Bu eser Bölümü Biyoteknoloji, Hindistan hükümeti Ulusal Enstitüsü İmmünoloji, Yeni Delhi için alınan çekirdek grant tarafından desteklenmiştir. Dr. Bhattacharjee'nın şu anki adresim mı bölümü Gastroenteroloji, Hepatoloji ve beslenme, Çocuk Hastanesi Los Angeles.

Bu protokol için sunulan yordamları kurumsal hayvan etik komite tarafından Ulusal Enstitüsü İmmünoloji, Yeni Delhi onaylanmış olması. IAEC #319/13. onayı seri referans numarasıdır
Not: Genel cerrahi prosedürler20 ve kemirgen cerrahi21belirli iletişim kuralları üzerinde mükemmel kaynakları vardır. O hayvan ameliyatı: ilk kez, bu kapsamlı bir şekilde pratik cerrahi mankenleri üzerinde hayvanlar üzerinde çalıştırmadan önce tavsiye edilir.
1. hazırlık
<ol><li>Deney öncesinde, steril fosfat tamponlu tuz (PBS) veya serum fizyolojik hazır tutun.</li>
	<li>Makas, tırtıklı forseps, doku forseps, pamuk, pamuk tomurcukları, naylon konuları ve farklı mikro iğne tutucular içeren bir cerrahi seti bir araya getirin. Otoklav cerrahi seti. Özel bir bağışıklık şaibeli NOD Eğer özen gösterilmelidir. SCID fare iletişim kuralında dahildir.</li>
	<li>Deneysel yordamın tamamı, ameliyat sonu için hazırlık gerçekleştirmek, biyo güvenlik sınıf ı kabine.</li>
	<li>Bir NOD tartın. 6-8 hafta ameliyat öncesi eski SCID fare. Fareler arasında 14-18 g ağırlığındaki bu çalışmada kullanılır.</li>
	<li>Fare üst orta ve hastalık karın bölgesi ile saç düzeltici tıraş. Saç kremi bölgenin tümünde eşit bir spatula ile tamamen kesilmiş kıllar kaldırmak için kaldırma uygulanır. 2-5 dakika sonra bir parça steril ıslak pamuk yardımıyla hafifçe tüyleri.</li>
	<li>Fareyi isoflurane odasında getirin ve oksijen silindir kapak kilidini. Oksijen akışı 4 L/dk hızında ve anestezi ikna etmek için % 4 isoflurane buharlaşma korumak.<ol>
<li>Fare düzgün nazik parmak pinching tarafından anestezi ki emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir ameliyat kartını bir biyogüvenlik içinde kabine yerleştirin. Hayvan cerrahi gemide, öyle ki fare ventral kısmı yukarı gelecek şekilde ve fare ön kısmını isoflurane ve oksijen kaynağına bağlı burun konisi içinde yerleştirilir yerleştirin.</li>
	<li>% 2 isoflurane buharlaşma azaltmak ve cerrahi işlem sürdürmek.</li>
	<li>Fare cilt dezenfekte ve steril % 70 etanol batırılmış pamuk ile silerek sterilize.</li>
</ol>2. cerrahi müdahale
<ol><li>
Kısmi Hepatectomy
	<ol>
<li>Xiphoid süreci ve göğüs kafesi, paralel düz işletim makas yardımıyla yaklaşık 1 cm enine bir kesi derinin hemen altında göğüs kemiği, dik olun.</li>
		<li>Yavaşça forseps veya cilt ve karın kas katmanı birbirinden ayırmak için steril ıslatılmış pamuk ipuçları ile kazıma alanı çevresinde karın kas tabaka ile bağlı cilt ayırın. İntradermal bölge kuruma kaçınmak için steril pamuklu ipuçları kullanma PBS ile ıslatın.</li>
		<li>Sol lob alan sorunsuz hemen altındaki xiphoid Periton katmanı yoluyla enine bir kesi yaparak ortaya çıkarmak. İki ıslatılmış pamuk ipuçları ortaya çıkarmak ve karaciğer sol lob kaldırmak için kullanın.</li>
		<li>Kesme karın tarafında pamuk uçlarından birini yerleştirin ve başka pamuk uç diyafram tarafında yer. Yavaşça doğru diyafram yerleştirilen bastırın ve karaciğer sol lob kaldırmak için sürgülü diğer ucunu tarafından ayır.</li>
		<li>Naylon iplik kaldırdı sol lob bir döngü ile kayma ve döngü hilus yakın sol lob Bankası mikro-forseps veya pamuk ipuçları yardımıyla doğru kaydırın. Yavaşça sol lob tabanına naylon iplik döngü itin.</li>
		<li>Mikrocerrahi iğne bağı ve mikro forseps kullanarak sol lob üst üzerinde naylon iplik iki ucu kravat. İki ek knot diğer tarafında yapmak.</li>
		<li>Bir makas yardımı ile bağlı LOB incelemek. Çok yakın iplik kesmeye çalışmayın. Yordamı daha fazla 5 dakika sürer, Periton boşluğu ve organları ile kuruma sıvı kaybı nedeniyle önlemek için steril PBS nemli tutun.</li>
		<li>Karın zarını tarafından sürekli dikiş kullanarak 4-0 akorduna dikiş dikmek. Daha sonra cilt tarafından sürekli dikiş kısa zamanda kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücre transplantasyonu Not: GFP ifade tetkikine transgenik GFP fareler izole edildi (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J), Lee ve arktarafından açıklanan yordamı göre. 22 ve Shen ve ark. 23 Hepatosit benzeri hücreler (NeoHep) insan kaynaklı monosit24 ayrıştırılan Ayrıca ekimi için kullanılmıştır. Ancak, herhangi bir diğer kaynaklardan elde hücreleri de protokol kullanılabilir.<ol>
<li>0,2 milyon hücrelerin yaklaşık 50 µL Iscove'nın modifiye Dulbecco'nın orta (IMDM) içinde askıya alma ve 1 mL insülin şırınga 30 G iğne ile şapkalı içinde Aspire edin. Şırınga buza koyarak soğuk tutmak.</li>
		<li>Fare sol yanal bölümü ameliyatı gerçekleştiren kişi doğru yukarı dönük bir şekilde yerleştirin. Dalak alanını belirlemek ve kemiği cilt sadece dalak ortaya çıkarmak için Periton katmanı üzerinden kısa bir kesi ardından evhamlı bölge yakınındaki incelemek.</li>
