Yazarlar gönüllü katılımlarını bu çalışmalar ve yağ doku biyopsisi sağlamak için Boston Tıp Merkezi cerrahi personel için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Gökçe Ulusal Enstitüleri (NIH) sağlık hibe HL081587, HL114675 ve HL126141 tarafından desteklenir. Dr. Farb NIH tarafından desteklenmektedir K23 HL135394 verin.

protokolü ve burada anlatılan örnekler Boston Üniversitesi okul tıp kurumsal inceleme kurulu'nin (IRB, iletişim kuralı #H-25644) kabul edildi ve Helsinki Deklarasyonu uygun olarak yapılmıştır. Tüm konularda yazılı Onam önce katılım sağlanan.
 1. hazırlık çözümler ve mikro-cam Kanüller <ol><li>hazırla 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic asidik solüsyon (HEPES) çözüm. 1 L için 8.059 g NaCl, 0,298 g KCl, 0,296 g MgSO 4 dissolve &#8226; 7 H 2 O, 0.235 g CaCl 2 &#8226; 2 H 2 O, 0,16 g KH 2 PO 4, 0,01 g EDTA, 1.081 g D-glukoz ve 2.383 g HEPES asit 950 ml deiyonize su. Sesini için 1 L deiyonize su ile olun. PH 7.4 NaOH kullanarak için ayarlayın. HEPES tampon saklanabilir için 7 gün 4 ° C.</li>
	<li>20 x Salt arabellek hisse senedi hazırlayın. 143,8 g NaCl, 7.0 g KCl, 5.9 g MgSO 4 ve 7.4 g CaCl 2 1 L için ekleyin &#8226; 2 H 2 O 900 mL distile su içine. •Ses yükseltme için 1 L deiyonize su ile olun. Saat 4'te hazır çözüm depolamak ° C.</li>
	<li>20 x arabellek hisse senedi hazırlayın. 1 L için 26.8 g NaHCO 3 ve 0.2 g EDTA·2H 2 O 900 mL deiyonize su içine ekleyin. •Ses yükseltme için 1 L deiyonize su ile olun. Saat 4'te hazır çözüm depolamak ° C.</li>
	<li>Çözüm KREBS fizyolojik deneyler sırasında kullanılmak üzere hazırlayın. 1 L için 900 mL deiyonize su, 20 arabellek hisse senedi x 50 mL, 20 tuz tampon solüsyonu, 0,99 g D-glukoz ve 0,16 g KH 2 PO 4 x 50 mL ekleyin. PH HCl kullanarak 7.4 için ayarlayın. Tamponunun pH korumak için sürekli karıştırın ve kapak ile parafin veya sürekli kabarcık.
	<ol><li>Onay pH her 20 dk. KREBS çözüm taze olun günlük.</li>
	</ol></li> <li>Yapmak mikro-cam Kanüller 40-240 µm bir piyasada bulunan iğne/pipet çektirmenin kullanarak bir iç çapı ile. Cam Kanüller boyutunu izole kan damarları (50-350 µm) iç çapını boyutu tarafından belirlenir. Alternatif olarak, mikro-cam Kanüller önceden belirlenmiş büyüklükte satın.</li>
</ol> 2. Reaktifler hazırlanması <ol><li>hazırla asetilkolin (Ach, 10 -2 M, hisse senedi çözüm). 10 mL deiyonize su 18.29 g geçiyoruz. 1 mL aliquots hisse senedi çözüm (10 -2 M)-80 ° C'de depolayın Aşağıdaki çalışma konsantrasyonları elde etmek için seri olarak seyreltik deneme günü: 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 M.</li>
	<li>(2 x 10 -2 M, hisse senedi çözüm) papaverin hazırlayın. 10 mL deiyonize su 0.07517 g geçiyoruz. 10 µL aliquots hisse senedi çözüm ve-80 mağazasında hazırlamak ° C. seri olarak sulandırmak 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8 M denemenin gün almak için.</li>
	<li>Endotelin-1 (ET-1, 2 x 10 -5 M, hisse senedi çözüm) hazırlayın. 50 µg endotelin-1 1 mL % 1'dağıtılması BSA/PBS. 1 mL aliquots hisse senedi çözüm (2 x 10 -5 M)-80 ° C'de depolayın 10 -10 M çalışma konsantrasyonu deney gününde elde etmek için seyreltik deneme günü.</li>
	<li>Ya-20 ° C'de reaktifler depolamak veya ile-80 ° C arasında derin dondurucu türüne bağlı olarak kullanılabilir, ama 6 aydan uzun olmayan.</li>
</ol> 3. Yağ dokusu toplama ve gemi hazırlık <ol><li>askere obez erkekler ve kadınlar (vücut kitle indeksi (VKİ) &#8805; 35 kg/m², yaş &#8805; 18 yaşındaki) bariatrik cerrahi programı, Boston Tıp Merkezi (BMC) kayıtlı. Toplam 40 konuların bu deneylerde katıldı.</li>
	<li>Toplamak subkutan ve viseral yağ doku örnekleri planlı bariatrik cerrahi sırasında operasyonu cerrah tarafından.
	<ol><li>Hasat subkutan yağ dokuları alt karın duvarından ve viseral sırasıyla büyük Omentumun, şişko. Tipik yağ dokusu örnek boyutu değişir doku 3-10 mg.</li>
		<li>Yer dokulara hemen soğuk HEPES tampon çözüm pH 7,4 ve mağaza 4 ° c ilâ 24 h için 
		Not: Ayrıca, adipose arteriyoller yalın bireylerin de cerrahi fıtık onarım veya plastik cerrahi gibi diğer türleri sırasında elde edilebilir ve aynı zamanda biyopsi trans-Kutanöz karın yağ yastığı biyopsi ile subkutan depo dan olabilir 6.</li>
	</ol></li> <li>Bir doku diseksiyon mikroskop, mikro-makas ve mikro-forseps kullanarak, dikkatle çevreleyen bağ dokusu ve yağ küçük adipose arteriyoller (50-350 µm intraluminal çapı, 2-3 mm uzunluğunda) kaldırın.</li>
	<li>Cam kapiller Pipetler cannulating önce küçük naylon veya ipek dikiş kullanarak arteriyoller bütün dallarda kapalı kravat. Arteriyol duvardaki bile ufak hasar önemli bir işlev değişikliğine neden olur bu yana dikkatle incelemek arteriyoller.
	Işık ve ısı olarak <ol><li>simge durumuna Küçült gemi maruz vazodilatasyon neden olabilir. Bazen arteriyoller venüller ayırt etmek zor olabilir bu yana, damarları boyutu ve düz kas tonu damarlarının ipuçları kesme tarafından tanımlayın. Arteriyoller genellikle daha küçük olan ve büyük sesi venüller için karşılaştırıldığında gösteren.</li>
	</ol></li> <li>Organ odası hazırlamak. Yavaş yavaş cam kapiller Pipetler ve kauçuk tüp 10 mL kullanarak KREBS solüsyonu ile doldurmak.</li>
	<li>Kez alıpkendi doldurulur ve cam kapiller Pipetler KREBS çözüm içinde organ odası sular altında arteriyoller güvenli Pipetler üzerinde güvenli bir şekilde cannulate ve her iki ucunda da arteriyol naylon ile kravat veya dikiş knot dikkatle ipek.</li>
	<li>Organ odası KREBS çözüm ile doldurmak 2 mL.</li>
	<li>Organ odası bir sahneye ters mikroskopla (büyütme 10 X / 0,25 amaç) güvenli ve video kamera.</li>
	<li>İçinde akış kenar algılama yazılımı 1 kHz örnekleme hızında gerçek zamanlı açın (1 kare/sn).</li>
