Dr. Khan hibe desteğinden NIH/NICHD K12HD052892, Alfa-1 Vakfı, Hillman Vakfı ve Pittsburgh karaciğer Araştırma Merkezi kabul eder. Dr. Michalopoulos hibe desteğinden NIH/NIDDK P01DK096990 eder. Anne Orr mükemmel ve cömert teknik yardım için teşekkür ederiz. Biz de Dr David A. Geller için minnettar nakli/kemirgen mikrocerrahi laboratuvar erişim sağlamak için vardır.

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi Pittsburgh Üniversitesi etik kurallarına uygun olarak yapılmıştır.
1. temel teknikleri ve ortak yordamlar
<ol><li>Otoklav kullanmadan önce tüm mikrocerrahi ekipman.</li>
	<li>Fare anestezi tarafından öldürülmesi önlemek için onun nefes desen dikkatlice kontrol edin.</li>
	<li>Organları ve bağırsak organlara zarar verme ve kanama neden önlemek mümkün olduğu kadar az dokunmak. Islak pamuk temizleme bezi veya gazlı bez sünger ile kanama Puan tuşuna basın.</li>
	<li>Islak pamuk temizleme bezi organları nazik manipülasyon için kullanın. Islak, dokuma olmayan gazlı bez sünger iki farklı boyutta kullanıldığından, 3,5 × 3,5 cm ve 6.0 × 6,0 cm. daha küçük olan bütün karaciğer geri çekmek için kullanın. Büyük bir küçük ve büyük bağırsak sarmak için kullanın.</li>
</ol>2. presurgical hazırlık
<ol><li>Erkek c57/b6 fareler, 8-12 hafta-in yaş (vücut ağırlığı yaklaşık 20-35 g ne zaman) kısmi safra kanalı ligasyonu için kullanın.</li>
	<li>Fareler anestezi indüksiyon kadar su ve yiyecek ücretsiz erişmesine izin vermek.</li>
</ol>3. kısmi safra kanalını ligasyon işlemi
<ol><li>Fareyi bir indüksiyon Odası 1.5-%2.0 isoflurane ve 1 L/dak oksijen karışımı ile hayvan koyarak anestezi. Hayvan solunum oranı gözlemleyerek dikkatle izleyin. Hayvan solunum hızı saniyede bir nefes olduğunda, fare iyi imzalat. Beri açık bacak çekilmesi refleks daha hızlı kaybolur, hind bacak ayak de para çekme refleks olmaması onaylamak için çimdik. Gözleri Korneal ülser önlemek için bir oftalmik yağlama ajan ile yağlanması. Not Bu ilk doz analjezik, pre-operatively ağrı reseptörlerinin uyarımı önlemek için verilebilir.</li>
	<li>Karın duvarının saç makasları ile tıraş ve cerrahi mikroskop altında cerrahi masanın üzerine fareyi getirin. Tablo için tüm uzuvların bant ile düzeltmek. İsoflurane inhalasyon genel anestezi altında fare korumak için kullanın.<ol>
<li>İsoflurane Buharlaştırıcı ayarlamak ve 2.0-%3.0 isoflurane indüksiyon için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Steril temizleme bezi kullanarak, karın duvarının dezenfekte ilk 0,3-0,5 ile % 70 etanol tarafından takip mL povidone-iyot topikal, uygulanan. Hayvan steril örtü ile örtülmelidir.</li>
	<li>Bir uzun karın Ensizyon xiphoid üzerinden makas ve Adson forseps kullanarak pubis için yapmak. İsoflurane 0.8-1.0 için azaltmak belgili tanımlık karın kesme yaptıktan sonra % bakım için.</li>
	<li>Karın boşluğu bir mikro-Retraktörü kullanarak açarsınız. Xiphoid sivrisinek Forseps ile basılı tutarak fareyi başkanı doğru geri çek. Sivrisinek forseps yumuşak kil kullanarak yerde düzeltmek.</li>
	<li>1-2 mL ılık (37 ° c) aşılamak sterilize edilmiş fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) karın organları zarar önlemek için karın boşluğu içine. Küçük bağırsak ıslak pamuk temizleme bezi ile tutun ve yavaşça fare başkanı doğru onları geri çek. Küçük bağırsak ve küçük bağırsak (şekil 1A) ağır yaralı önlemek için retroperitoneum arasında bağ kesilmiş.</li>
	<li>Bir ıslak, dokuma olmayan gazlı bez sünger ile küçük ve büyük bağırsak sarın. Onları karın boşluğu Kaudal yanına koyun. Bağırsak içinde steril gazlı bez sarılmış kirlenmesini önlemek için steril bol dökümlü sahada yerleştirilebilir.</li>
	<li>Yavaşça xiphoid doğru bütün Karaciğer karaciğer hilus ve hepato-duodenal bağ (şekil 1B) ortaya çıkarmak için bir küçük ıslak dokuma olmayan gazlı bez sünger kullanarak geri çek.</li>
	<li>Karaciğer hilus anatomisi onaylamak için kontrol edin. Ortak safra kanalını portal ven ventral tarafta yer alır. Ana safra kesiştiği yerde, karaciğer hilus içine drenaj sağ ve sol hepatik safra kanalını Mekanlar onaylayın.</li>
	<li>Sol hepatik safra kanalını da boşalmasına neden olur sol lob tanımlamak ve 10-0 naylon Dikiş dikiş iğne (şekil 2A) kör tarafı kullanarak bir çembere. Portal ven, hepatik arter ve karaciğer yüzey yaralanmasına kaçının.</li>
	<li>10-0 naylon ile sol safra kanalını ligate. (Şekil 2B).</li>
