Yazarlar onların çok değerli yardımlarını bu yazının hazırlanmasında için samimi Katie Fink ve Lynn Dondlinger sayesinde hızlı.
Hibe desteği: NIH #R21-OD018309; #R56-HL065289; ve #R01-HL128242.

Yazarlar hiçbir rakip mali ilgi alanlarına sahip.

Giriş bölümünde de belirtildiği gibi bu kağıt televizyon mikroskobu açıklar ve izole direnç arter sadece standart fare modelleri (istihdam video gibi) vasküler işlevin yaklaşımlar, ama aynı zamanda son derece genetik olarak uzmanlaşmış roman ve bu yaklaşımları kullanarak elde edilebilir anlayışlar güçlü göstermek mühendislik sıçan suşları. Etkin sesi değerlendirmek için bu güçlü teknikleri kullanımı ve pasif mekanik özellikleri küçük direniş arterlerin vasküler kontrol mekanizmalarını endotel bağımlı yönetmelik de dahil olmak üzere geniş bir yelpaze ile ilgili önemli bilgiler sağlayabilir direnç arterler etkin tonda, vasküler düz kas fonksiyonu normal ve patofizyolojik koşulları ve Arter pasif Özellikler altında vasküler remodeling için ilgili ve vasküler duvar mekaniğinin değiştirir. Disfonksiyon endotel birden çok kardiyovasküler advers kardiyovasküler bağlı ölüm63de dahil olmak üzere insanlar güçlü bir prognostik göstergesi olarak gösterilen ve cannulated direnç arter hazırlıkları içinde özellikle değerlidir endotel fonksiyon bozukluğu tespit ve endotel disfonksiyonu mekanizmaları anlayışımız artan.
Azaltılmış bir sergi sıçan suşları Dahl tuz duyarlı (SS) fareler ve roman consomic bu tekniklerin kullanım örnekleri verdiğimiz vitro video mikroskobu teknikleri izole direnç arterler istihdam etkinliğini göstermek için Tansiyon için SS ebeveyn zorlanma24göre tuz duyarlılığını. Bu çalışmalar kan basıncı ve vasküler değişiklikler SS fare tuz duyarlılığını katkıda bulunmak özel ilgi vardır iki kromozom üzerinde genlerle ilgili damar kontrol mekanizmalarını araştırdık. Kromozom 13, renin gen18,22,29,57,58, taşıyan ve CYP450-4A ω-hidroksilaz64 izoformlarının için gen taşıyan kromozom 5, bu kromozom vardır ,65— Böbrek fonksiyonları üzerine ve vasküler reaktivite66,67,68üzerinde önemli etkileri vardır 20-HETE sentezler enzim. Sıçan genetik araç kutusu başka bir son ve güçlü ek sıçan gene nakavt modelleri de dahil olmak üzere Gelişmiş gen düzenleme teknikleri kullanan bir gelişmedir: ZFNs; Transkripsiyon harekete geçirmek-gibi-efektör enzimler (TALENS) ve en son CRISPR-Cas913,14,15,16,17. Vitro video mikroskobu modelinden çok önemli antioksidan ve hücre koruyucu transkripsiyon faktörü NRF2, bir Nrf2(- / -) nakavt sıçan izole MCAs çalışmaya bu teknikleri kullanan önemli sağlamıştır ve daha önce bilinmeyen bir yükseltilmiş yokluğu endotel disfonksiyonu tuz kaynaklı mekanizmaları içgörü kan basıncı17. Bu özel fare modelleri kullanarak deneyler belirli sonuçların önceki raporlar17,29,57,58,59, bir dizi açıklanan 60 , 64 , 65 .
O izole, cannulated direnç arterler çalışmaların son derece değerli işlev koşulları çeşitli altında kritik düzeyde önemli bu gemilerin düzenleyen mekanizmalar anlamakta açık olmakla birlikte, egzersiz çok önemli bir doğru ve güvenilir sonuçlar elde edilen sağlamak için önlemler sayısı. Serebral arterler ve direnç arterler diğer vasküler yatak birçok iç sesi sergi, bazı arterler (özellikle Mezenterik direnç arterler) yanıt-e doğru değerlendirmek için vasoconstrictors norepinefrin gibi ile önceden anlaşmalı olması gerekir vazodilatör uyaranlara ve daha doğru bir şekilde vivo içinde koşullar, gemilerin nerede adrenergic sinir terminaller yayımlanan norepinefrin gibi sinirsel ve humoral vasoconstrictor uyaranların etkisiyle simülasyonu. Bu nedenle, damar belirlenmesi için temel özellikleri ile tanıdık olmanız gerekir, ya edebiyat veya dikkatle ön deneyler yaptı. Çünkü endotel büyük arterler, küçük arterlerin ve mikro arteriyoller düzenlenmesinde önemli bir rol oynar, endotel yalıtım ve cannulation arter sırasında zarar görmesini önlemek için dikkatli esastır. Klasik endotel bütünlüğü için ACh gemi genişleme neden gösteri testidir. Bir uyarı olduğunu oksidatif stres koşullarında damar endotel bozulmamış olabilir, ancak kapakların ACh için yoktur, süperoksit aşırı düzeyde vazodilatör yanıt önleme nitrik oksit çöpçülük çünkü. Bu gibi durumlarda, endotel bütünlük süperoksit leş gibi vazodilatasyon ACh ve diğer endotel bağımlı vazodilatör uyaranlara yanıt kurtarmalısınız tempol huzurunda ACh uygulama tekrar ederek doğrulanabilir. Ayrıca, bir dizi patolojik koşul endotel vasküler düz kas hücreleri daralma ve daralma arter neden maddelerin serbest bırakabilirsiniz; ve bazı durumlarda, endotel bağımlı dilatasyon (veya daralma) Siklooksijenaz metabolitleri, H2O2, epoxygenase metabolitleri, vbgibi diğer maddeler ile aracılık ettiği. Klasik bir endotel bağımlı vazodilatör veya vasoconstrictor madde için dilatasyon veya daralma arterin endotel kaldırma tarafından elenirse göstermek için testidir. Son olarak, çeşitli endotel bağımlı vazodilatör ve vasoconstrictor maddelerin kimlik genellikle belirli inhibitörleri veya leş yiyiciler, nitrik oksit sentaz, İndometazin inhibe etkisizleştirmek için L-adı gibi yönetimi tarafından tespit edilebilir oluşumu Siklooksijenaz metabolitleri, katalaz H2O2, thromboxane sentaz inhibitörleri, epoxygenase inhibitörleri ve/veya antagonistleri CYP450-4A/20-HETE yolun çöpçülük edecek.
Önemli (ve öğretici) da ölçmek için aktif miktarı tonlama deneme sonunda Ventriküler tarafından ve superfusing arter ile bir Ca2 +-PSS ücretsiz veya papaverin gibi güçlü vazodilatör aracı maksimal doz yönetme. Aktif tipik bir düzeyde sesi MCA içinde dinlenme, ((Dmax-Ddinlenme) / dmax) olarak hesaplanan x 100, şehridir yaklaşık % 40, Dmax ve Ddinlenme en fazla olduğu (Ca2 +-PSS ücretsiz) ve çapı (PSS), dinlenme sırasıyla denetim denge basınç (MCA için genellikle 80 mmHg). Bu işaretlerin damarları travmanın göstergesidir gibi gemi ile önemli ölçüde daha az etkin sesi veya gelen bir segmental boğumların veya dilations gösteren arterler analizinden, dışarıda bırakılır. Ca2 +sonuna kadar dilate arterlerin çapı ölçümü-ücretsiz çözüm ölçüm arter çapı ve hesaplama stres gerginlik ilişkiler tarafından damarlar pasif mekanik özelliklerini değerlendirmek için Dedektif iþlevlere transmural basınç sonuna kadar genişlemiş damarlarının7,56yılında sıralı yükselmeler sırasında. Bu pasif stres gerginlik ilişkileri kolayca elde edilir ve gemilerin mekanik özellikleri herhangi bir değişiklik değerli bir gösterge sağlar.
Pipetler, konektörler ve rezervuarlar tedarik boru temizlik kesinlikle başarılı deneyler için önemlidir. Bu bağlamda, deney tamamlandıktan ve durulama ve doku temiz banyo, teslim boru ve depolamak için kullanılan tüm rezervuarlar sıcak ve PSS gemi ulaşmadan önce gaz equilibrate sonra tüp dışında tüm çözümler temizlemek önemlidir odası. Kesme muslukları ve vanalar gönderim sistemi içinde Ayrıca temizlenmesi ve PSS taşıyan herhangi bir boru gerektiği gibi düzenli olarak değiştirildi. Klasik kirlenmiş Boru döşeme kalıp ve bakteri tarafından oluşturulan bir gri sis işaretidir; ve bu değişiklikler normal reaktivite bakteriyel kirlenme tarafından üretilen maddeler nedeniyle kan damarlarının kaybı eşlik eder. Ancak, bakteri ve diğer mikroorganizmalar tarafından kirlenme hala görünür herhangi bir kanıt yokluğunda mevcut olabilir.
Bizce mevcut kağıt son derece farklı vasküler yatak tüm önemli küçük direniş arterler çalışmalar için uygundur onur tekniklerin kullanılması için yararlı bir örnek sağlar. LDF ve microvessel yoğunluğu, değerlendirilmesinde GS1 lektin yöntemi gibi doku perfüzyon değerlendirmek için standart yaklaşımları ile birleştirildiğinde vitro video mikroskobu cannulated direnç arter içine son derece değerli bilgiler sağlar doku perfüzyon ve nasıl bunlar hastalık durumlarında değişmiş olabilir kontrol faktörler. Vasküler düz kas ve endotel fonksiyonları standart fare modelleri temel mekanizmaları incelemek için güçlü bir araç sağlamanın yanında, bireysel direnç arterler çalışmaya video mikroskobu kullanımı ve diğer hayvan modelleri için uygulanabilir insan direnç arterler. İzole direnç arter roman genetiği fare modelleri video mikroskobu uygulama yanıt genlerin bir çok (ve büyüyen listesi) değiştirilmiş işlevine oluşan fenotipik değişiklikler anlamak için yeni kapılarını açıyor.

