Bu malzeme Grant No altında Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenen çalışma üzerine kuruludur CMMI-1452943 ve Arkansas Üniversitesi onur üniversite tarafından. Biz de Arkansas Kordon Kanı Bankası kordon kanı birimleri ile bize sağlamak için kabul etmek istiyorum.

Bu araştırma Üniversitesi Arkansas kurumsal inceleme Kurulu (onay numarası 16-04-722) onayı ile gerçekleştirilmiştir. Göbek Kordon kanı birimleri sitrat fosfat dekstroz (GBM) çözümünde, Arkansas Kordon Kanı Bankası toplanmıştır ve depolama gereksinimini karşılamayan birimleri için araştırma kuruluşuna verildi. Kordon kan birimleri ortam sıcaklıklarda koleksiyonunun 24 saat içinde laboratuvara couriered.
 1. yalıtım endotelyal Progenitor Hücre kordon kanı üzerinden <ol><li>reaktifler hazırlanması.
	<ol><li>Hazırlamak endotel Bazal orta (EBM) % 10 fetal sığır serum için (FBS) ekleyerek EGM takıma 20 ng/mL İnsülin benzeri büyüme faktörü (IGF), 1 µg/mL askorbik asit, 5 ng/mL rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (rhEGF), 22.5 µg/mL heparin ve 0,5 ng/mL vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), 10 ng/mL rekombinant insan Fibroblast büyüme faktörü B (rhFGF-B), 0.2 µg/mL hidrokortizon ve % 2 penisilin-streptomisin-glutamin ile birlikte. Kültür 0.2 µm polyethersulfone (PES) membran vakum filtre kullanarak ortamın sterilize.</li>
		<li>Hazırlama fare ben kollajen çözüm 50 µg/mL 0,02 N Asetik asit kullanarak bir konsantrasyon, kuyruk. Bu çözüm 0.2 µm şırınga filtre sterilize.</li>
		<li>Öncesi kat 6-şey tabak 2 mL hazırlanmış iri fare ile ben her şey için kollajen çözüm kuyruk. Tohum önce % 5 CO 2 ve 37 ° C en az 1 h için tutulan bir kuluçka yerleştirebilirsiniz.</li>
		<li>1:1 konsantrasyon, kordon kanı ile Hanks dengeli tuz çözüm (HBSS) yaklaşık olarak 25 mL seyreltik.</li>
		<li>Hazırlama radyo-IMMUNO yağış tahlil 150 mM Sodyum Klorür, %1 Triton X-100, % 0.5 sodyum deoxycholate, 1 mM β-gliserofosfat, % 0,1 SDS ve 50 mM Tris (pH 8.0) kullanarak (RIPA) arabellek.</li>
	</ol></li> <li>Yalıtım endotelyal progenitor hücre.
	<ol><li>Sıcak tüm hazır reaktifler yalıtım önce 37 ° C'de tutulan bir su banyosunda.</li>
		<li>Yoğunluğu degrade orta reaktif 20 mL 50 mL santrifüj tüpü ekleyin.</li>
		<li>Dikkatle katman seyreltilmiş kordon kanı pipet tüp yan duvarlarının doğru amaçlayan tarafından bu katman bozmadan yoğunluk gradient orta içeren santrifüj tüpü içinde 20 mL.</li>
		<li>Onların yoğunlukları ( şekil 1) göre kan bileşenlerinin santrifüj rotor frenler ile 800 x g oda sıcaklığında 30 dk için de centrifuging tarafından ayırın. Farklı Katmanlar rahatsız etmeyin.</li>
		<li>Plazma katmanın dikkatle bu tüp dışında diğer hücre katman pipet ucu MNC ulaşmak mümkün olana katmanları (bkz. şekil 1) rahatsız etmeden pipetting tarafından kaldırın. Kaldırılan plazma atın. 
		Not: pipet ipuçları plazma kaldırmak için kullanırken, plazma MNC katmanının (bozuklukları azaltmak için, şekil 1) küçük bir tabaka bırakın.</li>
		<li>Bir 18'lik iğne donatılmış kullanarak çok uluslu şirketler içerir buffy kat toplamak ve bir taze santrifüj tüpü transfer.</li>
		<li>Ekleyin EBM eşit bir hacmi toplanan çok uluslu şirketler. santrifüj için bu tüpler 500 x g 10 min için de 4'te ° C. atma süpernatant. 
		Not: Kırmızı hücre Pelet kırmızı kan hücreleri/eritrositler varlığı nedeniyle görünür.</li>
		<li>5 mL kırmızı kan hücreleri parçalayıcı amonyum klorür çözeltisi ekleyin. Bu tüp için 5-10 dk ara sıra sallayarak ile buz üzerinde kuluçkaya. 
		Not: çok uluslu şirketler için zararlı olabileceği kadar dikkatli olun bu adımı sırasında zaman süresini aşmayacak şekilde alınmalıdır.</li>
		<li>500 x g 4 ° C'de 10 dakika için de tüpler santrifüj kapasitesi ve süpernatant atın. Eritrositler devam ederse, kırmızı renk Pelet içinde gözlenen 1.2.8 ve 1.2.9 yükleme tamamlayana dek.</li>
		<li>Pelet hazırlanan EGM içinde resuspend ve hemasitometre çok uluslu şirketler kullanın.</li>
		<li>Aspiratı sıçan kuyruk ben (adımından 1.1.3) kolajen kaplı 6-şey plaka ve wells 1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x ile üç kez yıkayın.</li>
		<li>1 x 10 7 çok uluslu şirketler her iyi bir konsantrasyon, kollajen plakasına EGM içinde resuspended MNC Pelet tohum. 37 ° C'de % 5 CO 2 kuluçka yerleştirin.</li>
		<li>Sonra 24 h, orta Aspire edin ve wells bir kez EGM ile yıkayın. Her şey için EGM orta 3 mL ekleyin ve geri 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka yerleştirin.</li>
		<li>7 gün boyunca her gün taze EGM orta ile plaka doldurmak. 7 gün sonra EGM orta her gün değiştirin.</li>
		<li>Bir alan parlak mikroskop kullanarak almak 6-şey plaka görüntülerini her gün endotel hücre kolonileri ilerlemesini izlemek için. Nerede koloniler ortaya onların büyüme izlemek için plaka işareti. 
		Not: Genellikle kültür görünmesini colonies için 5 ile 9 gün arasında sürer.</li>
	</ol></li> <li>Genişleme endotelyal progenitor hücre.
	<ol><li>Kat T-25 kültür şişeye fare ile kuyruk kollajen (50 µg/mL) ve yer o 37 ° C'de % 5 CO 2 kuluçka için en az 60 dk. aspiratı ve hücreleri tohum önce üç kez 1 x PBS ile T-25 hücre kültür şişeye yıka.</li>
		3 mm boyutunda 150 µL % 0.05 tripsin-EDTA çözüm her kuyuya kullanarak ulaştığınızda <li>endotel hücre koloniler trypsinize. 6-şey plaka 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka 2-3 dakika süreyle geri yerleştirin</li>
		<li>Ekli hücreleri çıkarmak için 6-şey plaka hafifçe dokunun. 2 mL EGM eklenir ve yaklaşık 15 mL santrifüj tüpü hücrelerde kurtarmak.</li>
		<li>Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve ilk tohumlama yoğunluğu hesaplamak.</li>
		<li>Spin 15 mL santrifüj tüpleri 400 x g 5 dakika süreyle, hücre Pelet EGM içinde Resuspend ve T-25 şişeye ~ 500.000 hücreleri ile tohum. Bu şişeyi geçiş 1 olarak işaretlemek ve T-25 şişeye geri 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka yerleştirin. 
		Not: Hücreleri EBM ve DMEM büyüme EGM ile karşılaştırmak için kaplama.</li>
		<li>İçin daha fazla geçişleri, şişeye % 90 izdiham ulaştığında, adımları 1.3.1 - 1.3.5 ve hücre 10 4 hücreleri/cm 2 T-75 veya T-175 hücre kültür şişeler reseed. İzole hücreler (Adım 2 ve 3) karakterizasyonu için devam.</li>
	</ol></li></ol> 2. İzole hücreler kullanarak Western Blot karakterizasyonu <ol><li>Ekle 50-100 µL lizis, arabellek izole hücreleri ayırdetmek için genişleme adımları her geçiş. Proteinler yaklaşık 500.000 veya daha çok satır toplamak.</li>
	<li>Yukarı ve aşağı şiddetle hücreleri rüptürü ve proteinleri serbest bırakmak için pipet. Toplamak ve arabellek microcentrifuge tüp transfer.</li>
	<li>Microcentrifuge tüp 500 x g de spin ve dikkatle süpernatant yeni bir microcentrifuge tüp aktarın. Etiket ve tüpler uzun süreli depolama için-80 ° C'de depolayın.</li>
	<li>Ya Bradford kullanarak her tüpün içinde protein miktarını ölçmek &#39; s veya BCA tahlil 27 , 28 , 29.</li>
	<li>Standart prosedürler 27 , 28 , 29 kullanarak kurutma Western taşımak. İfadeye CD31, CD34, VEGFR2 ve α-SMA ait toplam protein 5 µg analiz. Veri normalleştirme için α-tübülin kullanın.</li>
</ol> 3. Dolaylı ayirt <ol><li>18-mm cam coverslips % 50 etanol içinde solüsyon içeren temizleyicide ve onları kurutun. Temiz coverslips bir 12-şey plaka gecede Biyogüvenlik mahalledeki bir UV ile onları sterilize etmek ışık bırakın.</li>
	<li>Kat coverslips ile 50 ve #181; g/kuyruk kollajen ve plaka bir 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka en az 60 dakika süreyle transfer mL sıçan</li>
	<li>Kollajen Aspire edin ve 1 mL 1 x PBS coverslips yıkamak için 12-şey plaka ekleyin. 1 x PBS Aspire edin ve iki kez tekrarlayın.</li>
	<li>Tohum 250.000 kültürlü EPCs her şey ve onları geri 37 ° C'de % 5 CO 2 kuluçka immunostaining taşıma önce en az 3 gün boyunca yerde.</li>
	<li>3 kez 1 x PBS ile plaka yıkayın. Her şey buz gibi metanol 1 mL ekleyin ve hücreleri düzeltmek 15 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
	<li>Kullanarak bir standart iletişim kuralı 27 , 28 , 29 immunostaining taşımak. Antikorlar onların uygun dilutions kullanın (Örneğin, CD31 (1:20), CD34 (1:50), α-SMA (1: 100) ve VEGFR2 (1:50)).</li>
	<li>Al epifluorescence mikroskop kullanarak immunostained coverslips görüntülerini.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Asahara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+putative+progenitor+endothelial+cells+for+angiogenesis.">Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis.</a> Science. 275 (5302), 964-967 (1997).</li><li>Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+of+circulating+endothelial+cells+and+endothelial+outgrowth+from+blood.">Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood.</a> J Clin Invest. 105 (1), 71-77 (2000).</li><li>Shi, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+circulating+bone+marrow-derived+endothelial+cells.">Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells.</a> Blood. 92 (2), 362-367 (1998).</li><li>Hirschi, K. K., Ingram, D. A., Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+identity,+phenotype,+and+fate+of+endothelial+progenitor+cells.">Assessing identity, phenotype, and fate of endothelial progenitor cells.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (9), 1584-1595 (2008).</li><li>Ingram, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+hierarchy+of+endothelial+progenitor+cells+using+human+peripheral+and+umbilical+cord+blood.">Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood.</a> Blood. 104 (9), 2752-2760 (2004).</li><li>Yoder, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redefining+endothelial+progenitor+cells+via+clonal+analysis+and+hematopoietic+stem/progenitor+cell+principals.">Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals.</a> Blood. 109 (5), 1801-1809 (2007).</li><li>Sales, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-beta1+modulates+extracellular+matrix+production,+proliferation,+and+apoptosis+of+endothelial+progenitor+cells+in+tissue-engineering+scaffolds.">Transforming growth factor-beta1 modulates extracellular matrix production, proliferation, and apoptosis of endothelial progenitor cells in tissue-engineering scaffolds.</a> Circulation. 114, 193-199 (2006).</li><li>Sales, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Progenitor+Cells+as+a+Sole+Source+for+Ex+Vivo+Seeding+of+Tissue-Engineered+Heart+Valves.">Endothelial Progenitor Cells as a Sole Source for Ex Vivo Seeding of Tissue-Engineered Heart Valves.</a> Tissue Eng Pt A. 16 (1), 257-267 (2010).</li><li>Liew, A., Barry, F., O'Brien, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+diagnostic+and+therapeutic+considerations.">Endothelial progenitor cells: diagnostic and therapeutic considerations.</a> Bioessays. 28 (3), 261-270 (2006).</li><li>Hur, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+two+types+of+endothelial+progenitor+cells+and+their+different+contributions+to+neovasculogenesis.">Characterization of two types of endothelial progenitor cells and their different contributions to neovasculogenesis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (2), 288-293 (2004).</li><li>Ingram, D. A., Caplice, N. M., Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unresolved+questions,+changing+definitions,+and+novel+paradigms+for+defining+endothelial+progenitor+cells.">Unresolved questions, changing definitions, and novel paradigms for defining endothelial progenitor cells.</a> Blood. 106 (5), 1525-1531 (2005).