אנו מודים ד ר Wei Qi הוא (אוניברסיטת שבחיים, סאזהאו, סין), ד ר יאן נינג קיאו (מחוזית האוניברסיטה, שיאן, סין) לסיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי את נבחרת מדעי הטבע קרן סין (גרנט 31272311, 81373295 ו- 81473420), את הפרוייקט ממומן על ידי עדיפות תוכנית הפיתוח של ג'יאנגסו להשכלה גבוהה המוסדות האקדמיים (מענק מס ' ysxk-2016).

מניפולציות בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של האוניברסיטה מודל החיה מחקר מרכז של נאנג'ינג.
1. פתרון הכנה
<ol><li>להכין פתרון HEPES-Tyrode (H-T) באמצעות 137.0 מ"מ NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, CaCl 1.8 מ מ2, 1 מ מ MgCl2∙6H2O, 5.6 מ מ D-גלוקוז ו 10 מ מ HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
	<li>להכין HEPES-Tyrode פתרון ללא סידן (Ca2 +-חינם H-T) באמצעות מ"מ 140.6 NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, 1 מ MgCl2∙6H2O, 5.6 מ מ D-גלוקוז ו- 10 מ מ HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
	<li>להכין HEPES-Tyrode פתרון באמצעות 124 מ"מ אשלגן (K גבוה+) באמצעות 15.7 מ מ NaCl, 124.0 מ מ. אשלגן כלורי, מ מ 1.8 CaCl2, 1 מ MgCl2∙6H2O, 5.6 מ מ D-הגלוקוז, ו- 10 מ מ HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
</ol>2. ניסוי הכנה
<ol><li>מחממים H-T ו פתרונות High-K+ שימוש באמבט מים 37 ° C.</li>
	<li>הפעל את מערכת myograph, נתוני רכישת חומרה ומחשב.</li>
	<li>למלא בקפידה צ'יימברס myograph כל 5 מ"ל של H-T פתרון לכל.</li>
	<li>למלא שתי צלחות פטרי עם 20 מ של 4 ° C H-T ו- Ca2 +-ללא פתרונות H-T, בהתאמה, ולאחסן על קרח.</li>
	<li>מילוי ס מ-10 מצופה פטרי עם 20 מ של H-T פתרון ולתחזק אותה בטמפרטורת החדר.</li>
</ol>3. מצע המעי העליון העכבר עורק
<ol><li>המתת חסד של 8-12-בת שבוע C57BL/6J נשית או גברית העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם. להצמיד את העכבר עם הבטן שלו פונה כלפי מעלה.</li>
	<li>להרטיב את הבטן עם 70% אתנול. ואז, לחתוך את העור עם מספריים לאורך הקו האמצעי הגחון מהמפשעה, ולבצע חתכים מנקודת ההתחלה של החתך הראשוני כלפי מטה הרגליים משני הצדדים. משוך את העור בחזרה משני הצדדים; לעשות חתכים דומה לפתיחה של הצפק.</li>
	<li>בעזרת מספריים, חותכים את לוושט, המעי הגס, אחרים ורקמות לבודד לחלוטין על מערכת העיכול עם האכלה להערכת מן הגוף.</li>
	<li>עם מלקחיים, להעביר את המקטע מבודד המנה המכיל את הקור H-T מוכן בשלב 2.4, ולשטוף בעדינות את הרקמה בפתרון H-T מספר פעמים כדי לשטוף את הדם.</li>
	<li>להעביר את המקטע מבודד לתוך הפטרי מצופה מוכן בשלב 2.5, ולבצע עורק מצע המעי העליון בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>להחליק את קיבה, מעי, מעי ו caecum בכיוון השעון, להצמיד את הבטן ואת caecum בצד ימין ועל שמאל, בהתאמה.</li>
	<li>למתוח את המיטה להערכת מצע המעי העליון ותקן המעי עם סיכות כדי לחשוף את העורקים מצע המעי העליון גזור. הערה: בתנאים אלה, העורקים הם מעל הורידים.</li>
	<li>הפעל את מקור האור שידור של מיקרוסקופ סטריאוסקופי, לנתח את העורקים מתחת למיקרוסקופ. ודא כי הרקמה כולה הוא שקוע הפתרון.</li>
	<li>תהדק את רקמות adipose סביב העורקים עם מלקחיים, לבודד את העורקים על ידי כריתת כל אל הרקמות במספריים לנתיחה. הימנע ופצעו את העורקים.</li>
</ol>4. עורקי הרכבה
<ol><li>העברה, לטבול את העץ עורק מצע המעי העליון לתוך קר Ca2 +-חינם פתרון H-T (להכין בשלב 2.4) על ידי מחבר חובק למעקה העורקים עודף עם מלקחיים.</li>
	<li>לחתוך חלק מ מ 1.4 של העורק proximal לקיר המעי של ארקייד מצע המעי העליון, והשתמש מלקחיים שני כדי לפתוח את שני הצדדים של קטע עורק זה בזהירות.</li>