Vasküler işlevi arterler kullanılan boru arterler ve pek çok erken çalışmaların aort durumda. Büyük arterler kuvvet oluşturma genellikle bir doku banyoda bir güç çevirici için bir yüzük kesimi arter ekleyerek incelenmiş; düz kas lifleri eki noktası ve daralma tarafından oluşturulan gücünün en iyi tahmin sağlamak için güç dönüştürücü arasındaki boyuna yönde odaklı böylece aorta durumunda kesme Helisel gemisini şeritler düz kas boyuna ekseni boyunca. Aortas Helisel şeritler kesme için standart teknik bir cam çubuk gemi Lümen içinde yer, istenen açıda damar duvarındaki bir kesim yapmak ve kesme gruplandırırken üretmek için genişletildi maruz damar duvar kenarına sonuna kadar basılı tutun yapıldı. gemi Helisel şerit. Bu noktada, damar endotel tarafında genellikle gemi strip güç dönüştürücü ekleyerek ve bir oksijenli hazırlanmasında batış önce enkaz kaldırmak için deyimiyle ve doku banyo ısı kontrollü. Sonunda, daha sonra nitrik oksit tanımlanan dinlendirici faktör (EDRF), yaklaşım Furchgott ve Zawadski1, yani endotel rolü fizyolojisi, tarihinin en ünlü ve önemli keşifler birine götürdü elde edilen Vasküler işlevini düzenleyen. Bu keşif için önde gelen önemli olay hangi müfettişler bir sağlam endotel yabancı yüzeyler ile damar endotel tarafına temas kaçınarak tarafından tutulan ve aort şerit beklenen sergilemek değil olduğunu fark bir durumdu kasılma asetilkolin (ACh), ama bunun yerine rahat ACh karşılık olarak için. Bu gözleme dayalı, müfettişler hangi onlar bir aort kesimini (ama yapamaz-contractile güç oluşturmak) bir sağlam endotel ile bağlı bir "sandviç" hazırlık aort bir çift sarmal şerit için geliştirilen ve ACh kaynaklı dönüştürülür kasılma bir rahatlama içine.
Bugün yaygın olarak kullanılır Bu alanda iki önemli gelişmeler vardır küçük direniş arterler2,3 ' te etkin contractile kuvvet ölçmek için hazırlıklar gelişimi (örneğin bağırsak bıçaklanmasından3 ) ve cannulated direnç arter hazırlıklar4,5,6. Bir erken raporları, Mulvany ve Halpern3 etkin contractile güç izole direnç arterler gelen kendiliğinden hipertansif sıçan (SHR) bağırsak bıçaklanmasından olarak çalışmaya tel myograph hazırlık kullanımı açıklanmıştır ve normotansif WKY kontrol eder. Tel myograph sisteminin geliştirilmesi sonraki cannulated direnç arter hazırlıklar çalışmalar damarlarının daha yakın vivo içinde koşullar4,5,6için izin vermek için geliştirilmiştir.  Her iki yaklaşımın değerli sonuçlar sağlarken, cannulated arter hazırlık daha etkili koruma arterlerde içsel etkin sesi ekledi avantajı vardır; ve Müfettişler transmural basınç ve gemi yanıt-e doğru akış hızı ve endotel kesme stres değişiklikleri değişiklikleri active myogenic yanıt çalışmaya izin (bkz: adli kullanici tarafindan goruntulendi Halpern ve Kelley6).
Mevcut kağıt ana amacı bu önemli etkin sesi düzenleyen mekanizmalar ile ilgili kesin bilgi elde etmek için izole, cannulated direnç arterler kullanarak video mikroskobu onur tekniği kullanırım nasıl tarif etmektir damarlar, sinir, humoral veya parenkima hücre etkileri bağımsız. Bu temel bilgi, yeni bir standart fare modeli ve bizim çalışmaları örneklerden genetik olarak istihdam sıçan suşları mühendislik, okuyucu ile televizyon elde edilebilir vasküler işlevi ile ilgili yorumlara türleri hakkında bir fikir verecektir mikroskopi yaklaşımlar ve hangi herhangi bir kontrol ve araştırmacı'nın seçme, deneysel grupları içeren çalışmalarda istihdam seçici akraba evliliği tarafından üretilen ve yeni genetik geliştirilmiş güçlü yeni deneysel fare modelleri de dahil olmak üzere mühendislik teknikleri.
Televizyon mikroskobu yaklaşımlar duyarlığını sayesinde, cannulated arter hazırlıklar değişimler çapı ölçümü vasküler endotel bağımlı ve endotel bağımsız mekanizmaları ile ilgili çok değerli bilgi sağlayabilir gevşeme yanı sıra hipertansiyon, yüksek tuz diyet ve deneysel diğer müdahaleler ile meydana gelen vasküler kontrol mekanizmalarının önemli (ve bazen beklenmeyen) değişiklik. Buna ek olarak, basınç-çapı ilişkilerde ölçümü izole ve cannulated tedavi ile Ca2 +tarafından sonuna kadar rahat direniş arterler-ücretsiz çözüm veya farmakolojik vazodilatör uyuşturucu değerlendirmek için Dedektif sağlar arterlerin vasküler remodeling nedeniyle ve Arteryel işlevini etkileyebilir arterler pasif mekanik özelliklerindeki değişiklikler önemli içgörü sağlayabilir pasif stres gerginlik ilişkiler7 hesaplamak için yapısal değişiklikler bağımsız olarak (veya ek olarak) aktif kontrol mekanizmaları değiştirir. İzole direnç arterler çalışmalardan elde edilen bilgilerden LDF, doku perfüzyon bütün hayvan düzey8,9 değerlendirmek için pratik bir yöntem kullanarak elde ettiği bilgileri tarafından desteklenebilir unutmamak önemlidir ,10, ve microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli GS1 lektin kullanılarak değerlendirme elde edilen bilgilerden tarafından özel olarak hangi bağlar küçük arteriyoller ve kılcal11 membran glikoprotein moieties için , 12. ikinci yöntemi damarları vivo içindeörneğin sigara periosteum eksik, sayarak microvessel yoğunluk tahmini yaparken karşılaşılan klasik zorluklar tabi değildir microvessel yoğunluğu son derece doğru bir tahmin sağlar damarlarının kan akımı arteriyoller etkin kapatılması nedeniyle durduğu. Birlikte kullanıldığında, bu yaklaşımların izole direnç arterler doku perfüzyon microcirculatory düzeyinde değişiklikler için fonksiyonel değişiklikler ilişkilendirmek için önemli bilgiler sağlayabilir; ve bu değerli yaklaşımlar cannulated arter teknikleri ile birlikte kullanımı, bazı örnekler de içinde mevcut el yazması sağlanacaktır.
Mevcut kağıt outbred Sprague-Dawley Rat arterlerin vasküler değişiklikler değerlendirmek için video mikroskobu teknikleri üzerinde duruluyor. Ancak, bu teknikleri alanında son derece uzman genetiği sıçan suşları seçici ıslahı veya gen teknikleri kullanarak düzenleme tarafından oluşturulan fenotipik değişiklikler elucidating çok değerli olduğu kanıtlanmıştır unutmamak gerekir. Bu makale, biz nasıl video mikroskobu teknikleri örnekleri modelleri, en yaygın Dahl tuz-duyarlı (SS) doğuştan rat sıçan bir gerginlik de dahil olmak üzere değerli sıçan çeşitli damar fonksiyonu ile ilgili önemli bilgi vermişlerdir sağlar deneysel model tuz hassas hypertenson18,19,20,21,22,23mekanizmaları incelemek için kullanılır; ve SS sıçan tuz-duyarlı Brown Norveç (BN) fare zorlanma ile seçici ıslahı yoluyla oluşturulan consomic sıçanlar. Consomic fare panelleri her kromozom Dan Brown Norveç sıçan introgressed tek tek Dahl SS24,25,26 genetik arka plana olmuştur. Consomic fare paneller kullanımı ile ilgili kan basıncı ve vasküler reaktivite24,25,26 da dahil olmak üzere diğer fenotipleri tuz duyarlılığını katkıda belirli kromozomlar değerli ipuçları sağlamıştır ,27,28.
