Yazarlar, bu iletişim kuralını µCT değerlendirilmesinde konusunda teknik yardım almak için Bay Boyin te (Şangay halk sağlığı Klinik Merkezi) için şükran ifade etmek istiyorum.

Not: OE model oluşturulan ve daha önce bildirilen araştırma 30 , 31 , 32 yılında kullanılan. Tüm hayvan deneyleri kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Shanghai Jiaotong Üniversitesi tarafından kabul edildi.
 1. fareler <ol><li>ev patojen ücretsiz, 7 - için 9-hafta-yaşlı kadın BALB/c fareler bir hayvan bireysel havalandırılmış kafeslerde tesis altında kontrollü sıcaklık (20 ° C) ve nem (40-%60). 12 h ışık ve 12 h tesisin karanlık döngüsünde sağlar. Gıda sağlamak ve ad libitum su.</li>
</ol> 2. Ozon veya hava pozlama <ol><li>Generate ozon ile sızdırmazlık akrilik (örneğin Perspex) kutusunda bir elektrik jeneratörü. Blow hava iç ve kutunun dışında bağlı bir hava havalandırma borusu aracılığıyla küçük Hava üfleyici kullanarak kutudan. Kutusuna bir ozon sonda kullanarak ozon konsantrasyonu izlemek. Kutusunda ozon konsantrasyonu başına 2.5 parçaları ulaşır kadar bekleyin milyon (ppm). 
	Not: Ozon sonda otomatik olarak Ozon Jeneratör açık veya kapalı geçiş yapabilir ve ozon seviyesi 2.5 ppm at kutusundaki koruyabilirsiniz.</li>
	Ozon seviyesi 2.5 ppm ulaştığında <li>fareler ve metin kutusuna yerleştirin. Fareler kutusunda 3 h için her zaman için ozon karşılaşmazlar devam. 
	Not: Kutu sırasında 3 h otomatik olarak Ozon Jeneratör açık veya kapalı geçiş yaparak bir ozon düzeyi 2.5 ppm koruyabilirsiniz ve CO 2 üfleme tarafından üretilen farelerin kutunun dışında.</li>
	<li>(3 günde bir kez) 7 hafta boyunca haftada iki ozon Etkilenmeler (3 saat süren her maruz kalma) vermek; aynı zamanda ve aynı süre için hava kontrol fareler ortaya çıkarmak.</li>
</ol> 3. Mikro bilgisayarlı tomografi <ol><li>pelltobarbitalum natricum mayi enjeksiyonu ile fareler 7 haftanın sonunda, anestezi (% 1, 0.6 - 0.8 ml/100 g) göre fare değil görmek için bireysel durumlarda doz ayarlama bir ayak çimdik. için monitör yanıt ve fare sürekli nefes frekansta tutun; ve gönüllü yok hareketleri var işlemler sırasında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Bir mikro Bilgisayarlı Tomografi (µCT) odasında imzalat fareler yer.</li>
	<li>Kalibre standart protokol ve üreticinin kullanma µCT &#39; s yönergeleri. X-ışını tüpü 50 ayarla kV ve 450 µA mevcut. 
	Not: Her ikisi de x-ışını ve Dedektör fareler döndürmek.</li>
	<li>Bir dilim için 300 MS bir çekim hızı ve bir dilim kalınlığı 0,093 mm etkili piksel boyutunu 515 projeksiyonlar 0.092 mm, kazanılması by µCT çözümlemesi yapma.</li>
	<li>Akciğer alınan görüntüleri bir yazılım kullanarak yeniden. En az ve en çok gri tonlamalı sırasıyla-750 ve-550 Hounsfield daxilində ayarlayarak gri tonlamalı görüntü parlaklığını ayarlayın. 
	Not: Yazılım otomatik olarak akciğer parankimi ve düşük-zayıflama alan (LAA) 34 , 35 hacimleri hesaplar.</li>
	<li>Toplam akciğer hacmi LAA hacimce bölerek LAA (LAA %) yüzdesini hesaplamak.</li></ol>
 4. koşu bandı Test <ol><li>fareler adaptasyon bir test üzerinde bir koşma koşu bandı makine. Not 10 m/dk 10 dk hızında vermek: yordamı yürütülen elektrik her zaman kapalı olduğunda.</li> <li>yönetici bir yorgunluk testi fareler için.
	<ol><li>Fare hızı 10 m/dak 5 dakika süreyle ısınmak</li>
		<li>Artmak belgili tanımlık hız 15 m/dk 10 dakika süreyle</li>
		<li>Egzersiz yoğunluğu artırmak: 5 m/dak, 20 m/dak başlangıç tarafından hızı artan fareler kadar her 30 dk. 36 çalıştırmak devam edemiyor.</li>
	</ol></li> <li>Çalışan mesafe ve çalışma süresi yorgunluk mesafe ve yorgunluk zaman, anılan sıraya göre toplam kayıt.</li></ol>
 5. pulmoner fonksiyon ölçümleri <ol><li>pelltobarbitalum natricum mayi enjeksiyonu ile fareler anestezi (% 1, 0.6 - 0.8 ml/100 g) göre fare yaptığını görmek için bireysel durumlarda doz ayarlama bir ayak çimdik değil yanıt vermek ve fareler spontan solunum. monitör korumuştur ve fare sürekli nefes frekansta tutun kadar bekleyin; ve gönüllü yok hareketleri var işlemler sırasında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Dikkatle fareler tracheostomize ve bilgisayar kontrollü bir vantilatöre bağlı bir vücut Pletismograf yerleştirebilirsiniz. 
	Not: Havalandırma proksimale endotrakeal tüp bulunan bir vana ile kontrol edilir. Belgili tanımlık tertibat yarı statik basınç birimi manevra ve manevra hızlı akış hacminin de dahil olmak üzere farklı yarı otomatik manevralar sağlar.</li>
	<li>Her nefes döngüsü tam bitiminde elde edilir ve ortalama 150 nefes/dk düzenli nefes desen kadar basınç kontrollü havalandırma yoluyla imzalat fare sıklığını nefes empoze.</li>
	<li>Yarı statik basınç-hacim manevra aygıtla Pletismograf içinde oluşturulan negatif basınç kullanarak gerçekleştirmek.</li>
	<li>Hızlı Akış birim manevra FVC ve FEV kaydetmek için yarı statik basınç-hacim döngüler içinde gerçekleştirin. + 30 cm H 2 akciğer şişirmek O ve hemen sonrasında kalan birim FEV ilk 25, 50 ve soluk verme (FEV 25 75 ms-30 cm H 2 de O. kayıt olana sona erme zorlamak için son derece olumsuz bir basınç bağlanmak FEV 50 ve FEV 75, sırasıyla). Suboptimal manevralar reddetmek. Her tek fare ile her test için düzenleyeceği en az tüm sayısal parametreler için güvenilir bir ortalaması elde etmek için üç kabul edilebilir manevralar.</li>
</ol> 6. BALF koleksiyonu <ol><li>ardından terminal anestezi ile pelltobarbitalum natricum ((%1, 1,8-2.4 ml/100 g) fareyi bir ayak çimdik cevap değil ve nefes kaybetmek görmek için bireysel durumlarda göre doz ayarlamak), lavaj PBS 2 mL 1 mm çaplı endotrakeal tüp ve sonra al BALF 10 üzerinden ile fareler.</li>
	<li>Erişim tarihi lavaj aliquots havuz ve onlara 4 ° C ve 250 x g 10 dakika süreyle santrifüj kapasitesi</li>
	<li>İçin acele kullanma süpernatant toplamanız ve kalan-80 ° C ya da sıvı azot,.</li>
	<li>Bir hemasitometre kullanarak hücreleri toplam sayısını saymak.</li>
	<li>PBS ve sonra spin (1400 x g, 6 dk.) 250 µL slayta bir slayt spinner santrifüj kullanarak resuspended hücrelerinin hücre Pelet resuspend.</li>
	<li>İçin geçerli Wright boyama hücreleri slaytlara üreticiye göre &#39; s protokolü.</li>
	<li>Fare başına 200 hücreleri saymak; 400 X büyütme altında; Standart Morfoloji göre hücreleri makrofajlar veya nötrofil, tanımlamak ve sayıları saymak.</li>
</ol> 7. Kalp kan örnekleme <ol><li>kardiyak ponksiyon yoluyla kan toplamak, 1.5 mL tüpler, içine yük ve buz 30 dakika süreyle devam et</li>
	<li>2000 g x ve 4 5 min için kan örnekleri santrifüj kapasitesi ° C.</li>
