunun etrafına yönlendirin. Sağ serbest ucu diğer ucun etrafında yönlendirin. Lobuna çekiş uygulamak için pamuklu çubuk kullanın ve bağın merkezi olarak konumlandırıldığından emin olun.
Sonra bir çift yarım düğüm bağlayın. Bu düğümü, tam olarak sıkmadan diğer yönde bağlanmış başka bir ikinci yarım düğümle sabitleyin. Ligatür düzgün bir şekilde yerleştirildiğinde, ligatürün kraniyal serbest ucunu künt uçlu forseps ile tutun ve kaudal ucu başka bir forseps çifti ile çekin.
Düğümü ters yönde bağlanmış ikinci bir düğümle sabitleyin. Karaciğeri rezeke etmek için kesmeden bağa yakın kesin. Sol lateral karaciğer lobunun küçük rezeksiyonundan sonra, falsiform ligamenti kesin.
Lob'u kraniyal olarak çevirin, ardından altına bir bağ yerleştirin ve kaudal olarak çevirin. Şimdi bağın serbest enlerini labialin etrafına dolaştırın. Bağ doğru bir şekilde yerleştirildikten sonra, yavaşça bir çift yarım düğüm bağlayın.
İkinci bir yarım düğümü ters yönde tamamen sıkın, ardından ters yönde üçüncü bir yarım düğüm ekleyin. Lob rezeke edin, ardından karnı steril salin solüsyonu ile yıkayın. Bağırsakları anatomik yerlerine geri yerleştirin.
Karnı kapatmak için, cildi ve karın zarını tutmak için forseps kullanın. Kesi hattının üst ucuna emilebilir dikişli bir dikiş yerleştirin. Kesiğin diğer tarafında, cilt tarafından çıkan ikinci bir dikiş gerçekleştirin.
Düğümü sıkıca bağlayın, serbest ucu iğne kısa olmadan bırakın. Dikişin iğne ucunu uzun bırakın. Çalışan sütürü, insizyonun alt ucunda bir düğüm ile bitirin.
Kalan kanın karnını temizleyin. Karaciğer loblarının nispi katkısı, aynı suşun farklı fareleri arasında karşılaştırılabilir. Minör rezeksiyon sonrası sağ inferior lobun ortalama ağırlığı toplam vücut ağırlığının %0.82'sine yükseldi.
Majör rezeksiyon, toplam vücut ağırlığının% 0.99'unda bir artışa neden oldu. Sağ superior lobun majör rezeksiyonu, sağ inferior loba göre ağırlığında belirgin bir artışa neden oldu.