Seçici üreme stratejileri kullanmak SS fareler ve bireysel BN kromozomu taşıyan consomic fareler de genetik Dahl SS içine bireysel Brown Norveç kromozomlar introgressed küçük parçalarla daralmış congenic suşları nesil etkinleştirdiyseniz arka plan22,29. Bunlar son derece değerli giriş üzerinde belirli genler sağlamak veya tansiyon, böbrek hasarı ve vasküler reaktivite22,29gibi çok önemli fizyolojik değişkenler etkileyebilir kromozomlar bölgelerinde daraltabilirsiniz. Bir diğer güçlü yanı sıra sıçan genetik araç kutusu sıçan gene nakavt modelleri düzenleme teknikleri ZFNs, transkripsiyon harekete geçirmek-gibi-efektör enzimler (TALENS), dahil olmak üzere Gelişmiş gen kullanan bir gelişmedir ve en son CRISPR-Cas913 ,14,15,16,17. Gen nakavt çalışmalar bugüne kullanılan (ve kullanmaya devam) fareler içinde sıçan nakavt genler etkinleştirmek bu güçlü teknikleri gelişiyle son derece önemli bir gelişme çünkü neredeyse sadece. Bugünkü gazetede başka bir deneysel bileşeni cannulated arter teknikleri ve fizyolojik kontrol mekanizmalarını ana antioksidan ve hücre koruyucu transkripsiyon eksik nakavt Sıçanlarda değerlendirmek için video mikroskobu değerini gösterir faktör, nükleer faktör (erythroid elde edilen 2) - gibi - Sprague-Dawley genetik arka plan17' TALEN teknolojisi kullanılarak geliştirilen 2 (NRF2)30,31. Bu deneylerin vitro video mikroskobu teknikleri NRF2 gen kaybı fonksiyonel doğrulama sağlamak için ve potansiyel olarak değerli bir tedavi yaklaşımı NRF2-aracılı antioksidan doğrudan upregulation üzerinde dayalı test etmek için kullanılmıştır Savunma. NATO Mukabele Gücü 2 mücadele vasküler oksidatif stres insanlarda klinik çalışmalarda antioksidan vitamin C ve E32gibi doğrudan yönetimi ile ilgili hayal kırıklığı yaratan sonuçlar ışığında önemli terapötik önemi var.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>SS Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS/JHsd/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS.5BN Consomic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS-Chr 5BN/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS.13BN Consomic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS-Chr 13BN/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ren1-BN Congenic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS.BN-(D13hmgc41-D13)hmgc23/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ren1-SSA Congenic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS.BN-(D13rat77-D13rat105/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ren1-SSB Congenic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS.BN-(D13rat124-D13rat101/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nrf2(-/-) Knockout Rat and Wild Type Littermates</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SD-Nfe212em1Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Salt Rat Chow (0.4% NaCl)-AIN-76A</td>
			<td>Dyets, Inc.</td>
			<td>113755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Salt Rat Chow (4% NaCl)-AIN-76A</td>
			<td>Dyets, Inc.</td>
			<td>113756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colorado Video Caliper</td>
			<td>Colorado Video, Inc.</td>
			<td>Model 308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video Camera</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>KPM1AN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus Life Science</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Television Monitor</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>WVBM1410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure Transducers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>56360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Display Unit</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulated Artery Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td>Single vessel chamber for general use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Controller for Single Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>TC-09S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Dispersion Tube, Miniature,Straight</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>GD-MS</td>
			<td>Provides aeration in the vessel bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Exchange Oxygenator, Miniature</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>OX</td>
			<td>Allows gas exchange with perfusate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser-Doppler Flowmeter</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PeriFlux 5000 LDPM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GS1 Lectin</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>RL-1102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary Tubes for Micropipettes</td>
			<td>Fredrich Haer Co.</td>
			<td>27-33-1</td>
			<td>2 mm ODX1 mm ID</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verticle Pipette Puller</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 700C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon suture material (10/0)-3 PLY</td>
			<td>Ashaway Line and Twine Manufacturing Co.</td>
			<td>114-ANM-10</td>
			<td>Single strands of 3 ply nylon suture teased out for use on vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps-Inox</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15003-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protandim</td>
			<td>Protandim</td>
			<td></td>
			<td>NRF2 Inducer: Contact Dr. Joe McCord (JOE.MCCORD@UCDENVER.EDU)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (d-glucose) anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate (MgSO4-7H2O)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880-500 G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride (CaCl2-2 H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate-Monobasic (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0751-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P217-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED255-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of vascular control mechanisms utilizing video microscopy of isolated resistance arteries of rats

