저자는 그들의 진실한 케이티 핑크와 린 Dondlinger이이 원고 준비에 그들의 귀중 한 도움에 대 한 표현.
보조금 지원: NIH #R21-OD018309; #R56-HL065289; 그리고 #R01-HL128242입니다.

저자 아무 경쟁 금융 관심사 있다.

이 종이 소개에서 설명 했 듯이, 텔레비전 현미경의 사용에 설명 합니다 및 절연된 저항 동맥 표준 쥐 모델 (비디오에 사용)에 뿐만 아니라 혈관 기능을 평가 하기 위해 접근 하지만 또한 매우 전문화 유전자 소설과 이러한 접근법을 활용 하 여 얻을 수 있는 강력한 통찰력을 보여 조작된 쥐 변종. 활성 톤을 평가 하기 위해 이러한 강력한 방법 사용 하 고 작은 저항 동맥의 수동 기계적 성질 endothelium 종속 규칙을 포함 한 혈관 제어 메커니즘의 넓은 스펙트럼에 관한 중요 한 정보를 제공할 수 있습니다. 저항 동맥에서 활성 톤의 정상 및 병 태 생리 조건, 및 수동 속성 동맥의 혈관 평활 근 기능 혈관 개장에 관련 하 고 혈관 벽 역학에서 변경 됩니다. 내 피 기능 장애 인간 심장 혈관 관련 사망63를 포함 하 여 여러 불리 한 심장 혈관 사건의 강력한 전조 표시기로 표시 되었습니다 그리고 cannulated 저항 동맥 준비에서 특히 귀중 한 내 피 기능 장애를 감지 하 고 내 피 기능 장애의 메커니즘에 대 한 우리의 이해를 증가.
비디오 현미경 기술 생체 외에서 절연된 저항 동맥 채용의 효과 설명 하기 위해, 우리 제공 Dahl 소금 민감한 (SS) 쥐 그리고 소설 consomic에 이러한 기술의 사용의 예 쥐 긴장 감소 하는 SS 부모의 스트레인24에 비해 혈압의 소금 감도. 그 연구 조사 혈압 그리고 SS 쥐에 혈관 변경 소금 감도에 기여에 특히 관심이 있는 두 개의 염색체에 유전자와 관련 된 혈관 제어 메커니즘. 이러한 염색체는 염색체 13, renin 유전자18,22,29,,5758, 운반 및 염색체 5, CYP450 4A ω-hydroxylase64의 isoforms 위한 유전자를 나르는 ,65-20-HETE, 신장 기능 및 혈관 반응성66,,6768에 주요 효과가 있는 합성 효소. 쥐 유전자 도구 상자에 또 다른 최근 및 강력한 추가 고급 유전자 편집 기법 등을 활용 하 여 쥐 유전자 녹아웃 모델의 개발: ZFNs; transcriptional 활성 제 같은 이펙터 nucleases (TALENS), 그리고 가장 최근에 CRISPR-Cas913,14,15,,1617. 생체 외에서 비디오 현미경 Nrf2(-/-) 녹아웃 쥐 모델 중요 한 항 산화 및 세포 보호 전사 인자 NRF2, 부족에서 고립 된 MCAs 공부 이러한 기법을 활용 하 여 중요 한 제공 하 고 이전에 상승의 부재에서 내 피 기능 장애 소금 유도의 메커니즘에 대 한 알 수 없는 통찰력 혈액 압력17. 이러한 전문된 쥐 모델을 활용 하 여 실험의 특정 한 결과 이전 보고서17,29,,5758,59, 의 수에 설명 되어 60 , 64 , 65 .
그것은 분명 절연, cannulated 저항 동맥의 연구는 다양 한 조건에서이 비판적으로 중요 한 혈관의 기능을 조절 하는 메커니즘을 이해에 매우 중요 한, 그것은 매우 중요 한 운동 하는 정확 하 고 신뢰할 수 있는 결과 얻을 수 있도록 경고의 수입니다. 대뇌 동맥과 많은 다른 혈관 침대의 저항 동맥 내장 톤 전시, 하는 동안 일부 동맥 (특히 mesenteric 저항 동맥) 해야 norepinephrine 같은 vasoconstrictors와 미리 계약 응답을 평가 하기 위해 vasodilator 자극, 그리고 더 정확 하 게 비보에 조건을 시뮬레이션, 혈관 신경 그리고 체액 vasoconstrictor 자극, 노르 아드레날린 신경 터미널에서 발표 등의 영향을 받고 있다. 따라서, 공부 하는 동맥의 기본 속성을 잘 알고 있어야 하는 것이 중요 하다, 또는 문학에서 신중 하 게 예비 실험을 실시. Endothelium 큰 동맥, 작은 동맥, arterioles microcirculation에 조절에 중요 한 역할을, 때문에 격리 및 동맥의 cannulation endothelium 손상 되지 않도록 주의를 기울 필수적 이다. Endothelium 무결성에 대 한 고전적인 테스트 ACh 배 팽창 하면 데모입니다. 한 경고는, 산화 긴장의 조건 하에서 혈관 내 피 손상, 있을 수 있습니다 하지만 ACh에 vasodilatation는 결 석 초과의 과도 한 수준의 vasodilator 응답을 방지 하는 산화 질소 청소 때문에. 이러한 경우에, 내 피 무결성 ACh 응용 프로그램 응답 ACh 및 다른 endothelium 종속 vasodilator 자극으로 혈관을 복원 해야 하는 tempol와 같은 superoxide 폐품의 존재를 반복 하 여 확인할 수 있습니다. 또한, 다양 한 병 적인 조건에서에서 endothelium 혈관 부드러운 근육 세포의 수축과; 동맥의 수축 시키는 물질을 해제할 수 있습니다. 그리고 경우에 따라 피 종속 팽창 (또는 수축) cyclooxygenase 대사 산물, H2O2, epoxygenase 대사 산물, 등등과 같은 다른 물질을 통해 중재 된다. Endothelium 종속 vasodilator 또는 vasoconstrictor 물질에 대 한 고전적인 테스트 팽창 또는 수축의 동맥 내 피 제거에 의해 삭제는 입증 하는. 마지막으로, 다양 한 endothelium 종속 vasodilator 및 vasoconstrictor 물질의 정체성 수 있습니다 일반적으로 될 ascertained 특정 억제제 또는 썩은 고기, 산화 질소 synthase, indomethacin 억제을 억제 하기 위해 L-이름 등의 관리에 의해 cyclooxygenase metabolites의 형성 catalase 청소할 H2O2, thromboxane synthase 억제제, epoxygenase 억제제, 또는 CYP450-4A/20-HETE 통로의 길 항 근.
그것은 또한 중요 한 (유익한) 척도를 액티브의 양을 톤 실험의 끝에 perfusing와 superfusing는 캘리포니아2 +동맥-PSS, 무료 또는 papaverine 같은 강력한 vasodilator 에이전트의 최대 복용량을 관리. 액티브의 전형적인 수준 MCA에 톤을 휴식, ((D최대-D나머지) /D최대)로 계산 된 x 100은 약 40%,최대 D와 D나머지 있는 최대 (캘리포니아2 +-무료 PSS) 직경 (PSS), 휴식 제어 평형 압력 (MCA에 대 한 일반적으로 80 mmHg)에서 각각. 그는 혈관에 외상의 표시로 실질적으로 덜 활성화 톤 나 보여주는 단편 constrictions 또는 dilations 동맥 혈관 분석에서 제외 됩니다. 캘리포니아2 +에서 극대로 동 공이 확장 되어 동맥의 직경의 측정-무료 솔루션 또한 동맥 직경 측정 및 계산 응력-변형 관계 하 여 혈관의 수동 기계적 특성을 평가 하는 조사를 수 극대 동 공이 확장 되어 혈관7,56에서 과거 압력에 입 하 면 순차도 동안 이러한 수동 응력-변형 관계는 쉽게 얻을 하 고 혈관의 기계적 특성 변화에 대 한 귀중 한 표시를 제공 합니다.
펫, 커넥터, 및 튜브 공급 하는 저수지의 청결은 절대적으로 성공적인 실험에 대 한 중요 합니다. 이와 관련, 그것은 실험 완료 되 면, 그리고 린스와 조직 청소 목욕, 배달 배관 및 저장 하는 데 사용 하는 모든 저수지 따뜻한, 가스 equilibrate 배를 도달 하기 전에 PSS 튜브에서 모든 솔루션을 플러시 하는 것이 중요 약 실입니다. Stopcocks 및 전달 시스템에 밸브 해야 청소 수 있으며 어떤 튜브 PSS를 들고 해야 합니다 정기적으로 변경. 오염 된 튜브의 고전적인 표시는 곰 팡 이와 박테리아;에 의해 생성 된 회색 안개 그리고 그 변화 물질 세균 오염에 의해 생산으로 인해 혈관의 정상적인 반응의 손실에 의해 함께. 그러나, 박테리아와 다른 미생물에 의해 오염 여전히 수 있습니다 표시 증거의 부재에.
현재 종이 매우 다른 혈관 침대의 모든 중요 한 작은 저항 동맥의 연구 적합 영광 기술의 사용에 대 한 유용한 예제를 제공 합니다 생각 합니다. 조직 관류, LDF는 GS1 lectin 방법 microvessel 밀도, 평가 등을 평가 하기 위한 표준 방법으로 결합 될 때 cannulated 저항 동맥의 생체 외에서 비디오 현미경 매우 귀중 한 통찰력을 제공 하는 것은 조직의 관류 및 어떻게 이러한 질병 상태에 변경 될 수 있습니다 제어 하는 요인. 표준 쥐 모델에서 내 피 기능과 혈관 평활 근의 기본적인 기계 장치를 공부 하는 강력한 수단을 제공, 뿐만 아니라 개별 저항 동맥 공부 비디오 현미경의 사용 적용할 수 있는 다른 동물 모델을 인간 저항의 동맥 새로운 유전자 조작된 쥐 모델의 절연된 저항 동맥의 비디오 현미경의 응용 프로그램 응답 유전자의 무리 (및 적-성장 목록)의 변경 된 기능으로 발생 하는 phenotypic 변화를 이해 하는 데 새로운 문을 엽니다.