	<li>להכין שני מקטעים של פלדת אל-חלד חוט 2.5 ס מ אורך, למקם אותם לתוך אותה המנה.</li>
	<li>הצמד בעדינות את קצה אחד של העורק באמצעות מלקחיים והוסף בקפידה שני חוטי לתוך לומן של העורק אחד עם עזרה של מלקחיים אחר. ודא החוטים נשמרים ישר אל תיגע של אנדותל.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים שני, מהדק את שני חוטי פלדה מחוץ הספינה משורשרות בו זמנית, בזהירות להעביר את כלי הקיבול הפטרי לתא myograph מילא בעבר עם פתרון H-T (שלב 2.3).</li>
	<li>בורג הלסתות בנפרד כדי לפנות מקום עבור הרכבה. תהדק את שני הצדדים של אחד שני החוטים שנוספו באמצעות מלקחיים שני, ולמקם את כלי הקיבול הפער הלסת (איור 1 א').</li>
	<li>לעטוף את שני צידי החבל בחוזקה סביב הברגים של הלסת מחובר של מיקרומטר (איור 1B).</li>
	<li>לתקן את הבורג השמאלי על ידי סיבוך עם כיוון השעון. ישרו את החוט בעזרת המלקחיים הימנית ולאחר מכן לתקן את הבורג הימני על ידי סיבוך עם כיוון השעון (איור 1C). ודא כי הכלי הוא תמיד בתוך הפער הלסת, אבל אל תגעו הלסת כדי למנוע נזק.</li>
	<li>סגירת הלסתות שני שימוש של מיקרומטר (איור 1D). ודא כי שתי הלסתות נמצאים מספיק קרוב אבל זה שלא יגעו אחד את השני, כי החוט מבולבל הוא בראש החוט קבוע.</li>
	<li>עם המלקחיים הימנית, מקפלים את החוט מוברגת בפינה של הלסת מחובר כדי לאלץ את מתמר, ובזהירות לעטוף את זה עם כיוון השעון מסביב הבורג צד ימין (איור 1E). לאחר מכן, לתקן את הבורג. חזור על שלב זה בצד שמאל של התיל ולתקן את הבורג מצד ימין (איור 1F).</li>
	<li>להעביר את הלסתות פשוקות מתחלפות בקפידה את מיקרומטר (איור 1 ג'י). הימנע מתיחה הכלי. להשתמש מלקחיים כדי להעביר את החוט שבצד מיקרומטר במישור האופקי של החוט על הצד מתמר. לסובב את מיקרומטר בקפידה כך הפער בין שתי הלסתות יכול להכיל רק את שני החוטים.</li>
	<li>חזור על שלבים 4.2 – 4.11 להר העורקים על גבי התאים האחרים. להתחבר כל התאים הציוד, לכסות את התאים, לצרף את אספקת חמצן 100% ובדיקה טמפרטורה, להפעיל חימום כדי 37 מעלות צלזיוס. פתח את תוכנת יצירת תרשימים, לחץ על לחצן התחל על חלון תצוגת תרשים כדי להתחיל להקליט.</li>
	<li>Equilibrate למשך כ 20 דקות.</li>
</ol>5. נורמליזציה
הערה: כדי לתקנן את התנאים ניסיוני וכדי להשיג אמין תגובתיות פיזיולוגית של כלי, הליך נירמול הוא הכרחי15. לפי היחס בין כוח פעיל לבין היקף פנימי של כלי השיט, מערכת myograph חוט יש תוכנית נורמליזציה סטנדרטי כדי להעריך את היקף פנימי (IC) של כלי הנטען5,8, 9. בקצרה, כדי לחשב IC (מיקרומטר), לקרוא את מיקרומטר, קלט את הערך כמו הערך של X והמתמר פלט כוח, קרי, נח קיר מתח (mN/מ מ), כמו Y הערך. התוכנית להחזיר עיקול מצויד של (X, Y) ולחשב את IC המתאים בלחץ transmural של 100 מ מ כספית (100IC). הספינה מוגדר היקף פנימי מנורמל (IC1) כאשר התגובתיות פעיל הוא מקסימלי.
<ol><li>הגדר כוחות כאפס עבור כל הערוצים במכשיר, equilibrate עוד 1-2 דקות.</li>
	<li>בחר הגדרות נורמליזציה של "תפריט DMT, ולהגדיר הפרמטרים כדלקמן: עינית כיול (מ מ/div): 0.36; המטרה לחץ (kPa): 13.3; IC-1-/IC-100: 0.9; באינטרנט בממוצע זמן (בשניות): 2; לעכב את זמן (בשניות): 60. לחץ על הלחצן אישור כדי לסגור את חלון הגדרות נורמליזציה DMT .</li>
	<li>בחר הערוץ של עניין DMT תפריט כדי לפתוח חלון נורמליזציה DMT עבור הערוץ המתאים. הזן את הערכים קבוע לתוך החלון כדלקמן: רקמת והגישור a1: 0.1; רקמות והגישור a2: 4; קוטר החוט (מיקרומטר): 40. החלון מציג את אורך הכלי מחושב 1.40 מ מ.</li>