	<li>Küçük ve büyük bağırsak operasyon öncesi aynı konumda ıslak pamuk temizleme bezi kullanarak yerleştirebilirsiniz.</li>
	<li>Hiçbir bağırsak burulma ve intra abdominal kanama onaylamak sonra kas ve 4-0 vicryl ile iki kat deride kapatın. Örgülü dikiş (Vicryl) Cilt kapatılması için kullanılan, ancak monofilament enfeksiyon olasılığını azaltmak için tercih edilir. Not: fasya tarafından sürekli xiphoid pubis için dikiş ve deri xiphoid için apış arasından sürekli dikiş tarafından kapatın.</li>
	<li>Anestezi belgili tanımlık kesme kapattıktan sonra kes.</li>
</ol>4. Postoperatif tedavi ve takibi
<ol><li>Sadece ameliyattan sonra fare dorsal cilt pinch ve Buprenex (0.1 mg/kg) ve sülfadiyazin (100 mg/kg) subkutan, Buprenex enjeksiyon her 12 h için 3 gün ve sülfadiyazin her 24 h 3 gün sırasıyla ardından enjekte11,12 ,13. Not Bu ilk doz analjezik, pre-operatively ağrı reseptörlerinin uyarımı önlemek için verilebilir. Sülfadiyazin ve diğer peri-operatif antibiyotikler yalnızca nakli çalışmalarda kullanılanlar gibi bağışıklık bastırılmış hayvanlar için gereklidir. Not: ameliyat başarıyla gerçekleştirilirse, fare genellikle 30 dk. içinde kurtarır etkinlik farelerin Preoperatif koşulu olarak hemen hemen aynı olacak.</li>
	<li>Fareler tehlike belirtisi için her gün kontrol edin.<ol>
<li>Farelerin karaciğer ve diğer doku örneği tanımlanan zaman noktaları (Yani, 7, 14, 21 gün) sonra pBDL temin etmek için genel anestezi altında servikal çıkığı tarafından kurban.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Higgins, G. M., Anderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+pathology+of+the+liver+-+Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal.">Experimental pathology of the liver - Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).</li><li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+the+common+bile+duct.">Ligation of the common bile duct.</a> The Journal of Pathology and Bacteriology. 35 (5), 769-798 (1932).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+bile+duct+obstruction:+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat.">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li><li>Michalopoulos, G. K., Barua, L., Bowen, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transdifferentiation+of+rat+hepatocytes+into+biliary+cells+after+bile+duct+ligation+and+toxic+biliary+injury.">Transdifferentiation of rat hepatocytes into biliary cells after bile duct ligation and toxic biliary injury.</a> Hepatology. 41 (3), 535-544 (2005).</li><li>Dipaola, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+intramural+epithelial+networks+linked+to+peribiliary+glands+that+express+progenitor+cell+markers+and+proliferate+after+injury+in+mice.">Identification of intramural epithelial networks linked to peribiliary glands that express progenitor cell markers and proliferate after injury in mice.</a> Hepatology. 58 (4), 1486-1496 (2013).</li><li>Guyot, C., Combe, C., Desmouliere, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+common+bile+duct+ligation+in+rat:+A+relevant+in+vivo+model+to+study+the+role+of+mechanical+stress+on+cell+and+matrix+behaviour.">The common bile duct ligation in rat: A relevant in vivo model to study the role of mechanical stress on cell and matrix behaviour.</a> Histochem Cell Biol. 126 (4), 517-523 (2006).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bile+duct+ligation+on+bile+acid+composition+in+mouse+serum+and+liver.">Effect of bile duct ligation on bile acid composition in mouse serum and liver.</a> Liver Int. 32 (1), 58-69 (2012).</li><li>Tag, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+duct+ligation+in+mice:+induction+of+inflammatory+liver+injury+and+fibrosis+by+obstructive+cholestasis.">Bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis.</a> J Vis Exp. (96), e52438 (2015).</li><li>Osawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+mediators+induce+fibrogenic+effects+in+normal+liver+after+partial+bile+duct+ligation.">Systemic mediators induce fibrogenic effects in normal liver after partial bile duct ligation.</a> Liver Int. 26 (9), 1138-1147 (2006).</li><li>Khan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Duct+Ligation+Induces+ATZ+Globule+Clearance+in+a+Mouse+Model+of+alpha-1+Antitrypsin+Deficiency.">Bile Duct Ligation Induces ATZ Globule Clearance in a Mouse Model of alpha-1 Antitrypsin Deficiency.</a> Gene Expr. 17 (2), 115-127 (2017).