Bu iletişim kuralı vitro televizyon mikroskobu damar fonksiyonu izole beyin direnç arterler (ve diğer gemilerin) değerlendirmek için kullanımını açıklar ve lazer Doppler Flowmetry (LDF kullanarak doku perfüzyon değerlendirmek için teknikler açıklanır ) ve microvessel yoğunluğu fluorescently kullanan etiketli griffona simplicifolia (GS1) lektin. Eğitim için geçerli yöntemleri direnç arterler transmural basınç karşılaştı vivo içinde izole ve parenkimal hücre etkileri yokluğunda in vivo çalışmalar ve moleküler üzerinden elde edilen bilgilerden arasında önemli bir bağlantı sağlamak Bütün hayvan düzeyinde bütünleştirici yanıt sınırlı içgörü sağlamak indirgemeci yaklaşımlar. LDF ve teknikleri ile GS1 lektin fluorescently etiketli arteriyoller ve kılcal seçmeli olarak tanımlamak için izole direnç arterler çalışmalardan elde bilgi genişletmek müfettişler etkinleştirmek için pratik çözümler sunuyor. Bu kağıt vasküler Fizyoloji ve genel bir deneysel model olarak fare patolojisi temel bilgi elde etmek için bu tekniklerin uygulanması açıklar ve özel çeşitli genetik olarak sağlayabilir "tasarımcı" sıçan suşları belirli genler etkisi önemli vasküler fenotipleri önemli içgörü. Sıçan suşları seçici üreme stratejileri ve rat, gen nakavt modellerinde üretimi için yeni teknolojiler tarafından geliştirilen bu değerli deneysel yaklaşımlar kullanarak bilimsel tesislerinde nakavt fare modellerinde geliştirilmiş rigor genişletmek ve Bu bilgi için bir iyi anlaşılan fizyolojik arka plan ve uygunluğu daha büyük boyutu nedeniyle fizyolojik Etütler ile daha alakalı bir hayvan modeli genişletir.