혈관 기능 활용 하는 동맥 도관 동맥, 및 많은의 초기 연구는 대동맥의 경우. 큰 동맥에서 강제로 생성은 일반적으로 조직 목욕; 힘 변환기를 동맥의 링 세그먼트를 연결 하 여 공부 대동맥의 경우 나선형 절단 하 여 스트립 선박의 있도록 부드러운 근육 섬유 첨부 파일의 포인트와 힘 변환기의 수축에 의해 생성 된 힘의 좋은 견적을 제공 하는 경도 방향에서 동쪽으로 향하게 했다 세로 축 따라 부드러운 근육입니다. Aortas의 나선형 스트립을 절단에 대 한 표준 기술 선박의 루멘에 유리 막대를 배치, 원하는 각도에서 혈관 벽에 상처를 만들고 컷은 전체 생산 확장으로 혈관 벽의 노출된 가장자리의 끝에 개최 되었다 그릇의 나선형 스트립입니다. 그 시점에서, 혈관의 내 피 쪽은 일반적으로 선박 스트립 힘 변환기에 연결 하 고 물속에 산소를 준비 하기 전에 파편을 제거 하 얼룩이 및 온도 제어 조직 목욕. 결국, 편안한 인자 (EDRF), 이후에에서 산화 질소로 식별 된 파생 된 접근 생리학의 역사에서 가장 유명 하 고 중요 한 발견 중 하나를 Furchgott와 Zawadski1, 즉 피 내 막의 역할에 의해 주도 혈관 기능을 규제. 그의 발견에 지도 하는 중요 한 이벤트는 조사 외국 표면 동맥의 내 피 쪽의 접촉을 피하 여 그대로 피를 유지 하 고 대동맥 스트립 예상 전시 하지 않았다 발견 상황 이었다 아 세 틸 콜린 (ACh), 대신에 ACh 대응 편안 하지만 수축. 그 관찰을 바탕으로, 조사는 그들은 (그러나 수축 성 힘을 생성할 수 없습니다)는 그대로 피와 대동맥 세그먼트를 연결 하는 "샌드위치" 준비 대동맥의 표준 헬리컬 스트립 개발과 ACh 유도 변환 휴식으로 수축입니다.
광범위 하 게 오늘 사용 되는이 지역에서 두 개의 주요 발전은 작은 저항 동맥2,3 에 활성 수축 성 힘을 측정 하는 준비의 개발 (예:3 장 mesentery )와 cannulated 저항 동맥 준비4,,56. 초기 보고서 중 하나에서 Mulvany 및 Halpern3 와이어 myograph 준비 공부 저절로 고혈압 쥐 (SHR)의 장 mesentery에서 절연된 저항 동맥에 활성 수축 성 힘을를 사용 하 여 설명 하 고 normotensive WKY 제어 합니다. 와이어 myograph 시스템의 개발, 후속 cannulated 저항 동맥 준비 vivo에서 조건4,,56배 가까이의 연구를 허용 하도록 개발 되었다.  두 방법 모두 귀중 한 결과 제공 하는 동안 cannulated 동맥 준비는 더 효과적으로 보존; 동맥에 본질적인 활성 톤의 추가 장점 변화 흐름 율과 내 피 전단 응력 변화에 과거 압력과 배 응답에 활성 조직적 응답 연구 조사를 허용 하 고 (참조 Halpern와 켈리6검토).
현재 종이의 주요 목표에서 이러한 중요 한 활성 톤을 조절 하는 메커니즘에 대 한 정확한 정보를 얻기 위해 절연, cannulated 저항 동맥을 사용 하 여 비디오 현미경의 영광 기술을 채용 하는 방법을 설명 하는 것입니다. 혈관, 신경, 체액, 또는 parenchymal 세포의 독립에 영향을. 이 기본 정보, 고용 표준 쥐 모델 및 예의 우리의 연구에서 새로운 유전자 조작 쥐 긴장, 텔레비전으로 얻을 수 있는 혈관 기능에 대 한 통찰력의 종류의 아이디어로 독자를 제공할 것입니다. 현미경 접근 하 고 있는 모든 제어 및 탐정의 선택, 강력한 새로운 실험 쥐 모델을 포함 한 선택적 근 친 결혼에 의해 생성 하 고 새로 개발 된 유전자의 실험적인 그룹을 포함 하는 연구에서 채택 될 수 있다 엔지니어링 기술입니다.
텔레비전 현미경 방식의 정밀 감사 cannulated 동맥 준비에 직경 변화의 측정 혈관의 내 피-종속 및 endothelium 독립 메커니즘에 관한 매우 귀중 한 정보를 제공할 수 있습니다. 휴식, 뿐만 아니라 고혈압, 높은 소금 다이어트, 그리고 다른 실험 개입으로 발생 하는 혈관 제어 메커니즘에서 중요 한 (그리고 때로는 예기치 않은) 변경. 더하여, 압력-직경 관계의 절연 측정과 cannulated 극대로 Ca2 +치료에 의해 완화 저항 동맥-무료 솔루션 또는 약리학 vasodilator 약물 평가 하기 위해 조사를 수 동맥 동맥 기능에 영향을 미칠 수 있는 동맥의 수동 기계적 특성의 변화에 중요 한 통찰력을 제공할 수 있는 수동 응력-변형 관계7 을 계산 하 고 혈관 개장 때문에 구조적인 변화 독립 (또는 이외에)의 활성 제어 메커니즘에 변경합니다. 그것은 또한 절연된 저항 동맥의 연구에서 얻은 정보 LDF, 전체 동물 레벨8,9 조직 관류를 평가 하기 위한 실용적인 방법을 이용 하 여 얻은 정보에 의해 보완 될 수 있습니다 주의 하는 것이 중요 ,10, microvessel 밀도 붙일 이라는 GS1 lectin를 사용 하 여 평가에서 얻은 정보로는 특히 작은 arterioles, 모세 혈관11 의 지하실 막에 있는 당단백질 moieties에 바인딩합니다 , 12. 후자의 방법을 고전적인 어려움 혈관에서 vivo에서, 예를 들어 비 끼얹는다 누락 계산 하 여 microvessel 밀도 추정에 적용 되지 않습니다 microvessel 밀도의 매우 정확한 견적 제공 선박 어디 혈 arterioles의 활성 폐쇄로 인해 중지. 함께 사용 하는 경우 이러한 접근 기능 변경 수준 microcirculatory; 조직 관류의 변화에 절연된 저항 동맥에 연결 하는 중요 한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 그리고 cannulated 동맥 기술와 함께에서 이러한 중요 한 접근 방법의 사용의 몇 가지 예 또한 현재 원고에 제공 됩니다.
현재 종이 outbred Sprague-Dawley 쥐의 동맥에서 혈관 변화를 평가 하기 위해 비디오 현미경 검사 법 기술의 사용에 초점을 맞추고. 그러나, 그것은 중요 이러한 기술을 elucidating 선택적 번 식 또는 유전자 기술을 사용 하 여 편집에 의해 만들어진 고도로 전문화 된 유전자 조작된 쥐 긴장에서 phenotypic 변경에 매우 유용한 것으로 입증 되었습니다. 이 원고를 제공 어떻게 비디오 현미경 검사 법 기술의 예 수 귀중 한 쥐에에서 혈관 기능에 관한 중요 한 정보에서 가장 널리는 Dahl 소금에 민감한 (SS) 타고 난된 쥐 쥐 한 긴장을 포함 한 모델 제공 실험 모델을 사용 하는 소금 민감한 hypertenson18,19,20,21,,2223;의 메커니즘 연구 그리고 consomic 쥐 소금 구분 브라운 노르웨이 (BN) 쥐 긴장 SS 쥐의 선택적인 breeding를 통해 만든. Consomic 쥐 패널에서 갈색 노르웨이 쥐에서 모든 염색체 introgressed Dahl SS24,,2526 유전 배경으로 개별적으로 되었습니다. 혈압 및 혈관 반응성24,25,26 포함 하 여 다른 고기 소금 감도에 기여 하는 특정 염색체에 관한 귀중 한 단서를 제공 하는 consomic 쥐 패널의 사용 ,,2728.
SS 쥐와 개별 BN 염색체를 운반 하는 consomic 쥐를 이용 하 여 선택적 번 식 전략 또한 Dahl SS 유전으로 개별 브라운 노르웨이 염색체 introgressed의 작은 세그먼트와 좁게 congenic 긴장의 생성 활성화 배경22,29 이 제공 하는 매우 귀중 한 입력된에 특정 한 유전자 또는 혈압, 신장 손상, 혈관 반응성22,29등 중요 한 생리 적 변수 영향을 미칠 수 있는 염색체의 지구를 좁힐 수 있습니다. 쥐 유전자 도구 상자에 또 다른 강력한 추가 쥐 유전자 녹아웃 모델 ZFNs, transcriptional 활성 제 같은 이펙터 nucleases (TALENS)를 포함 한 기술을 편집 고급 유전자를 활용 하 여 개발 하 고 가장 최근에 CRISPR-Cas913 ,,1415,,1617. 쥐에 기 절 하는 유전자를 활성화 하는 이러한 강력한 기술의 출현은 대단히 중요 한 발전 날짜에 유전자 녹아웃 학문의 사용 (및 계속 사용) 마우스 때문에 거의 독점적으로. 현재 종이 다른 실험적인 구성 요소 cannulated 동맥 기술 및 녹아웃 쥐 마스터 항 산화 및 세포 보호 전사 부족에 생리 적 제어 메커니즘을 평가 하기 위해 비디오 현미경의 값을 보여 줍니다. 요소, 핵 팩터 (erythroid 파생 2)--2 (NRF2)30,31, Sprague-Dawley 유전 배경17TALEN 기술을 사용 하 여 개발 되었다. 