	<li>Süpernatant (serum) için yeni bir tüp aktarın ve-80 ° C ya da sıvı azot depolayın.</li>
	<li>IL-1β için serum hazırlamak IL-10 ve ilgili ELISA Kitleri kullanarak TNF-α algılama testleri.</li>
</ol> 8. Akciğer xarakteristikaları analizi <ol><li>teşrih akciğerler ve fareler üzerinden tracheas.
	<ol><li>Cerrahi bir tahta üzerine euthanized her fare hemen kurbandan sonra konumlandırın.</li>
		<li>Uzak platysma incelemek ve görselleştirmek ve trakeal halkalar erişmek için ön trakeal kaslar.</li>
		<li>Açık yukarıya göğüs boşluğuna. Akciğerler ve nefes borusu incelemek, ama kalp akciğerlerden ayırmayın.</li>
	</ol>
	</li> <li>%4 paraformaldehyde PE90 polietilen boru aracılığıyla içeren bir şırınga endotrakeal kateter bağlanmak. 
	Dikkat: Paraformaldehyde zehirlidir. Eldiven ve koruyucu gözlük ve duman başlık içinde çözüm kullanın.</li>
	<li>Tamamen %4 paraformaldehyde (10 damla, ~ 200 µL) kullanarak akciğer endotrakeal kateter şişirmek. Kalp enflasyon tamamlandıktan sonra kaldırın.</li>
	<li>Bakım için en az 4 h %4 paraformaldehyde 10 mL içeren 15 mL tüp içinde akciğer</li>
	<li>Embed parafin akciğerde. 5-µm bölümleri parafin blok bir döner microtome ile kesit elde. Kesit sırasında maruz maksimum yüzey alanı bronş ağacının alanı içinde akciğer dokusunun.</li>
	<li>Xarakteristikaları için Hematoksilen ve Eozin çözümlemesi (H &#38; E) bölümleri boyama.</li>
	<li>Bölümleri alan parlak dik mikroskopla (objektif lens, 20 X; pozlama süresi, 1.667 ms) görüntü.</li>
	<li>İki müfettişler tedavi protokolü kör bağımsız olarak saymak histolojik kesitler var. Ortalama doğrusal kesme noktası (L m) arası alveoler septal duvar mesafe ölçmek için bir parametre olarak kullanmak. Aşağıdaki adımları uygulayarak L m belirlemek: <ol><li>bölümleri görüntüleri Photoshop açın ve beş 550 µm uzun hatları ile görüntü üzerinde reticule kılavuz çizin.</li>
		<li>Alveoller arasında kılavuz çizgisi sayısını.</li>
		<li>L m kılavuz çizgisi uzunluğunu alveoller sayısına bölünmesi ile hesaplayın. Miktar için fare başına beş bölüm görüntü. Her bölümün (alan başına bir görüntü) on görüntüleri ve rastgele değerlendirmek. Bir alan önde ya da başka bir yöne hareket ettirerek airways ve gemiler alan seçimi sırasında kaçının. 
		Not: Veri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır Un eşleştirilmiş bir t-test hava maruz fareler ve fareler ozon maruz arasında karşılaştırma için gerçekleştirilmiştir. Her grubun üç hayvan önemli farkı hesaplamak için kullanılmıştır. P-değeri &#60; 0,05 olarak önemli kabul.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Z.W.S. ve chilling geçerli çalışanları ve hücresel Biyomedikal grup hisse senedi opsiyonu sahipleri vardır (NASDAQ: CBMG). Diğer yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Bu çalışmada, biz yeni bir KOAH model oluşturmak için güvenilir bir yöntem mevcut. Diğer modeller için (Yani, LPS ya da KKE modelleri) karşılaştırıldığında, bu OE model KOAH hastaları patolojik süreci beyannamedir. Sigara dumanı KOAH insan hasta40neden olan ana tehlikeli madde olduğundan, CS model en popüler KOAH model41,42kalır. Ancak, 3 - 12 ay R CS model gerektirir &#38; D dönem için yeni ilaçlar. CS modeline göre geçerli OE modeli üretimi dönemi 6-8 hafta için azaltır. Biz erkek farelerde amfizem ozon etkilenme 6 hafta sonra bizim önceki çalışmalar30,31,32gözlemledim. Bu çalışmada OE Protokolü dişi fareler için 7 hafta boyunca uygulanan ve başarılı bir şekilde bir kadın OE model oluşturulan. Çünkü KOAH ölüm oranı erkeklerde azaldı ama bazı ülkeler33kadınlarda artış bildirilmiştir, patojenik mekanizmaların çalışmaya ve bir kadın KOAH modeli kullanarak kadın KOAH hastaları için tedavi yaklaşımları geliştirmek için gereklidir. Yukarıda belirtilen KOAH modelleri (Yani, LPS, KKE ve CS) her iki erkek ve dişi hayvanlar43çalıştığını biliyoruz. Bu çalışmanın amacı, hem KOAH hastaları patolojik süreci recapitulates ve çok kısa bir nesil süre gerektiren ek bir KOAH modeli teklif etmekti.
Bu model oluşturmak için önemli bir adım fareler iki kez her hafta (3 günde bir kez) 6-8 hafta (2.5 ppm düzeyinde) ozon için açığa (doz yükseltme deneyin vermedi rağmen bu çalışmada, biz 7 hafta kullanılır). Maruz kalma sıklığı ve ozon konsantrasyonu kritik parametreleri kontrol ederek, başarılı bir şekilde erkek C57BL/6 fareler31,32, erkek BALB/c fare30ve kadın BALB/c fare (geçerli amfizem çoğaltılamaz çalışma). Hava akımı sınırlama ve akciğer parenkima yıkım KOAH hastaları44,45'. görülen değişikliklere benzer ile ozon maruz amfizem fenotip sonuçlandı
Hala bu çalışma için sınırlamalar vardır. Örneğin, akciğerler anatomi insan KOAH patogenezi ile ilgili çünkü hayvanlarda insanlar için benzer bir akciğer anatomik yapıya sahip ideal bir KOAH modeli oluşturulması. Büyük hayvanlar için karşılaştırıldığında, küçük hayvanlar insanlar46dallanma daha az kapsamlı hava yolu sahip. Biz büyük hayvanlarda KOAH modeli oluşturmak için daha anlamlı olacağını itiraf etmeliyim. Ancak, büyük ölçekli modeller hayvanlarda kurmak çok zordur. Bu model başka bir sınırlaması klinik önemi var. Ozon tepki ile solunum yolu ve akciğer doku19,22zarar kesin olmasına rağmen ve ozon28maruz kaldıktan sonra bazı KOAH hastaları belirtileri kötüleşmek kanıt olsa, Ozon ana KOAH hastalarında nedeni değil. Ancak, biz hala teklif ve ozon ve CS solunum sistemi zarar iltihap inducing ve oksidatif stres26,27için neden çünkü bu OE modelini kullanarak. Bu nedenle, KOAH OE modeli olabilir assumably tedavi olabilir yeni bir ilaç da CS modelinde iş ve bu nedenle potansiyel olarak KOAH hastaları için geliştirilecek.
Uygulamalar OE modelinin KOAH moleküler ve hücresel mekanizmaları deşifre için sınırlı değildir. İki son belgeler de N-acetylcysteine (NAC)31 ve OE modeli için iki ilaç eksojen yönetim üzerinden KOAH tedavisi, NaHS32 (H2S eksojen bir donör) etkinliği araştırıldı. İlk çalışmada, hava yolu hiper-yanıt ters ve hava yolu düz kas kitle azaltma NAC yönetim sonra bulduk. Bu efektleri NAC potansiyel klinik yararları KOAH hastaları31yılında temeli olduğunu gösterebilir. OE modelinin ikinci çalışmada akciğer iltihabı ters ve amfizem özelliklerini kısmen tersine eksojen NaHS yönetim bulduk. Böylece, bu OE modeliyle biz NaHS KOAH hastaları32için potansiyel bir uyuşturucu aday olarak geliştirilebilir bir ön çalışmada gösterdi. Bu nedenle, OE model hem mekanizması araştırma için potansiyel uygulamalar ve KOAH için uyuşturucu tarama vardır.