Vitro mikroskopi cannulated direnç arter normal vivo içinde transmural basınç ve parenkimal hücre yokluğu küçük direniş arterler (ve daha büyük arteriyoller) etkin sesi etkileyen faktörler çalışma sağlar etkiler. Reaktivite damarları çeşitli vazodilatör ve vasoconstrictor bizi canlı tutan ve myogenic yanıt transmural basınç yükselmesi normal PSS, Ca2 +içinde değerlendirilmesi yanı sıra-ücretsiz PSS perfusate ve sonunda superfusate eklendi en büyük damar çapı ve duvar kalınlığının belirlemek için deneme. İkinci ölçümleri vasküler remodeling, Yani, kan basıncı veya yönetim farmakolojik ajanların değişiklikler ortaya çıkabilir duvar/Lümen oranı değişiklikleri değerlendirirken son derece değerlidir. Ca2 +sonuna kadar genişlemiş damarlarının çapı ölçümleri-ücretsiz PSS x 100, iç sesi ((Dmax-Ddinlenme) / dmax) olarak hesaplamak yararlı Dmax ve Ddinlenme maksimum (Ca2 +- nerede PSS ücretsiz) ve çapı (PSS), sırasıyla, (MCA için genellikle 80 mmHg) denetim denge basınçta dinleniyor. Deneyim, MCA etkin sesi yaklaşık %40 80 mmHg transmural basınç ortalamasını alır. Sonuna kadar dilate arterlerin Çap ölçüm çapı ölçerek damarları pasif mekanik özelliklerini değerlendirmek için pratik bir yol da arter transmural basınç distending ve sonuçları kullanarak farklı düzeylerinde stres gerginlik ilişkileri ve damarları7,56diğer mekanik özellikleri hesaplayın.
Şekil 3 ek seçici ıslahı yaklaşımlar kullanarak SS.13BN sıçan gelen türetilen üç daralmış congenic suşları, şematik bir gösterimidir. Bu sıçan suşları kromozom segmentleri de Brown Norveç renin alleli (Ren1-BN) dahil veya hemen üstünde (Ren1-SSA) veya hemen altında (Ren1-SSB) renin gen locus kesik (böylece SS renin alleli istinat vardır). Bu29çalışma, Brown Norveç renin gen içeren kromozom segment sadece 25 genler yer.
Şekil 4 endotel bağımlı vazodilatör ACh cevaben gösterir (1 µM) izole MCAs erkek Dahl SS rats ve üç şekil 3' te gösterilen congenic suşları daralmış. (Ren1-BN) dahil etmek veya sadece (Ren1-SSA) kesilir veya (Ren1-SSB) renin gene faiz (Yani, çevresi renin gen locus) bölgenin yaklaşık 25 genler için sınırlı bu üç congenic suşları kombine kullanımı. Bu deneylerin hayvanlar normotansif ve düşük tuz beslenen (% 0,4 NaCl) diyet. Çalışma29 endotel bağımlı dilatasyon ACh için yapıldı yok SS ebeveyn zorlanma ve her iki congenic suşları SS renin alleli istinat, ancak SS genetik arka planda BN renin alleli taşıyan congenic zorlanma restore edildi. Bu çalışmanın sonuçları daha önceki çalışmalar SS.13BN consomic fareler57,58 kullanan bulguları desteklenen ve güçlü kanıtlar bu endotel disfonksiyonu sağlanan normotansif olduklarında bile SS fareler mevcuttur ve düşük tuz diyet beslenen. Alınan birlikte, bu çalışmalar29,57,58 sonuçlarını hipotezini disfonksiyon endotel SS Rat destek Engelli, düzenleme, kronik maruz kalma düşük sonuçlanan renin gen kaynaklanmaktadır Anjiyotensin II kan düzeyleri.
Şekil 5' te, özetlenen başka bir çalışma59, endotel bağımlı vazodilatör ACh izole MCAs (MCA) yanıt erkek Dahl SS rats ve kromozom 5 (içeren Brown Norveç genlerini taşıyan SS.5BN consomic rats karşılaştırıldığında çeşitli izoformlarının sitokrom P450-4A ω-hidroksilaz, için). Bu çalışmada, hayvanlar ya da düşük bir tuz beslenen edildi (% 0,4 NaCl) veya yüksek tuz (%4 NaCl) diyet. SS fareler gelen MCA aksine, endotel bağımlı dilatasyon ACh için düşük tuz diyet beslenen SS.5BN consomic sıçanlarından emir MCA içinde devam edildi. Buna ek olarak, (ve tersine SS.13BN consomic fareler57,58, Sprague-Dawley Rat33,39,40,60ve altın hamster sonuçları 61), yüksek tuz diyet ACh kaynaklı genişleme bu CYP450-4A ω-hidroksilaz gösteren SS.5BN Sıçanlarda ortadan kaldırmak başarısız oldu ve 20-hydroxyeicosatetraenoic asit (20-HETE) çoğu önemli katkıda bulunan damar oksidan stres ve endotel disfonksiyon SS fareler ve yükseklikler diğer suşların diyet tuz alımı sırasında. Deneysel bir bakış açısından, yüksek tuz diyet başarısızlık endotel bağımlı dilatasyon ACh için ortadan kaldırmak için nasıl çalışmalar cannulated direnç arter geleneksel bilgelik yola beklenmeyen bulgular üretebilir bir örnek sağlar ve karmaşık kontrol mekanizmalarını etkileyen çok önemli bu gemiler fonksiyonu yeni bir anlayış neden olabilir.
Şekil 6 ACh için izole MCA tepki gösterir (1 µM) vahşi türü ve Nrf2(- / -) nakavt fareler düşük tuz diyet beslenen (% 0,4 NaCl), yüksek tuz diyet (%4 NaCl), veya bilinen NRF2 harekete geçirmek30,62 içeren yüksek tuz diyet . Oksidatif stres tuz kaynaklı yokluğunda, ACh kaynaklı dilatasyon vahşi türü ve Nrf2(- / -) nakavt fareler MCA içinde benzer. Sprague-Dawley sıçan önceki çalışmaların sonuçları ile uyumlu, yüksek tuz diyet ACh kaynaklı dilatasyon vahşi türü ve Nrf2(- / -) nakavt fareler ortadan kaldırılmıştır. NRF2 uyarıcı yüksek tuz diyet yanı sıra endotel bağımlı dilatasyon vahşi türü fareler ama nakavt Sıçanlarda Nrf2 gen başarılı kaldırılması gösteren değil Nrf2(- / -) fareler, ACh için geri, ve vasküler oksidatif stres iyileştirmek için bir tedavi yaklaşımı olarak NRF2 up-düzenleyiciler kullanımını destekleyen.