	Kabarcıklar deneysel hata tanıtmak gibi <li>bir basınçlı boru dolu basınç rezervuar microbubbles ücretsiz KREBS çözüm bağlamak. Diğer basınçlı boru organ odasına bağlamak.</li>
	<li>Temiz boru ile basınç detektörler KREBS dolu çözüm basınç rezervuar bağlanmak.</li>
	<li>Kontrol bu iki rezervuarlar yüksekliğini düzenleyerek içi luminal akışı; Yani, ne zaman rezervuarlar içi luminal hiçbir akışı ortaya çıkar aynı yükseklikte yer alır.</li>
	Tüm bu işlemler tamamlandıktan sonra <li>dönüş sıcaklığı 37 korumak için blok ve yazılım programı Isıtma ° C. sürekli KREBS çözüm ile gemi sıvı ve % 5 CO 2, % 21 O 2 ve % 74'ü N gaz karışımı ile havalandırmak 2 bütün deneysel prosedür boyunca 7 , 8.</li>
	İstenilen basınç insin ulaşmak için <li>de izole kaplar Lümen yavaş yavaş artırın intraluminal basınç (5 mmHg, her 5 dk) yolu ile endotel tabakası zarar görmemesi için yavaş bir hızla böylece basınç kontrol ünitesi myo-arabirimi Masası ' nda. 
	Not: basınç 60 mmHg ulaştığında, bir 20-30 dk denge süre gemi stabilize etmek gereklidir. Tüm vasküler işlevi çalışmaları 60 mmHg ve pH 7.4 37 ° C'de gerçekleştirilir. 7</li></ol> 4. Adipose mikrovasküler işlevi değerlendirilmesi Not: genel olarak, yağ arteriyol endotel bağımlı vazodilatasyon yanıt olarak fizyolojik (akış kaynaklı) elicited ve farmakolojik uyaranlara (Ach kaynaklı).
<ol><li>Akışı aracılı, endotel bağımlı vazodilatasyon <ol><li>basıncını, istirahat (Di) yağ arteriyol çapını kaydetmek. Bu dinlenme temel çapı adlandırılır.</li>
		<li>Kan damarlarının dinlenme temel çapı (Dp) ~ %55 1 µL endotelin-1 ekleyerek önceden daraltır (ET-1, 10 &#8722; 10 M) banyo ve etkisi 5 dk bekle. İstenen ~ %55 ulaşan devlet önceden dar kadar bu işlemi yineleyin.</li>
		<li>Ortalama intraluminal basınç değiştirmeden gemi arasında basınç farkı geliştirilebilir böylece öncesi daralma sürekli akışı yağ dokusu arteriyoller, eşit ve zıt yönde intraluminal uzaya ikna etmek 60 mmHg,. 
		Not: bir rezervuar 10 cm yüksekliğinde hareket ederse, örneğin, diğeri 10 cm kadar basınç gradyanları değiştirebilir ve böylece intraluminal akış hızını değiştirmek için taşınması gerekiyor. Daha doğru akış hızı ölçümleri istenirse, deneysel set-up bir nicel debimetre sistemi uygulanabilir.</li>
		<li>Ölçmek akışı aracılı dilatasyon akışı indüksiyon başlanmasından sonra 3-5 dak. İntraluminal akışı (basınç gradyanları) düzeyde olabilir aralığın 0 - 100 cmH 2 O. artırmak her artış basınç geçişin Δ10 cmH 2 tarafından O en çok 100 cmH 2 O. her 5-6 min 
		Not: lümen istikrarlı laminar akışı ikna etmek için her iki mikro cam kanül ucu boyutları çok arteriyoller iç çap yakın olmak gerekir; Aksi takdirde, türbülanslı akış içinde Lümen üretmek ve istenmeyen ölçüm hataları neden.</li>
		<li>Akış-aracılı dilatasyon değerlendirme, aynı yükseklikte (60 mmHg) basınç rezervuar iade.</li>
		<li>Sonra yıkama arteriyol ve odası hemen odasından çözüm kaldırarak ve taze KREBS çözüm ile değiştirin. Bu odanın içinde askıya alınmış arteriyol bozmak değil olarak dikkatle yapılır.</li>
		<li>20-30 dk için 3 - 4 kez veya izole kap dinlenme temel çapı dönünceye kadar bu işlemi tekrarlayın.</li>
	</ol></li> <li>Asetilkolin-aracılı, endotel bağımlı, vazodilatasyon <ol><li>adipose arteriyol dinlenme temel çapı döndüğünde önceden sıkmak endotelin-1 (ET-1, 10 yönetmek gemi ~ %55 &#8722; 10 M) doğrudan Bath, 4.1.2 bölümünde yukarıda açıklandığı gibi.</li>
		<li>Öncesi daralma artan dozlarda (2 µL) sırayla bir reseptör aracılı, nitrik oksit agonist (Ach, 10 -9 10 -5 M için) doğrudan banyo için olan asetilkolin yönetmek. Değişikliği arterioler çapı 5 dk sonra her doz yönetim kaydetmek.</li>
		Gemi yönetimi son Ach doz takip bir plato ulaşmıştır sonra <li>gemi 3 - 4 kez KREBS çözüm ile yıkayın. 20-30 dk geminin yeniden elde etmek ve temel çapı istirahat için dönmek izin. KREBS çözüm her 15 dk. organ kamber pH korumaya yardımcı olmak için değiştirmek</li>
	</ol></li> <li>Kuluçkaya arteriyol ile N w - nitro - l-arginin metil ester (L-NAME, 10 -4 M), bir 30 dk, nitrik oksit sentaz inhibitörü ve sonra tekrar 4.2.1 ve göreli katkısını karakterize 4.2.2 nitrik oksit Ach-aracılı vazodilatasyon.</li>
	<li>Endotel bağımsız vazodilatasyon (vasküler düz kas fonksiyonu) ve gemi canlılığı papaverin (10 -8 10 -4 M için) doğrudan banyo için artan dozlarda sıralı bir yönetim tarafından değerlendirmek. Damar çapı değil dönmek veya aşması papaverin (Yani uygun vazodilatasyon) yanıt olarak dinlenme temel (Di) çapı, gemi uygun olmayan düşünün ve veri noktaları atın.</li>
</ol> 5. Veri analizi ve hesaplama <ol><li>Hesaplama vasküler reaktivite. Temel farklılıklar damar çapı hesabı ve aşağıdaki denklemi kullanarak hesaplamak için veri ifade için yüzde vazodilatasyon kullanın: % vazodilatasyon = (DT-Dp/Di-Dp) × 100 DT verilen zamanda noktada (en yüksek derece kaydedilen çapı nerede çapı), Dp vazokonstriksiyona ajan (i.e. eklenmesinden sonra kaydedilen çapı olduğunu. ET-1 indüklenen daralma çapı), ve Di hemen vazokonstriksiyona ajan (dinlenme temel çapı) toplamadan önce kaydedilen çapı. 9</li> <li>vazodilatasyon ve vazokonstriksiyona duyarlılığı (doz-yanıt) için bir agonist Ach, papaverin veya ET-maksimal yanıt (EC 50) % 50'si aydınlığa çıkartıyor tarafından tanımlanan 1 konsantrasyon olarak tanımlamak bir sigmoidal parametre ve çizilen, daha önce açıklandığı gibi. 10 Not: yağ yüzdeki vazodilatasyon arası gözlemci tekrarlanabilirlik çalışmalar vardır 0,99 yüksek bir korelasyon katsayısı (CC) (n = 10 gemi deneyler) bizim laboratuvar.</li></ol>
 6. istatistiksel analiz ± SEM anlamına <ol><li>Express sürekli ölçümler Bunlar normal dağıldığı eğilimindedir. Vasküler reaktivite tarafından tekrarlanan ölçüler iki yönlü ANOVA adipose arteriyoller analiz.</li>