</li><li>Birkhead, H. A., Briggs, G. B., Saunders, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicology+of+cefazolin+in+animals.">Toxicology of cefazolin in animals.</a> J Infect Dis. 128, 378 (1973).</li><li>Kunst, M. W., Mattie, H., van Furth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+efficacy+of+cefazolin+and+cephradine+in+neutropenic+mice.">Antibacterial efficacy of cefazolin and cephradine in neutropenic mice.</a> Infection. 7 (1), 30-34 (1979).</li><li>Traul, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+studies+of+post-surgical+buprenorphine+therapy+for+mice.">Safety studies of post-surgical buprenorphine therapy for mice.</a> Lab Anim. 49 (2), 100-110 (2015).</li><li>Carlson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+PiZ+alpha+1-antitrypsin+causes+liver+damage+in+transgenic+mice.">Accumulation of PiZ alpha 1-antitrypsin causes liver damage in transgenic mice.</a> J Clin Invest. 83 (4), 1183-1190 (1989).</li><li>Sifers, R. N., Finegold, M. J., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1-antitrypsin+deficiency:+accumulation+or+degradation+of+mutant+variants+within+the+hepatic+endoplasmic+reticulum.">Alpha-1-antitrypsin deficiency: accumulation or degradation of mutant variants within the hepatic endoplasmic reticulum.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 1 (5), 341-345 (1989).</li><li>Rudnick, D. A., Shikapwashya, O., Blomenkamp, K., Teckman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indomethacin+increases+liver+damage+in+a+murine+model+of+liver+injury+from+alpha-1-antitrypsin+deficiency.">Indomethacin increases liver damage in a murine model of liver injury from alpha-1-antitrypsin deficiency.</a> Hepatology. 44 (4), 976-982 (2006).</li><li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+bile+duct+ligation+in+mice:+a+novel+model+of+acute+cholestasis.">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li><li>Glaser, S. S., Alpini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+cholehepatic+shunt+as+a+potential+therapy+for+primary+sclerosing+cholangitis.">Activation of the cholehepatic shunt as a potential therapy for primary sclerosing cholangitis.</a> Hepatology. 49 (6), 1795-1797 (2009).</li><li>Gurpinar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+sulindac+derivative+inhibits+lung+adenocarcinoma+cell+growth+through+suppression+of+Akt/mTOR+signaling+and+induction+of+autophagy.">A novel sulindac derivative inhibits lung adenocarcinoma cell growth through suppression of Akt/mTOR signaling and induction of autophagy.</a> Mol Cancer Ther. 12 (5), 663-674 (2013).</li><li>Alpini, G. G., Francis, H., Marzioni, M., Venter, J., Phinizy, J., LeSage, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Madame Curie Bioscience Database. , (2013).</li><li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice.">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J Surg Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li><li>Delhove, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+in+vivo+bioimaging+of+hepatocyte+transcription+factor+activity+following+cholestatic+liver+injury+in+mice.">Longitudinal in vivo bioimaging of hepatocyte transcription factor activity following cholestatic liver injury in mice.</a> Sci Rep. 7, 41874 (2017).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homing+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+mediated+by+sphingosine+1-phosphate+contributes+to+liver+fibrosis.">Homing of bone marrow mesenchymal stem cells mediated by sphingosine 1-phosphate contributes to liver fibrosis.</a> J Hepatol. 50 (6), 1174-1183 (2009).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+released+from+cholestatic+rat+livers+possibly+involved+in+inducing+bone+marrow+hepatic+stem+cell+priming.">Factors released from cholestatic rat livers possibly involved in inducing bone marrow hepatic stem cell priming.</a> Stem Cells Dev. 17 (1), 143-155 (2008).</li><li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propitious+role+of+bone+marrow-derived+mononuclear+cells+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model:+potential+clinical+implications+in+obstructive+cholangiopathy.">Propitious role of bone marrow-derived mononuclear cells in an experimental bile duct ligation model: potential clinical implications in obstructive cholangiopathy.</a> Pediatr Surg Int. 29 (6), 623-632 (2013).</li></ol>