KOAH, Amfizem ve kronik bronşit gibi ölüm üçüncü önde gelen nedenidir 20201,2dünyada olabilir tahmin ediyor. KOAH potansiyel insidansı 40 yıldır eski bir popülasyondaki erkeklerde % 12,7 ve dişilerde3önümüzdeki 40 yıl içinde % 8.3 olduğu tahmin edilmektedir. Hiçbir ilaç KOAH hastaları4ilerleyici bozulma tersine çevirmek şu anda mevcuttur. KOAH güvenilir hayvan modelleri sadece hastalık patolojik süreci taklit talep ediyorum ama aynı zamanda kısa nesil süresi gerektirir. LPS veya bir PPE kaynaklı modeli de dahil olmak üzere geçerli KOAH modelleri amfizem benzeri semptomlar5,6tetikleyebilir. Tek bir yönetim veya işaretli neutrophilia bronchoalveolar lavaj sıvı (BALF), artar pro-inflamatuar aracılar (Örneğin, TNF-α ve IL-1β) BALF veya serum, fare ya da sıçan sonuçlarında LPS veya KKE bir haftalık meydan okuma akciğer üretir parenkimal imha genişlemiş hava boşluk ve sınırları hava akımı5,6,7,8,9,10. Ancak, LPS veya KKE insan KOAH nedenleri değildir ve böylece patolojik süreç11taklit değil. CS kaynaklı manken üretilen bir kalıcı hava akımı sınırlama, akciğer parenkima yıkım ve fonksiyonel egzersiz kapasitesi düşük. Ancak, geleneksel bir CS Protokolü KOAH model12,13,14,15oluşturmak için en az 3 ay gerekir. Böylece, iki gereksinimlerini karşılayan yeni, daha etkili bir hayvan modeli oluşturmak önemlidir.
Son zamanlarda, ek olarak sigara, hava kirliliği ve mesleki maruz kalma KOAH16,17,18daha yaygın nedenleri olmuştur. Ozon, önemli kirletici biri olarak (değil önemli bileşeni hava kirliliği rağmen), doğrudan solunum yolu ile tepki ve çocuklar ve genç yetişkinler19,20,21 akciğer dokusuna zarar ,22,23,24,25. Ozon yanı sıra LPS, KKE ve CS, de dahil olmak üzere diğer uyarıcılar bir ciddi pulmoner oksidatif stres ve DNA hasarı biyokimyasal yolları katılmaktadırlar ve inisiyasyon ve promosyon KOAH26,27bağlantılıdır. Bazı KOAH hastaları belirtileri gösteren ozon Akciğer işlev18,28,29bozabilir ozon için maruz sonra bozulabilir başka bir faktördür. Bu nedenle, biz tekrar tekrar 7 hafta boyunca fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir KOAH model oluşturulan; Bu hava akımı kusurları ve akciğer parenkima hasarı önceki araştırmalar30,31,32benzer sonuçlandı. Biz bu çalışmada kadın farelere OE Protokolü genişletilmiş ve başarılı bir şekilde bizim önceki çalışmalar30,31,32erkek farelerde gözlenen amfizem çoğaltılamaz. KOAH ölüm oranı erkeklerde azaldı ama birçok ülkede33kadınlarda artmıştır çünkü KOAH manken dişilerde mekanizmaları çalışmaya ve kadın KOAH hastaları için tedavi yöntemleri geliştirmek için gereklidir. Tüm cins OE modeline uygulanabilirliği KOAH manken olarak kullanmak için daha fazla destek ödünç.