	<li>Alternatif olarak, arsa için doz-yanıt tedavi grupları arasında için toplu vazodilatasyon (AUC) eğri altındaki alan incelemenizi öneririz. Her durumda, P düşünün &#60; 0,05 istatistiksel olarak anlamlı.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96 (4), 313-326 (1999).</li><li>Jadeja, R. N., Rachakonda, V., Bagi, Z., Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Myogenic+Response+and+Vasoactivity+In+Resistance+Mesenteric+Arteries+Using+Pressure+Myography.">Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography.</a> J Vis Exp. (101), e50997 (2015).</li><li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Microcirculation:+Regulation+of+Flow+and+Beyond.">The Human Microcirculation: Regulation of Flow and Beyond.</a> Circ Res. 118 (1), 157-172 (2016).</li><li>Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity-Induced+Changes+in+Adipose+Tissue+Microenvironment+and+Their+Impact+on+Cardiovascular+Disease.">Obesity-Induced Changes in Adipose Tissue Microenvironment and Their Impact on Cardiovascular Disease.</a> Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+adipose+tissue+inflammation+represents+an+intermediate+cardiometabolic+phenotype+in+obesity.">Reduced adipose tissue inflammation represents an intermediate cardiometabolic phenotype in obesity.</a> J Am Coll Cardiol. 58 (3), 232-237 (2011).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WNT5A-JNK+regulation+of+vascular+insulin+resistance+in+human+obesity.">WNT5A-JNK regulation of vascular insulin resistance in human obesity.</a> Vasc Med. 21 (6), 489-496 (2016).</li><li>Durand, M. J., Phillips, S. A., Widlansky, M. E., Otterson, M. F., Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vascular+renin-angiotensin+system+contributes+to+blunted+vasodilation+induced+by+transient+high+pressure+in+human+adipose+microvessels.">The vascular renin-angiotensin system contributes to blunted vasodilation induced by transient high pressure in human adipose microvessels.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307 (1), H25-H32 (2014).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclooxygenase+inhibition+improves+endothelial+vasomotor+dysfunction+of+visceral+adipose+arterioles+in+human+obesity.">Cyclooxygenase inhibition improves endothelial vasomotor dysfunction of visceral adipose arterioles in human obesity.</a> Obesity (Silver Spring). 22 (2), 349-355 (2014).</li><li>Park, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+age+on+the+vasodilatory+function+of+human+skeletal+muscle+feed+arteries.">Impact of age on the vasodilatory function of human skeletal muscle feed arteries.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (2), H217-H225 (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+feed+arteries+studied+in+vitro:+the+effect+of+temperature+on+alpha(1)-adrenergic+responsiveness.">Human skeletal muscle feed arteries studied in vitro: the effect of temperature on alpha(1)-adrenergic responsiveness.</a> Exp Physiol. 96 (9), 907-918 (2011).</li><li>Grizelj, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+flow-and+acetylcholine-induced+dilations+in+visceral+compared+to+subcutaneous+adipose+arterioles+in+human+morbid+obesity.">Reduced flow-and acetylcholine-induced dilations in visceral compared to subcutaneous adipose arterioles in human morbid obesity.</a> Microcirculation. 22 (1), 44-53 (2015).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriolar+function+in+visceral+adipose+tissue+is+impaired+in+human+obesity.">Arteriolar function in visceral adipose tissue is impaired in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (2), 467-473 (2012).</li><li>Tanner, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin-Related+Protein+1+Mediates+Low+Glucose-Induced+Endothelial+Dysfunction+in+Human+Arterioles.">Dynamin-Related Protein 1 Mediates Low Glucose-Induced Endothelial Dysfunction in Human Arterioles.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha1-Adrenergic+responsiveness+in+human+skeletal+muscle+feed+arteries:+the+impact+of+reducing+extracellular+pH.">alpha1-Adrenergic responsiveness in human skeletal muscle feed arteries: the impact of reducing extracellular pH.</a> Exp Physiol. 98 (1), 256-267 (2013).</li><li>Dharmashankar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase-dependent+vasodilation+of+human+subcutaneous+arterioles+correlates+with+noninvasive+measurements+of+endothelial+function.">Nitric oxide synthase-dependent vasodilation of human subcutaneous arterioles correlates with noninvasive measurements of endothelial function.</a> Am J Hypertens. 25 (5), 528-534 (2012).</li><li>Truran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+and+leptomeningeal+arteriole+endothelial+dysfunction+induced+by+beta-amyloid+peptide:+a+practical+human+model+to+study+Alzheimer's+disease+vasculopathy.">Adipose and leptomeningeal arteriole endothelial dysfunction induced by beta-amyloid peptide: a practical human model to study Alzheimer's disease vasculopathy.</a> J Neurosci Methods. 235, 123-129 (2014).</li><li>Karki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+O-1+modulation+improves+endothelial+insulin+resistance+in+human+obesity.">Forkhead box O-1 modulation improves endothelial insulin resistance in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1498-1506 (2015).</li><li>Shahid, M., Buys, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+murine+resistance+artery+function+using+pressure+myography.">Assessing murine resistance artery function using pressure myography.</a> J Vis Exp. (76), (2013).</li></ol>