		<li>Yavaşça dalak kaldırın ve dışarı kavite iki PBS yardımı ile ıslatılmış pamuk ipuçları tutun.</li>
		<li>Dalak dikkatle iki pamuk ipuçları ile bir elinde tutmak ve şırınga iğne tam olarak dalak için dikey yerleştirin. Yavaşça dalak işlemek ve iğne itmek çok yavaş içinde; İğneyi 2 mm'den daha derin almak gerekir.</li>
		<li>Şırınga piston yavaş yavaş hücreleri dalak enjekte için itin. Ekimi sonra iğne şırınga sabit tutmak ve yavaş yavaş kanama önlemek için dalak veya hücrelerinin kaybı kaldırma.</li>
		<li>Dalak pamuk ipuçları ile Periton boşluğu içine geri koyduktan sonra Periton tabakası sürekli ile 4-0 akorduna Dikiş dikiş tarafından kapatın. Cilt aralıklı ile aynı dikiş dikmek. Cilt kapanış için yara klip kullanmaktan kaçının; Bunun yerine, 4-0 dikiş tarafından kapatın. Yara klip fare doğal hareket kısıtlayabilir ve kez klipleri gevşek olmak ve hızlı bir şekilde ortaya çıkıyor.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Cilt kapattıktan sonra her iki dikiş site steril pamuklu ipucu kullanarak iyot solüsyonu (betadin) çevresi silin.</li>
	<li>600 mg/kg vücut ağırlığına (genellikle 100 µL serum/fare içinde 12 mg sefotaksim) intraperitoneally gibi bir doz antibiyotik sefotaksim enjekte 1 mL şırınga kullanarak.</li>
	<li>Analjezik Meloksikam günlük doz 1 mg/kg hayvanın vücut ağırlığı (genellikle 12 µg Meloksikam 100 µL serum/fare içinde) intraperitoneally, ameliyattan sonra üç güne kadar ver.</li>
	<li>Ameliyat tamamlanması sonra isoflurane gaz akışını durdurmak ve tek tek havalandırılmış kafesine döndü fareyi getirin.</li>
</ol>4. euthanization ve karakterizasyonu
<ol><li>Deneysel endpoints sonra (1 gün ve 10 gün sonrası cerrahi), kurumsal hayvan etik kurallarına göre fareler ötenazi.</li>
	<li>Kan ölümcül oküler terminal pleksus delinme hayvanlar, kanama tarafından toplamak.</li>
	<li>Serum kandan yalıtmak.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Nussler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Present+status+and+perspectives+of+cell-based+therapies+for+liver+diseases.">Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases.</a> J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).</li><li>Ponder, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+hepatocytes+migrate+to+liver+parenchyma+and+function+indefinitely+after+intrasplenic+transplantation.">Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).</li><li>Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+hepatocyte+and+fetal+liver+transplantation+and+xenogeneic+hepatocyte+transplantation+for+Nagase's+analbuminemic+rats.">Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats.</a> Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).</li><li>Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rodent+animal+models.">Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models.</a> Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).</li><li>Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+transplantation.">Hepatocyte transplantation.</a> J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).</li><li>Glanemann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+monocyte-derived+hepatocyte-like+cells+(NeoHeps)+improves+survival+in+a+model+of+acute+liver+failure.">Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure.</a> Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).</li><li>Rahman, T. M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+hepatic+failure.">Animal models of acute hepatic failure.</a> Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulocyte+colony-stimulating+factor+treatment+ameliorates+liver+injury+and+improves+survival+in+rats+with+D-galactosamine-induced+acute+liver+failure.">Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure.</a> Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).</li><li>Gardner, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nitric+oxide+in+acetaminophen-induced+hepatotoxicity+in+the+rat.">Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat.</a> Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).</li><li>Nardo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+treatment+of+CCL4-induced+acute+liver+failure+with+portal+vein+arterialization+in+the+rat.">Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat.</a> Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).</li><li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+hepatic+failure+in+rats+induces+oxidative+stress+differentially+in+cerebral+cortex,+cerebellum+and+pons+medulla.">Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla.</a> Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laennec+protects+murine+from+concanavalin+A-induced+liver+injury+through+inhibition+of+inflammatory+reactions+and+hepatocyte+apoptosis.">Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis.</a> Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).