그 실험에서 NRF2 유전자의 손실의 기능 검증을 제공 하 고 잠재적으로 귀중 한 치료 접근을 중재 하는 NRF2 항 산화의 직접 upregulation에 따라 테스트를 비디오 현미경 기술은 생체 외에서 사용 되었다 방어입니다. NRF-2는 항 산화 비타민 C와 E32등의 직접적인 관리를 포함 하는 임상 시험의 실망 스러운 결과 비추어 인간에서 혈관 산화 스트레스를 싸우는에 상당한 치료 중요 합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>SS Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS/JHsd/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS.5BN Consomic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS-Chr 5BN/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SS.13BN Consomic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS-Chr 13BN/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ren1-BN Congenic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS.BN-(D13hmgc41-D13)hmgc23/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ren1-SSA Congenic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS.BN-(D13rat77-D13rat105/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ren1-SSB Congenic Rat</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SS.BN-(D13rat124-D13rat101/Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nrf2(-/-) Knockout Rat and Wild Type Littermates</td>
			<td>Medical College of Wisconsin</td>
			<td>SD-Nfe212em1Mcwi strain</td>
			<td>Contact Dr. Aron Geurts (ageurts@mcw.edu)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Salt Rat Chow (0.4% NaCl)-AIN-76A</td>
			<td>Dyets, Inc.</td>
			<td>113755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Salt Rat Chow (4% NaCl)-AIN-76A</td>
			<td>Dyets, Inc.</td>
			<td>113756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colorado Video Caliper</td>
			<td>Colorado Video, Inc.</td>
			<td>Model 308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video Camera</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>KPM1AN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus Life Science</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Television Monitor</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>WVBM1410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure Transducers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>56360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Display Unit</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannulated Artery Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td>Single vessel chamber for general use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Controller for Single Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>TC-09S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Dispersion Tube, Miniature,Straight</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>GD-MS</td>
			<td>Provides aeration in the vessel bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Exchange Oxygenator, Miniature</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>OX</td>
			<td>Allows gas exchange with perfusate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser-Doppler Flowmeter</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PeriFlux 5000 LDPM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GS1 Lectin</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>RL-1102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary Tubes for Micropipettes</td>
			<td>Fredrich Haer Co.</td>
			<td>27-33-1</td>
			<td>2 mm ODX1 mm ID</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verticle Pipette Puller</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 700C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon suture material (10/0)-3 PLY</td>
			<td>Ashaway Line and Twine Manufacturing Co.</td>
			<td>114-ANM-10</td>
			<td>Single strands of 3 ply nylon suture teased out for use on vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps-Inox</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15003-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protandim</td>
			<td>Protandim</td>
			<td></td>
			<td>NRF2 Inducer: Contact Dr. Joe McCord (JOE.MCCORD@UCDENVER.EDU)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP358-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose (d-glucose) anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate (MgSO4-7H2O)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1880-500 G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride (CaCl2-2 H2O)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate-Monobasic (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0751-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P217-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED255-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of vascular control mechanisms utilizing video microscopy of isolated resistance arteries of rats