Yazarlar hiçbir açıklamaları ya da rapor için çıkar çatışması var.

Diseksiyon ve dokuları çevreleyen dan adipose arteriyoller yalıtım dikkat detay ve teknik iletişim kuralı ile zaman alıcı ve emek yoğun bir işlem olabilir. Mikrodiseksiyon yordam titiz beceri ve düz kas ve endotel olabilecek hasarları önlemek için özel diseksiyon mutfak eşyaları microvasculature katmanları hücre gerektirir. Arterioler duvardaki bile küçük yanlışlıkla delikler intraluminal basınçlandırma ve başarısız bir deney sonuçlarında engelleyebilirsiniz. Ayrıca, cannulation dikiş kullanan arteriyoller, gemi her ucundaki cam kapiller pipet ipuçları arasında arteriyoller güvenliğini sağlamak önemlidir.
İnsan izole yüzdeki spontan myogenic sesi basınçlandırma 60 mmHg, 30-40 dk sonra gelişebilir. Ancak, insan yağ arteriyoller genellikle 50-350 µm iç luminal çapının vasküler düz kas seyrek katmanları ile nispeten küçüktür ve kas iskelet arteriyoller karşılaştırıldığında önemli myogenic sesi geliştirmek değil eğilimindedir boyutlu bulundu. Böylece bu küçük arteriyoller vazodilatör maruz önce ET-1 kullanarak ön daralma neden. Bulduğumuz bazı durumlarda olsa da değişkenlik phenylephrine gibi alfa reseptör agonistleri yanıt içinde ET-1 daha öngörülebilir bir vasoconstrictor yanıt uygular. İstenen % ~ 55 öncesi daralma ikna etmek için uygun agonistler seçmek zorunludur; Ancak dozaj ve toksik hasar üzerinde gemi önlemek için önceden kısıtlayıcı Aracısı doğru miktarını seçmek için önemlidir. Bu alt aralığı doz ile başlayan ve yukarı-4.1.2 bölümünde açıklandığı gibi etkisi için titrating tarafından elde etmek.
Yağ dokusu içinde arteriyoller pH ve sıcaklık değişikliklerine duyarlıdır; Bu nedenle, 14 uygun pH (7,4) ve sıcaklık (37 ° C) deneysel işlemi sırasında denetlemek ve izlemek önemlidir. Videomicroscopy sıkı bir şekilde düzenlenmiş sıcaklık kontrollü sistem olmakla birlikte, bu sonuçları çarpık vardiya önlemek için deney boyunca KREBS çözüm pH izlemek için zorunludur. KREBS çözüm ve çözüm her 15dk yerine basınçlandırma sırasında sürekli köpüren ve adımları yıkama pH varyasyonları zamanla azaltacaktır.
Videomicroscopy yüzdeki fonksiyonel özelliklerini incelemek için yararlı bir yöntem olmakla birlikte, teknik önemli bir öğrenme eğrisi vardır ve emek özellikle vasküler yalıtım işlemi sırasında yoğun olabilir. Biyopsi doku türüne bağlı olarak, bizim deneyim ile yağ dokusu yüzdeki cannulation yordam önemli miktarda zaman ve sabır gerektirir göstermiştir. Ayrıca, doğal zaman deneyler hassasiyeti damarlar vücut dışında olarak zaman içinde kendi fizyolojik ve fonksiyonel özelliklerini kaybederler eğilimi var. Böylece, deneyler dakika saat sonra nihai doku çürümesi önce cerrahi biyopsi gemilerin kalıcı pencere içinde gerçekleştirilmesi gerekir.
Klinik önemi ve mantığı arteriyoller eğitim doğrudan patofizyolojisi yaşayan bir konu, kaldırıldı insan kan damarlarının bozulmamış tüm kesimleri içinde yoklama yeteneğimizi tarafından desteklenen için videomicroscopy kullanan bu deneysel modelin hangi tarafından non-invaziv görüntüleme yinelenemez. Aslında, bizim yetenek doğrudan erişim ve vücutta, örneğin bir obez, işlevsel olmayan insan kan damarları incelemek için bize bu differentially hastalık koşullarında değişmiş ve roman keşfetmek yolları bir anlayış kazanmak için fırsatlar verebilir tedavi hedefleri. Ayrıca, bizim laboratuvar ve diğerleri yayımlanmış veri adipose arterioler işlevi ilişkilendirir vivo içinde ile bu ex vivo değerlendirilmesi bireyin içinde diğer vasküler yatak sistemik endotel fonksiyonları yanıt-e doğru göstermek ve ilişkilendirme kardiyovasküler risk faktörleri ile hipertansiyon, Sigara, şeker hastalığı ve inflamasyon da dahil olmak üzere. 12 , 15 , 16 biz de immunohistokimyasal bulgular visseral adipoz endotel hücreleri nitrik oksit Biyoloji ile ilgili ve Brakiyal arter akışı aracılı vazodilatasyon düşündüren arasında önemli bir ilişki gösteren veri yayımlanmıştır yağ ve sistemik dolaşımları paralel anormallikleri. 17 disfonksiyon endotel sistemik doğası göz önüne alındığında, biz bu teknik sadece insan damar dokusu çalışma ama da potansiyel hayvanlar ve klinik uzunlamasına çalışmalar için bu yöntemi kullanmak için pragmatik bir yaklaşım temsil inanıyorum tedavisinin etkileri inceleyin. Microvasculature incelemek için başka teknikler de tel myography, hangi yapmak daha az teknik olarak zor olma eğilimindedir ve önlemler için bir güç çevirici kullanarak çeşitli agonistler izole gemilerin izometrik gerginlik sağlar gibi mevcuttur. Bu yöntem Ayrıca yüzdeki fizyolojik özellikleri ile ilgili bilgi sağlarken, set-up vivo içinde koşullar özetlemek daha az uygun hale getirebilir bir içi luminal baskı sistemi kullanmaz. Videomicroscopy avantajı nispeten sabit intraluminal basınç makas Lümen içinde değişiklikleri en aza ikna etmek için yeteneğidir. Yöntem hem insanlar hem de hayvanlar benzer büyüklükte yüzdeki uygulanabilir. 9 , 12 , 18 son olarak, bu piyasada bulunan videomicroscopy sistemleri bir dizi satın alma ve kurulum için kullanılabilir olması gerekmektedir; Ancak genel olarak fizyolojik kavramlar tüm platformlar arasında oldukça düzgün. 2 , 6 , 18