	<li>קרא את מיקרומטר לשכת הרקמה המתאימה. הזן את הערך בתיבה קריאה מיקרומטר , ולחץ על לחצן הוסף נקודת . ערך זה הוא הערך ההתחלתי של X (X0). לאחר זמן השהיה s 60, החלון מציג את הכוח והלחץ יעיל (ERTP) המתאים לערך זה מיקרומטר. במקביל, תיבת מיקרומטר הקריאה הופכת לפעילה.</li>
	<li>למתוח את הכלי להיות מנורמל ע מיקרומטר נגד כיוון השעון. הזן את הערך מיקרומטר לתוך התיבה מיקרומטר קריאה , ולחץ על לחצן הוסף נקודת . לחכות זמן השהיה של 60 s שוב.</li>
	<li>חזור על שלב 5.5, להמשיך למתוח את כלי הקיבול, והוספת ערכי מיקרומטר עד החלון מציג את הערך של "מיקרומטר X1", אשר הוא ההגדרה מיקרומטר מחושב נדרש למתוח את כלי הקיבול שלו IC1.</li>
	<li>הגדר את מיקרומטר ל X ערך1 . הערה: המתח מנורמל בדרך כלל 1-2 mN.</li>
</ol>6. העורק התכווצות הקלטה
הערה: כל הפתרונות, כולל H-T ו- High-K+ פתרון להשתמש בסעיף זה, הוכנו בשלב 2.1.
<ol><li>לאחר נורמליזציה, equilibrate את כלי הקיבול בבית הבליעה למשך 15-20 דקות. הערה: אלה הוא אין צורך לשנות את הפתרון בשלב זה.</li>
	<li>לאתגר את הכלי עם פתרון גבוהה-K+ פעמיים.<ol>
<li>לאתגר את כלי הקיבול, החלף פתרון H-T 5 מ של High-K+ פתרון כדי לגרום להתכווצות למשך 10 דקות, ואחריו כביסה עם 5 מ של H-T פתרון 3 - 4 פעמים. הערה: התכווצות טיפוסי יש כוח מקסימלי 3 mN וכוח מתמשכת מתמיד סביב 2.5 mN12. אם האתגר הראשון יוצר כוח מקסימלי מתחת 2.5 mN או הכוח מתמשכת יורדת עם הזמן, או האתגר השני יוצר כוח נמוך הרבה יותר המינון בפעם הראשונה, כלי הקיבול נמחקת, לא ישמש לחקירה נוספת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאתגר את הכלי עם 5 מ של High-K+ פתרון כדי לגרום להתכווצות. לאחר 5 דקות, להוסיף 0.5 µL של מניות פתרון (10 מ מ דימתיל סולפוקסיד) neoliensinine14 אל החדר להירגע הלכנו לאכול ריכוז 1 מיקרומטר neoliensinine הסופי.</li>
	<li>כאשר הכוח הוא יציב (זה בדרך כלל לוקח מספר דקות), להוסיף עוד 0.5 µL של פתרון מניות neoliensinine לתוך החדר כדי להגדיל את ריכוז 2 מיקרומטר. להוסיף 1 µL של הפתרון מניות בכל פעם כדי להעלות את ריכוז 4, 6, 8 ו- 10 מיקרומטר לייצר t הוא מנה-תגובה עקומה. הערה: המניות ואת העבודה ריכוזים משתנים בין תרופות.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats.">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats.">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , (2004).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li><li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li><li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system.">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li><li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+phosphatase+target+subunit+1+(MYPT1)+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure.">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li><li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension.">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li><li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn,+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant.">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li><li>Slez&#225;k, P., Waczul&#237;kov&#225;, I., Bali&#353;, P., P&#250;zserov&#225;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery.">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+hypertension:+analysis+of+worldwide+data.">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li><li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research.">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