<table><tbody><tr><td>BALB/c mice</td><td>Slac Laboratory Animal,Shanghai, China</td><td>N/A</td><td>7-to-9-week-old female BALB/c mice were used in this study.</td></tr><tr><td>Individual ventilated cages</td><td>Suhang, Shanghai, China</td><td>Model Number: MU64S7</td><td>The cages were used for housing mice in the animal facility.</td></tr><tr><td>Sealing perspex-box</td><td>Suhang, Shanghai, China</td><td>N/A</td><td>The box was used&amp;nbsp; to contain the ozone generator. Mice were exposed to ozone within the box.</td></tr><tr><td>Electric generator</td><td>Sander Ozoniser, Uetze-Eltze, Germany</td><td>Model 500&amp;nbsp;</td><td>The device was used for generating ozone.</td></tr><tr><td>Ozone probe</td><td>ATi Technologies, Ashton-U-Lyne, Greater Manchester, UK</td><td>Ozone 300</td><td>The device was used for monitoring and controlling the generation of ozone.</td></tr><tr><td>Pelltobarbitalum natricum</td><td>Sigma, St. Louis, MO, USA</td><td>P3761</td><td>Mice were anesthetized by intraperitoneal injection of pelltobarbitalum natricum.</td></tr><tr><td>Micro-Computed Tomography</td><td>GE Healthcare, London, ON, Canada</td><td>RS0800639-0075</td><td>This device was used for acquiring images of the lung.</td></tr><tr><td>Micro-view 2.01 ABA software</td><td>GE Healthcare, London, ON, Canada</td><td>Micro-view 2.01&amp;nbsp;</td><td>This device was used for reconstruct the lung and analyze volume, LAA of the lung.</td></tr><tr><td>Treadmill machine&amp;nbsp;</td><td>Duanshi, Hangzhou, Zhejiang, China</td><td>DSPT-208</td><td>This machine was usd for fatigue test.</td></tr><tr><td>Body plethysmograph</td><td>eSpira&amp;trade; Forced Manoeuvres System, EMMS, Edinburgh, UK</td><td>Forced Manoeuvres System</td><td>This device was used to test spirometry pulmonary function.</td></tr><tr><td>Ventilator</td><td>eSpira&amp;trade; Forced Manoeuvres System, EMMS, Edinburgh, UK</td><td>Forced Manoeuvres System</td><td>This device was used to test spirometry pulmonary function.</td></tr><tr><td>Slide spinner centrifuge</td><td>Denville Scientific, Holliston, MA, USA</td><td>C1183&amp;nbsp;</td><td>It was used to spin BALF cells onto slides.</td></tr><tr><td>Wright Staining</td><td>Hanhong, Shanghai, China</td><td>RE04000054</td><td>&amp;nbsp;It was used to staining macrophages, neutrophils in the suspended BALF.</td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>Hausser Scientific, Horsham, PA, USA</td><td>4000</td><td>It was used to count cells.</td></tr><tr><td>IL-1&amp;beta;</td><td>Abcam, Cambridge, MA, USA</td><td>ab100704</td><td>They were used to test the respective factors in serum.</td></tr><tr><td>IL-10</td><td>Abcam, Cambridge, MA, USA</td><td>ab46103</td><td>They were used to test the respective factors in serum.</td></tr><tr><td>TNF-&amp;alpha;</td><td>Abcam, Cambridge, MA, USA</td><td>ab100747</td><td>They were used to test the respective factors in serum.</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde&amp;nbsp;</td><td>Sigma, St. Louis, MO, USA</td><td>P6148</td><td>The lung was inflated by 4% paraformaldehyde.</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Hualing, Shanghai, China</td><td>56#</td><td>It was used to embed the lung.</td></tr><tr><td>Rotary Microtome</td><td>Leica, Wetzlar,&amp;nbsp; Hesse, Germany</td><td>RM2255</td><td>It was used for sectioning the lung.</td></tr><tr><td>Hgaematoxylin and Eosin (H&amp;amp;E) staining solution</td><td>Solarbio, Beijing, China</td><td>G1120</td><td>H&amp;amp;E staining was done for morphometric analysis.</td></tr><tr><td>Upright bright field microscope</td><td>Olympus, Center Valley, PA, USA</td><td>CX41</td><td>It was used to image the H&amp;amp;E staining slides.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 12</td><td>Adobe, San Jose, CA, USA</td><td>Adobe Photoshop 12</td><td>It was used to count the number of alveoli on the H&amp;amp;E stained images.</td></tr><tr><td>GraphPad prism 5</td><td>Graphpad Software Inc., San Diego, CA</td><td>GraphPad prism 5</td><td>It was used for data analysis and production of figures.</td></tr></tbody></table>

generation of a chronic obstructive pulmonary disease model in mice by repeated ozone exposure