</li><li>Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effect+of+hesperidin+on+lipopolysaccharide-induced+hepatotoxicity.">Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity.</a> Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).</li><li>Rupertus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+but+not+minor+hepatectomy+accelerates+engraftment+of+extrahepatic+tumor+cells.">Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).</li><li>Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+long-term+survival+of+syngeneic+hepatocytes+in+rat+peritoneum.">Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum.</a> Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).</li><li>Tang, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+donor+hepatocytes+and/or+splenocytes+pre-injection+in+reducing+islet+xenotransplantation+rejection.">The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection.</a> Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).</li><li>Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+transplantation+through+the+hepatic+vein:+a+new+route+of+cell+transplantation+to+the+liver.">Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver.</a> Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).</li><li>Gabelein, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasplenic+or+subperitoneal+hepatocyte+transplantation+to+increase+survival+after+surgically+induced+hepatic+failure?.">Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure?.</a> Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).</li><li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+NeoHep+Derived+From+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients'+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+cMET+Signaling.">Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. , (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme. , (2017).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li><li>Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+hepatocytes+by+a+two-step+collagenase+perfusion+procedure.">Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure.</a> J. Vis. Exp. (79), (2013).</li><li>Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+primary+culture+of+rat+hepatic+cells.">Isolation and primary culture of rat hepatic cells.</a> J. Vis. Exp. (64), (2012).</li><li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+NeoHep+Derived+from+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients'+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+c-MET+Signaling.">Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).</li><li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse.">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li><li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique.">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li><li>Vidal, I., Richert, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nude+mouse+as+model+for+liver+deficiency+study+and+treatment+xenotransplantation.">The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation.</a> Int. J. Hepatol. , 1400147 (2012).</li><li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2/3+partial+hepatectomy+in+mice.">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li><li>Ahmed, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+subcutaneous+and+intrahepatic+human+hepatocellular+carcinoma+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice.</a> J. Vis. Exp. (79), e50544 (2013).</li><li>Krikri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+vs.+open+abdominal+surgery+in+male+pigs:+marked+differences+in+cortisol+and+catecholamine+response+depending+on+the+size+of+surgical+incision.">Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision.</a> Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kısmi hepatectomy soruşturma karaciğer rejenerasyonu için kurulan bir tekniktir ve aşırı hepatectomy AHF modeli taklit etmek için bildirilir. Hayvan AHF arasında kemirgenler, özellikle fareler, en araştırılmış modeli modellerdir. % 70 hepatectomy kadar farelerde karaciğer yaralanma modeli elde etmek için bir iyi hayatta kalma oranı25,26' bildirilmiştir. Ancak çıplak ve diğer immünyetmezligi fare, % 70 hepatectomy ölümcül olarak bildirilmiş ve hayvanlar 24 saat27içinde öldü.
Mitchell ve Willenbring28 2/3 kısmi hepatectomy farelerde için tekrarlanabilir ve iyi tolere yöntemi gösterdi. İçin başını SALLAMAK. SCID fareler, biz % 100 sağkalım oranı elde hepatectomy toplam karaciğer kütlesinin % 30 yakın sol karaciğer LOB rezeksiyonu kadar sınırlı. Doğrultusunda gözlemler çıplak fareler27, herhangi daha fazla düğümde hepatectomy yüzdesi olarak artış gözlendi. SCID fare hayatta kalma oranı dramatik düşürülmesi için yol açar. Ayrıca, hızla çoğalmak-in içinde kalan Hepatosit karaciğer lobları sonrası % 30 kısmi hepatectomy 1 gün ekimi ve engraftment çalışmalar bu yordamda yardımcı doğruladı.