</li><li>Melero-Martin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+vasculogenic+potential+of+human+blood-derived+endothelial+progenitor+cells.">In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells.</a> Blood. 109 (11), 4761-4768 (2007).</li><li>Melero-Martin, J. M., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+13.+An+in+vivo+experimental+model+for+postnatal+vasculogenesis.">Chapter 13. An in vivo experimental model for postnatal vasculogenesis.</a> Methods Enzymol. 445, 303-329 (2008).</li><li>Yoder, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+endothelial+progenitor+cells.">Human endothelial progenitor cells.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (7), 006692 (2012).</li><li>Siddique, A., Shantsila, E., Lip, G. Y. H., Varma, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+what+use+for+the+cardiologist.">Endothelial progenitor cells: what use for the cardiologist.</a> J Angiogenes Res. 2 (6), (2010).</li><li>Camci-Unal, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface-modified+hyaluronic+acid+hydrogels+to+capture+endothelial+progenitor+cells.">Surface-modified hyaluronic acid hydrogels to capture endothelial progenitor cells.</a> Soft Matter. 6 (20), 5120-5126 (2010).</li><li>Hill, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+endothelial+progenitor+cells,+vascular+function,+and+cardiovascular+risk.">Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk.</a> N Engl J Med. 348 (7), 593-600 (2003).</li><li>Young, P. P., Vaughan, D. E., Hatzopoulos, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologic+properties+of+endothelial+progenitor+cells+and+their+potential+for+cell+therapy.">Biologic properties of endothelial progenitor cells and their potential for cell therapy.</a> Prog Cardiovasc Dis. 49 (6), 421-429 (2007).</li><li>Mehta, J. L., Szwedo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+endothelial+progenitor+cells,+microparticles+and+vascular+disease.">Circulating endothelial progenitor cells, microparticles and vascular disease.</a> J Hypertens. 28 (8), 1611-1613 (2010).</li><li>Nevskaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+endothelial+progenitor+cells+in+systemic+sclerosis+are+related+to+impaired+angiogenesis+and+vascular+disease+manifestations.">Circulating endothelial progenitor cells in systemic sclerosis are related to impaired angiogenesis and vascular disease manifestations.</a> Ann Rheum Dis. 66, 67-67 (2007).</li><li>Cebotari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+tissue+engineered+human+heart+valves+using+autologous+progenitor+cells.">Clinical application of tissue engineered human heart valves using autologous progenitor cells.</a> Circulation. 114, 132-137 (2006).</li><li>Ito, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells+as+putative+targets+for+angiostatin.">Endothelial progenitor cells as putative targets for angiostatin.</a> Cancer Res. 59 (23), 5875-5877 (1999).</li><li>Vasa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+circulating+endothelial+progenitor+cells+by+statin+therapy+in+patients+with+stable+coronary+artery+disease.">Increase in circulating endothelial progenitor cells by statin therapy in patients with stable coronary artery disease.</a> Circulation. 103 (24), 2885-2890 (2001).</li><li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+microvessels+on+three-dimensional+biodegradable+scaffolds+using+human+endothelial+progenitor+cells.">Tissue-engineered microvessels on three-dimensional biodegradable scaffolds using human endothelial progenitor cells.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (2), 480-487 (2004).</li><li>Boyer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+endothelial+cells+and+their+progenitor+cells+from+human+peripheral+blood.">Isolation of endothelial cells and their progenitor cells from human peripheral blood.</a> J Vasc Surg. 31 (1), 181-189 (2000).</li><li>Huber, B., Czaja, A. M., Kluger, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+epidermal+growth+factor+(EGF)+and+hydrocortisone+on+the+co-culture+of+mature+adipocytes+and+endothelial+cells+for+vascularized+adipose+tissue+engineering.">Influence of epidermal growth factor (EGF) and hydrocortisone on the co-culture of mature adipocytes and endothelial cells for vascularized adipose tissue engineering.</a> Cell Biol Int. 40 (5), 569-578 (2016).</li><li>Sturdivant, N. M., Smith, S. G., Ali, S. F., Wolchok, J. C., Balachandran, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetazolamide+Mitigates+Astrocyte+Cellular+Edema+Following+Mild+Traumatic+Brain+Injury.">Acetazolamide Mitigates Astrocyte Cellular Edema Following Mild Traumatic Brain Injury.</a> Sci Rep. 6, 33330 (2016).</li><li>Lam, N. T., Muldoon, T. J., Quinn, K. P., Rajaram, N., Balachandran, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Valve+interstitial+cell+contractile+strength+and+metabolic+state+are+dependent+on+its+shape.">Valve interstitial cell contractile strength and metabolic state are dependent on its shape.</a> Integr Biol (Camb). 8 (10), 1079-1089 (2016).</li><li>Tandon, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Valve+interstitial+cell+shape+modulates+cell+contractility+independent+of+cell+phenotype.">Valve interstitial cell shape modulates cell contractility independent of cell phenotype.</a> J Biomech. 49 (14), 3289-3297 (2016).</li><li>Cockshell, M. P., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Culture+of+Human+CD133++Non-adherent+Endothelial+Forming+Cells.">Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells.</a> Bio-Protocol. 6 (7), (2016).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Daha önce belirtildiği gibi bir kaldırım taşı döşeli Morfoloji sahip yapışık EPCs. Bizim izole çok uluslu şirketler bir seklinde hücre koloni (Şekil 2A-2D) bir süre kültür on gün içinde bir Arnavut kaldırımlı koloni (Şekil 2E-2F) erken aşamalarında ilerledi. EPCs farklı farklı araştırma gruplarınca, endotel koloni oluşturan hücreleri5veya endotelyal progenitor hücreler12Yani geç endotelyal progenitor hücreler10etiketlendi. Bu hücreler işlevsel olarak aynıdır ve benzer hücre yüzey işaretleyicileri hızlı unutulmamalıdır. Neredeyse 108 hücrelere, önceki yayınları benzer ve tipik EPCs3,5proliferatif potansiyeli yüksek bir artış kültür döneminde (şekil 3) gözlenen hücre sayısı. Gerçekten de, bu EPCs bir yüksek proliferatif potansiyel ve gösterdiği birkaç nüfus doublings yaşlanma yetişkin insan periferik kan5 izole EPCs göre geçiren önce gösterdi insan göbek kordon kanı elde bulundu , 10.
Batı blotting sonuçlarımız (şekil 4A) CD31, CD34 ve VEGFR2 varlığı olumlu denetimin HUVEC göre EPCs elde edilen hücre lysates gösterdi. HUVECs CD31, CD34 ve VEGFR2 hızlı ve VIC hızlı α-sSMA harekete geçirmek. Benzer şekilde önceki raporları10,18, CD31 ifade ile daha yüksek pasajlar azalmıştır. İfade deseni de benzer durumunda CD34 ve VEGFR2, nerede her iki işaretleyiciyi güçlü ilk geçiş ve nispeten daha düşük ama eşit miktarlarda daha sonra pasajlar ifade edildi. Bu veri içinde immunosorting tabanlı protokoller kordon kanı elde edilen EPCs12yalıtmak için kullanılan önceki grupları sonuçları ile anlaşma olduğunu bir eğilim gösterir. Genel olarak, EPCs Mezenkimal işaretleri ifade edemediği ve izole hücreler doğada, Mezenkimal olmadığını doğrulamak için biz immunolabeled bizim Western blot membranlar ile α-SMA. Sonuçlarımız α-SMA antikor güçlü ifade sergi kurban toplanan olumlu denetim hücre lysates ile karşılaştırıldığında kültürlü EPCs yok α-SMA ifade olduğunu açıkça gösteriyor.
EGM EPCs için kullanılan diğer kültür medya göre artan hücre çoğalması için izin verdiğini göstermek için biz üç farklı türde medya hücrelerde kültürlü: DMEM, EBM ve EGM (Yani, daha önce belirtildiği gibi büyüme faktörleri ile desteklenmiş EBM). Tüm % 10 ile takviye FBS. Hücreleri farklı parçaları her iyi bir 12-şey plaka numaralı seribaşı. Tamamlayıcı şekil 1 birim alan başına hücre sayısı zaman içinde farklı medya formülasyonları kültüründe her kuyuya gösterir. EGM içinde kültürlü EPCs sürekli bir artış cep numarası ve EBM, hücrelerde için hücre sayısı artış ilk üç gün, daha sonra monoton sırasında daha yavaş bir oran olduğunu gösterdiğine dikkat edin. Bu EPCs hala EBM hayatta, ama büyüme faktörleri yokluğu yayılmasına engel göstermektedir. EPCs sayısı, DMEM düşüş Bu belirli orta formülasyonu onların hayatta kalma veya üretimi için uygun olmadığını düşündüren kültürlü olduğunu unutmayın. Bizim immunostaining veri EPCs EGM (şekil 5) kültürlü CD31 EBM (tamamlayıcı Şekil 2) ve DMEM (tamamlayıcı şekil 3) kültürlü EPCs kıyasla daha fazla birimiyle gösterir. Şekil 5 tamamlayıcı Şekil 2 ve ek şekil 3ile karşılaştırıldığında, bu hücreler diğer hücre tipleri ile kontamine değil görülebilir. Ayrıca, immunostained EPCs (şekil 5) karşılaştırıldığında, biz niteliksel CD31 ve CD34 ifadesi daha yüksek geçit üzerinde azalmış Western blot verilerimiz (şekil 4) destekleyen devlet olabilir.
Yinelemek için bizim önerilen Protokolü birincil amacı bir kodlamayla kanında çok uluslu şirketler özel seçmeli medya tarafından endotelyal progenitor hücreler yalıtabilirsiniz göstermektir. Bu EPCs gelişmiş ekipman ve yordamlar, Akış Sitometresi - ya hemen sonra MNC yalıtım1,3,20 kullanımı dahil diğer yöntemlerin aksine olmadan ayrılmış olabilir göstermektir , 30 veya koloniler monolayer - büyüdü sonra4,10,12,13,23replating tarafından takip etti. EPC kolonileri genellikle 5 ve 9 gün arasında görünür. EPCs izole için daha hızlı ve daha maliyet-etkin bir yöntem böylece bizim yöntemidir. Birincil bu teknik CD31 ve CD34 ifade hücreleri onların yaratıcı fenotip kaybediyor hatırlatıyoruz sonraki pasajlar ile azalır kısıtlamasıdır. Böylece, bir pasaj 5 veya daha düşük elde hücreleri bu iletişim kuralını kullanan Eğer deney için kullanmanız gereken salık vermek.
Centrifuged tüp kapağın çekerken farklı katmanları rahatsız etmek önlemler yoğunluğu Santrifüjü sonra alınmalıdır ve aynı zamanda plazma kaldırırken. Başka bir önemli adım nerede daha uzun bir kuluçka süresi potansiyel MNC zarar verebilir eritrosit lizis için geçerlidir. Bu nedenle bu adımı daha--dan iki kere tekrarlamak için değil tavsiye edilir. Orta aspirasyon 24 saat sonra kaplama yapılır beri sigara yapışık oldukları gibi gerçekten de, eser miktarda eritrositler, kaldırılır. Fibronektin veya jelatin, gibi alternatif yüzeylerde bizim tarafımızdan test değil aynı zamanda belirli protokollere göre hücre kültür kaplama oluşturmak için kullanılabilir. İlk adımda küçük değişiklik istihdam ederek, araştırmacılar yapışık olmayan EPCs30izole.
Sonuç olarak, EPCs göbek kordon kanı ayırma yöntemi bildirdin. EPCs işaretleri α-SMA gibi onlar gibi Mezenkimal hücreler değildir ima ifade yok olduğunu unutmamak gerekir. Nitekim, α-SMA EPCs Mezenkimal endotel geçiş (endo-MT) çalışmaya çalışırken önemli bir işareti olarak hizmet vermektedir. Endo-MT sırasında endotel hücreleri belirli onların işaretleri kaybedecek ve Mezenkimal benzeri hücre fenotip dönüştürmek için bilinen bir hücresel transdifferentiation süreçtir. EPCs büyüme faktörü β7 dönüşüm varlığında bu geçişi uygulayabilir ve ekstraselüler membran proteinlerinin onların doku Mühendisliği iskele8 serbest bırakabilirsiniz gösterilmiştir. Bu gözlemler EPCs vaadi bir Otolog hücre kaynağı olarak kullanmak için bir kalp kapakçığı veya kardiyovasküler diğer doku mühendislik yapıları oluşturmak için gösterir.