Yazarlar hiçbir açıklamalar var.

CBDL obstrüktif Histiositoz için en yaygın deneysel teknik olmakla birlikte, kemirgen birden çok sorunlar mevcut. Bir bitiş noktası elde etmek için gereken ameliyat sonrası gün sayısına bağlı olarak, hayvanların önemli morbidite ve mortalite zaman ilerledikçe yaşayabilirsiniz. Doku hasarı ve safra nekroz derecesini anormal karaciğer parankimi ve fonksiyon için taban çizgisi göstermek bazı karaciğer hastalığı, transgenik fare modelleri ile çalışırken daha da şiddetlenir. CBDL için karşılaştırıldığında, pBDL olarak bildirilen sınırlıdır, ama bu tekniği olumsuz sonuçları ve hayvan kayıpları azaltmak için select deneylerde bir alternatif olarak uygulanabilir.
PBDL yöntemi değişimler de bildirilmistir. Yöntem Heinrich vd., dış bir eğri iğne ortak safra kanalını ve iğne17etrafında bağ ardından ortak safra kanalını bitişik yer alıyor. İğne sonra karın duvarı kapatma, safra kanalı17daralmış Lümen (Yani, alt toplam tıkanıklığı) ile sınırlı safra akışı sonuçlanan önce kaldırılır. Bu işlem sırasında safra kesesi de kolesistit17engellemek için alınır. Yazarlar bu yöntem kronik değişiklikleri17yerine akut Histiositoz çalışmaya daha yararlı olduğu sonucuna vardı. Daha az hayvan deney için gerekli olan bu yüzden buna ek olarak, biz burada açıklanan pBDL yöntemi sıkı, aynı hayvan ve birleştirilmiş ve unligated ("sham") loblar ile kontrol edilir. Şiddetli temel karaciğer hastalığı ile bile transgenik fareler daha uzun bitiş noktalarını (2-3 hafta) sürekli olabilir. Tam olarak ortaya çıkarmak ve mikrodiseksiyon yöntemlerle, damar yapıları ve safra kanalları yaralanma önlemek için sınırlı manipülasyon ile safra ağacının tanımlamak için özen göstermelidir.
Safra salgı işlevi ve Işınlayıcılar doğrudan karşılaştırmalar histolojik ve moleküler teknikleri kullanılarak yapılabilir böylece ideal deneyde, aynı zamanda ve birleştirilmiş (solda) ve unligated (sağda) loblar dokulardan hasat edilecek. Her ne kadar serum karaciğer biochemistries şiddetli Histiositoz yansıtmaz, ve birleştirilmiş LOB obstrüktif Histiositoz10ile ilişkili histolojik yapılan değişiklikleri göstermektedir. Bu model içinde karaciğer tutulan safra bileşenlerinin (örneğin, safra asitlerinin, lipitler, kolesterol) doğrudan microenvironmental etkileri çalışmaya yararlıdır. Gelecekteki bir çalışma pBDL manevra, nerede belirli safra asitleri ve uyuşturucu tetkikine18,19' a doğrudan cholangiocytes semptomlar cholehepatic araştırmak için kabul edilebilir. Endojen safra asitlerinin verimsiz hepatositler tarafından Birleşik pasif de manevra, hypercholeresis ve alkanlinization safra artmış bikarbonat salgılanmasını20ile giden cholehepatic geçmesi safra epitel tarafından emilir. PBDL teknik uygulama ilaç keşif roman safra asidi tedavi karaciğer hastalığı soruşturma altında için farmakolojik mekanizmaları tanımlayarak kolaylaştırabilir.
PBDL için ek uygulamalar safra ağacının genişletebilirsiniz. Reversibility cBDL ve ilişkili etkileri açıklanan ve bu da pBDL için iç kontrol21doğrudan karşılaştırma ile uygulanabilir. Benzer şekilde, boyuna vivo içinde bioimaging floresan muhabir ifade fare karaciğer sonra cBDL22, pBDL deneyler için güçlü etkileri ile çalışılmıştır. Ayrıca, pBDL kullanarak kemirgen deneyleri soy izleme veya "hücreleri, karaciğer hasarı, daha fazla izlenen vivo içinde olmalarını sağlayan bir site için kemik iliği elde edilen Mezenkimal hücreler gibi dolaşan homing" dahil potansiyeline sahip hassas23,24,25.
Açıkçası, karaciğer hasarı ve tamir, safra fizyolojisi ve ilaç metabolizması ile birlikte çalışmak için bir dahili olarak kontrollü ve tekrarlanabilir teknik olarak yalnız pBDL için yaygın uygulamalar vardır. İlerleme ve kronik Histiositoz olgusu sistemik etkileri değerlendirmek amacıyla deneyler için cBDL hala en çok tercih edilen yöntemdir; Ancak, pBDL hala böyle bulguları desteklemek için tamamlayıcı veri ekleyebilirsiniz.