Daha yeni bir yazıda, Ahmed S.Ü vd. 29 intrahepatic Hepatosellüler karsinom xenografts immünyetmezligi farelerde için bir yordam göstermiştir. Onlar hepatectomy intrahepatic engraftment kolaylaştırmak için gerçekleştirilen ve dalak dahil olmak üzere çeşitli organlarda tümör hücrelerinin nakli için bir yordam göstermiştir.
Mitchell28 ya da Ahmed29tarafından bildirilen yordamlar, bir fırsat olduğunu iyileştirmeler için daha küçük kesik, gibi daha küçük kesiler genellikle cerrahi tercih yaparak. Daha küçük bir uzunluk cerrahi kesi stres hormonu kortizol ve katekoiamin gibi daha az salgılanması yol açar kanıt30 vardır. Ayrıca, bir daha büyük kesi ile ilgili yordamları yüksek beceri gerektiren ve iki küçük kesiler sahip yordamlar için karşılaştırıldığında daha yeniden oluşturulması zor olan bulduk.
Bu kağıt içinde en az kesi karaciğer sol lob ortaya çıkarmak için gerekli bir yordam tarif var ve % 30 hepatectomy yaptıktan sonra başka bir küçük kesi nerede hücreleri implante edildi dalak ortaya çıkarmak için yapıldı. Bu yordam herhangi bir özel cerrahi beceri gerektirmez ve 5-7 dakika içinde tamamlanabilir. Ayrıca, herhangi bir morfolojik veya anatomik anormallik bulgusuna kalan karaciğer kitle olarak histolojik çalışmalar kanıtladığı bulduk. Ayrıca, 6-8 hafta cerrahi işlem sırasında iskemi veya nekroz olmayışı vardı-eski bağışıklık uzlaşma fareler. Kısmi hepatectomy karaciğer enzimleri AST, ALT ve ALK-PHOSin fareler serum düzeyleri tarafından onaylandıktan sonra karaciğer hasarı indüksiyon. Portal Venöz sistem Venöz diğer sistemlere göre daha yüksek erişilebilirlik içine karaciğer korteks olduğundan intrasplenic bir rota üzerinde Venöz diğer yollar, hücre transplantasyonu için seçildi. Transgenik GFP fareden izole tetkikine nakli göstermiştir ve kısmen hepatectomized başını SALLAMAK içinde insan kaynaklı Hepatosit benzeri hücreler olan NeoHep farklı. SCID hayvanlar. Yordamı nakli için kullanılan hücre türü kısıtlamaz.
Ancak, bu yordamı yalnızca % 30 kısmi hepatectomy uyguladıkları bir fare AHF koşulu oluşturmaz. Bu sınırlı hepatectomy proliferatif potansiyeline tetkikine kalan karaciğerde engraftment için böylece transplante tetkikine için ek fırsatlar sağlayan mevcut sağlar. Bu sadece gösterir geçiş ve engraftment tetkikine ve NeoHep dalak karaciğere ve hiçbir ek hasar karaciğere nakli yordam tarafından gerçekleştirilen.
Her yerinde, bu yordam basittir ve uygulanan ve kolayca tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için hakim. Birkaç hücresel kaynakları (kök hücre veya Hepatosit benzeri hücreler) karaciğer hasarı veya karaciğer rejenerasyonu çalışma bağlamında yeniden üretim potansiyelini kolayca bu cerrahi işlem ile değerlendirilebilir.

Şu anda, Hepatosit bütün organ nakli şiddetli karaciğer bozukluğu olan hastaları tedavi için bir alternatif olarak teklif edilir. Bu hastaların tüm organ nakli1köprü olabilir inanılıyor. Ek olarak allojenik tetkikine2, xenogenic tetkikine3 ve kök hücre4 ' ten türetilmiş tetkikine hayvan modellerinde da soruşturuluyor. Bu bağlamda, posta ve engraftment potansiyel alıcı transplante hücrelerinin temel hücre tedavisi için önemli bir kriter akut hepatik yetmezliği (AHF) var.