Birkaç müfettişler özellikleri ve insan EPCs5,10,11,12,13potansiyelini inceledik. EPCs endotel dokusunda siteleri hipoksi, iskemi, yaralanma veya tümör oluşumu için uygun ve yeni vasküler yapılar4,14oluşumuna katkıda yeteneği olan hücreleri dolaşan olarak tanımlanabilir. Neovaskülarizasyon, doğum sonrası vasculogenesis, şeklinde gözlenen onların katılımı bir anlayış bu hücreler ve tedavi uygulamaları4,15, kullanımları Patofizyoloji yol açmış 16. bireyin EPCs sayısında kardiyovasküler patoloji9,15,16,17,18ile,19 ilişkili olduğu gösterilmiştir ,20. Diğer çalışmalar da EPCs bir vana fibroblast benzeri fenotip ayrıştırılan ve bu hücrelerin doku Mühendisliği kalp vanalar7,21için kullanılan olabilir önerdi.
EPCs yalıtmak için gerekli belirli hücre yüzey molekülleri açıkça nedeniyle İncelemeler4arasındaki tutarsızlıkları tespit edilmiştir değil. Çok uluslu şirketler yapışma maruz kalma kültür koşulları, çeşitli ile belirli bir matris için sözde EPCs olabileceğini düşündüren çeşitli gruplar1,17,22,23, sahne aldı farklı fenotipik özellikleri görüntülenemiyor. Bu özellikler phagocytotic yeteneği, Matrigel tüp oluşumu ve Dil acetylated düşük yoğunluklu lipoproteinler alımını eksikliği içerir. Yüksek klonojenik progenitör mobilizasyonu yapar ve proliferatif potansiyeli ile hangi EPCs hierarchized5olabilir iki özelliklerdir. EPCs da insan fetal akciğer fibroblastlar4ile cocultured zaman vitro tübüllerin oluşabilir. Bu hücreler endotel hücre yüzey işaretleyicileri ifade etmek ve hematopoetik işaretleri13,24,25bazılarını paylaşmak için bilinir. Fenotipleme EPCs için yaygın olarak kabul edilen olumlu ifade işaretleri vardır CD31, CD34, vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptör 2 (VEGFR2), von Willebrand faktör (vWF), CD133, c-Kit ve vasküler endotel cadherin (VE-cadherin)4 , 18. CD90, CD45, CD14, CD115 veya alfa-düz kas aktin (α-SMA) Co hızlı hücreleri bakteri ve yetersizlik de novo insan formu için phagocytose sınırlı proliferatif potansiyel, yeteneklerini nedeniyle EPCs olmak dikkate alınmaz damarları vivo içinde4,7. Bu makalede insan göbek kordon kanı ezelî belgili tanımlık lüzum için herhangi bir hücreyi iletişim kuralları sıralama endotelyal progenitor hücre izolasyon için değiştirilmiş bir protokol özetlenmektedir. Bu yazı için biz CD31, CD34 ve VEGFR2 olumlu işaretleyicilerle α-SMA negatif göstergesi olarak olarak kullanılır.
Bu makalede, yalıtma ve göbek kordon kanı hücrelerden endotelyal progenitor hücre kullanarak sıralama kültür yöntemi büyüme faktörleri (EGM) ile desteklenmiş endotelyal büyüme orta İhtisas öneriyorum. Bu EGM vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve fibroblast büyüme faktörü (FGF), hayatta kalma, yayılması ve endotel hücreleri26geçiş güvenliğini artırmak içerir. Ayrıca askorbik asit, hücre Arnavut kaldırımlı Morfoloji bakımından sorumlu olan içerir; İnsülin benzeri büyüme faktörü-anjiogenik ve göçmen işlevi sağlayan 1 (IGF-1); ve heparin, büyüme faktörleri geliştirilmiş uzun vadeli istikrar içinde orta26neden olur. Endotel hücre kültür ortamına eklenen diğer büyüme faktörleri içerir takviyesi ile epidermal büyüme uyarıcı hücre çoğalması ve farklılaşma ve EGF26 hücrelere sensitizes hidrokortizon yardımcı olan faktörü (EGF), . Bu belirli büyüme orta kullanımı EPCs endotel Bazal orta (EBM) ya da Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) göre daha yüksek sayıda verimleri göster.