יתר לחץ דם הוא אתגר בריאות הציבור נפוצה בשל סיבוכים חמורים, כולל הלב וכלי הדם שלה מחלות כליה16. להבנת בפתוגנזה של יתר לחץ דם, לחקור יותר תרופות נגד יתר לחץ דם הפך להיות משימה דחופה בתחום זה. לחץ דם הוא נוצר ומתוחזק על ידי התנגדות היקפית של מחזור הדם. על פי החוק של Poiseuille, העורקים קטן יחסית לייצר חלק גדול של התנגדות הדם ולשמש המפיק הדומיננטי של לחץ דם3,10. לפיכך, מדידה של עורקים קטנים-התנגדות ולא עורקים גדולים מתאימה יותר מחקרים של לחץ הדם. הטכנולוגיה myograph חוט היא לאחד שיטות הטובה ביותר ללמוד את הפונקציות הפיזיולוגיות קטן-התנגדות העורקים ו בפתוגנזה של מחלות לב וכלי דם.
מערכת כלי קטן תיל myograph תועד טוב בדוחות אחרים, שימש כדי למדוד את ההתכווצות של עכברוש העורקים מצע המעי העליון העורקים8 ו העכבר כגון האאורטה9. ניצול של הנדסה גנטית, מגוון רחב של מחלות מודלים ודגמים ההקרנה סמים, העכבר הפך חיית מודל בשימוש נרחב בתחומים רבים. לכן, כאן, סיפקנו פרוטוקול שונה של שיטה זו למדידת התכווצות עורק מצע המעי העליון העכבר. בדו ח זה, מדדנו בהצלחה את contractility עורקי מצע המעי העליון עכבר עם שינויים של מאגרי יסוד וצעדים הרכבה. מחקרים רבים בנושא שמחוץ vasocontractility מדידה המשמשים פתרונות המכיל NaHCO3, כגון פתרונות קרבס, לחקות תמיסת מלח פיזיולוגית. אולם, מאגרים כאלה צריך CO2 כדי להתאים את ערך ה-pH במהלך המדידה, וכתוצאה מכך הייצור של קאקו3. אנחנו נבחר H-T פתרון מערכת מאגר ומצא שזה עבד טוב. מאז טמפרטורה יש השפעה מועטה על pK הערך של HEPES, ערך ה-pH של התמיסה בנוחות מותאם בטמפרטורת החדר והוא ללא שינוי בגיל 37 ° C 17. בנוסף, אנו משתמשים Ca2 +-H-T הפתרון החופשי כאשר המנחה את החוטים דרך לומן כלי על מנת למנוע כלי לתעוקה על ידי Ca2 +. שינוי נוסף בפרוטוקול זה הוא ההליך הרכבה. 8,כמה דוחות9 ומכשיר ידני5 ממליצים המנחה את החוט השני לאחר תיקון את החוט הראשון על הלסת. אנו מוצאים שזה עובד טוב יותר כאשר שני חוטי מודרכים דרך לומן כלי לפני הרכבה הספינה כי שיטה זו עשוי להפחית נזק אפשרי של המתמר בשל המרחב קאמרית מוגבלת.
למרות הפארמצבטית גבוהה של שיטה זו, אנחנו צריכים לשים יותר לב. כמה צעדים מרכזיים. החשוב ביותר הוא כדי למנוע נזק לכלי הנגרמת על ידי מלקחיים ומספריים. במהלך כלי ניתוח, המפעיל צריך להשתמש המלקחיים בעדינות בעת מתיחה של רקמת שומן, להשתמש בזהירות את המספריים, כאשר אתה מבתר את רקמות החיבור. בנוסף, מחבר חובק למעקה הספינה עבור קיבעון נעשה בעדינות, נזק אנדותל להימנע בעת המנחה את החוטים כי הספינה אנדותל פגום יהיה להצמיח תגובות חריגות, למשל. , הספינה פגומות מציג כוח ניכר המתח לאחר גירוי עם אצטילכולין, בעוד הספינה רגיל מראה אפקט מרפה. ההסבר לתופעה זו הוא כי אנדותל פגום לא יכול לייצר תחמוצת החנקן כראוי. שימו לב כי בניסוי מעורבים התכווצות הקשורות אנדותל, המצב אנדותל צריך להיבדק לפני המדידה כוח. בנוסף, אנחנו צריכים גם בזהירות הר הספינה על הלסתות כי המתמר פגום בקלות אם להחיל עם כוח חזק. לבסוף, אנו בדרך כלל תשתמש ערך תוספת קבועה מיקרומטר בעת ביצוע נורמליזציה. הערך של התוספת הוא 30 או 20 מיקרומטר בתחילה ומגיעה 10 מיקרומטר לאחר הלחץ יעיל kPa 11-12. שיטה זו עשויה להפחית נחסך זמן, עשויה למנוע מתיחת, ובכך attenuating כלי נזק.
למרות החקירה שלנו התמקדו העורקים מצע המעי העליון העכבר, שיטה זו יכולה לשמש גם אבי העורקים, הסמפונות, ואת אחרים כלי שיט קטנים, כולל כליות, מוח ובעורקי הריאות. מאז מערכת זו כוללת ארבעה ערוצים, זה נוח למדידה של הארבעה מקבילים בו זמנית. בנוסף, מיטה כל כלי הדם מצע המעי העליון יכול לספק לפחות ארבעה מקטעים עורק, ולכן קל מאוד לעצב קבוצות ניסוי שונות. הניסיון שלנו שכל קטע עורק שורד לפחות 4 שעות ושומר טוב התגובות הפתרון גבוהה-K+ במשך לפחות 6 חזרות. מאפיין זה הוא מאוד שימושי עבור מדידות של ההשפעות של מספר תוספות של תרופות שונות. עם זאת, יש גם מגבלות על המערכת myograph תיל. הניסוי של myograph חוט לשעבר vivo רק הוא מסוגל למדוד vasocontractility איזומטרי, אבל זה בדרך כלל צריך להיות משולב עם אחרים מידות עבור ניתוח מורכב של כלי השיט.
לסיכום, אנו תיאר שיטה למדידת contractility isomeric בעורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות מערכת myograph האזנה מרובה. בשיטה זו ניתן להעריך את הפונקציות של השריר החלק בכלי הדם, מרפה מסך של שריר חלק.