이 프로토콜 텔레비전 현미경 고립된 대뇌 저항 동맥 (와 다른 배), 혈관 기능을 평가 하기 위해 생체 외에서 의 사용을 설명 하 고 레이저 도플러 Flowmetry (LDF를 사용 하 여 조직 관류를 평가 하기 위한 기술에 설명 합니다. )와 microvessel 밀도 붙일 활용 Griffonia simplicifolia (GS1) lectin를 표시. 현재 공부에 대 한 과거 발생 압력에서 vivo에서 에서 저항 동맥을 분리 방법과 parenchymal 세포 영향의 부재에서 vivo에서 연구와 분자에서 얻은 정보 사이의 중요 한 링크를 제공 전체 동물 수준에서 통합 응답에 제한 된 통찰력을 제공 하는 reductionist 접근. 선택적으로 붙일 레이블 GS1 lectin arterioles, 모세 혈관을 식별 하는 LDF 및 기술 절연된 저항 동맥의 연구에서 얻은 지식을 확장할 수 사관 수 있도록 실용적인 솔루션을 제공 합니다. 이 종이 혈관 생리학과 병리학 일반 실험 모델 쥐에서의 기본적인 지식을 얻기 위해 이러한 기술의 응용 프로그램을 설명 하 고 전문의 다양 한 제공할 수 있는 "디자이너" 쥐 종자를 유전자 조작 중요 한 혈관 고기에 특정 한 유전자의 영향으로 중요 한 통찰력. 녹아웃 마우스 모델에서 개발 된 과학 건물의 엄 함 확장 됩니다 선택적 번 식 전략과 쥐에 유전자 녹아웃 모델 생산을 위한 새로운 기술을 개발한 쥐 긴장에서이 귀중 한 실험적인 접근을 이용 하 고 그 지식을 잘 이해 생리 적 배경 및 그것의 큰 크기 때문에 생리 적 연구에 대 한 적합성과 더 관련 동물 모델을 확장 합니다.

