Kaval kemiği mikroçevriminin içine osteosarkom hücrelerinin yerleştirilmesi akciğer metastazını teşvik eder. Bu model, sağlam bir bağışıklık sistemi gerektiren pulmoner metastaz veya yeni kanser tedavilerinin mekanizmalarını incelemek için de yararlı olabilir. Tümör kurulduktan sonra, uzun süreli sağkalım çalışmalarında metastaz oranını kontrol etmek için amputasyon gereklidir.
Damardan ilaç dağıtımının görselleştirilmesine izin vermek için şahdamar enjeksiyonlarını kullanıyoruz. Juguler ven enjeksiyonu, kesin bir ilaç teslimatının gerekli olduğu diğer birçok hastalık modeli için yararlıdır. Bu yöntemi in-vivo görüntüleme için nanopartiküller ve radyolabelli liganlar sunmak için kullandık.
Yeni kullanıcılara, kan kaybı olmadan uzuv amputasyon mekaniğine hakim olmak için bir deney denemeden önce beş ila 10 ötenazili sıçandan bir uzvu çıkarma pratiği yapmalarını tavsiye ediyoruz. Penis refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, uyuşturulmış sıçanı burun kemiğinde, düşük ısı ayarlı bir ısı yastığında supine pozisyonunda sabitleyin. Sağ bacakta, ventral ve dorsal alt karına kadar olan saçları çıkarın.
Cerrahi bölgeyi% 70 etanol ve uygun bir seyreltilmiş antiseptik ile dezenfekte etmek ve hayvanın gözlerine merhem uygulamak için gazlı bez veya sprey kullanın. Bir açıklık yapmak için matkap benzeri bir hareket kullanarak, uçtan 10 milimetre işaretli 22 kalibrelik bir iğneyi, tibial platonun ortasındaki kaval kemiğinin diyafizine yerleştirin ve iğneyi metafizden diafize doğru uzatın. İğneyi çıkardıktan sonra, homojen bir hücre süspansiyonu elde etmek için ilgi çekici tümör hücresi süspansiyonu hafifçe karıştırın ve 20 mikrolitre PBS'deki hücrelerin dördüncüsüne 7,5 x 10'u bir Hamilton şırıngasına yükleyin.
Hamilton şırıngasını iğne ucundan 10 milimetrelik hücrelerle işaretleyin ve iğneyi 22 kalibrelik iğnenin yaptığı deliğe 10 milimetre işaretine yerleştirin. Daha sonra tüm hücre hacmini ilik boşluğuna hafifçe boşaltın ve sıçanı tam görev süresine kadar izleme ile bir ısıtma yastığı üzerindeki bir kafese yerleştirin. İntravenöz doksofubisin uygulanması için, anestezi onayından sonra, sağ veya sol şahdamarını görselleştirmek için dikkatli diseksiyon kullanın ve iğneyi aşırı kas dokusuna yerleştirin.
Şahdamar ön kısmında pektoralis kasına görselleştirildiği için iğneyi başlığa doğru şahdamarına doğru yönlendirin ve doğru bir yerleştirmeyi onaylamak için iğne ucuna küçük bir kan hacmi çizin. İğne yerindeyken, bir dakika içinde kilogram başına iki miligramlık 100 ila 150 mikrolitre enjekte edin. Çözelti doğum sırasında damar içinde görünmelidir.
Çözeltinin tamamı teslim edildiğinde, damara hafif basınç uygulamak için steril gazlı bez kullanın ve kesiği kapatmak için üç ila dört yara klipsi kullanın. Sedasyonu onayladıktan sonra, sağ bacaktaki saçları, ventral ve sırt alt karın bölgesine kadar çıkarın ve sıçanı bir ısıtma yastığına sırtüstü konuma yerleştirin. Cildi, gösterildiği gibi baldırın ortasından sağ alt karın kalça ekleminin hemen üstüne ovalayın ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın.
Steril eldivenler ve aletler kullanarak, bacağı steril cerrahi örtünün havalandırmasına çekin ve boğucuya sadece proksimal olan çevresel bir kesi yapın. Arka uzvun ventral-medial yüzeyindeki femoral arteri ve damarı açığa çıkarmak için arka uzvu deglove edin ve damarları orta uyluk kemiği seviyesinde dava etmek ve distal olarak transeksiyon yapmak için 4-0 emilebilir dikiş kullanın. Kas diseksiyonu sırasında sızıntıyı azaltmak için damarı distal olarak kelepçeleyin ve kalça eklemini yanal dışa doğru dönüşle kaçırmak için künt diseksiyon kullanın.
Femurun başını asetabulumdan bulun ve dağıtın ve bacağı vücuda bağlı tutarak kalan herhangi bir dokuyu çıkarın. Asetatülum ve siyatik sinire kilogram ropivakain başına yaklaşık altı miligram ile bir sıçrama bloğu geçirin ve asetatül üzerindeki kasları kapatmak için basit bir kesintiye uğramış 4-0 emilebilir dikiş kullanın. Daha sonra cildin kenarlarını kapatmak için beş ila 10 milimetre yerleştirilen yara klipslerini kullanın.
Tümör gözetimi için X-ışını görüntüleme kemik tümörü invazyonunun doğrulanmasına izin verir ve yakın zamanda kesilmiş veya formalin sabit uzuvlarında yapılabilir. Röntgen görüntüleme ayrıca metastazlı ve metastazsız akciğerlerin radyografik morfolojisinin değerlendirilmesine izin vererek, gereksiz spontan ölümleri önlemek için ötanazi ihtiyacını belirlemek için hızlı ve kolay bir yöntem sağlar. Sıçan osteosarkomunda hem osteolitik hem de osteoblastik tümör morfolojisi, kesilmiş uzvun histopatolojisi ile doğrulanabilir.
Kortikal kemiğin bu örnekte bulunmadığını ve bitişik kemiğin korteksin mevcut şaftına dik olarak yönlendirilen yeni dokuma kemikle değiştirildiğini veya güçlendirildiğini unutmayın. Olgunlaşmamış osteoid adaları da tümör içinde tanımlanabilir. Bu görüntülerde, bazıları mineralize kemik ve tümör vasküler emboli ile temsili akciğer metastazlarının mikroskobik morfolojisi gözlenebilir.
Primer osteosarkom tümörlerinin immünostainingi, tümörlerin CD68 pozitif makrofajlar veya CD3-pozitif T hücreleri gibi bağışıklık hücresi popülasyonları tarafından infiltrasyonunu ortaya çıkarabilir. Tümör hücre protein lysates Batı şişkinliği protein kinazları, protein kinaz reseptörleri ve bu yollar ile etkileşime diğer proteinlerin ekspresyonunu belirlemek için kullanılabilir. Tibial implantasyon için, ilk tibial delik yapıldıktan sonra, hamilton iğnesi yerleştirmeyi kolaylaştırmak için cildi ve kemik deliklerini hizada tutmak için bacağı baskın olmayan elinizde tutmaya devam edin.
Şahdamar enjeksiyonu için, iğneyi kas içine yerleştirin, ancak damarı kaçırmamak için iğneyi çok fazla açıya sokmayın. Amputasyon için, önce ötenazili sıçanlar üzerinde disartikülasyon uygulayın.