המערכת myograph כלי קטן המשמש כאן הייתה למדידת איזומטרי התכווצות של כלי התנגדות קטן עם קטרים פנימי 100 ועד 400 מיקרומטר. מבודד כלי שיט קטנים (כ-2 מ מ אורך) הוכנסו על ידי שני חוטים קוטר 40-מיקרומטר, היו אז רכוב על הלסתות מיקרומטר-צד וצד מתמר ברצף. טכניקה זו myograph היה הציע לראשונה בשנת 19721 ולאחר מכן פיתחו בעיקר על ידי Mulvany ו שלו עמיתים2,3,4,5,6. עכשיו זה טכניקה בוגרת עם ציוד יציב, ביצועים קל ו8,97,הליך סטנדרטי נורמליזציה. אנחנו מנוצל בשיטה זו עם כמה שיפורים עבור מידות עורק מצע המעי העליון העכבר.
השריר החלק בכלי הדם קווים הקירות של כמעט כל כלי הדם. הפונקציה הבסיסית שלהם היא לייצר כוחות באמצעות התכווצות בתגובה לגירויים שונים. Contractility נורמלי של השריר החלק בכלי הדם חיונית ויסות לחץ דם, תזונה תוספת של10. חריג ויסות לחץ דם תוצאות במגוון רחב של מחלות, כולל יתר לחץ דם, אי ספיקת לב, ischaemia. מספר מחקרים הראו כי לחץ דם חריג קשורה תמיד השריר החלק בכלי הדם מתפקדת contractility7,11,12,13. שיטת myograph מאפשרת חקירת contractility איזומטרי של העכבר כלי המושרה על ידי גירויים שונים כולל vasoconstrictors, מעכבי וסמים. מדידות מוצלחת של התכווצות יסייע לנו להבין את המנגנונים של לחץ דם ותחזוקה בפתוגנזה של מחלות הקשורות השריר החלק בכלי הדם, וכן לבחון גישות טיפוליות הרומן.
צמחי מרפא סיניים רבים היה בשימוש נרחב לטיפול קלינית של מחלות לב וכלי דם; עם זאת, למרכיביהם יעיל בדרך כלל נשאר לא ידוע. לפיכך, בידוד וזיהוי של הרכיבים יעיל הוא מאוד חשוב עבור פיתוח תרופות חדישות. האזנה מרובה myograph הטכנולוגיה מציעה גישה פשוטה לסינון הרכיבים הפעילים של עשבי תיבול. יש דיווח על מספר מחקרים באמצעות מערכת myograph כלי קטן לחקור התכווצות עורק מצע המעי העליון העכבר ואנו לזהות תרכובות טבעיות עם פעילות אנטי-יתר לחץ דם12,13,14. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עבור פעולת השירות myograph והערכת השפעת מרפה neoliensinine מבודדת מעוברים של זרע הלוטוס (GaertnNelumbo nucifera ). 14.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Multi wire myograph system</td>
			<td>DMT</td>
			<td>610-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel wire</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geuder dissection scissor</td>
			<td>DMT</td>
			<td>400431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps</td>
			<td>DMT</td>
			<td>300413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab/8SP</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>LabChart 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>G6152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100511-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography

הטכניקה myograph החוט משמש כדי להעריך את contractility של כלי הדם השרירים החלקים בתגובה depolarization, GPCR אגוניסטים/מעכבי, סמים. זה נמצא בשימוש נרחב מחקרים רבים בנושא פונקציות פיזיולוגיים של השריר החלק בכלי הדם, בפתוגנזה של כלי דם מחלות כגון יתר לחץ דם, ופיתוח של תרופות להרפיית שריר חלק. העכבר הוא חיה מודל נפוץ עם בריכה גדולה של מודלים של המחלה, זנים מהונדסים. הצגנו בשיטה זו כדי למדוד את התכווצות איזומטרי של העכבר עורק מצע המעי העליון בפירוט. קטע מ מ 1.4 של עורק מצע המעי העליון ההתנגדות העכבר היה מבודד, רכוב על תא myograph על-ידי העברת שני חוטי פלדה דרך לומן שלה. לאחר צעדים equilibration, נורמליזציה, קטע הקיבול היה potentiated על ידי פתרון גבוהה-K+ פעמיים לפני וזמינותו התכווצות. כדוגמה של היישום של שיטה זו של פיתוח תרופות, מדדנו את השפעת להרפיית הרומן חומר טבעי, neoliensinine, מבודד עשבים סיניים, העוברים של הזרע לוטוס (Nelumbo nucifera Gaertn..) על העכבר מצע המעי העליון העורקים. הקטעים כלי רכוב על תא myograph היו מגורה עם פתרון גבוהה-K+ . כאשר המתח כוח הגיעה תקופה ממושכת יציב, מינונים מצטברים של neoliensinine נוספו אל התא. מצאנו את שזה neoliensinine הייתה השפעה להרפיית למינון על התכווצות השריר החלק, ובכך רומז כי היא נושאת פעילות פוטנציאליות נגד יתר לחץ דם. בנוסף, כפי קטע הקיבול יכול לשרוד לפחות 4 שעות לאחר הרכבה ולתחזק contractility שנגזרות הפתרון גבוהה-K+ כי פעמים רבות, אנו ממליצים כי מערכת myograph תיל עשוי לשמש עבור התהליך זמן רב של והתרופות הקרנה.