Hepatositlerin veya Hepatosit benzeri hücreler5nakli soruşturma için AHF hayvan modelinde cerrahi6 veya farmakolojik7 yordamlar, hücre nakli tarafından takip tarafından oluşturulur. Bir AHF hayvan modeli farmakolojik reaktifler, d-galactozamin8, asetaminofen9, karbon tetraklorür10, thioacetamide11, Concanavalin A12, lipopolysaccharide13 gibi birçok hepatotoxins tarafından yapmak için , vs., kullanılmıştır. Bu listeden her reaktif AHF için benzersiz bir özellik kümesi oluşturur, ancak ne yazık ki yok tek reaktif insan AHF taklit eder. Ayrıca, hepatotoxins tarafından indüklenen AHF hayvanlar kronik stres altında koyar, uzun bir zaman alır ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek zordur.
Öte yandan, kısmi hepatectomy (PHx) cerrahi işlem beceri bağımlı ve tekrarlanabilir sonuçlar gerekli becerileri geliştirme sonra elde etmek kolaydır. Cerrahi müdahale yalnız AHF ikna etmek için daha--dan %70 karaciğer rezeksiyonu gereklidir; Ancak, bir % 70 hepatectomy hala engraftment ve yaygın eğitim için yararlı olabilir daha az tedavi kapasitelerini karaciğer hasarı14sırasında analiz etmek için karaciğer hücrelerinde nakledilmektedir. Hepatositlerin nakli karın zarını15, kuyruk damar16, hepatik ven17veya18dalak aracılığıyla gerçekleştirilen yazı hepatectomy olmuştur. Yeniden oluşturmak daha kolay olduğu gibi şu anda, hepatik ven infüzyon ve tetkikine intrasplenic nakli tercih edilen, işlemlerdir.
Bu yazıda, bir yordam için % 30 kısmi hepatectomy düğümde anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) içinde karaciğer sol lob eksize fareler. Bu nakli 0,2 milyon GFP ifade fare (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) tetkikine hem de insan kaynaklı NeoHep19 dalak içinde izler. Bu yordamı karaciğer nakledilen hücrelerinin engraftment yol açar. Bu yordam az invaziv ve en az acı veren bir teknik olacaktır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1002">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Gas Anesthesia System</td>
			<td style="width:255px;">Ugo Basile; Italy</td>
			<td style="width:119px;">211000</td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Weighing machine</td>
			<td style="width:255px;">Goldtech ; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biological safety cabinet ( Class I)</td>
			<td style="width:255px;">Kartos international;&#160; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hair Trimmer</td>
			<td>Panasonic ;&#160; Japan&#160;</td>
			<td style="width:119px;">ER-GY10&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Straight operating scissor with sharp /sharp blades</td>
			<td style="width:255px;">Major Surgicals; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps with Serrations</td>
			<td style="width:255px;">Major Surgicals; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro needle holders&#160; straight &#38; curved&#160;</td>
			<td>Mercian ;&#160; England&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BS-13-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles&#160;</td>
			<td>Dispo Van; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 ml syringe with 26 G * 1/2 needle</td>
			<td>BD ; US&#160;</td>
			<td>REF 303060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon Threads&#160;&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Mighty ; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>(1-0) Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled Suture</td>
			<td style="width:255px;">Ethicon, Johnson &#38; Johnson, India</td>
			<td style="width:119px;">NW 5047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical suture</td>
			<td>Sutures India Pvt. Ltd; India</td>
			<td>SN 5048</td>
			<td>Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton Buds</td>
			<td style="width:255px;">Pure Swabs Pvt Ltd ;&#160; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Local Procurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Surgical Tape</td>
			<td style="width:255px;">3M India ; India</td>
			<td style="width:119px;">1530-1</td>
			<td>Micropore Surgical Tape</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Microtome</td>
			<td style="width:255px;">Histo-Line Laboratories, Italy</td>
			<td style="width:119px;">MRS3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Shandon Cryotome E Cryostat</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Electron Corporation ; US</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Confocal laser scanning microscope</td>
			<td style="width:255px;">Carl Zeiss ; Germany&#160;</td>
			<td style="width:119px;">LSM 510 META</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Bright Field Microscope</td>
			<td style="width:255px;">Olympus, Japan</td>
			<td style="width:119px;">LX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Automated analyser</td>
			<td>Tulip, Alto Santracruz, India</td>
			<td style="width:119px;">Screen Maaster 3000</td>
			<td>Biochemical analyser for liver functional test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Flow Cytometer</td>
			<td style="width:255px;">BD ; US&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BD FACSverse</td>
			<td>Assesment of presence of cells post transplantation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Veet hair removal cream&#160;</td>
			<td>Reckitt Benckiser , India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FORANE</td>
			<td style="width:255px;">Abbott ; US</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>isoflurane USP 99.9%&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Taxim</td>
			<td style="width:255px;">AlKem ; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>cefotaxime sodium injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-Iodine solution&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Win-Medicare;&#160; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Betadine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:255px;">Himedia; India</td>