Videomicroscopy küçük arteriyoller yaşayan insan denekler ex vivokaldırıldı vasomotor işlevini incelemek için kullanılan yararlı bir tekniktir. Bizim laboratuvar microvasculature çeşitli yağ microenvironments etkilerini karakterize etmek için farklı yağ dokusu bölmeleri gelen küçük yüzdeki dışarı dissekan odaklanmıştır. Bu teknik önemli bir avantajı kan damarları insan vücudundan kaldırıldı işlevsel kalır ve kolayca dakika ile biyopsi takip saat içinde incelenebilir var. Fizyolojik şartlarda taklit ve birçok vivo içinde özellikleri özetlemek mikro-cam Kanüller üzerinden intraluminal uzayda tutulan transmural basınç sabit. 1 , 2 Ayrıca, güvenilir videomicroscopy kurulum otomatik kenar algılama yazılımı ile endotel bağımlı ve - bağımsız vazodilatör ve vasoconstrictor kapasitesini izole hem nitel hem de nicel değerlendirmesi için sağlar. Gemi gerçek zamanlı, izin hızlı fizyolojik değerlendirme fiziksel ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak. 3 diğer mikrovasküler teknikleri de daha az zaman alıcı ve bir güç çevirici tarafından çeşitli agonistler yanıtlarını gerilim ölçmek eğilimindedir tel myography gibi mevcuttur.
Bizim laboratuvar videomicroscopy obezite ve vasküler disfonksiyon, damarlara farklı yağ dokusu etki alanları etkilerini odaklanan arasındaki ilişkiyi incelemek için başvurdu. İntra abdominal visseral yağ birikimi ile Merkezi obezite en yakın adipocytokine üretim, metabolik fonksiyon bozukluğu ve kardiyometabolik risk bağlantılı olmuştur. Bu yağ doku disfonksiyon aşırı üretim pro aterojenik sitokinler ve adipokine bozukluk olan kuvvetle bu işlemlerde karıştığı, ancak belirli yasal moleküller ve tedavi hedefleri büyük ölçüde kalır öne keşfedilmemiş. 4 Ayrıca, yerel yağ doku düzeyinde, kapiller rarefaction ve Engelli perfüzyon yağ dokusu pseudohypoxia ve metabolik bozukluk bağlantılı. Kardiyovasküler hastalık yağ doku disfonksiyon sonucu olabilir hipotez gelişmektedir. Pro aterojenik arabulucu yağ, özellikle orta/visseral obezite, büyük olasılıkla işbirliğiyle piyasaya teşvik endotel disfonksiyonu ve -ebilmek var olmak patojenik vasküler değişiklikler yerel olarak tezahür adipose damarlara ve kullanarak tespit Burada açıklanan yöntemi. 5
İzole yağ dokusu arteriyoller işlevsel değerlendirme patofizyolojisi ve insan obezite vasküler disfonksiyon katkıda moleküler mekanizmalar anlamak için yararlı bir yaklaşımdır. Yağ depo özel disfonksiyon katkıda mekanizmaları araştırmak için endotel bağımlı incelemek için yöntemler geliştirdik ve - microvasculature bağımsız vasodilatory yanıtları ve çeşitli düzenleyici ifade değerlendirmek obez bir konu bariatrik cerrahi anda elde eşleştirilmiş visseral ve subkutan (SC) yağ dokusu örnekleri aday.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="769">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Chemical Name</td>
			<td style="width:159px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Acetylcholine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A6625</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">G5767</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Endothelin-1</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E7764</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8217;,N&#8217;-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E3889</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E9884</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">HEPES</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">H3784</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:352px;">Nw-nito-L-arginine methyl ester hydrochloride</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">N5751</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">M7506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Potassium chloride (KCL)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3911</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P5655</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Papaverine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3510</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S6014</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S7653</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2Po4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:132px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:127px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Forceps</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted microscope</td>
			<td>Zeiss Achromat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Laboratory tubing</td>
			<td>Euro-Pharm</td>
			<td>250100306F999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle/pippette puller</td>
			<td>David kopf instruments</td>
			<td>720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ophthalmic monofilament nylon suture</td>
			<td>Surgical specialties</td>
			<td>A7756N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scissors</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>150000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vessel Chamber</td>
			<td>DMT</td>
			<td>VAS v.2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of human adipose tissue microvascular function using videomicroscopy