אנו למדוד את contractility איזומטרי של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות מערכת האזנה מרובה myograph, העריך את השפעת להרפיית neoliensinine מכל העוברים זרע הלוטוס (GaertnNelumbo nucifera ). 14. עורק מצע המעי העליון ההתנגדות העכבר היה מבודד, ניקה של רקמות החיבור ולחתוך לחלקים 1.4-mm. קטע עורק הוכנס על ידי שני חוטי פלדה ב Ca2 +-H-T הפתרון בצלחת פטרי החופשי ולאחר מכן הקטע היה רכוב על שתי מלתעות תא myograph (איור 2 א). לאחר הרכבה על הקטע, שני החוטים הותאמו להיות במקביל, קרוב אבל לא נוגעים אחד בשני (איור 2B). לפני המדידה כוח, קטע כלי מנורמל, potentiated פעמיים על-ידי פתרון גבוהה-K+ כדי לייצב את כלי הקיבול. במהלך ההליך נורמליזציה, הכלי היה נמתח מספר פעמים עד שהגיע הערך של IC100, וכללה בכל מחזור מתיחה התכווצות חזקה, מהירה מרגוע, תחזוקה כוח ב 60 s (איור 3). ההתכווצות של השריר החלק בכלי הדם המושרה על ידי פתרון גבוהה-K+ בדרך כלל הראה בשני שלבים, שלב חזקים, תקופה ממושכת (איור 3). קטע קיבול יכול להיות משמש עוד ניסויים רק אם את גבוהה-K+-התכווצות עורר מופיע נורמלי לשחזור. מדידה טיפוסית עם neoliensinine מיוצג באיור4. כאשר המתח כוח שנגזרות גבוהה-K+ הגיעה תקופה ממושכת, הוספנו מינון מצטבר של neoliensinine (1, 2, 4, 6, 8 ו- 10 מיקרומטר) דרך החורים במכסה קאמרית. ככל במינונים, הכוח מופחת באופן תלוי מינון. התוצאה מצוינת ש-neoliensinine הזה הוא חומר להרפיית השריר החלק בכלי הדם שפועל באופן פוטנציאלי תרופות נגד יתר לחץ דם מועמד14.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig1.jpg"> איור 1: תיאור סכמטי של עורקי הרכבה הליך. הקווים הכחולים מייצגים את החוטים, המלבן האדום מייצג את העורק. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig2.jpg"> איור 2: קטע עורק מצע המעי העליון העכבר רכוב על תא myograph. (א) קטע עורק מצע המעי העליון העכבר רכוב על שתי הלסתות באמצעות שני חוטי פלדה. הבר לבן = 2 מ מ (B) A מיקרוסקופיים תמונת קטע עורק מצע המעי העליון של עכבר נטען לפי לוח (א). פס שחור = 0.5 מ מ. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig3.jpg"> איור 3: לשרטוטים המקורי נציג מציג את תהליך הנורמליזציה ואת potentiation על-ידי פתרון גבוהה-K+ . לאחר הגירוי גבוהה-K+ השנייה, ניתן לבצע את הניסוי רגיל. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58064/58064fig4.jpg"> איור 4: מעקב נציג של עורק מצע המעי העליון עכבר כי הוא מזמין גבוהה-K + פתרון ומשוחרר ואז על-ידי הוספת מינון מצטבר של neoliensinine. ככל במינונים, הכוח מופחת באופן תלוי מינון <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/58064/58064fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography at JoVE.com