과거 압력 정상 에 vivo에 에서 그리고 parenchymal 세포의 부재에서 cannulated 저항 동맥의 생체 외에서 현미경에 작은 저항 동맥 (큰 arterioles) 활성 톤을 영향을 미치는 요인의 연구에 대 한 허용 영향을 미칩니다. 다양 한 vasodilator 및 vasoconstrictor 자극에 선박과 일반 PSS, 캘리포니아2 +에서 과거 압력 상승에 대 한 조직적 응답의 반응성을 평가 하는 것 외에도-무료 PSS는 perfusate와 superfusate의 끝에 추가할 수 있습니다 최대 선박 직경 및 벽 두께 결정 하는 실험. 후자의 측정은 혈관 개장, 즉, 벽/루멘 비율 변화 혈압 또는 약리 에이전트의 관리에 대 한 응답에서 발생할 수 있는 변화 평가에 매우 중요 합니다. 캘리포니아2 +에서 극대로 동 공이 확장 되어 혈관의 직경의 측정-무료 PSS는최대 D와 D나머지 있는 최대 (캘리포니아2 +-100, x ((D최대-D나머지) /D최대)로 내장 음색을 계산 하는 데 유용 PSS 무료) 제어 평형 압력 (MCA에 대 한 일반적으로 80 mmHg)에 각각, 직경 (PSS), 휴식. 우리의 경험에서는, MCA에 활성 톤 평균 약 80 mmHg의 과거에서 40%. 극대 동 공이 확장 되어 동맥의 직경을 측정은 또한 직경을 측정 하 여 혈관의 수동 기계적 특성을 평가 하는 실용적인 방법을 압력 distending 및 결과를 사용 하 여 과거의 서로 다른 수준에서 동맥의 응력-변형 관계 및 선박7,56의 다른 기계적 성질을 계산 합니다.
그림 3 추가 선택적 번 식 접근법을 활용 하 여 SS.13BN 쥐에서 파생 된 3 좁혀 congenic 긴장의 도식 적인 표현입니다. 이러한 쥐 긴장에서 염색체 세그먼트 브라운 노르웨이 renin 대립 유전자 (Ren1 억)를 포함 하거나 또는 바로 (Ren1-SSA) 위에 또는 (Ren1-SSB) renin 유전자 소재 시 아래 그냥 잘라 (따라서 유지 SS renin 대립 유전자). 29연구에서는, 브라운 노르웨이 renin 대립 유전자를 포함 하는 염색체 세그먼트 포함만 25 유전자.
그림 4 endothelium 종속 vasodilator ACh에 대 한 응답을 보여 줍니다 (1 µ M) 남성 달 SS 쥐와는 3에서 고립 된 MCAs 좁혀 congenic 긴장 그림 3에 표시 된. 중 하나 나 포함 하는 (Ren1-BN) 또는 (Ren1-SSA) 바로 위에 차단 된다 (Ren1-SSB)는 renin 유전자 아래 약 25 유전자 (즉, renin 유전자 소재 시 주변 지역)의 지역 제한이 세 congenic 긴장의 결합된 사용. 그 실험에서 동물 normotensive 되었고 낮은 소금 먹이 (0.4 %NaCl) 다이어트. ACh 연구29 endothelium 종속 팽창 했다에 SS 부모의 스트레인 및 두 congenic 긴장 유지 SS renin 대립 유전자, 결 석 하지만 SS 유전 배경에서 BN renin 대립 유전자를 나르는 congenic 긴장에 복원 되었습니다. 그 연구의 결과 SS.13BN consomic 쥐57,58 를 이용 하 여 이전 연구의 결과 지지 하 고 강력한 증거를 제공 하는 내 피 기능 장애 normotensive 경우에 SS 쥐에 존재 하는 고 낮은 소금 다이어트를 먹이. 함께, 그 연구29,,5758 의 결과 지원 가설 SS 쥐에서 그 내 피 기능 장애 있다 낮은에 만성 노출의 결과로 renin 유전자의 장애인된 규정으로 인해 혈액에 angiotensin II의 수준입니다.
또 다른 연구59, 그림 5에 요약 비교 남성 달 SS 쥐와 SS.5BN consomic 쥐 염색체 5 (포함 브라운 노르웨이 유전자 운반에서 endothelium 종속 vasodilator ACh 격리 된 MCAs (MCA)에 대 한 응답 다양 한 isoforms의 시 토 크롬 P450 4A ω-hydroxylase)에 대 한. 그 연구에 동물 먹 힌 중 낮은 소금 (0.4 %NaCl) 또는 높은 소금 (4 %NaCl) 다이어트. SS 쥐에서 MCA 달리 endothelium 종속 팽창 ACh에 낮은 소금 규정식 먹이 SS.5BN consomic 쥐에서 MCA에 유지 되었다. 또한, (그리고 SS.13BN consomic 쥐57,58, Sprague-Dawley 쥐33,39,,4060, 골든 햄스터 에서 결과 달리 61), 높은 소금 다이어트는 CYP450 4A ω-hydroxylase를 나타내는 SS.5BN 쥐에 팽창 ACh 유도 제거 하지 못했습니다 및 20-hydroxyeicosatetraenoic 산 (20-HETE)는 중요 한 참여자 혈관 산화 스트레스 및 내 피 SS 쥐 그리고 다른 긴장에 규정식 소금 입구에 있는 고도 역이 기능 실험적인 관점에서 endothelium 종속 팽창 ACh 제거 하 고 소금 다이어트의 실패 어떻게 cannulated 저항 동맥의 연구는 전통적인 지혜에서 출발 하는 예기치 않은 결과 생성할 수 있습니다의 예를 제공 하 고 이러한 중요 한 혈관의 기능에 영향을 미치는 복잡 한 제어 메커니즘의 새로운 이해를 발생할 수 있습니다.
그림 6 ACh에 고립 된 MCA의 응답은 (1 µ M) 야생 유형 및 Nrf2(-/-) 에서 녹아웃 쥐 낮은 소금 다이어트 먹이 (0.4 %NaCl), 높은 소금 다이어트 (4 %NaCl), 또는 알려진된 NRF2 활성 제30,62 포함 하는 높은 소금 다이어트 . 소금 유발 산화 스트레스의 부재, ACh 유도 팽창 MCA에서 야생 유형 및 Nrf2(-/-) 녹아웃 쥐에서 유사 했다. Sprague Dawley 쥐의 이전 연구의 결과와 일치, 높은 소금 다이어트 ACh 유도 팽창 야생 유형 및 Nrf2(-/-) 녹아웃 쥐 제거. 또한 높은 소금 다이어트 NRF2 유도의 복원 endothelium 종속 팽창 ACh Nrf2 유전자 녹아웃 쥐에서의 성공적인 제거를 보여주는 Nrf2(-/-) 쥐에 강포한 유형 쥐만 그리고 혈관 산화 스트레스를 개량 하는 치료 접근으로 NRF2 업-레 귤 레이 터를 사용 하 여 지원.