<table width="1257">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:204px;height:20px;">A) For isolation and culturing</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:807px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">EGM-2 BulletKit</td>
			<td style="width:127px;">Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td>This product comes with all the growth factors needed to make the Endothelial Growth Medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Pencillin-Streptomycin-Glutamine (100X)</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:127px;">GE Heatlhcare</td>
			<td style="width:119px;">17-1440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Hank&#39;s Balanced Salt Solution</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14170-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Ammonium Chloride</td>
			<td style="width:127px;">Stem Cell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">7850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">1X Phosphate Buffer Saline</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">Rat Tail I Collagen</td>
			<td style="width:127px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">Glacial Acetic Acid</td>
			<td style="width:127px;">Amresco</td>
			<td style="width:119px;">0714-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">0.05% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">HEPES buffer</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10566-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:204px;height:20px;">B) Antibodies and cell lysates</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">CD31&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab28364</td>
			<td>1:250 dilution&#160; for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">CD34</td>
			<td style="width:127px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-7045</td>
			<td>1:100 dilution for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">&#945;-SMA</td>
			<td style="width:127px;">abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab5694</td>
			<td>1:100 dilution for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">&#945;-tubulin</td>
			<td style="width:127px;">abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab7291</td>
			<td>1:2500 dilution for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">VEGFR2</td>
			<td style="width:127px;">abcam</td>
			<td style="width:119px;">sc504</td>
			<td>1:100 dilution for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Human umbilical vein endothelial cell lysate</td>
			<td style="width:127px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc24709&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">Valve interstitial cell lysate</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:807px;">Primary cell line cultured from own lab and lysed with RIPA buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:204px;height:40px;">C) Western blotting and immunostaining</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">10X Tris/Glycine/SDS buffer</td>
			<td style="width:127px;">Biorad</td>
			<td style="width:119px;">161-0772</td>
			<td>Used as running buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">10X Tris/Glycine buffer</td>
			<td style="width:127px;">Biorad</td>
			<td style="width:119px;">161-0771</td>
			<td>Used as transfer buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Immobilon-FL transfer membrane</td>
			<td style="width:127px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">IPFL0010</td>
			<td>This is a PVDF transfer membrane that has 45 &#181;m pore size and is mentioned in the protocol as western blot membrane</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">4X Laemmli sample buffer</td>
			<td style="width:127px;">Biorad</td>
			<td style="width:119px;">161-0747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:127px;">Biorad</td>
			<td style="width:119px;">161-0710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">10% Criterion TGX precast gel</td>
			<td style="width:127px;">Biorad</td>
			<td style="width:119px;">5671033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:204px;height:42px;">Prolong Gold antifade</td>
			<td style="width:127px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P36930</td>
			<td>Used for mounting immunostained coverslips for long term storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:204px;height:21px;">Methanol</td>
			<td style="width:127px;">VWR Analytical</td>
			<td style="width:119px;">BDH1135-4LP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood

Endotelyal progenitor hücreler (EPCs) periferik kan varlığı ve onun katılımı vasculogenesis ilk Ashara ve arkadaşları1tarafından rapor. Daha sonra diğerleri benzer türdeki diğer kemik iliği2,3' ten kaynaklanan EPCs varlığını belgelemiştir. Daha yakın zamanlarda, Yoder ve EPCs göbek kordon kanı türetilmiş gösterdi Ingram4,5,6kan olanlar yetişkin periferik izole göre bir daha yüksek proliferatif potansiyeli vardı. Doğum sonrası vasculogenesis dahil olmak dışında EPCs da söz doku Mühendisliği vasküler kalp kapak yapıları7,ve8oluşturmak için hücre kaynağı olarak göstermiştir. Çeşitli yalıtım protokoller bulunmaktadır, bazıları ücretli mononükleer hücreler (ÇUŞ 'un) endotel ve hematopoetik işaretleri yardımıyla yukarıda belirtildiği kaynaklardan elde edilen hücre sıralanması veya özel endotelyal büyüme ile bu ÇUŞ 'un kültür Orta veya bu teknikleri9bileşimi. Burada, biz yalıtım için bir iletişim kuralı mevcut ve kullanarak EPCs kültürünün İhtisas endotel orta immunosorting, Western Blot kullanarak izole hücrelerin karakterizasyonu tarafından takip kullanımı olmadan büyüme faktörleri ile desteklenmiş ve immunostaining.