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

הטכניקה myograph החוט משמש כדי לחקור פונקציות השריר החלק בכלי הדם, תרופות חדשות מסך. אנחנו מדווחים על פרוטוקול מפורט עבור מודדים את contractility איזומטרי של עורק מצע המעי העליון העכבר, הקרנת מרפה החדש של השריר החלק בכלי הדם.

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

14.6K Views.  Nanjing University. הטכניקה myograph החוט משמש כדי לחקור פונקציות השריר החלק בכלי הדם, תרופות חדשות מסך. אנחנו מדווחים על פרוטוקול מפורט עבור מודדים את contractility איזומטרי של עורק מצע המעי העליון העכבר, הקרנת מרפה החדש של השריר החלק בכלי הדם.

Video: Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

התכווצות העורקים mesenteric ללימודי הרפיה באמצעות Myography בנקאית אוטומטית

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

מדידת לחץ תוך גולגולתי אפידורל בחולדות באמצעות מתמר סיבים אופטיים לחץ

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly hydrated, forming a substantial endothelial surface layer (ESL) that contributes to the maintenance of endothelial function. As the endothelial glycocalyx is often aberrant in vitro and is lost during standard tissue fixation techniques, study of the ESL requires use of intravital microscopy. To best approximate the complex physiology of the alveolar microvasculature, pulmonary intravital imaging is ideally performed on a freely-moving lung. These preparations, however, typically suffer from extensive motion artifact. We demonstrate how closed-chest intravital microscopy of a freely-moving mouse lung can be used to measure glycocalyx integrity via ESL exclusion of fluorescently-labeled high molecular weight dextrans from the endothelial surface. This non-recovery surgical technique, which requires simultaneous brightfield and fluorescent imaging of the mouse lung, allows for longitudinal observation of the subpleural microvasculature without evidence of inducing confounding lung injury.

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx/endothelial surface layer is ideally studied using intravital microscopy. Intravital microscopy is technically challenging in a moving organ such as the lung. We demonstrate how simultaneous brightfield and fluorescent microscopy may be used to estimate endothelial surface layer thickness in a freely-moving in vivo mouse lung.

במדידת vivo של שכבת פני שטח האנדותל ריאתי המאוסה

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

הערכת myogenic תגובה וVasoactivity בעורקי ההתנגדות mesenteric שימוש Myography לחץ

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential phenotypic changes are best assessed by measurement of the changes in lung elasticity. To best understand specific mechanisms underlying such pathologies in mice, it is essential to make functional measurements that can reflect the developing pathology. Although there are many ways to measure elasticity, the classical method is that of the total lung pressure-volume (PV) curve done over the whole range of lung volumes. This measurement has been made on adult lungs from nearly all mammalian species dating back almost 100 years, and such PV curves also played a major role in the discovery and understanding of the function of pulmonary surfactant in fetal lung development. Unfortunately, such total PV curves have not been widely reported in the mouse, despite the fact that they can provide useful information on the macroscopic effects of structural changes in the lung. Although partial PV curves measuring just the changes in lung volume are sometimes reported, without a measure of absolute volume, the nonlinear nature of the total PV curve makes these partial ones very difficult to interpret. In the present study, we describe a standardized way to measure the total PV curve. We have then tested the ability of these curves to detect changes in mouse lung structure in two common lung pathologies, emphysema and fibrosis. Results showed significant changes in several variables consistent with expected structural changes with these pathologies. This measurement of the lung PV curve in mice thus provides a straightforward means to monitor the progression of the pathophysiologic changes over time and the potential effect of therapeutic procedures.

Here we present a protocol to simply and reliably measure the lung pressure-volume curve in mice, showing that it is sufficiently sensitive to detect phenotypic parenchymal changes in two common lung pathologies, pulmonary fibrosis and emphysema. This metric provides a means to quantify the lung&#8217;s structural changes with developing pathology.

מדידה של עקומת לחץ-נפח ריאות עכבר

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

דגם Murine של עורק הירך חוט פגיעה בהשרשה של perivascular החדרת תרופות תיקון

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...