Akut karaciğer hasarı ve tamir, kısmi hepatectomy veya ortak safra kanalını ligasyonu (cBDL), gibi cerrahi modelleri Rodents yıllardır karaciğer rejenerasyonu ve pathobiology1,2eğitim için kullanılmıştır. CBDL içinde (da boşalmasına neden olur tüm safra karaciğerde üretilen) ortak safra kanalını bakmaksızın siroz3nihai ilerleme ile ameliyatı takiben ilk 2-3 hafta içinde obstrüktif Histiositoz, inflamasyon ve fibrozis ile sonuçlanan. Ayrıca, safra kanalını yayılması, transdifferentiation ve indüksiyon ikamet karaciğer progenitör hücre cBDL4,5özellikleridir. Her ne kadar cBDL iyi vahşi tipi fareler ve bu suşlar normal karaciğerleri6,7,8ile tekrarlanabilir sonuçlar ile karakterize olan belirli obstrüktif cholangiopathy, mekanizmalarının elucidates yordam teknik olarak karaciğer hastalıkları, Yüksek morbidite ve mortalite zaman içinde safra tıkanıklığı nedeniyle beklenenden daha fazla hayvan gerektiren bazı transgenik fare modellerinde rağbet görebilir. Bu teknik aynı zamanda aksi değil tahammül stres uzun süreli saat ders deneyler cBDL takip altında yatan ile transgenik farelerde karaciğer hastalığı, eğitim için faydalıdır.
pBDL bazı bu sorunları sorunu gidermek üzere makul bir alternatif sağlar. Farelerde vahşi-tip çalışmalarda ilk pBDL yerel olarak oyunculuk ve sistemik inflamasyon9arabulucu ayırt etmek amaçlanmıştır. PBDL, sağ ve sol hepatik safra kanalları ortak safra kanalını yukarıda ana safra izdiham dikkatle hilus görüntülenir ve yalnızca sol hepatik safra kanalını yerelleştirilmiş obstrüktif Histiositoz oluşturmak için bakmaksızın. pBDL cBDL için birçok avantaj sunar. PBDL, unligated sağ LOB aynı sistemik etkileri, beslenme durumu veya faktörler dolaşan gibi tabi ve birleştirilmiş sol lob için aynı şekilde eşleşen bir iç kontrol olarak hizmet vermektedir. Sistemik pro-inflamatuar aracılar mevcut olmasına rağmen Osawa vd. daha az fibrozis ve nekroz unligated loblar içinde gözlenen ancak inflamatuar hücreler ve dönüştürme büyüme faktörü β ifade ve birleştirilmiş LOB9arttı.
Daha yakın zamanlarda, pBDL tutulan safra10karaciğer parenkima etkilerini incelemek için yeniden. Aynı hayvan iç kontrol (unligated "sham") ve deneysel grupları için kullanarak, pBDL etkin bir şekilde sırayla daha düşük maliyetli olan deney gerekli hayvan sayısı halves. Böylece ders deneme ideal zaman (≥2 hafta) ve birleştirilmiş lobunda elde edilebilir fareler pBDL çok daha iyi, etkilerini tolere. En önemlisi, pBDL doğrudan intrahepatic etkileri obstrüktif Histiositoz olgusu ayırt edebilir ve safra bileşenleri ve birleştirilmiş LOB unligated denetim LOB karşılaştırıldığında, korunur. Genel olarak, pBDL LOB özel efektler karaciğerde yerelleştirilmiş Histiositoz olgusu çalışmaya çekici bir yöntemdir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1040px;" width="1039">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Microscope-Leica Wild M650, 6&#8211;40&#215; magnification</td>
			<td style="width:336px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:195px;">n/a</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tec 3 isoflurane funnel fill vaporizer</td>
			<td>General Anesthetic Services</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stevens Tenotomy Scissors</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments Corporation</td>
			<td>ASSI.9193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adson Forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mosquito classic delicate hemostatic forceps</td>
			<td>Codman</td>
			<td>30-4472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-retractor</td>
			<td>Murdock; Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-6550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nonwoven gauze sponges</td>
			<td>Fisherband</td>
			<td>870-PC-DBL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puritan 6&#8221; Small Cotton Swab w/Wooden Handle</td>
			<td>Puritan Medical Products Company</td>
			<td>868-WCS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont SS Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/13.5cm</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11203-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont SS Forceps - Standard Tips/Angled 45&#176;/Inox/13.5cm</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Spring Scissors - 3mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microneedle holder</td>
			<td>Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td>FD231R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro AROSuture, sterile 10-0 nylon suture, 70 &#181;m, TAP points</td>
			<td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
			<td>T4A10N07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J662H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-ml Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon tissue culture dish, 60 &#215; 15 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:343px;">Isoflurane, United States Pharmacopeia (USP) liquid for inhalation, 250 ml</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenex injectable (buprenorphine hydrochloride)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 12496-0757-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cefazolin for injection , USP</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-238-61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PVP scrub solution (povidone&#8211;iodine 7.5%)</td>
			<td>Medline</td>
			<td>NDC 12496-0757-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70% Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:343px;">Phosphate Buffered Saline Without Calcium or Magnesium</td>
			<td style="width:336px;">LONZA</td>
			<td style="width:195px;">17-516F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Sirius Red</td>
			<td style="width:336px;">Sigma</td>
			<td style="width:195px;">365548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Hematolxylin</td>
			<td style="width:336px;">Fisher (Richard-Allan Scientific)</td>
			<td style="width:195px;">22-050-111 (7211)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Eosin</td>
			<td style="width:336px;">Anatech (Fisher)</td>
			<td style="width:195px;">832 (NC9686037)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Formalin</td>
			<td style="width:336px;">Fisher</td>
			<td style="width:195px;">SF100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

partial bile duct ligation in the mouse: a controlled model of localized obstructive cholestasis