			<td style="width:119px;">GRM 3660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Iscove&#39;s Modified Dulbecco&#39;s Medium (IMDM)</td>
			<td style="width:255px;">Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td>
			<td style="width:119px;">12200-036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Sucrose</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Tissue-Tek</td>
			<td style="width:255px;">Sakura; US</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>O.C.T compound</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">DAPI</td>
			<td style="width:255px;">Himedia; India</td>
			<td style="width:119px;">MB 097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">anti-Albumin goat Polyclonal</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Scientific,Pierce, US</td>
			<td style="width:119px;">PA126081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">anti-connexin 32/GJB1 Polyclonal</td>
			<td style="width:255px;">abcam, UK</td>
			<td style="width:119px;">ab64609-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">antiGFP rabbit polyclonal&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Santa Cruz biotechnology; US</td>
			<td style="width:119px;">SC 8334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Alexa Fluor 594 donkey anti-goat</td>
			<td style="width:255px;">&#160;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&#160; US</td>
			<td style="width:119px;">A11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep</td>
			<td style="width:255px;">&#160;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&#160; US</td>
			<td style="width:119px;">A11015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit</td>
			<td style="width:255px;">&#160;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&#160; US</td>
			<td style="width:119px;">A21442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:411px;">Goat anti rabbit IgG HRP</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; US&#160;</td>
			<td>65-6120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">anti-Ki67 antibody</td>
			<td style="width:255px;">abcam, UK</td>
			<td style="width:119px;">ab15580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Antigen Unmasking Solution, Citric acid base</td>
			<td style="width:255px;">Vector laboratories, US</td>
			<td style="width:119px;">H-3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">ProLong Diamond antifade mountant</td>
			<td style="width:255px;">Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td>
			<td style="width:119px;">P36966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">SGOT (ASAT) KIT</td>
			<td style="width:255px;">Coral Clinical System, India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">SGPT (ALAT) KIT</td>
			<td style="width:255px;">Coral Clinical System, India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Alkaline Phosphatase Kit (DEA)</td>
			<td style="width:255px;">Coral Clinical System, India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Hematoxylin Solution, Mayer&#39;s</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">MHS16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Eosin Y solution, alcoholic</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">HT110132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">DPX Mountant&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td align="right" style="width:119px;">6522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Melonex (Pain Killer)</td>
			<td style="width:255px;">Intas Pharmaceuticals Ltd; India</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Meloxicam injection&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochloride</td>
			<td style="width:255px;">Sigma ; US</td>
			<td style="width:119px;">D3939</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrasplenic transplantation of hepatocytes after partial hepatectomy in nod.scid mice

Kısmi hepatectomy karaciğer rejenerasyonu ve değişik patolojik koşullarda hücre dayalı tedavi etkisini incelemek için çok yönlü ve tekrarlanabilir bir yöntemdir. Kısmi hepatectomy da artan engraftment ve Transplante hücrelerin çoğalması hızlanan neovaskülarizasyon ve hücre göç doğru karaciğer tarafından kolaylaştırır. Burada, bir obez olmayan şeker hastası/şiddetli, dalak performans % 30 hepatectomy ve hücre nakli kombine immünyetmezligi başını SALLAMAK için basit bir protokol açıklayın. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fare.
Bu yordam, iki küçük insizyon yapılır. Belgili tanımlık ilk kesme ortaya çıkarmak ve karaciğer sol lob çıkarabileceğim etmektir ve başka bir küçük kesi dalak hücre intrasplenic nakli için ortaya çıkarmak için yapılır. Bu yordam herhangi bir özel cerrahi beceri gerektirmez ve daha az stres ve ağrı, hızlı iyileşme ve daha iyi hayatta kalma ile 5-7 dakika içinde tamamlanabilir. Fare (transgenik C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) yanı sıra Hepatosit hücreler kısmen hepatectomized başını SALLAMAK içinde insan kaynaklı (NeoHep) gibi ifade bir floresan yeşil protein (GFP) dan izole tetkikine nakli göstermiştir. SCID fareler.

% 30 kısmi hepatectomy sonra Hepatosit nükleer silahların yayılmasına karşı: Yayılması içinde kalan hepatositlerin % 30 hepatectomy sonra karaciğer Hücre proliferasyonu avans, Ki-67 boyama immunohistokimyasal (IHC) tarafından incelenmiştir. Bir gün sonrası hepatectomy, fareler ötenazi, kalan karaciğer lobları eksize ve parafin kesitler elde. Bölümleri ile Ki-67 antikor, horseradish peroksidaz (HRP) konjuge ikincil antikor ile etiketleme tarafından takip lekeli. Di-Amino Benzidine (DAB) substrat HRP için kahverengi renk geliştirme için lekeli hücrelerini tanımlamak için kullanılan. Çekirdek Hematoksilen ile lekeli ve 20 X objektif mikroskop altında görüntülenen çalışıyordum. Şekil 1 bir karaciğer bir bölüm temsilcisi IHC görüntüsünü gösterir. Yaklaşık %13 hücre (13.66 ± 0.317, N = 3) Ki-67 idi pozitif, % 30 hepatectomy tetkikine fare karaciğer yayılması kolaylaştırır doğruladı.