Şekil 7 LDF ölçümleri pial mikrosirkülasyon yanıt-e doğru ikisinden biri üstünde tutulan Sprague-Dawley Rat art arda gelen kan hacmi para çekme tarafından üretilen arteryel kan basıncında ilerici indirimleri karşılaştırma sonuçlarını özetler normal tuz (% 0,4 NaCl) diyet ya da yüksek tuz (%4 NaCl) diyet dört hafta için. Düşük tuz diyet beslenen sıçanlar aksine, fareler yüksek tuz diyet sergi indirimleri mekanizmalarının serebral kan akımı autoregulation için sorumlu olduğunu belirten perfüzyon basıncındaki sırasında sürekli kan akışını korumak için Engelli bir yetenek beslenen uzun süreli maruz kalma yüksek tuz diyet tarafından ele geçirildi. Bu deneylerin sonuçlarını izole serebral arterler tuz beslenen sıçanlar60 Engelli vasküler gevşeme mekanizmalar varlığı ile uyumludur ve nasıl LDF ölçüleri desteklemek ve genişletmek için istihdam edilebilir iyi bir örnek sağlar istihdam çalışmaların bulguları direnç damar düzeyine kadar tüm vasküler yatağın izole.
Direnç arter işlevi değerlendirme ek olarak izole arter ve doku perfüzyon lazer-Doppler flowmetry, microvessel yoğunluğu ve kronik kas uyarımı54, gibi çeşitli uyaranlara karşı anjiogenik yanıt-e doğru kullanma kullanma 55 seçmeli olarak arteriyoller ve kapiller membran glikoprotein moieties bağlar fluorescently etiketli GS1 lektin, kullanan hayvanlarda değerlendirilebilir. Şekil 8 tipik lektin 2 hafta (Not yüzdeki yüksek tuz beslenen Sıçanlarda düşük yoğunluk) düşük tuz diyeti veya yüksek tuz diyet beslenen Sprague-Dawley Rat cremaster kas boyama gösterir. Microvessel yoğunluğu lektin etiketli yüzdeki bir bilgisayar tarafından oluşturulan başvuru kılavuz52ile Kavşakları sayarak değerlendirildiğini ve anjiogenik yanıt54,55 değerlendirmek için mükemmel bir yöntem sağlar veya algılamak ve yüzdeki hipertansiyon ve yükseltilmiş diyet tuz tüketiminizi12,17,53gibi koşullarda kaybı ölçmek.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig1.jpg"> Şekil 1: Vitro video mikroskobu Kur izole, cannulated direnç arterler(a)çalışmaya istihdam. Cannulated direnç arter cam MİKROPİPETLER (B) ve Lümen çapı ölçümü cannulated direnç arter (C) gösterilen video mikrometre ekran bağlı. Ölçek çubuğu Panel b cannulated arter (µm) iç çapı, ve Panel c 125 µm ekran görüntüsünü el ile atardamar iç duvarları üzerinde deney gözlemci tarafından yerleştirilen hareketli başvuru çizgiler arasındaki uzaklığı . <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig2.jpg"> Resim 2: Beynin orta serebral arterin yalıtma ve cannulation ile MİKROPİPETLER hazırlanırken yordamı şematik diyagramı. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig3.jpg"> Şekil 3: Küçük kesimleri Brown Norveç kromozom 13 introgressed Dahl tuz hassas genetik arka plana sahip daralmış congenic sıçan suşları şematik diyagramı. Kromozom kesimleri Brown Norveç renin alleli (Ren1-BN) yer alan veya sadece (Ren1-SSA) kesilir veya sadece (Ren1-SSB) renin gen odağı ve böylece SS renin alleli korumak. Bu şekil değiştiren ve Durand vd. yayımlanmaktadır 29 Amerikan Fizyolojik Derneği izniyle. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig4.jpg"> Şekil 4: İzole, tepki cannulated SS MCAs fareler ve congenic sıçan suşları için 1 µM asetilkolin ( Şekil 2' de gösterilmektedir). Veri denetim çapı asetilkolin önce dinlenme--dan ortalama çapı değişiklik (Δ µm) ±SEM olarak ifade edilir ve orijinal bir çalışma Durand vd tarafından replotted 29 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig5.jpg"> Şekil 5: 1 µM asetilkolin içinde hayvan izole, cannulated SS MCAs fareler ve SS.5BN consomic fareler yanıt beslenen düşük tuz (% 0,4 NaCl) veya yüksek tuz (%4 NaCl) diyet. Veri denetim çapı asetilkolin önce dinlenme--dan ortalama çapı değişiklik (Δ µm) ±SEM olarak ifade edilir ve orijinal bir çalışma Lukaszewicz vd tarafından replotted 64 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig6.jpg"> Şekil 6: Yanıt-e doğru 1 µM asetilkolin izole, cannulated MCAs Nrf2(- / -) nakavt fareler ve vahşi türü denetimlerin içinde düşük tuz diyet beslenen (% 0,4 NaCl), yüksek tuz diyet (%4 NaCl), veya bilinen NRF2 harekete geçirmek30, içeren yüksek tuz diyet 62. veri denetimi çapı asetilkolin önce dinlenme--dan ortalama çapı değişiklik (Δ µm) ±SEM olarak dile getirdi. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig7.jpg"> Şekil 7: Serebral kan akımı pial mikro LDF tarafından değerlendirildi. Yüksek tuz diyet dört hafta boyunca tutulan Sprague-Dawley Rat önemli bir bozulma olarak arteryel kan basıncı yanıt olarak art arda gelen kan hacmi para çekme düşürüldü kan akışı sabit korumak için yeteneklerini sergiledi. Veri denetim ±SEM ortalama yüzde çizilen * p < 0,05 aynı düşük tuz diyet vs demek arteriyel basınç. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig8.jpg"> Şekil 8: Test sıçan cremaster kas rodamine etiketli GS1 lektin arteriyoller ve kılcal microvessel yoğunluğu değerlendirilmesi için tanımlamak için taşır. Cremaster kaslar düşük tuz beslenen Sprague-Dawley sıçanlarından emir elde (LS; % 0,4 NaCl) ya da 2 hafta boyunca (HS:4% NaCl) diyet tuz ve mikrovasküler rarefaction LS kontrollere göre HS beslenen hayvanlarda göstermek yüksek. Ölçek çubuğu 100 µm. = <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats at JoVE.com