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) tarafından kalıcı hava akımı sınırlama ve akciğer parenkima imha karakterizedir. Nüfus yaşlanma içinde bir çok yüksek insidansı vardır. Geçerli geleneksel tedaviler KOAH odak çoğunlukla açık belirti-modifiye ilaçlar için; Böylece, yeni tedavilerin geliştirilmesi acilen ihtiyacı vardı. KOAH nitelikli hayvan modelleri temel mekanizmaları karakterize etmek için yardımcı olabilir ve yeni ilaç tarama için kullanılabilir. Lipopolysaccharide (LPS) gibi geçerli KOAH modelleri veya domuz pankreas elastase (PPE)-indüklenen amfizem modeli, akciğerler ve airways KOAH benzeri lezyonlar oluşturur ancak aksi takdirde insan KOAH patogenezinde benzer değil. Bir sigara dumanı (CS)-indüklenen model kalır en popüler çünkü sadece solunum sistemi lezyonlarının KOAH gibi taklit eder, ama bu da insanlarda KOAH neden ana tehlikeli madde birini dayanır. Ancak, CS kaynaklı modeli zaman alıcı ve emek yoğun yönlerini önemli ölçüde kendi uygulamasında yeni uyuşturucu tarama sınırı. Bu çalışmada, biz başarıyla yeni KOAH manken fareler için ozon yüksek düzeyde maruz tarafından oluşturulan. Bu modeli aşağıda gösterilmiştir: 1) zorunlu Ekspiratuar cilt 25, 50 ve 75/zorla vital kapasite azalmıştır (FEV25/FVC, FEV50/FVC ve FEV75/FVC), akciğer fonksiyonu; bozulma gösteren 2) büyütülmüş akciğer alveoller akciğer parenkima imha ile; 3) yorgunluk zaman ve mesafe azalır; ve 4) artış iltihabı. Birlikte ele alındığında, bu veriler ozon pozlama (OE) modeli ozon dozun KOAH etyolojik faktörlerden biri olduğu için insanlara benzer bir güvenilir hayvan modeli olduğunu ispat. Ayrıca, sadece 6-8 hafta, 3-12 ay OE modeli KOAH araştırma için iyi bir seçim olabilir gösteren sigara dumanı modeli ikna etmek için gerektirir, ancak bir OE modeli oluşturmak için önceki çalışmalarımız, temel aldı.