Anatomik çalışma: Temsil edici bir görüntü bir NOD karaciğer. SCID fare, 10 gün sonrası hepatectomy Şekil 2' de gösterilmiştir. Bu görüntü kalan karaciğer hiçbir görünür anomalileri ile sağlıklı olduğunu doğruladı.
Varlığı cerrahi ilk bir saati sırasında transplante hücre: Transplante hücre posta akış sitometrik analizi ile 2 saat sonra nakli GFP olumlu tetkikine varlığı incelenerek teyit edildi.
Çıkarılan doku Enzimatik sindirim deftere naklettikten sonra 2 saat-in GFP tetkikine ekimi bir tek hücre süspansiyon dalak ve karaciğer ana bilgisayar fare elde edildi. Transplante GFP pozitif hücrelerinin yüzdesi bir Akış Sitometresi kullanarak tahmin edilmiştir. Bir dağılım kapı enkaz ve tamamen hücreleri ortadan kaldırmak için karşılık gelen FSC-SSC nokta arsa seçildi. Arsa çeyreği kapısı dalak ve karaciğer içinde hiçbir hücre nakli bir denetim fare elde edilen hücre süspansiyonlar arka plan fluorochrome yoğunluğunu tarafından oluşturuldu. Yaklaşık %1,7 GFP olumlu tetkikine dalak içinde bulundu ve hiçbir GFP tetkikine içinde karaciğer nakli sonra 2 saat bulundu. Temsilcisi veri şekil 3' te gösterilmektedir.
İmmünhistokimya: On gün ameliyat sonrası, fareler euthanized ve şu yan lob, sağ orta LOB ve sol mediyal karaciğer lobları eksize ve cryo-kesit gerçekleştirilen 5 µm bölümler elde etmek için. Bu bölümlerde o zaman için belgili tanımlık posta ve Transplante hücrelerinin engraftment incelenmiş. Şekil 4 immunohistokimyasal (IHC) temsilcisi görüntülerini anti-fareler tetkikine (paneli A, Bve C); ifade GFP tanımlamak için GFP karşı (kırmızı) Boyama gösterir ve karşı anti-insan albumini (kırmızı), hem de anti-insan connexin 32 (yeşil), Hepatosit benzeri hücreler (NeoHep) insan kaynaklı tanımlamak için ( D, E, Fve Gpaneli). Çekirdek ile 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, mavi) her iki durumda da counterstained. Bu görüntü panellerinde birkaç engrafted GFP tetkikine (paneli A, Bve C) ve NeoHep ( D, E, Fve Gpanel) ifade açıkça görülebilir.
Karaciğer biyokimyasal analiz salgılanan enzimler: Cerrahi işlem sonrası karaciğer işlevini denetlemek için farklı karaciğer salgılanan enzimler biyokimyasal analizini gerçekleştirildi. Şekil 5 çubuk grafiklerde aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT) ortalama değerini temsil ve alkalen fosfataz (ALK PHOS) sağlıklı NOD serum. SCID fareler ve kısmen hepatectomized farelerin farklı grupları. Hepatectomy 1 gün sonra AST, ALT ve ALK PHOS enzim düzeyleri önemli ölçüde, sağlıklı fare ile karşılaştırıldığında arttı grafik dan açıktır.
Yüksek kaldı ALK PHOS düzeyleri sigara nakledilen farelerde on gün ameliyat sonrası ise ALT ve AST enzim düzeyleri normale, geri yüklendi. Ancak, tüm üç enzim düzeyleri normal transplante farelerde 10 gün sonra düştü.