Obezite yakından metabolik ve kardiyovasküler hastalık gelişimine bağlı iken az bu süreçleri yöneten mekanizmaları hakkında bilinir. Özellikle merkez/visseral obezite işbirliğiyle yağlı doku serbest pro aterojenik arabulucu yerel ve sistemik patojenik vasküler değişiklikler tanıtmak ve kavramı o kardiyovasküler hastalık olabilir onaylanmadığına karar yağ doku disfonksiyon sonucu gelişmeye devam ediyor. Burada, analiz olduğu gibi küçük insan arteriyoller yaşayan insan denekler yağ deposundan kaldırıldı vazodilatör ve vasoconstrictor tepkilerin içerir videomicroscopy benzersiz bir yöntem açıklanmaktadır. Videomicroscopy farmakolojik veya fizyolojik uyaranlar vivo içinde koşulları taklit eden bir baskı sistemi kullanarak yanıt olarak izole yüzdeki fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Teknik patofizyolojisi ve vasküler disfonksiyon yağ dokusu ortamın içinde yerel olarak katkıda moleküler mekanizmalar anlamak için yararlı bir yaklaşımdır. Ayrıca, yağ dokusu microvasculature anormallikleri de sistemik hastalıklarla bağlantılı olmuştur. Biz depo özel vasküler yanıt obez bireylerde incelemek için bu tekniği uygulanır. Endotel bağımlı vazodilatasyon yüksek akış ve asetilkolin adipose arteriyoller (50-350 µm iç çapı, 2-3 mm uzunluğunda) aynı birey bariatrik cerrahi sırasında iki farklı yağ depoları izole olarak değerlendirildi. Visseral yağ arteriyoller subkutan perondan izole kaplar kıyasla Özürlüler endotel bağımlı vazodilatasyon sergi gösterdi. Bulgular visseral microenvironment klinik gözlem artan visseral obezite sistemik hastalik mekanizmaları için bağlama ile ilgili olabilecek vasküler endotel disfonksiyonu ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Videomicroscopy tekniği farklı yağ depoları gelen vasküler fenotipleri incelemek gibi bulgular farklı derecelerde obezite ve metabolik fonksiyon bozukluğu olan bireyler arasında karşılaştırmak için kullanılabilir. Yöntem damar yanıtlarında boyuna yanıt-e doğru klinik müdahaleler incelemek için kullanılabilir.

Bizim laboratuvar videomicroscopy endotel bağımlı incelemek için kullanılan ve - bağımsız vazodilatasyon, aynı zamanda yağ dokusu arteriyoller vasocontractile fonksiyonu obez insanların subkutan ve viseral yağ izole. Karakteristik deneysel set-up şekil 1A' görüntülenir. Yağ dokusu arteriyoller iki cam kapiller Pipetler arasında askıya ve yerde dikiş içinde şekil 1Badımında gösterildiği gibi organ odası ile güvenli. 5.1 bölümünde yukarıda açıklandığı gibi arterioler yanıt sonra arkasından öncesi daralma ET-1 temel çapı (şekil 2B) % ~ 55 ve sonra agonist kaynaklı temel (şekil 2A), gemisine incelenerek tespit edilebilir vazodilatasyon ve şekil 2Ciçinde görüntülendiği vasküler Lümen gevşeme.
Biz ve diğerleri endotel bağımlı vazodilatasyon yanıt yüksek akış (shear stres)11 ve Ach12 önemli ölçüde visseral içinde deri altı yağ arteriyoller (şekil 3A, 3B karşılaştırıldığında kör olduğunu gözlemledim ) insan obezite. Ancak, endotel bağımsız vazodilatasyon papaverin cevaben differentially iki depoları (şekil 3 c) arasında değiştirilmiş değil. Birlikte, bu bulgular bu vasküler disfonksiyon visseral etki alanlarındaki önermek büyük ölçüde bir disfonksiyon endotel, düzeyinde en az hastalığın erken aşamalarında sonucudur. Bu teknik olduğu gibi küçük insan arteriyoller, vazodilatör tepkilerin sistematik analizi izin verir ve insan damarlara erişilebilir diğer bölgeler için de uygulanabilir. Vasküler düz kas test etmek için bir dizin vasküler endotel insülin direnci6veya doz-yanıt çalışmaları için nitrogliserin olarak insülin yanıt gibi çok sayıda farmakolojik yöntemleri kullanarak ex vivo sisteminin değiştirilebileceğini Katman işlev. 12 RNA susturmak gibi biyolojik yöntemler de potansiyel olarak belirli hastalık koşullarında vasküler disfonksiyon görüşmek kritik düzenleyiciler anlamak için mekanik çerçeveler geliştirmek için tanıtılan13 olabilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56079/56079fig1.jpg"> 
Şekil 1: Videomicroscopy set-up. (A)görüntü videomicroscopy organ odası bileşenlerini tasvir. İki cam kapiller Pipetler organ namluda arasında bir insan yağ arteriyol (B) görüntü monte. Damar çapı incelenebilir fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak değiştirir ve quantified kullanarak analiz yazılımı ve ters kamera ek uzman içinde belgili tanımlık sistem. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56079/56079fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56079/56079fig2.jpg"> 
Şekil 2: mikrovasküler vazodilatasyon basınç videomicroscopy kullanarak Illustration. (A)dinlenme temel arterioler çapı (sonrası basınçlandırma çapı, hiçbir agonist veya uyarı: Di) (B) önceden dar çap (ET-1 dar çap indüklenen sonra: Dp), (C) Agonist kaynaklı vasodilated çapı (Ach eklendikten sonra: DT). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56079/56079fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56079/56079fig3.jpg"> 
Şekil 3: endotel bağımlı ve - bağımsız vazodilatasyon obez insanlarda visseral adipoz arteriyoller vs subkutan. Endotel bağımlı vazodilatasyon önemli ölçüde zayıflatılmış visseral içinde deri altı yağ dokusu ile karşılaştırıldığında (Atarafından) değerlendirirken arteriyoller akışı arttı (eşleştirilmiş subkutan ve viseral gemiler, n = 20), veya (B) asetilkolin doz yanıt/L-adı olmadan (eşleştirilmiş subkutan ve viseral gemiler, n = 16). (C) endotel bağımsız vazodilatasyon değil differentially değişmiş papaverin doz Cevabıyla değerlendirirken visseral ve subkutan arteriyoller arasında (eşleştirilmiş subkutan ve viseral gemiler, n = 8). * Depoları arasında grup farklılıklar gösterir; †Denotes depo özel asetilkolin L-NAME asetilkolin yalnız karşılaştırıldığında ile arasındaki farklar; NS: önemli değil. Mean± SEM, p sunulan verilerin &#60; 0,05. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56079/56079fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy at JoVE.com