Yalıtım ve genişleme endotelyal Progenitor Hücre: Bir şematik (şekil 1) genel Protokolü tasvir sağlanır. Farklı kan bileşeni katmanları insan göbek kordon kanı ile yoğunluk gradient Orta yoğunluk gradient Santrifüjü takip tespit edildi. Çok uluslu şirketler kollajen tedavi plakalar üzerine tohum, gün 5 ve 7 (Şekil 2A) arasında ilk koloniler akıbet gözlendi. Bu koloniler büyümeye devam etti ve daha sonra bir Arnavut kaldırımlı benzeri Morfoloji (Şekil 2E-2F) ilerledi erken aşamalarında seklinde hücre morfolojisi (Şekil 2A-2D) vardı. Şekil 3 A kültür zaman karşı hücreleri toplam sayısını gösterir ve her bir veri noktası her geçiş hasat hücre sayısı temsil eder. Şekil 3 B kollajen tedavi 6-şey plaka ÇUŞ 'un tohum sonra ortaya çıkan ilk koloni için geçen ortalama süre gösteriyor.
Western Blot kullanarak karakterizasyonu: 
Şekil 4 A sonuçlarını Western blot karşı çeşitli antikor test edildi membran temsilcisi gösterir. Bizim sonuç hücreleri CD31 ve CD34 için olumlu öneririz. CD31 ifade (şekil 4B) ve CD34 (şekil 4C) çıktı sonraki geçişler üzerinde azaltmak için ise VEGFR2 (şekil 4D) ifade eşit ilk ile daha sonra pasajlar geçiş daha yüksek ifade sahip. Biz de EPCs Mezenkimal hücre işaretçisi α-SMA (şekil 4E) ifade edemediği gözlenen. İnsan göbek damar endotel hücreleri (HUVEC) ve valvular interstisyel hücreleri (VIC) hücre lysates sırasıyla pozitif ve negatif denetimleri kullanılmıştır. HUVECs kurban α-SMA hızlı iken CD31, CD34 ve VEGFR2, ifade olduğu bilinmektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56021/56021fig1.jpg"> 
Resim 1 : EPC tecrit şematik. Yalıtım tarafından sulandrarak kordon kan HBSS ve dikkatle yoğunluğu degrade orta üst katman ile gösterildiği gibi Başlat. Katmanlı kan yoğunluk gradient Santrifüjü ayrı katmanlar çok uluslu şirketler (buffy ceket), yoğunluğu degrade orta, granülosit ve RBCs oluşan kan elde etmek için yapılır. Sağlanan alt görüntü bu farklı katmanları gösterir. Çok uluslu şirketler toplanır ve bir kollajen tedavi hücre kültür tabağa reseeded. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56021/56021fig2.jpg"> 
Resim 2 . İlerleme hücre koloninin. (A-E) Zaman içinde EPC koloni progresyon temsilcisi alan parlak görüntüler. Koloni Arnavut kaldırımlı Morfoloji benimseyerek erken aşamalarında seklinde hücre gerektiğini unutmayın. (E) T-75 şişesi passage 3, kültürlü EPC temsilcisi görüntüsü. Ölçek çubuğu 200 µm. = <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56021/56021fig3.jpg"> 
Şekil 3: EPCs büyüme eğrileri. (A)grafik gösteriyor bir süre içinde büyüyen hücre sayısı ve her veri noktası bir hücreyi gösterir her geçiş sırasında (P0 - P10) hasat numarası (n = 4). 6-iyi tabak içinde görünmesini (B) ilk EPC colony için geçen süre (n = 4). Hata çubukları demek (SEM) standart hatasını gösterir. İstatistiksel anlam tek yönlü ANOVA kullanarak bulundu. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56021/56021fig4.jpg"> 
Şekil 4 : Western Blot. (A)Western blot membran ile çeşitli antikor lekeli. HUVEC lysate ve VIC lysate olumlu denetimler olarak kullanılmıştır. (B) ortalama yoğunluğu CD31 gruplarından α-tübülin ile normalleştirilmiş. (C) CD34 bantları α-tübülin ile normalleştirilmiş ortalama yoğunluğu. (D) VEGFR2 bantları α-tübülin ile normalleştirilmiş ortalama yoğunluğu. (E) ortalama yoğunluğu α-SMA gruplarından normalleştirilmiş α-tübülin ile (n = 3-6). Hata çubukları SEM göstermek İstatistiksel anlam tek yönlü ANOVA kullanarak bulundu. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56021/56021fig5.jpg"> 
Şekil 5: Immunostaining. CD31, CD34, VEGFR2 ve α-SMA için 7 gün ve immunostained, çeşitli pasajlar için EGM içinde kültürlü EPCs temsilcisi görüntüler. Ölçek barlar - 100 µm. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 1" src="/files/ftp_upload/56021/56021supfig1.jpg"> 
Tamamlayıcı şekil 1: Grafik birim alan başına hücre sayısını gösteren bir 7 gün boyunca ne zaman EGM, EBM ve DMEM kültürlü. EGM medya (EBM ve DMEM) göre daha yüksek hücre büyüme gösterdi. Verilerin istatistiksel anlamlılık p ile gösterdi &#60; 0,01, tek yönlü ANOVA kullanarak (n = 2). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021supfig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 2" src="/files/ftp_upload/56021/56021supfig2.jpg"> / > Tamamlayıcı Resim 2: EBM içinde 7 gün ve immunostained için CD31, CD34, VEGFR2 ve α-SMA kültürlü EPCs temsilcisi görüntüler. Ölçek çubuğu 100 µm. = <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021supfig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 3" src="/files/ftp_upload/56021/56021supfig3.jpg"> 
Tamamlayıcı şekil 3: DMEM içinde 7 gün ve immunostained için CD31, CD34, VEGFR2 ve α-SMA kültürlü EPCs temsilcisi görüntüler. Ölçek çubuğu 100 µm. = <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56021/56021supfig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood at JoVE.com

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood

Bu iletişim kuralının amacı göbek kordon kanı endotelyal progenitor hücrelerini izole etmektir. Bazı uygulamalar bu hücreler bir biyomarker hastaların kardiyovasküler riski ile iskemik hastalıklar, tedavi tanımlamak için kullanmayı içerir ve oluşturma doku Mühendisliği vasküler ve kalp kapak oluşturur.

Yalıtım endotelyal Progenitor Hücre insan göbek kordon kanı

The existence of endothelial progenitor cells (EPCs) in peripheral blood and its involvement in vasculogenesis was first reported by Ashara and ...

isolation-endothelial-progenitor-cells-from-human-umbilical-cord

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

11.0K Görüntüleme.  University of Arkansas. Bu iletişim kuralının amacı göbek kordon kanı endotelyal progenitor hücrelerini izole etmektir. Bazı uygulamalar bu hücreler bir biyomarker hastaların kardiyovasküler riski ile iskemik hastalıklar, tedavi tanımlamak için kullanmayı içerir ve oluşturma doku Mühendisliği vasküler ve kalp kapak oluşturur.

Video: Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to primary human adult neural cultures raises unique challenges. Recent developments in induced pluripotent stem cells (iPSC) provides an alternative approach to derive neural cultures from skin fibroblasts through patient specific iPSC, but this process is labor intensive, requires special expertise and large amounts of resources, and can take several months. This prevents the wide application of this technology to the study of neurological diseases. To overcome some of these issues, we have developed a method to derive neural stem cells directly from human adult peripheral blood, bypassing the iPSC derivation process. Hematopoietic progenitor cells enriched from human adult peripheral blood were cultured in vitro and transfected with Sendai virus vectors containing transcriptional factors Sox2, Oct3/4, Klf4, and c-Myc. The transfection results in morphological changes in the cells which are further selected by using human neural progenitor medium containing basic fibroblast growth factor (bFGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF). The resulting cells are characterized by the expression for neural stem cell markers, such as nestin and SOX2. These neural stem cells could be further differentiated to neurons, astroglia and oligodendrocytes in specified differentiation media. Using easily accessible human peripheral blood samples, this method could be used to derive neural stem cells for further differentiation to neural cells for in vitro modeling of neurological disorders and may advance studies related to the pathogenesis and treatment of those diseases.

A method was developed to directly derive human neural stem cells from hematopoietic progenitor cells enriched from peripheral blood cells.