Kemirgen, obstrüktif Histiositoz ve safra kanalını yayılması için kurulan bir cerrahi yüntem tam safra kanalı ligasyonu (cBDL) ortak safra kanalını var. Ancak, uzun süreli deneyler artan morbidite ve mortalite için yol açabilir. Temel alınan karaciğer hastalığı olan seçin fare suşları içinde anlamlı karşılaştırmalar bile tek bir LOB hayvan kayıp ve giderleri azaltabilir karaciğer ligasyonu ile yapılabilir. Burada, biz kısmi safra kanalı ligasyonu (pBDL) içinde sadece sol hepatik safra kanalını bakmaksızın, Mouse sol lob ama kalan loblar safra tıkanıklığı neden açıklar. Unligated LOB ve birleştirilmiş loblar için dahili bir denetim ne zaman aynı hayvan aynı koşullarda tabi görür çünkü dikkatli mikrocerrahi teknik ile pBDL deneyler düşük maliyetli, olabilir. CBDL farklı olarak, bir ayrı sahte işletilen kontrol grubu gerekli değildir. pBDL doğrudan karşı Histiositoz ve diğer muhafaza safra bileşenlerinin sistemik etkileri lokalize karşılaştırmak için son derece yararlıdır. pBDL da ilaçlar ve hücre göç ile ilgili mekanizmalar araştırmak için yeni bir yöntem olarak güvenilemez.

Bu tipik deneme için pBDL (A1AT) Alfa-1 antitripsin eksikliği bulunan insan karaciğer hastalığı özetlemek onaylatılacak PiZ transgenik fareler içinde gerçekleştirildi. PiZ fare mutant insan A1AT gen ve organizatörü, intron ve akış yukarı ve aşağı akım bölgeler14kanat ~ 2 kilobases ile birlikte Kodlayıcı bölgeler içeren birden çok genomik DNA parçaları oluşan bir transgene overexpresses, 15. Normal A1AT karaciğerde üretilen bir salgılanan serum proteindir. A1AT mutant şeklinde toksik stres neden karaciğerde kendiliğinden birikir çözünmez protein toplamları oluşturur. Deneyler protein toplama16doruklarına bağlandığınızda bu hastalığın en şiddetli fenotip hızlı 3 - ay yaşlı erkek PiZ fareler kullanılmıştır.
Serum karaciğer biochemistries içinde pBDL ve cBDL PiZ fareler (Tablo 1)10karşılaştırıldı. Karaciğer enzimleri alanin aminotransferaz (ALT) ve aspartat aminotransferaz (AST) biyolojik hepatosellüler yaralanma, iken toplam serum bilirubin (TSB) Histiositoz derecesini ölçer. Genel olarak, serum değerleri temel10için benzer olduğu gibi pBDL için tabi fareler şiddetli karaciğer hasarı veya Histiositoz, belirtileri yoktu. Fareler (teknik sorunlar, safra kanalını veya vasküler yaralanmalar gibi) nedeniyle başarısız olan pBDL ile serum değerleri ile önemli ölçüde yükseltilmiş karaciğer enzimleri ve tekerlekli sandalye Basketbolu cBDL fareler için benzer gösterecektir unutmamak gerekir. Klinik olarak, başarısız olan pBDL ile fareler daha Sarılıklı ve sıkıntılı, safra sızıntıları, asit, peritonit ve/veya kanama bulguları ile görünür ve sonuçta kurban edilmesi gerekecektir.
Yana pBDL için tabi fareler LOB özgü obstrüktif Histiositoz geliştirmek, onlar cBDL içinde görülen şiş, karanlık, safra dolu safra kesesi alın. Unligated LOB onların normal, koyu, kirmizi-kahverengi rengi (şekil 3) korur iken sadece ve birleştirilmiş LOB renkte, solgun görünür. Artan safra kanalını yayılması ve fibrozis ve birleştirilmiş LOB (şekil 4) ile karaciğer Histoloji de, önemli farklılıklar vardır. 10
<img alt="Table 1" src="/files/ftp_upload/56930/56930table1.jpg"> Tablo 1: Safra kanalı ligasyonu (cBDL) tamamlamak için temsilcisi serum karaciğer biochemistries kısmi safra kanalı ligasyonu (pBDL) üzerinden karşılaştırıldığında 10 . Her zaman noktası 3-4 fareler temsil eder. Not PiZ transgenik fareler bir c57/bl6 arka plan üzerinde değildir. Laboratuvar referans aralıkları da parantez içinde verilmiştir. (WT, vahşi-türü; TSB, toplam serum bilirubin; ALT, alanin aminotransferaz; ALP, alkalen fosfataz).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56930/56930fig1.jpg"> Resim 1:karın boşluğuna ve hepatobiliary sistemi poz. (A)küçük bağırsak yavaşça bağırsak yaralanmayı önlemek için çekildi ve bağlayan ligament retroperitoneum ücretsiz kesilir. (B) karaciğer safra ağacının maksimal görselleştirme karaciğer hilus (ok) izin vermek için geri hafifçe çekildi. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56930/56930fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56930/56930fig2.jpg"> Resim 2 : Kısmi safra kanalı ligasyonu. (A) cerrahi iğne künt sonu özenle naylon dikiş sol hepatik safra kanalını, izdiham ortak safra kanalını (orijinal büyütme 40 x) için yukarıda etrafında sarmak için kullanılır. (B) sol hepatik safra da normalde karaciğer sol lob boşalmasına neden olur kanalını başarılı bağ. Kalan safra kanalları unligated (özgün büyütmeye 40 X) vardır. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56930/56930fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56930/56930fig3.jpg"> Şekil 3: Brüt görünümünü WT (c57/b6) fare karaciğer 14 gün sonra pBDL. Onların normal, koyu, kirmizi-kahverengi rengi unligated loblar korumak iken ve birleştirilmiş sol lob renk (oklar), soluk göründüğünü unutmayın. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56930/56930fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56930/56930fig4.jpg"> Şekil 4 : LOB özel gün 14 pBDL unligated sağ (R) LOB ve birleştirilmiş sol (L) LOB WT (c57/b6) farelerde için karşılaştırma üzerinden temsilcisi karaciğer dokusu bölümlerde değiştirir. (A)Hematoksilen ve Eozin (H & E) Boyama artış gösteren safra kanalını yayılması (oklar) ve birleştirilmiş yan lopta. (B) Sirius kırmızı leke gösteren köprüleme fibrozis safra kanalını yayılması ve birleştirilmiş LOB eşlik. Histoloji fare daha önce olmuştur PiZ için10bildirdi. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56930/56930fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis at JoVE.com