3D µCT görüntüleri her grubun örnekleri şekil 1biriçinde görüntülenir. Önemli ölçüde daha büyük bir toplam akciğer hacim ozon maruz fareler vardı (şekil 1bir ve b) ve LAA % (şekil 1c) hava maruz kontrol fareler daha. Akciğer hacmi ve LAA % ozon pozlama31,32altı hafta sonra yükseltilmiş kaldı. Artan akciğer hacmi ve LAA % amfizem fenotip temsil eder. Şekil 2bir içinde akciğer alveoler genişlemenin örnekler amfizem oluşumu göstermektedir. Farelerde akciğer parenkima imha ozon maruz kaldıktan sonra meydana geldiğini doğruladı ozon maruz (Şekil 2b), ortalama doğrusal kesme noktası (Lm) bir artış gözlenmiştir.
Akciğer işlev FEV25gösterilen hava akımı hızı parametreler tarafından ölçülen /FVC, FEV50/FVC ve FEV75/FVC. Sonuçları tüm ozon Günese maruz kalan farelerde (şekil 3a-c) azalma parametreleri tipik Akciğer işlev hataları KOAH hastaları4,37ile tutarlı olduğunu gösterdi. Daha fazla OE modeli değerlendirmek için biz yerine bir egzersiz tolerans testi KOAH hastalarında fonksiyonel egzersiz kapasitesindeki değişiklikleri değerlendirme için yaygın olarak kullanılan 6 dakika yürüme testi (6MWT)38,39, yürüttü. Ozon pozlama önemli ölçüde zaman ve yorgunluk yorgunluk mesafe azalmıştır (şekil 4bir ve b).
KOAH patogenezinde OE modeli adrese, makrofajlar ve nötrofiller fareler BALFs sayıldı; Pro-inflamatuar sitokinlerin (IL-1β ve TNF-α) ve anti-inflamatuar sitokinlerin (IL-10) fare sera tespit edildi. Ozon maruz fareler yanı sıra IL-10 önemli bir azalma ve IL-1β ve TNF-α artış inflamatuar hücreler, makrofajlar ve nötrofiller (şekil 5a-c), dahil olmak üzere önemli bir artış gösterdi (şekil 6a-c ). Tüm verileri OE recapitulated insan KOAH benzeri belirtiler model gösterdi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56095/56095fig1.jpg"> 
Şekil 1. Ozon pozlama akciğer hacmi ve µCT tarafından algılanan LAA % arttı. (a) 7 hafta ilgili maruz kaldıktan sonra akciğerlere hava veya ozon maruz farelerin gösterilen temsilcisi 3D görüntüler. (b) iki grup bireysel toplam akciğer hacimleri istatistikler için 3D görüntü elde. Ozon maruz fareler toplam akciğer hacmi önemli bir artış gösterdi. (c) iki grup bireysel ve kaba LAA %. Ozon maruz fareler LAA % içinde önemli bir artış gösterdi. Kırmızı renk LAA (voxels 2,550-2.700 Hounsfield birimleri yoğunlukları ile) gösterir. Trakea ve bu rakam Kırmızıyla gösterilen bronşlar akciğer LAA hesaplamak için kaldırılmıştır. Verileri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır ** P &#60; 0,01, *** P &#60; 0,001. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56095/56095fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56095/56095fig2.jpg"> 
Şekil 2. Ozon pozlama Şampiyonlar Ligi arttı. (a) akciğer hava maruz veya ozon maruz kalan farelerin bölümlerde o lekeli alveoler alanlarda temsilcisi filmler. (b) tek tek değerleri LM istatistikler için iki grup akciğer bölümlerden sayısal. Ozon Günese maruz kalan farelerde Lm bir artış gözlenmiştir. Verileri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır ** P &#60; 0,01. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56095/56095fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56095/56095fig3.jpg"> 
Şekil 3 . Ozon pozlama pulmoner fonksiyon azaldı. (a-c) Hava maruz ve ozon maruz fareler, ilk 25 içinde bireysel FEV için 50 ile 75 ms hızlı süre sonu (FEV25, FEV50ve FEV75, sırasıyla), FVC yanı sıra tüm kaydedildi. Yüzdeleri FEV25, FEV50ve FEV75 FVC için ayrı ayrı hesaplanır. FEV25/FVC, FEV50/FVC ve FEV75azaldı /FVC tüm önemli ölçüde içinde ozon maruz fareler. Verileri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır * P &#60; 0,05, ** P &#60; 0,01. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56095/56095fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56095/56095fig4.jpg"> 
Şekil 4 . Ozon pozlama yorgunluk zaman ve yorgunluk mesafe azaldı. bireysel çalışan (bir) kez hava veya ozon-fareler kaydedildi maruz kalan için. Ozon maruz fareler yorgunluk zaman önemli bir azalma gösterdi. (b) iki grup bireysel çalışan mesafelerde kaydedildi. Ozon maruz fareler yorgunluk mesafe önemli bir düşüş sergiledi. Verileri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır * P &#60; 0,05. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56095/56095fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56095/56095fig5.jpg"> 
Şekil 5 . İnflamatuar hücre sayılan BALF. (a) bireysel ve ortalama sayıları toplam hücre (toplama) hava veya ozon maruz farelerde. (b) makrofajlar (MAC) iki grup bireysel ve kaba numaralarını. (c) bireysel ve ortalama sayıda nötrofil (NEU) iki grup içinde. Verileri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır * P &#60; 0,05, ** P &#60; 0,01. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56095/56095fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
ithin-sayfa = "1" ><img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56095/56095fig6.jpg"> 
Şekil 6 . Enflamatuar ve anti-inflamatuar sitokin algılama Serumda. (a) IL-10 miktarı hava veya ozon maruz farelerde bireysel ve ortalama değerleri. (b) bireysel ve ortalama değerleri IL-1β tutarın iki gruplar halinde. (c) TNF-α miktarına iki grup olarak bireysel ve ortalama değerleri. Verileri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır * P &#60; 0,05. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56095/56095fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure at JoVE.com

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

generation-chronic-obstructive-pulmonary-disease-model-mice-repeated

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

10.8K Görüntüleme.  Cellular Biomedicine Group, Shanghai. Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Video: Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

Uzun Vadeli Kronik<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emFarelerde&gt; Havayolu Enfeksiyon

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1). Animal models of COPD are used to identify molecules that contribute to the disease process and to test the efficacy of novel therapies for COPD. Researchers use a number of models of COPD employing different species including rodents, guinea-pigs, rabbits, and dogs(2). However, the most widely-used model is that in which mice are exposed to cigarette smoke. Mice are an especially useful species in which to model COPD because their genome can readily be manipulated to generate animals that are either deficient in, or over-express individual proteins. Studies of gene-targeted mice that have been exposed to cigarette smoke have provided valuable information about the contributions of individual molecules to different lung pathologies in COPD(3-5). Most studies have focused on pathways involved in emphysema development which contributes to the airflow obstruction that is characteristic of COPD. However, small airway fibrosis also contributes significantly to airflow obstruction in human COPD patients(6), but much less is known about the pathogenesis of this lesion in smoke-exposed animals. To address this knowledge gap, this protocol quantifies both emphysema development and small airway fibrosis in smoke-exposed mice. This protocol exposes mice to CS using a whole-body exposure technique, then measures respiratory mechanics in the mice, inflates the lungs of mice to a standard pressure, and fixes the lungs in formalin. The researcher then stains the lung sections with either Gill&#8217;s stain to measure the mean alveolar chord length (as a readout of emphysema severity) or Masson&#8217;s trichrome stain to measure deposition of extracellular matrix (ECM) proteins around small airways (as a readout of small airway fibrosis). Studies of the effects of molecular pathways on both of these lung pathologies will lead to a better understanding of the pathogenesis of COPD.

The goal of this protocol is to provide automated methods to quantify chronic lung pathologies in a murine model of COPD. The protocol includes exposing mice to cigarette smoke (CS), measuring pulmonary function, inflating the lungs, and using morphometry methods to measure emphysema and small airway remodeling in mice.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Tıp

Lung microRNA Profiling Across the Estrous Cycle in Ozone-exposed Mice

MicroRNA (miRNA) profiling has become of interest to researchers working in various research areas of biology and medicine. Current studies show a promising future of using miRNAs in the diagnosis and care of lung diseases. Here, we define a protocol for miRNA profiling to measure the relative abundance of a group of miRNAs predicted to regulate inflammatory genes in the lung tissue from of an ozone-induced airway inflammation mouse model. Because it has been shown that circulating sex hormone levels can affect the regulation of lung innate immunity in females, the purpose of this method is to describe an inflammatory miRNA profiling protocol in female mice, taking into consideration the estrous cycle stage of each animal at the time of ozone exposure. We also address applicable bioinformatics approaches to miRNA discovery and target identification methods using limma, an R/Bioconductor software, and functional analysis software to understand the biological context and pathways associated with differential miRNA expression.