그림 7 LDF 측정 비교 pial 미세 혈관의 진보적인 감소 동맥 혈압 연속 혈액 볼륨 인출 Sprague-Dawley 쥐에 관리에 의해 생산에 응답의 결과 요약 일반 소금 (0.4 %NaCl) 다이어트 또는 높은 소금 (4 %NaCl) 4 주 동안 다이어트. 달리 낮은 소금 규정식 먹이 쥐, 쥐 먹이 높은 소금 다이어트 전시 대뇌 혈액 흐름 autoregulation에 대 한 책임 메커니즘은 나타내는 관류 압력의 감소 하는 동안 일정 한 혈액의 흐름을 유지 하는 장애인된 능력 높은 소금 다이어트에 장기 노출에 의해 손상. 그 실험의 결과 소금 먹인 쥐60 의 고립된 대뇌 동맥에 손상된 혈관 이완 메커니즘의 존재와 일치 하 고 지원 하 고 확장 LDF 측정 수 고용 하는 방법의 좋은 예를 제공 합니다 채용 하는 연구의 결과 절연 저항 동맥 혈관 전체 침대의 수준.
저항 동맥 기능 평가 이외에 사용 하 여 격리 된 동맥 조직 관류 레이저 도플러 flowmetry, microvessel 밀도 및 신생 응답 만성 근육 자극54, 등 다양 한 자극을 사용 하 여 55 붙일 레이블 GS1 lectin, arterioles, 모세 혈관의 지하실 막에 있는 당단백질 moieties에 선택적으로 묶는 활용 같은 동물에 평가할 수 있습니다. 그림 8 일반적인 lectin Sprague-Dawley 쥐 2 주 (참고 높은 소금 먹인된 쥐에서 microvessels의 더 낮은 밀도)에 대 한 낮은 소금 다이어트 또는 높은 소금 다이어트 먹이의 cremaster 근육에 얼룩을 보여 줍니다. Microvessel 밀도 lectin 표시 된 microvessels 컴퓨터에서 생성 된 참조 표52와 교차를 계산 하 여 평가 하며 신생 응답54,55 를 평가 하는 우수한 방법 또는 검색 및 계량 고혈압과 높은 규정식 소금 입구12,,1753같은 조건에서 microvessels의 손실.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig1.jpg"> 그림 1: 생체 외에서 비디오 현미경 셋업 절연, cannulated 저항 동맥 (A)를 공부 하는 고용. Cannulated 저항 동맥 유리 micropipettes (B)와 cannulated 저항 동맥 (C) 루멘 직경의 측정을 보여주는 비디오 마이크로 미터 디스플레이에 묶여있다. 패널 B에서 눈금 막대 cannulated 동맥 (µ m)의 내부 직경을 나타냅니다 패널 c에서 125 µ m 이며 실험을 실시 하는 관찰자에 의해 동맥의 내벽에 수동으로 배치 이동 참조 라인 사이의 거리의 비디오 디스플레이 . <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig2.jpg"> 그림 2: 중간 대뇌 동맥 뇌에서 분리 하 고는 micropipettes와 cannulation에 대 한 준비에 대 한 절차의 회로도. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig3.jpg"> 그림 3: Dahl 소금 민감한 유전 배경으로 갈색 노르웨이 염색체 13 introgressed의 작은 세그먼트는 데 좁혀 congenic 쥐 긴장의 회로도. 염색체 세그먼트 또는 브라운 노르웨이 renin 대립 유전자 (Ren1 억) 포함 (Ren1-SSA) 바로 위에 잘라 또는 바로 아래 (Ren1-SSB) renin 유전자 소재 시 및 따라서 SS renin 대립 유전자를 유지. 이 수치를 수정 하 고 듀란 외. 에서 증 쇄 하는 29 미국 생리 적인 사회의 허가. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig4.jpg"> 그림 4: 절연, 응답 SS의 MCAs 쥐 및 congenic 쥐 긴장 ( 그림 2에 나와 있는) 1 µ M 아 세 틸 콜린을 cannulated. 데이터 이전에 아 세 틸 콜린, 제어 직경 휴식에서 평균 지름 변화 (Δ μ m) ±SEM으로 표현 되 고 듀란 그 외 여러분 에 의해 원래 연구 합니다. 29 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig5.jpg"> 그림 5: 동물에 1 µ M 아 세 틸 콜린의 절연, cannulated SS의 MCAs 쥐과 SS.5BN consomic 쥐 응답 먹이 낮은 소금 (0.4 %NaCl) 또는 높은 소금 (4 %NaCl) 다이어트. 데이터 이전에 아 세 틸 콜린, 제어 직경 휴식에서 평균 지름 변화 (Δ μ m) ±SEM으로 표현 되 고 Lukaszewicz 그 외 여러분 에 의해 원래 연구 합니다. 64 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig6.jpg"> 그림 6: 응답 1 µ M 아 세 틸 콜린 Nrf2(-/-) 녹아웃 쥐와 야생 타입 컨트롤의 절연, cannulated MCAs에 낮은 소금 규정식 먹이 (0.4 %NaCl), 높은 소금 다이어트 (4 %NaCl), 또는 알려진된 NRF2 활성 제30, 를 포함 하는 높은 소금 다이어트 62. 데이터 이전에 아 세 틸 콜린 제어 직경 휴식에서 평균 지름 변화 (Δ μ m) ±SEM으로 표현 됩니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig7.jpg"> 그림 7: 뇌 혈액 흐름 pial 미세 혈관에 LDF에 의해 평가. Sprague Dawley 쥐 4 주에 대 한 높은 소금 다이어트 유지 동맥 혈압 연속 혈액 볼륨 인출에 대 한 응답에서 감소 되었다 혈액 흐름 상수를 유지 하는 그들의 기능에 상당한 장애를 전시. 데이터 제어 ±SEM의 평균 %로 그려집니다 * p < 동맥 압력을 의미 하는 동시에 낮은 소금 규정식 대 0.05. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56133/56133fig8.jpg"> 그림 8: 쥐 cremaster 근육 arterioles, 모세 혈관 microvessel 밀도의 평가 대 한 식별 GS1 lectin rhodamine 분류와 표시의 현미경 사진. Cremaster 근육 Sprague-Dawley 쥐 낮은 소금 먹이에서 가져온 (LS, 0.4 %NaCl) 또는 높은 (HS:4 %NaCl) 다이어트 2 주 동안 소금과 LS 컨트롤에 비해 HS 먹이 동물에 microvascular 진공을 보여줍니다. 눈금 막대 = 100 µ m. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56133/56133fig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