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

Burada, karaciğer hasarı ve rejenerasyon Rodents cerrahi bir model olarak kısmi safra kanalı ligasyonu mevcut.

Kısmi safra kanalı ligasyonu fare: kontrollü manken yerelleştirilmiş obstrüktif Histiositoz olgusu

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

partial-bile-duct-ligation-mouse-controlled-model-localized

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

15.4K Görüntüleme.  Jichi Medical University. Burada, karaciğer hasarı ve rejenerasyon Rodents cerrahi bir model olarak kısmi safra kanalı ligasyonu mevcut.

Video: Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

The Microfluidic Probe: Operation and Use for Localized Surface Processing

Microfluidic devices allow assays to be performed using minute amounts of sample and have recently been used to control the microenvironment of cells. Microfluidics is commonly associated with closed microchannels which limit their use to samples that can be introduced, and cultured in the case of cells, within a confined volume. On the other hand, micropipetting system have been used to locally perfuse cells and surfaces, notably using push-pull setups where one pipette acts as source and the other one as sink, but the confinement of the flow is difficult in three dimensions. Furthermore, pipettes are fragile and difficult to position and hence are used in static configuration only. 
The microfluidic probe (MFP) circumvents the constraints imposed by the construction of closed microfluidic channels and instead of enclosing the sample into the microfluidic system, the microfluidic flow can be directly delivered onto the sample, and scanned across the sample, using the MFP. . The injection and aspiration openings are located within a few tens of micrometers of one another so that a microjet injected into the gap is confined by the hydrodynamic forces of the surrounding liquid and entirely aspirated back into the other opening. The microjet can be flushed across the substrate surface and provides a precise tool for localized deposition/delivery of reagents which can be used over large areas by scanning the probe across the surface. 
In this video we present the microfluidic probe1 (MFP). We explain in detail how to assemble the MFP, mount it atop an inverted microscope, and align it relative to the substrate surface, and finally show how to use it to process a substrate surface immersed in a buffer.

In this video we present the microfluidic probe1 (MFP). We explain in detail how to assemble the MFP, mount it atop an inverted microscope, and align it relative to the substrate surface, and finally show how to use it to process a substrate surface immersed in a buffer solution.

Mikroakışkan Probe: Çalışma ve Yerelleştirilmiş Yüzey İşleme için kullanın

Microfluidic devices allow assays to be performed using minute amounts of sample and have recently been used to control the microenvironment of cells. ...

Biyoloji

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal model of the condition and an important correlate for human Meniere's disease. In 1965, Robert Kimura and Harold Schuknecht first described an intradural approach for obstruction of the endolymphatic duct (Kimura 1965). Although effective, this technique, which requires penetration of the brain's protective covering, incurred an undesirable level of morbidity and mortality in the animal subjects. Consequently, Andrews and Bohmer developed an extradural approach, which predictably produces fewer of the complications associated with central nervous system (CNS) penetration.(Andrews and Bohmer 1989) 
The extradural approach described here first requires a midline incision in the region of the occiput to expose the underlying muscular layer. We operate only on the right side. After appropriate retraction of the overlying tissue, a horizontal incision is made into the musculature of the right occiput to expose the right temporo-occipital suture line. The bone immediately inferio-lateral the suture line (Fig 1) is then drilled with an otologic drill until the sigmoid sinus becomes visible. Medial retraction of the sigmoid sinus reveals the operculum of the endolymphatic duct, which houses the endolymphatic sac. Drilling medial to the operculum into the area of the endolymphatic sac reveals the endolymphatic duct, which is then packed with bone wax to produce obstruction and ultimately ELH. 
In the following weeks, the animal will demonstrate the progressive, fluctuating hearing loss and histologic evidence of ELH.