Periferik kan Hematopoetik Progenitör Hücreleri İnsan Sinir Kök Hücre Doğrudan İndüksiyon

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Gelişim Biyolojisi

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of multipotent, self-renewing, and expandable neural stem cells. In serum conditions, these multipotent NSPCs will differentiate, generating neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. The harvested tissue is enzymatically dissociated in a papain-EDTA solution and then mechanically dissociated and separated through a discontinuous density gradient to yield a single cell suspension which is plated in neurobasal medium supplemented with epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), and heparin. Adult rat spinal cord NSPCs are cultured as free-floating neurospheres and adult human spinal cord NSPCs are grown as adherent cultures. Under these conditions, adult spinal cord NSPCs proliferate, express markers of precursor cells, and can be continuously expanded upon passage. These cells can be studied in vitro in response to various stimuli, and exogenous factors may be used to promote lineage restriction to examine neural stem cell differentiation. Multipotent NSPCs or their progeny can also be transplanted into various animal models to assess regenerative repair.

The adult mammalian spinal cord contains neural stem/progenitor cells (NSPCs) that can be isolated and expanded in culture. This protocol describes the harvesting, isolation, culture, and passaging of NSPCs generated from the periventricular region of the adult spinal cord from the rat and from human organ transplant donors.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, and is necessary for the emergence of definitive HSPC from the murine extra embryonic yolk sac, placenta, umbilical vessels, and the embryonic aorta-gonad-mesonephros (AGM) region. The transient nature and small size of this cell population renders its reproducible isolation for careful quantification and experimental applications technically difficult. We have established a fluorescence-activated cell sorting (FACS)-based protocol for simultaneous isolation of hemogenic endothelial cells and HSPC during their peak generation times in the yolk sac and AGM. We demonstrate methods for dissection of yolk sac and AGM tissues from mouse embryos, and we present optimized tissue digestion and antibody conjugation conditions for maximal cell survival prior to identification and retrieval via FACS. Representative FACS analysis plots are shown that identify the hemogenic endothelial cell and HSPC phenotypes, and describe a methylcellulose-based assay for evaluating their blood forming potential on a clonal level.

Hematopoietic stem and progenitor cells (HSPC) derive from specialized (hemogenic) endothelial cells during development, yet little is known about the process by which some endothelial cells specify to become blood forming. We demonstrate a flow-cytometry based method allowing simultaneous isolation of hemogenic endothelial cells and HSPC from murine embryonic tissues.

Fare Embriyonik Hemogenic endotel hücrelerinin izolasyonu

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

Isolating Mesangiogenic Progenitor Cells (MPCs) from Human Bone Marrow

In a research study aimed to isolate human bone marrow (hBM)-derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) for clinical applications, we identified a novel cell population specifically selected for growth in human serum supplemented medium. These cells are characterized by morphological, phenotypic, and molecular features distinct from MSCs and we named them Mesodermal Progenitor Cells (MPCs). MPCs are round, with a thick highly refringent core region; they show strong, trypsin resistant adherence to plastic. Failure to expand MPCs directly revealed that they are slow in cycling. This is as also suggested by Ki-67 negativity. On the other hand, culturing MPCs in standard medium designed for MSC expansion, gave rise to a population of exponentially growing MSC-like cells. Besides showing mesenchymal differentiation capacity MPCs retained angiogenic potential, confirming their multiple lineage progenitor nature. Here we describe an optimized highly reproducible protocol to isolate and characterize hBM-MPCs by flow cytometry (CD73, CD90, CD31, and CD45), nestin expression, and F-actin organization. Protocols for mesengenic and angiogenic differentiation of MPCs are also provided. Here we also suggest a more appropriate nomenclature for these cells, which has been re-named as "Mesangiogenic Progenitor Cells".

Isolating Mesangiogenic Progenitor Cells MPCs from Human Bone Marrow

Here we describe an optimized, highly reproducible protocol to isolate Mesodermal Progenitor Cells (MPCs) from human bone marrow (hBM). MPCs were characterized by flow cytometry and nestin expression. They showed the ability to give rise to exponentially growing MSC-like cell cultures while retaining their angiogenic potential.

İnsan Kemik İliği gelen Yalıtımlı Mesangiogenic Ata Hücreleri (MPCs)

In a research study aimed to isolate human bone marrow (hBM)-derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) for clinical applications, we identified a novel ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly gained attention because they do not pose any ethical or moral concerns. Current methods to isolate MSCs from UC yield low amounts of cells with variable proliferation potentials. Since UC is an anatomically-complex organ, differences in MSC properties may be due to the differences in the anatomical regions of their isolation. In this study, we first dissected the cord/placenta samples into three discrete anatomical regions: UC, cord-placenta junction (CPJ), and fetal placenta (FP). Second, two distinct zones, cord lining (CL) and Wharton&#39;s jelly (WJ), were separated. The explant culture technique was then used to isolate cells from the four sources. The time required for the primary culture of cells from the explants varied depending on the source of the tissue. Outgrowth of the cells occurred within 3 - 4 days of the CPJ explants, whereas growth was observed after 7 - 10 days and 11 - 14 days from CL/WJ and FP explants, respectively. The isolated cells were adherent to plastic and displayed fibroblastoid morphology and surface markers, such as CD29, CD44, CD73, CD90, and CD105, similarly to bone marrow (BM)-derived MSCs. However, the colony-forming efficiency of the cells varied, with CPJ-MSCs and WJ-MSCs showing higher efficiency than BM-MSCs. MSCs from all four sources differentiated into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic lineages, indicating that they were multipotent. CPJ-MSCs differentiated more efficiently in comparison to other MSC sources. These results suggest that the CPJ is the most potent anatomical region and yields a higher number of cells, with greater proliferation and self-renewal capacities in vitro. In conclusion, the comparative analysis of the MSCs from the four sources indicated that CPJ is a more promising source of MSCs for cell therapy, regenerative medicine, and tissue engineering.

Here, we present a protocol for the dissection of human umbilical cord (UC) and fetal placenta sample into cord lining (CL), Wharton&#39;s jelly (WJ), cord-placenta junction (CPJ), and fetal placenta (FP) for the isolation and characterization of mesenchymal stromal cells (MSCs) using the explant culture technique.

İnsan göbek bağı ve fetal plasentadan Mezenkimal Stromal Hücre İzolasyonu ve Vasıflandırılması

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. Currently, efforts are being made to regenerate damaged cartilage with ex vivo expanded chondrocytes or bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMSCs). However, the restricted viability and instability of these cells limit their application in cartilage reconstruction. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) have received scientific attention as a new alternative for regenerative applications. With unlimited self-renewal ability and multipotency, hiPSCs have been highlighted as a new replacement cell source for cartilage repair. However, obtaining a high quantity of high-quality chondrogenic pellets is a major challenge to their clinical application. In this study, we used embryoid body (EB)-derived outgrowth cells for chondrogenic differentiation. Successful chondrogenesis was confirmed by PCR and staining with alcian blue, toluidine blue, and antibodies against collagen types I and II (COL1A1 and COL2A1, respectively). We provide a detailed method for the differentiation of cord blood mononuclear cell-derived iPSCs (CBMC-hiPSCs) into chondrogenic pellets.

Here, we propose a protocol for chondrogenic differentiation from cord blood mononuclear cell-derived human induced pluripotent stem cells.

Kordon Kanından Oluşan İndüklü Pluripotent Kök Hücrelerden Kondrojenik Pellet Oluşumu

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...