evaluation-vascular-control-mechanisms-utilizing-video-microscopy

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.2K 조회수.  Marquette University. 이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

비디오: Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

Accurate and Simple Evaluation of Vascular Anastomoses in Monochorionic Placenta using Colored Dye

The presence of placental vascular anastomoses is a conditio sine qua non for the development of twin-to-twin transfusion syndrome (TTTS) and twin anemia polycythemia sequence (TAPS)1,2. Injection studies of twin placentas have shown that such anastomoses are almost invariably present in monochorionic twins and extremely rare in dichorionic twins1. Three types of anastomoses have been documented: from artery to artery, from vein to vein and from artery to vein. Arterio-venous (AV) anastomoses are unidirectional and are referred to as "deep" anastomoses since they proceed through a shared placental cotyledon, whereas arterio-arterial (AA) and veno-venous (VV) anastomoses are bi-directional and are referred to as "superficial" since they lie on the chorionic plate. Both TTTS and TAPS are caused by net imbalance of blood flow between the twins due to AV anastomoses. Blood from one twin (the donor) is pumped through an artery into the shared placental cotyledon and then drained through a vein into the circulation of the other twin (the recipient). Unless blood is pumped back from the recipient to the donor through oppositely directed deep AV anastomoses or through superficial anastomoses, an imbalance of blood volumes occurs, gradually leading to the development of TTTS or TAPS. The presence of an AA anastomosis has been shown to protect against the development of TTTS and TAPS by compensating for the circulatory imbalance caused by the uni-directional AV anastomoses1,2. 
Injection of monochorionic placentas soon after birth is a useful mean to understand the etiology of various (hematological) complications in monochorionic twins and is a required test to reach the diagnosis of TAPS2. In addition, injection of TTTS placentas treated with fetoscopic laser surgery allows identification of possible residual anastomoses3-5. This additional information is of paramount importance for all perinatologists involved in the management and care of monochorionic twins with TTTS or TAPS. Several placental injection techniques are currently being used. We provide a simple protocol to accurately evaluate the presence of (residual) vascular anastomoses using colored dye injection.

Twin-to-twin transfusion syndrome and twin anemia polycythemia sequence are two potentially devastating problems in perinatal medicine. Both disorders occur only in monochorionic twins and result from unbalanced blood flow through placental vascular anastomoses. We provide a simple protocol to accurately evaluate the presence of vascular anastomoses using colored dye injection of placental vessels after birth.

유색 염료를 사용하여 Monochorionic 태반의 혈관 Anastomoses의 정확하고 간단한 평가

The presence of placental vascular anastomoses is a conditio sine qua non for the development of twin-to-twin transfusion syndrome (TTTS) and twin anemia ...