This video shows how to surgically obstruct the guinea pig's endolymphatic duct to produce endolymphatic hydrops.

Endolenfatik Kanal obliterasyonu endolenfatik hidrops Cerrahi İndüksiyon

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum (ER). However, the visualization of these mRNAs can be challenging. This is especially true when only a fraction of the mRNA is ER-associated and their distribution to this organelle is obstructed by non-targeted (i.e. "free") transcripts. In order to monitor ER-associated mRNAs, we have developed a method in which cells are treated with a short exposure to a digitonin extraction solution that selectively permeabilizes the plasma membrane, and thus removes the cytoplasmic contents, while simultaneously maintaining the integrity of the ER. When this method is coupled with fluorescent in situ hybridization (FISH), one can clearly visualize ER-bound mRNAs by fluorescent microscopy. Using this protocol the degree of ER-association for either bulk poly(A) transcripts or specific mRNAs can be assessed and even quantified. In the process, one can use this assay to investigate the nature of mRNA-ER interactions.

Here we describe a method to visualize endoplasmic reticulum-associated mRNAs in mammalian tissue culture cells. This technique involves the selective permeabilization of the plasma membrane with digitonin to remove cytoplasmic contents followed by fluorescent in situ hybridization to detect either bulk poly(A) mRNA or specific transcripts.

Memeli hücrelerinde endoplazmik retikulum lokalize mRNA&#39;ların görselleştirilmesi

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of genes within the mammary epithelium has been difficult to achieve due to the lack of appropriate targeting molecules that are independent of developmental stages such as pregnancy and lactation. Herein, we describe a technique for localized delivery of reagents to the mammary gland at any stage in adulthood via intraductal injection into the nipples of mice. The injections can be performed on live mice, under anesthesia, and allow for a non-invasive and localized drug delivery to the mammary gland. Furthermore, the injections can be repeated over several months without damaging the nipple. Vital dyes such as Evans Blue are very helpful to learn the technique. Upon intraductal injection of the blue dye, the entire ductal tree becomes visible to the eye. Furthermore, fluorescently labeled reagents also allow for visualization and distribution within the mammary gland. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents, and small molecules.

A protocol for the non-invasive intraductal delivery of aqueous reagents to the mouse mammary gland is described. The method takes advantage of localized injection into the nipples of mammary glands targeting mammary ducts specifically. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents and small molecules.

Fare meme bezi Lokalize İlaç Teslim Intradüktal Enjeksiyon

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

Fare Modeli Doğrulanması Hücre-spesifik şekilde LINC kompleksler bozacak

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

Bağırsak kısmi tıkanıklık bir fare modeli

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Isolation and 3D Collagen Sandwich Culture of Primary Mouse Hepatocytes to Study the Role of Cytoskeleton in Bile Canalicular Formation In Vitro

Hepatocytes are the central cells of the liver responsible for its metabolic function. As such, they form a uniquely polarized epithelium, in which two or more hepatocytes contribute apical membranes to form a bile canalicular network through which bile is secreted. Hepatocyte polarization is essential for correct canalicular formation and depends on interactions between the hepatocyte cytoskeleton, cell-cell contacts, and the extracellular matrix. In vitro studies of hepatocyte cytoskeleton involvement in canaliculi formation and its response to pathological situations are handicapped by the lack of cell culture, which would closely resemble the canaliculi network structure in vivo. Described here is a protocol for the isolation of mouse hepatocytes from the adult mouse liver using a modified collagenase perfusion technique. Also described is the production of culture in a 3D collagen sandwich setting, which is used for immunolabeling of cytoskeletal components to study bile canalicular formation and its response to treatments in vitro. It is shown that hepatocyte 3D collagen sandwich cultures respond to treatments with toxins (ethanol) or actin cytoskeleton altering drugs (e.g., blebbistatin) and serve as a valuable tool for in vitro studies of bile canaliculi formation and function.

Presented here is a protocol for the isolation of mouse hepatocytes from adult mouse livers using a modified collagenase perfusion technique. Also described is the long-term culture of hepatocytes in a 3D collagen sandwich setting as well as immunolabeling of the cytoskeletal components to study bile canalicular formation and its response to treatment.

İzolasyon ve 3D Kollajen Sandviç Kültürü Birincil Fare Hepatositler Safra Canaliküler Oluşumunda Sitoskeleton Rolünü Çalışma In Vitro

Hepatocytes are the central cells of the liver responsible for its metabolic function. As such, they form a uniquely polarized epithelium, in which two or ...