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

evaluation-vascular-control-mechanisms-utilizing-video-microscopy

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.2K Görüntüleme.  Marquette University. Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Video: Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

Accurate and Simple Evaluation of Vascular Anastomoses in Monochorionic Placenta using Colored Dye

The presence of placental vascular anastomoses is a conditio sine qua non for the development of twin-to-twin transfusion syndrome (TTTS) and twin anemia polycythemia sequence (TAPS)1,2. Injection studies of twin placentas have shown that such anastomoses are almost invariably present in monochorionic twins and extremely rare in dichorionic twins1. Three types of anastomoses have been documented: from artery to artery, from vein to vein and from artery to vein. Arterio-venous (AV) anastomoses are unidirectional and are referred to as "deep" anastomoses since they proceed through a shared placental cotyledon, whereas arterio-arterial (AA) and veno-venous (VV) anastomoses are bi-directional and are referred to as "superficial" since they lie on the chorionic plate. Both TTTS and TAPS are caused by net imbalance of blood flow between the twins due to AV anastomoses. Blood from one twin (the donor) is pumped through an artery into the shared placental cotyledon and then drained through a vein into the circulation of the other twin (the recipient). Unless blood is pumped back from the recipient to the donor through oppositely directed deep AV anastomoses or through superficial anastomoses, an imbalance of blood volumes occurs, gradually leading to the development of TTTS or TAPS. The presence of an AA anastomosis has been shown to protect against the development of TTTS and TAPS by compensating for the circulatory imbalance caused by the uni-directional AV anastomoses1,2. 
Injection of monochorionic placentas soon after birth is a useful mean to understand the etiology of various (hematological) complications in monochorionic twins and is a required test to reach the diagnosis of TAPS2. In addition, injection of TTTS placentas treated with fetoscopic laser surgery allows identification of possible residual anastomoses3-5. This additional information is of paramount importance for all perinatologists involved in the management and care of monochorionic twins with TTTS or TAPS. Several placental injection techniques are currently being used. We provide a simple protocol to accurately evaluate the presence of (residual) vascular anastomoses using colored dye injection.

Twin-to-twin transfusion syndrome and twin anemia polycythemia sequence are two potentially devastating problems in perinatal medicine. Both disorders occur only in monochorionic twins and result from unbalanced blood flow through placental vascular anastomoses. We provide a simple protocol to accurately evaluate the presence of vascular anastomoses using colored dye injection of placental vessels after birth.

Renkli Boya kullanarak Monokoryonik Plasenta vasküler anastomozlar doğru ve basit Değerlendirme

The presence of placental vascular anastomoses is a conditio sine qua non for the development of twin-to-twin transfusion syndrome (TTTS) and twin anemia ...