연구

의학

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in peripheral arterial bypass surgery as well as in arteriovenous fistulas.1-5 The experimental procedure of vein graft interposition in the common carotid artery by using the cuff-technique has been applied in several research projects to examine the aetiology of neointimal hyperplasia and therapeutic options to address it. 6-8 The cuff prevents vessel anastomotic remodeling and induces turbulence within the graft and thereby the development of neointimal hyperplasia.
Using the superior caval vein graft is an established small-animal model for venous arterialization experiment.9-11 This current protocol refers to an established jugular vein graft interposition technique first described by Zou et al., 9 as well as others.12-14 Nevertheless, these cited small animal protocols are complicated.
To simplify the procedure and to minimize the number of experimental animals needed, a detailed operation protocol by video training is presented. This video should help the novice surgeon to learn both the cuff-technique and the vein graft interposition. Hereby, the right external jugular vein was grafted in cuff-technique in the common carotid artery of 21 female Sprague Dawley rats categorized in three equal groups that were sacrificed on day 21, 42 and 84, respectively. Notably, no donor animals were needed, because auto-transplantations were performed. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice. In addition, the graft patency rate was 60 % for the first 10 operated animals and 82 % for the remaining 11 animals. The blood flow at the time of sacrifice was 8&plusmn;3 ml/min. In conclusion, this surgical protocol considerably simplifies, optimizes and standardizes this complicated procedure. It gives novice surgeons easy, step-by-step instruction, explaining possible pitfalls, thereby helping them to gain expertise fast and avoid useless sacrifice of experimental animals.

Neointimal hyperplasia is the primary cause of stenosis in arterialized veins. We propose a new protocol whereby the right external jugular vein is grafted using the cuff technique in the common carotid artery of Sprague Dawley rats. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice.

쥐 온목 동맥에 개재 외부 경정맥 정맥 이식의 : 정교한 Microsurgical 기술을 교육

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered perfusion can aid research into the mechanisms of retinal pathologies. Intravital video microscopy of fluorescent tracers can be used to measure vascular diameters and bloodstream velocities of the retinal vasculature, specifically the arterioles branching from the central retinal artery and of the venules leading into the central retinal vein. Blood flow rates can be calculated from the diameters and velocities, with the summation of arteriolar flow, and separately venular flow, providing values of total retinal blood flow. This paper and associated video describe the methods for applying this technique to mice, which includes 1) the preparation of the eye for intravital microscopy of the anesthetized animal, 2) the intravenous infusion of fluorescent microspheres to measure bloodstream velocity, 3) the intravenous infusion of a high molecular weight fluorescent dextran, to aid the microscopic visualization of the retinal microvasculature, 4) the use of a digital microscope camera to obtain videos of the perfused retina, and 5) the use of image processing software to analyze the video. The same techniques can be used for measuring retinal blood flow rates in rats.

Intravital microscopy can be used in animals to visualize and measure retinal vascular diameters, bloodstream velocities, and total retinal blood flow.

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Implementation of In Vitro Drug Resistance Assays: Maximizing the Potential for Uncovering Clinically Relevant Resistance Mechanisms

Although targeted therapies are initially effective, resistance inevitably emerges. Several methods, such as genetic analysis of resistant clinical specimens, have been applied to uncover these resistance mechanisms to facilitate follow-up care. Although these approaches have led to clinically relevant discoveries, difficulties in attaining the relevant patient material or in deconvoluting the genomic data collected from these specimens have severely hampered the path towards a cure. To this end, we here describe a tool for expeditious discovery that may guide improvement in first-line therapies and alternative clinical management strategies. By coupling preclinical in vitro or in vivo drug selection with next-generation sequencing, it is possible to identify genomic structural variations and/or gene expression alterations that may serve as functional drivers of resistance. This approach facilitates the spontaneous emergence of alterations, enhancing the probability that these mechanisms may be observed in the patients. In this protocol we provide guidelines to maximize the potential for uncovering single nucleotide variants that drive resistance using adherent lines.

Implementation of In Vitro Drug Resistance Assays: Maximizing the Potential for Uncovering Clinically Relevant Resistance Mechanisms

Drug resistance to targeted therapeutics is widespread and the need to identify mechanisms of resistance--prior to or following clinical onset--is critical for guiding alternative clinical management strategies. Here, we present a protocol to couple derivation of drug-resistant lines in vitro with sequencing to expedite discovery of these mechanisms.

구현<em&gt; 체외</em&gt; 약물 저항 분석법 : 임상 적 저항 메커니즘을 폭로 가능성을 극대화

Although targeted therapies are initially effective, resistance inevitably emerges. Several methods, such as genetic analysis of resistant clinical ...

Ultrasound Assessment of Flow-Mediated Dilation of the Brachial and Superficial Femoral Arteries in Rats

Arterial vasodilation to increases in wall shear rate is indicative of vascular endothelial function. In humans, the non-invasive measurement of endothelial function can be achieved by employing the flow-mediated dilation technique, typically performed in the brachial or superficial femoral artery. Briefly, a blood pressure cuff placed distal to an ultrasound probe is inflated to a suprasystolic pressure, which results in limb ischemia. After 5 min of occlusion the cuff is deflated, resulting in reactive hyperemia and increases in wall shear rate that signal vasodilatory molecules to be released from the endothelium eliciting vasodilation. Despite the thousands of studies performing flow-mediated dilation in humans, surprisingly, no studies have performed this technique non-invasively in living rats. Considering the recent shift in focus to translational research, the establishment of guidelines for non-invasive measurement of flow-mediated dilation in rats and other rodents would be extremely valuable. In the following article, a protocol is presented for the non-invasive measurement of flow-mediated dilation in brachial and superficial femoral arteries of rats, as those sites are most commonly measured in humans.

Non-invasive assessment of endothelial function in humans can be determined by the flow-mediated dilation technique. Although thousands of studies have used this technique, no study has performed this technique non-invasively in rats. The following article describes non-invasive measurement of flow-mediated dilation in the brachial and superficial femoral arteries of rats.

흐름 매개 상완의 팽창과 쥐의 피상적 인 대퇴 동맥의 초음파 평가

Arterial vasodilation to increases in wall shear rate is indicative of vascular endothelial function. In humans, the non-invasive measurement of ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

저항 동맥의 세포 문화 모델

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

창 자 호르몬 분 비는 격리를 사용 하 여 기본 메커니즘 끼얹는다 쥐 소장

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

쥐의 심근 허혈 재관류 후 관상 동맥 흐름 예비의 평가

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...