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

assessment-human-adipose-tissue-microvascular-function-using

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

7.4K Görüntüleme.  Boston University School of Medicine. Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

Video: Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Tıp

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite fluorescent in situ elements through the optical fibers, and then record some of the emitted photons, via the same optical fibers. The light source is a laser that sends the exciting light through an element within the fiber bundle and as it scans over the sample, recreates an image pixel by pixel. As this scan is very fast, by combining it with dedicated image processing software, images in real time with a frequency of 12 frames/sec can be obtained.
We developed a technique to quantitatively characterize capillary morphology and function, using a confocal fluorescence videomicroscopy device. The first step in our experiment was to record 5 sec movies in the four quadrants of the tumor to visualize the capillary network. All movies were processed using software (ImageCell, Mauna Kea Technology, Paris France) that performs an automated segmentation of vessels around a chosen diameter (10 &mu;m in our case). Thus, we could quantify the 'functional capillary density', which is the ratio between the total vessel area and the total area of the image. This parameter was a surrogate marker for microvascular density, usually measured using pathology tools.
The second step was to record movies of the tumor over 20 min to quantify leakage of the macromolecular contrast agent through the capillary wall into the interstitium. By measuring the ratio of signal intensity in the interstitium over that in the vessels, an 'index leakage' was obtained, acting as a surrogate marker for capillary permeability.

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In this paper, we present a method to analyze tumor microvessels in vivo using dynamic contrast-enhanced fluorescence videomicroscopy. Two quantitative parameters were acquired: functional capillary density reflecting the vascularity of the tumor, and index leakage reflecting the leakiness of the endothelial wall.

Flüoresans Konfokal videomikroskopi kullanılarak tümör Angiogenesis İn vivo

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely related to metabolism and energy expenditure, and its dysfunction is one important contributor for obesity and diabetes. Contrary to previous belief, recent PET/CT imaging studies indicated the BAT depots are still present in human adults. PET imaging clearly shows that BAT has considerably high uptake of 18F-FDG under certain conditions. In this video report, we demonstrate that Cerenkov luminescence imaging (CLI) with 18F-FDG can be used to optically image BAT in small animals. BAT activation is observed after intraperitoneal injection of norepinephrine (NE) and cold treatment, and depression of BAT is induced by long anesthesia. Using multiple-filter Cerenkov luminescence imaging, spectral unmixing and 3D imaging reconstruction are demonstrated. Our results suggest that CLI with 18F-FDG is a practical technique for imaging BAT in small animals, and this technique can be used as a cheap, fast, and alternative imaging tool for BAT research.

In this video report, we show the application of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for interscapular brown adipose tissue in mice under activated and depressed conditions.

Interskapular kahverengi adipoz dokuda arasında Çerenkov Lüminesans Görüntüleme

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Yağ Dokusu Depolarında içine Nakli Enkapsülasyon termojenik Preadipositler

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and time-consuming. In addition, serial blood or urine samples are required, with the associated stress for the experimental animals. A recent technique significantly reduces the investment in time and resources, minimizing the invasiveness and the animal stress, but being equally valid as the traditional approaches. The method measures transcutaneously renal function. Using an optical device and the exogenous renal marker fluorescein isothiocyanate (FITC)-sinistrin, this technique is capable of measuring the elimination kinetics of the marker through the skin. With neither blood nor urine samples nor the associated laboratory assays needed, the results of the transcutaneous measurement are almost instantaneously available. The method has been already validated in different species and successfully applied in several models of renal pathology. Moreover, due to its minimally invasive characteristics, it is suitable for sequential measurements within the same animal. Here is provided a detailed protocol to carry out the transcutaneous assessment of renal function in rodents.

Determination of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional procedures to measure this parameter are cumbersome and require a large investment of time. Here we describe a faster and minimally invasive method to determinate GFR transcutaneously.

Bilinçli Kemirgenler Böbrek Fonksiyon Transkutanöz Değerlendirmesi

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the development of obesity-associated complications such as type 2 diabetes. To quantitatively and qualitatively investigate the immune cell subsets in human AT deposits, we have developed a flow cytometry approach. The stromal vascular fraction (SVF), containing the immune cells, is isolated from subcutaneous and visceral AT biopsies by collagenase digestion. Adipocytes are removed after centrifugation. The SVF cells are stained for multiple membrane-bound markers selected to differentiate between immune cell subsets and analyzed using flow cytometry. As a result of this approach, pro- and anti-inflammatory macrophage subsets, dendritic cells (DCs), B-cells, CD4+ and CD8+ T-cells, and NK cells can be detected and quantified. This method gives detailed information about immune cells in AT and the amount of each specific subset. Since there are numerous fluorescent antibodies available, our flow cytometry approach can be adjusted to measure various other cellular and intracellular markers of interest.