Tıp

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in peripheral arterial bypass surgery as well as in arteriovenous fistulas.1-5 The experimental procedure of vein graft interposition in the common carotid artery by using the cuff-technique has been applied in several research projects to examine the aetiology of neointimal hyperplasia and therapeutic options to address it. 6-8 The cuff prevents vessel anastomotic remodeling and induces turbulence within the graft and thereby the development of neointimal hyperplasia.
Using the superior caval vein graft is an established small-animal model for venous arterialization experiment.9-11 This current protocol refers to an established jugular vein graft interposition technique first described by Zou et al., 9 as well as others.12-14 Nevertheless, these cited small animal protocols are complicated.
To simplify the procedure and to minimize the number of experimental animals needed, a detailed operation protocol by video training is presented. This video should help the novice surgeon to learn both the cuff-technique and the vein graft interposition. Hereby, the right external jugular vein was grafted in cuff-technique in the common carotid artery of 21 female Sprague Dawley rats categorized in three equal groups that were sacrificed on day 21, 42 and 84, respectively. Notably, no donor animals were needed, because auto-transplantations were performed. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice. In addition, the graft patency rate was 60 % for the first 10 operated animals and 82 % for the remaining 11 animals. The blood flow at the time of sacrifice was 8&plusmn;3 ml/min. In conclusion, this surgical protocol considerably simplifies, optimizes and standardizes this complicated procedure. It gives novice surgeons easy, step-by-step instruction, explaining possible pitfalls, thereby helping them to gain expertise fast and avoid useless sacrifice of experimental animals.

Neointimal hyperplasia is the primary cause of stenosis in arterialized veins. We propose a new protocol whereby the right external jugular vein is grafted using the cuff technique in the common carotid artery of Sprague Dawley rats. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice.

Sıçanlarda Common Karotid Arter interpozisyon Harici Juguler Ven Greft: Gelişmiş Mikrocerrahi Tekniği Eğitimi

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered perfusion can aid research into the mechanisms of retinal pathologies. Intravital video microscopy of fluorescent tracers can be used to measure vascular diameters and bloodstream velocities of the retinal vasculature, specifically the arterioles branching from the central retinal artery and of the venules leading into the central retinal vein. Blood flow rates can be calculated from the diameters and velocities, with the summation of arteriolar flow, and separately venular flow, providing values of total retinal blood flow. This paper and associated video describe the methods for applying this technique to mice, which includes 1) the preparation of the eye for intravital microscopy of the anesthetized animal, 2) the intravenous infusion of fluorescent microspheres to measure bloodstream velocity, 3) the intravenous infusion of a high molecular weight fluorescent dextran, to aid the microscopic visualization of the retinal microvasculature, 4) the use of a digital microscope camera to obtain videos of the perfused retina, and 5) the use of image processing software to analyze the video. The same techniques can be used for measuring retinal blood flow rates in rats.

Intravital microscopy can be used in animals to visualize and measure retinal vascular diameters, bloodstream velocities, and total retinal blood flow.

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Implementation of In Vitro Drug Resistance Assays: Maximizing the Potential for Uncovering Clinically Relevant Resistance Mechanisms

Although targeted therapies are initially effective, resistance inevitably emerges. Several methods, such as genetic analysis of resistant clinical specimens, have been applied to uncover these resistance mechanisms to facilitate follow-up care. Although these approaches have led to clinically relevant discoveries, difficulties in attaining the relevant patient material or in deconvoluting the genomic data collected from these specimens have severely hampered the path towards a cure. To this end, we here describe a tool for expeditious discovery that may guide improvement in first-line therapies and alternative clinical management strategies. By coupling preclinical in vitro or in vivo drug selection with next-generation sequencing, it is possible to identify genomic structural variations and/or gene expression alterations that may serve as functional drivers of resistance. This approach facilitates the spontaneous emergence of alterations, enhancing the probability that these mechanisms may be observed in the patients. In this protocol we provide guidelines to maximize the potential for uncovering single nucleotide variants that drive resistance using adherent lines.

Implementation of In Vitro Drug Resistance Assays: Maximizing the Potential for Uncovering Clinically Relevant Resistance Mechanisms

Drug resistance to targeted therapeutics is widespread and the need to identify mechanisms of resistance--prior to or following clinical onset--is critical for guiding alternative clinical management strategies. Here, we present a protocol to couple derivation of drug-resistant lines in vitro with sequencing to expedite discovery of these mechanisms.

Uygulanması<em&gt; İn Vitro</em&gt; İlaç Direnci Tahliller: Klinik İlgili Direnç Mekanizmaları ortaya çıkararak yönelik Potansiyeli maksimize

Although targeted therapies are initially effective, resistance inevitably emerges. Several methods, such as genetic analysis of resistant clinical ...

Ultrasound Assessment of Flow-Mediated Dilation of the Brachial and Superficial Femoral Arteries in Rats

Arterial vasodilation to increases in wall shear rate is indicative of vascular endothelial function. In humans, the non-invasive measurement of endothelial function can be achieved by employing the flow-mediated dilation technique, typically performed in the brachial or superficial femoral artery. Briefly, a blood pressure cuff placed distal to an ultrasound probe is inflated to a suprasystolic pressure, which results in limb ischemia. After 5 min of occlusion the cuff is deflated, resulting in reactive hyperemia and increases in wall shear rate that signal vasodilatory molecules to be released from the endothelium eliciting vasodilation. Despite the thousands of studies performing flow-mediated dilation in humans, surprisingly, no studies have performed this technique non-invasively in living rats. Considering the recent shift in focus to translational research, the establishment of guidelines for non-invasive measurement of flow-mediated dilation in rats and other rodents would be extremely valuable. In the following article, a protocol is presented for the non-invasive measurement of flow-mediated dilation in brachial and superficial femoral arteries of rats, as those sites are most commonly measured in humans.

Non-invasive assessment of endothelial function in humans can be determined by the flow-mediated dilation technique. Although thousands of studies have used this technique, no study has performed this technique non-invasively in rats. The following article describes non-invasive measurement of flow-mediated dilation in the brachial and superficial femoral arteries of rats.

Flow-Aracılı brakiyal dilatasyonu ve Sıçanlarda Yüzeyel Femoral Arter Ultrason Değerlendirmesi

Arterial vasodilation to increases in wall shear rate is indicative of vascular endothelial function. In humans, the non-invasive measurement of ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

Kol tekniği aort transplantasyonu - eğitici bir Video bir fare Model kullanma

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

Hücre kültür manken direnç arter

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...