Induction of Endothelial Differentiation in Cardiac Progenitor Cells Under Low Serum Conditions

Cardiac progenitor cells (CPCs) may have therapeutic potential for cardiac regeneration after injury. In the adult mammalian heart, intrinsic CPCs are extremely scarce, but expanded CPCs could be useful for cell therapy. A prerequisite for their use is their ability to differentiate in a controlled manner into the various cardiac lineages using defined and efficient protocols. In addition, upon in vitro expansion, CPCs isolated from patients or preclinical disease models may offer fruitful research tools for the investigation of disease mechanisms.
Current studies use different markers to identify CPCs. However, not all of them are expressed in humans, which limits the translational impact of some preclinical studies. Differentiation protocols that are applicable irrespective of the isolation technique and marker expression will allow for the standardized expansion and priming of CPCs for cell therapy purpose. Here we describe that the priming of CPCs under a low fetal bovine serum (FBS) concentration and low cell density conditions facilitates the endothelial differentiation of CPCs. Using two different subpopulations of mouse and rat CPCs, we show that laminin is a more suitable substrate than fibronectin for this purpose under the following protocol: after culturing for 2 - 3 days in medium including supplements that maintain multipotency and with 3.5% FBS, CPCs are seeded on laminin at &#60;60% confluence and cultured in supplement-free medium with low concentrations of FBS (0.1%) for 20 - 24 hours before differentiation in endothelial differentiation medium. Because CPCs are a heterogeneous population, serum concentrations and incubation times may need to be adjusted depending on the properties of the respective CPC subpopulation. Considering this, the technique can be applied to other types of CPCs as well and provides a useful method to investigate the potential and mechanisms of differentiation and how they are affected by disease when using CPCs isolated from respective disease models.

This protocol describes an endothelial differentiation technique for cardiac progenitor cells. It particularly focuses on how serum concentration and cell-seeding density affect the endothelial differentiation potential.

İndüksiyon düşük Serum koşullar altında kalp Progenitor hücreler endotel farklılaşma

Cardiac progenitor cells (CPCs) may have therapeutic potential for cardiac regeneration after injury. In the adult mammalian heart, intrinsic CPCs are ...

Isolation and Characterization of Human Umbilical Cord-derived Mesenchymal Stem Cells from Preterm and Term Infants

Mesenchymal stem cells (MSCs) have considerable therapeutic potential and attract increasing interest in the biomedical field. MSCs are originally isolated and characterized from bone marrow (BM), then acquired from tissues including adipose tissue, synovium, skin, dental pulp, and fetal appendages such as placenta, umbilical cord blood (UCB), and umbilical cord (UC). MSCs are a heterogeneous cell population with the capacity for (1) adherence to plastic in standard culture conditions, (2) surface marker expression of CD73+/CD90+/CD105+/CD45-/CD34-/CD14-/CD19-/HLA-DR- phenotypes, and (3) trilineage differentiation into adipocytes, osteocytes, and chondrocytes, as currently defined by the International Society for Cellular Therapy (ISCT). Although BM is the most widely used source of MSCs, the invasive nature of BM aspiration ethically limits its accessibility. Proliferation and differentiation capacity of MSCs obtained from BM generally decline with the age of the donor. In contrast, fetal MSCs obtained from UC have advantages such as vigorous proliferation and differentiation capacity. There is no ethical concern for UC sampling, as it is typically regarded as medical waste. Human UC starts to develop with continuing growth of the amniotic cavity at 4-8 weeks of gestation and keeps growing until reaching 50-60 cm in length, and it can be isolated during the whole newborn delivery period. To gain insight into the pathophysiology of intractable diseases, we have used UC-derived MSCs (UC-MSCs) from infants delivered at various gestational ages. In this protocol, we describe the isolation and characterization of UC-MSCs from fetuses/infants at 19-40 weeks of gestation.

Human umbilical cord (UC) can be obtained during the perinatal period as a result of preterm, term, and postterm delivery. In this protocol, we describe the isolation and characterization of UC-derived mesenchymal stem cells (UC-MSCs) from fetuses/infants at 19-40 weeks of gestation.

Yalıtım ve insan göbek kordonu kaynaklı mezenkimal kök hücre erken Doğum ve terim bebekler karakterizasyonu

Mesenchymal stem cells (MSCs) have considerable therapeutic potential and attract increasing interest in the biomedical field. MSCs are originally ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily functions. Biomimetics is the imitation of the models, systems, and elements of nature for the purpose of solving complex human problems1. Skin biomimetics is a useful tool for in vitro disease research and in vivo regenerative medicine. Human induced pluripotent stem cells (iPSCs) have the characteristic of unlimited proliferation and the ability of differentiation to three germ layers. Human iPSCs are generated from various primary cells, such as blood cells, keratinocytes, fibroblasts, and more. Among them, cord blood mononuclear cells (CBMCs) have emerged as an alternative cell source from the perspective of allogeneic regenerative medicine. CBMCs are useful in regenerative medicine because human leukocyte antigen (HLA) typing is essential to the cell banking system. We provide a method for the differentiation of CBMC-iPSCs into keratinocytes and fibroblasts and for generation of a 3D skin organoid. CBMC-iPSC-derived keratinocytes and fibroblasts have characteristics similar to a primary cell line. The 3D skin organoids are generated by overlaying an epidermal layer onto a dermal layer. By transplanting this 3D skin organoid, a humanized mice model is generated. This study shows that a 3D human iPSC-derived skin organoid may be a novel, alternative tool for dermatologic research in vitro and in vivo.

We propose a protocol that shows how to differentiate induced pluripotent stem cell-derived keratinocytes and fibroblasts and generate a 3D skin organoid, using these keratinocytes and fibroblasts. This protocol contains an additional step of generating a humanized mice model. The technique presented here will improve dermatologic research.

3B cilt Organoid kablosu kan kaynaklı nesil Pluripotent kök hücreler indüklenen

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give rise to multiple cell types, including the myotome (MYO), sclerotome (SCL), dermatome (D), and syndetome (SYN), which in turn develop into skeletal muscle, axial skeleton, dorsal dermis, and axial tendon/ligament, respectively. Therefore, the generation of SMs and their derivatives from human induced pluripotent stem cells (iPSCs) is critical to obtain pluripotent stem cells (PSCs) for application in regenerative medicine and for disease research in the field of orthopedic surgery. Although the induction protocols for MYO and SCL from PSCs have been previously reported by several researchers, no study has yet demonstrated the induction of SYN and D from iPSCs. Therefore, efficient induction of fully competent SMs remains a major challenge. Here, we recapitulate human SM patterning with human iPSCs in vitro by mimicking the signaling environment during chick/mouse SM development, and report on methods of systematic induction of SM derivatives (MYO, SCL, D, and SYN) from human iPSCs under chemically defined conditions through the presomitic mesoderm (PSM) and SM states. Knowledge regarding chick/mouse&#160;SM development was successfully applied to the induction of SMs with human iPSCs. This method could be a novel tool for studying human somitogenesis and patterning without the use of embryos and for cell-based therapy and disease modeling.

We present here a protocol for the differentiation of human induced pluripotent stem cells into each somite derivative (myotome, sclerotome, dermatome, and syndetome) in chemically defined conditions, which has applications in future disease modeling and cell-based therapies in orthopedic surgery.

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...