Here we describe a method to assess lung expression of miRNAs that are predicted to regulate inflammatory genes using mice exposed to ozone or filtered air at different stages of the estrous cycle.

Akciğer mikroRNA profil oluşturma arasında Estrous döngüsünde ozon maruz fareler

MicroRNA (miRNA) profiling has become of interest to researchers working in various research areas of biology and medicine. Current studies show a ...

In Vivo Assessment of Alveolar Macrophage Efferocytosis Following Ozone Exposure

Ozone (O3) is a criteria air pollutant that exacerbates and increases the incidence of chronic pulmonary diseases. O3 exposure is known to induce pulmonary inflammation, but little is known regarding how exposure alters processes important to the resolution of inflammation. Efferocytosis is a resolution process, whereby macrophages phagocytize apoptotic cells. The purpose of this protocol is to measure alveolar macrophage efferocytosis following O3-induced lung injury and inflammation. Several methods have been described for measuring efferocytosis; however, most require ex vivo manipulations. Described in detail here is a protocol to measure in vivo alveolar macrophage efferocytosis 24 h after O3 exposure, which avoids ex vivo manipulation of macrophages and serves as a simple technique that can be used to accurately represent perturbations in this resolution process. The protocol is a technically non-intensive and relatively inexpensive method that involves whole-body O3 inhalation followed by oropharyngeal aspiration of apoptotic cells (i.e., Jurkat T cells) while under general anesthesia. Alveolar macrophage efferocytosis is then measured by light microscopy evaluation of macrophages collected from bronchoalveolar (BAL) lavage. Efferocytosis is finally measured by calculating an efferocytic index. Collectively, the outlined methods quantify efferocytic activity in the lung in vivo while also serving to analyze the negative health effects of O3 or other inhaled insults.

This manuscript describes a protocol for determining whether exposure to ozone, a criteria air pollutant, impairs alveolar macrophage efferocytosis in vivo. This protocol utilizes commonly used reagents and techniques and can be adapted to multiple models of pulmonary injury to determine effects on alveolar macrophage efferocytosis.

Ozon Maruziyetinden Sonra Alveoler Makrofaj Eferositozun Vivo Değerlendirilmesi

Ozone (O3) is a criteria air pollutant that exacerbates and increases the incidence of chronic pulmonary diseases. O3 exposure is known to induce ...

Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique

The forced oscillation technique (FOT) is a powerful, integrative and translational tool permitting the experimental assessment of lung function in mice in a comprehensive, detailed, precise and reproducible manner. It provides measurements of respiratory system mechanics through the analysis of pressure and volume signals acquired in reaction to predefined, small amplitude, oscillatory airflow waveforms, which are typically applied at the subject's airway opening. The present protocol details the steps required to adequately execute forced oscillation measurements in mice using a computer-controlled piston ventilator (flexiVent; SCIREQ Inc, Montreal, Qc, Canada). The description is divided into four parts: preparatory steps, mechanical ventilation, lung function measurements, and data analysis. It also includes details of how to assess airway responsiveness to inhaled methacholine in anesthetized mice, a common application of this technique which also extends to other outcomes and various lung pathologies. Measurements obtained in na&iuml;ve mice as well as from an oxidative-stress driven model of airway damage are presented to illustrate how this tool can contribute to a better characterization and understanding of studied physiological changes or disease models as well as to applications in new research areas.

The present protocol provides a detailed step-by-step description of the procedures required to execute measurements of respiratory system mechanics as well as the assessment of airway responsiveness to inhaled methacholine in mice using the forced oscillation technique (flexiVent; SCIREQ Inc, Montreal, Qc, Canada).

Zorla Salınım Tekniği kullanarak Fare Solunum Sistemi Mekanik Değerlendirilmesi

The  forced oscillation technique (FOT) is a powerful, integrative and translational  tool permitting the experimental assessment of lung function in mice ...

Biyoloji

Cigarette Smoke Exposure in Mice using a Whole-Body Inhalation System

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular diseases have been widely studied, however, the impact of CS in other tissues and organs such as blood and bone marrow remain incompletely defined. Finding the appropriate system to study the effects of CS in rodents can be prohibitively expensive and require the purchase of commercially available systems. Thus, we set out to build an affordable, reliable, and versatile system to study the pathologic effects of CS in mice. This whole-body inhalation exposure system (WBIS) set-up mimics the breathing and puffing of cigarettes by alternating exposure to CS and clean air. Here we show that this do-it-yourself (DIY) system induces airway inflammation and lung emphysema in mice after 4-months of cigarette smoke exposure. The effects of whole-body inhalation (WBI) of CS on hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) in the bone marrow using this apparatus are also shown.

This protocol demonstrates the study of the pathophysiologic effects of cigarette smoke (CS) with a whole-body inhalation (WBI) exposure system (WBIS) built in-house. This system can expose animals to CS under controlled repeatable conditions for research of CS-mediated effects on lung emphysema and hematopoiesis.

Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular ...

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung fixation to produce reliable histological specimens of the lung. Due to the nature of the lung&rsquo;s structural composition, which consists largely of air and tissue, there is a risk that it collapses or deflates during the fixation process. Various lung fixation methods exist, each of which has its own advantages and disadvantages. The lung fixation method presented here utilizes constant pressure to enable optimal tissue evaluation for studies using an emphysematous mouse lung model. The main advantage is that it can fix many lungs with the same condition at one time. Lung specimens are obtained from chronic cigarette smoke-exposed mice. Lung fixation is performed using specialized equipment that enables the production of constant pressure. This constant pressure maintains the lung in a reasonably inflated state. Thus, this method generates a histological specimen of the lung that is suitable to evaluate cigarette smoke-induced mild emphysema.

Presented here is a useful protocol for lung fixation that creates a stable condition for histological evaluate of lung specimens from a mouse model of emphysema. The main advantage of this model is that it can fix many lungs with the same constant pressure without lung collapse or deflation.

Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

Visualizing Lung Cellular Adaptations during Combined Ozone and LPS Induced Murine Acute Lung Injury

Lungs are continually faced with direct and indirect insults in the form of sterile (particles or reactive toxins) and infectious (bacterial, viral or fungal) inflammatory conditions. An overwhelming host response may result in compromised respiration and acute lung injury, which is characterized by lung neutrophil recruitment as a result of the patho-logical host immune, coagulative and tissue remodeling response. Sensitive microscopic methods to visualize and quantify murine lung cellular adaptations, in response to low-dose (0.05 ppm) ozone, a potent environmental pollutant in combination with bacterial lipopolysaccharide, a TLR4 agonist, are crucial in order to understand the host inflammatory and repair mechanisms. We describe a comprehensive fluorescent microscopic analysis of various lung and systemic body compartments, namely the broncho-alveolar lavage fluid, lung vascular perfusate, left lung cryosections, and sternal bone marrow perfusate. We show damage of alveolar macrophages, neutrophils, lung parenchymal tissue, as well as bone marrow cells in correlation with a delayed (up to 36-72 h) immune response that is marked by discrete chemokine gradients in the analyzed compartments. In addition, we present lung extracellular matrix and cellular cytoskeletal interactions (actin, tubulin), mitochondrial and reactive oxygen species, anti-coagulative plasminogen, its anti-angiogenic peptide fragment angiostatin, the mitochondrial ATP synthase complex V subunits, &#945; and &#946;. These surrogate markers, when supplemented with adequate in vitro cell-based assays and in vivo animal imaging techniques such as intravital microscopy, can provide vital information towards understanding the lung response to novel immunomodulatory agents.

Combined ozone and bacterial endotoxin exposed mice show wide-spread cell death, including that of neutrophils. We observed cellular adaptations such as disruption of cytoskeletal lamellipodia, increased cellular expression of complex V ATP synthase subunit &#946; and angiostatin in broncho-alveolar lavage, suppression of the lung immune response and delayed neutrophil recruitment.

Kombine Ozon ve LPS kaynaklı Murine Akut Akciğer Hasarı Sırasında Akciğer Hücresel Adaptasyonlarının Görselleştirilmesi

Lungs are continually faced with direct and indirect insults in the form of sterile (particles or reactive toxins) and infectious (bacterial, viral or ...

A Silicosis Mouse Model Established by Repeated Inhalation of Crystalline Silica Dust

Silicosis can be caused by exposure to respiratory crystalline silica dust (CSD) in an industrial environment. The pathophysiology, screening, and treatment of silicosis in humans have all been extensively studied using the mouse silicosis model. By repeatedly making mice inhale CSD into their lungs, the mice can mimic the clinical symptoms of human silicosis. This methodology is practical and efficient in terms of time and output and does not cause mechanical injury to the upper respiratory tract due to surgery. Furthermore, this model can successfully mimic acute/chronic transformation process of silicosis. The main procedures were as follows. The sterilized 1-5 &#181;m CSD powder was fully ground, suspended in saline, and dispersed in an ultrasonic water bath for 30 min. Mice under isoflurane-induced anesthesia switched from shallow rapid breathing to deep, slow aspiration for approximately 2 s. The mouse was placed in the palm of a hand, and the thumb tip gently touched the lip edge of the mouse's jaw to straighten the airway. After each exhalation, the mice breathed in the silica suspension drop by drop through one nostril, completing the process within 4-8 s. After the mice's breathing had stabilized, their chest was stroked and caressed to prevent the inhaled CSD from being coughed up. The mice were then returned to the cage. In conclusion, this model can quantify CSD along the typical physiological passage of tiny particles into the lung, from the upper respiratory tract to the terminal bronchioles and alveoli. It can also replicate the recurrent exposure of employees due to work. The model can be performed by one person and does not need expensive equipment. It conveniently and effectively simulates the disease features of human silicosis with high repeatability.

This protocol describes a method for establishing a mouse model of silicosis through repeated exposure to silica suspensions via a nasal drip. This model can efficiently, conveniently, and flexibly mimic the pathological process of human silicosis with high repeatability and economy.

Kristal silika tozunun tekrar tekrar solunmasıyla oluşturulan bir silikoz fare modeli

Silicosis can be caused by exposure to respiratory crystalline silica dust (CSD) in an industrial environment. The pathophysiology, screening, and ...

A Mouse Model of Pulmonary Fibrosis Induced by Nasal Bleomycin Nebulization

Pulmonary fibrosis is characteristic of several human lung diseases that arise from various causes. Given that treatment options are fairly limited, mouse models continue to be an important tool for developing new anti-fibrotic strategies. In this study, intrapulmonary administration of bleomycin (BLM) is carried out by nasal nebulization to create a mouse model of pulmonary fibrosis that closely mimics clinical disease characteristics. C57BL/6 mice received BLM (7 U/mL, 30 min/day) by nasal nebulization for 3 consecutive days and were sacrificed on day 9, 16, or 23 to observe inflammatory and fibrotic changes in lung tissue. Nasal aerosolized BLM directly targeted the lungs, resulting in widespread and uniform lung inflammation and fibrosis. Thus, we successfully generated an experimental mouse model of typical human pulmonary fibrosis. This method could easily be used to study the effects of the administration of various nasal aerosols on lung pathophysiology and validate new anti-inflammatory and anti-fibrotic treatments.

<meta charset="utf8"></head><body>Nazal Bleomisin Nebulizasyonunun Neden Olduğu Pulmoner Fibrozisin Bir Fare Modeli

Various animal models of pulmonary fibrosis have been established using bleomycin to clarify the pathogenesis of pulmonary fibrosis and find new drug targets. However, most pulmonary fibrosis models targeting lung tissue have uneven drug administration. Here, we propose a model of uniform pulmonary fibrosis induced by nasal bleomycin nebulization.

Nazal Bleomisin Nebulizasyonunun Neden Olduğu Pulmoner Fibrozisin Bir Fare Modeli

Pulmonary fibrosis is characteristic of several human lung diseases that arise from various causes. Given that treatment options are fairly limited, mouse ...