This article describes a method to analyze immune cell content of adipose tissue by isolation of immune cells from adipose tissue and subsequent analysis using flow cytometry.

Akış Sitometresi kullanarak insan yağ dokusu içinde bağışıklık hücreleri karakterizasyonu

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to expend energy has made it a potential target for novel therapies to ameliorate obesity and associated metabolic disorders in humans. Though this tissue has been well studied in small animals, BAT&#39;s thermogenic capacity in humans remains largely unknown due to the difficulties of measuring its volume, activity, and distribution. Identifying and quantifying active human BAT is commonly performed using 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography and computed tomography (PET/CT) scans following cold-exposure or pharmacological activation. Here we describe a detailed image-analysis approach to quantify total-body human BAT from 18F-FDG PET/CT scans using an open-source software. We demonstrate the drawing of user-specified regions of interest to identify metabolically active adipose tissue while avoiding common non-BAT tissues, to measure BAT volume and activity, and to further characterize its anatomical distribution. Although this rigorous approach is time-consuming, we believe it will ultimately provide a foundation to develop future automated BAT quantification algorithms.

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Using free, open-source software, we have developed an analytical approach to quantify total and regional brown adipose tissue (BAT) volume and metabolic activity of BAT using 18F-FDG PET/CT.

18F-FDG PET/BT kullanarak yağ dokusu kahverengi tüm vücut ve bölgesel Quantification etkin insan

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

A Computerized Functional Skills Assessment and Training Program Targeting Technology Based Everyday Functional Skills

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a computerized functional skills training program that was paired in half of the participants with a commercially available cognitive training (CCT) program.
Non-impaired older individuals (NC) aged 60+ (n=45) and similarly aged individuals with mild cognitive impairment (MCI; n=50) were randomized to receive 12 weeks of twice-weekly computerized functional skills training (CFST) or 12 weeks of twice-weekly sessions split between CCT and CFST. Skills trained were use of an ATM; internet banking; ticket kiosk; telephone and internet prescription refill; medication management; and internet shopping. As with previous functional capacity assessments, we focus on completion time for each simulation.
51 participants completed the training program, either by mastering all 6 tasks (34) or completing 12 weeks of training. 44 more participants completed 4 or more training sessions so they were also analyzed for improvement up to their last training session. Completion time for all 6 tests significantly improved from the baseline assessment to the final training session in both groups of participants (all p&#60;0.001 with an average improvement in task completion time of 45%). Further, there was no differential improvement in MCI and NC in the 6 tests from baseline to end of training (all t&#60;1.66, all p&#62;0.12). Finally, combined CCT plus CFST did not differ from CSFT alone on any of the percent-change score measures (all t&#60;1.64, all p&#62;0.11).
Both NC and MCI groups evidenced substantial improvements in performance. CCT supplementation led to similar functional gains with half as many training sessions. The NC participants proceeded through the training fairly rapidly even without CCT supplementation; MCI participants required more training but learned equivalently. These findings suggest that even in cases with memory impairments, functional skills can be efficiently learned with training.

This training protocol uses computerized training to teach technology-related everyday functional skills. These skills include financial skills, travel and transit, as well as medication management.

Bilgisayarlı Fonksiyonel Beceri Değerlendirme ve Eğitim Programı Hedefleme Teknolojisi Tabanlı Günlük Fonksiyonel Beceriler

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring apparatus and a motor to perform functional studies. These studies will allow measurement of cardiomyocyte stiffness (passive force) and its activation with different calcium (Ca2+)-containing solutions to determine, amongst others: maximum force development, myofilament Ca2+-sensitivity (pCa50), cooperativity (nHill) and the rate of force redevelopment (ktr). This method also enables determination of the effects of drugs acting directly on myofilaments and of the expression of exogenous recombinant proteins on both active and passive properties of cardiomyocytes. Clinically, skinned cardiomyocyte studies highlight the pathophysiology of many myocardial diseases and allow in vitro assessment of the impact of therapeutic interventions targeting the myofilaments. Altogether, this technique enables the clarification of cardiac pathophysiology by investigating correlations between in vitro and in vivo parameters in animal models and human tissue obtained during open heart or transplant surgery.

This protocol aims to describe step-by-step the technique of extraction and assessment of cardiac function using skinned cardiomyocytes. This methodology allows measurement and acutemodulation of myofilament function using small frozen biopsies that can be collected from different cardiac locations, from mice to men.

Derili Kardiyomiyositler Kullanarak Kardiyak Fonksiyonun İn Vitro Değerlendirilmesi

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this procedure. However, intraperitoneal islet transplantation has some limitations, including poor transplant efficacy, difficult graft detection ability, and a lack of graftectomy capability for post-transplant analysis. In this paper, "fat-covered islet transplantation", an intraperitoneal islet transplantation method that utilizes epididymal white adipose tissue, is used to assess the therapeutic effects of bioengineered islets. The simplicity of the method lies in the seeding of islets onto epididymal white adipose tissue and using the tissue to cover the islets. While this method can be categorized as an intraperitoneal islet transplantation technique, it shares characteristics with intra-adipose tissue islet transplantation. The fat-covered islet transplantation method demonstrates more robust therapeutic effects than intra-adipose tissue islet transplantation, however, including the improvement of blood glucose and plasma insulin levels and the potential for graft removal. We recommend the adoption of this method for assessing the mechanisms of islet engraftment into white adipose tissue and the therapeutic effects of bioengineered islets.

This fat-covered islet transplantation method is suitable for the detection of engrafted islets in the intraperitoneal cavity. Notably, it does not require the use of biobinding agents or suturing.

Epididim Beyaz Yağ Dokusu Kullanılarak Yağ Kaplı Adacık Nakli

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...