Karaciğer histolojik çalışma: Hepatectomized ve Transplante fare karaciğer örnekleri daha fazla anatomik değişiklikler ameliyat sonrası çalışmaya histolojik analiz işlendi. Şekil 6 temsilcisi parlak alan kısmi hepatectomy sonrası ameliyatsız, sağlıklı farelerin karaciğer bölümler 1 gün lekeli görüntüleri Hematoksilen ve Eozin (H ve E) ve 10 gün kısmi hepatectomy ve NeoHep transplantasyonu sonrası gösterir. Bu görüntüler, karaciğer hasarı nedeniyle hafif peri safra fibrozis ya da bağ dokusu proliferasyonu kısmi hepatectomy 1 gün sonra gözlendi ve hiçbir anormallik on gün ameliyat sonrası gözlendi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig1.jpg"> Resim 1 : Ki-67 NOD boyama temsilcisi bir görüntü. 1 gün sonra SCID karaciğer bölümünü % 30 hepatectomy. Bölüm ile Ki-67 antikor lekeli, horseradish peroksidaz (HRP) ikincil antikor, Birleşik ve DAB (kahverengi) HRP substrat kullanıldı ve çekirdekleri Hematoksilen (mavi) tarafından counterstained. Gösterge ok uçları Ki-67 pozitif (kahverengi) hücrelerinin bir kısmını üzerine gelin. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig2.jpg"> Resim 2 : Bir NOD karaciğer lobları yeniden. SCID fare 10 gün ameliyat sonrası. A: kaudat LOB (kaudat işlemi), B: sağ yan lob, C: sağ orta LOB, D: yaptı orta LOB, E: kalp, kalan F: G: kaudat LOB (Papiller işlem) ve sol yan lob hepatectomy sonra. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig3.jpg"> Şekil 3 : GFP olumlu fare heptatocytes dalak ve karaciğer bir nod yüzdesi. SCID fare. Üst panelleri içinde hiçbir hücre nakli yaş eşleşen kontrol fare hücre profilini göster. Alt panelleri GFP Hepatosit hepatectomized Mouse 2 saat sonra hücre profilini göster. Parsel y ekseni bir günlük ölçekte rasgele birimleri cinsinden floresan yoğunluğu GFP (FITC kanal) gösterir ve x ekseni doğrusal bir ölçek üzerinde rasgele birimlerindeki ileri dağılım (FSC) gösterir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig4.jpg"> Şekil 4 : Fare tetkikine ve NeoHep rejenere ana bilgisayar karaciğerde ifade transplante GFP posta. Kısmen hepatectomized karaciğer kesimlerinin temsilcisi görüntüleri SALLA. Hücre engraftment gösterilen ve homing GFP olumlu fare tetkikine (A-C), nakledilen SCID fare. Paneli A: çekirdeği (mavi: DAPI), Panel B: anti-GFP (kırmızı: Alexa Fluor 594), Panel C: birleştirilmiş görüntü. Paneller (DG) kısmen hepatectomized NOD karaciğer bölümünü göster. Hangi NeoHep SCID fare nakledilmektedir. Paneli D: çekirdeği (mavi: DAPI), Panel E: insan anti-Connexin 32 (yeşil: Alexa Fluor 488), Panel F: insan anti-Albumin (kırmızı: Alexa Fluor 594) ve Panel G: birleştirilmiş görüntü. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig5.jpg"> Şekil 5 : Biyokimyasal analiz farklı karaciğer salgılanan enzimler fareler Serumda. Sütun çubuklar farklı enzimleri (AST/SGOT, ALT/SGPT, ALK PHOS) ortalama değerlerini gösterir. Ameliyat sonrası çalışma süresi noktası X ekseni üzerinde görünür. Kontrol grubunda vardı yaş eşleşen başını SALLAMAK. SCID fareler ve ameliyat uygulandı. Hata çubukları anlamına gelir demek, N = 3 standart hatası ve * pbelirtir < 0,05, NS gösterir Sigara önemi, p> 0.05. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56018/56018fig6.jpg"> Şekil 6 : Fare karaciğer doku bölümleri histopatolojik incelenmesi. Hematoksilen ve Eozin (H ve E) temsilcisi parlak alan mikroskobu görüntülerini NOD bölümlerini karaciğer dokusu lekeli. 20 X objektif lens altında SCID fareler. Paneli A karaciğer bir bölümü sağlıklı bir NOD göstermektedir. Herhangi bir ameliyat olmadan aynı yaştaki SCID fare. Panel B karaciğer Bölüm 1 gün sonrası kısmi hepatectomy gösterir. Bu görüntüde, ok uçları hafif peri-billiary fibrozis ya da bağ dokusu proliferasyonu bölge gösterir. Bir karaciğer Bölüm 10 gün sonrası kısmi hepatectomy ve hücre nakli paneli C gösterir. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56018/56018fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice at JoVE.com

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Hepatositlerin intrasplenic nakli düğümde kısmi Hepatectomy sonra. SCID fareler

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

intrasplenic-transplantation-hepatocytes-after-partial-hepatectomy

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

13.9K Görüntüleme.  National Institute of Immunology. Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Video: Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular through transplantation of stromal cells and epithelial cells in the mammary gland of mice. Current transplantation models often involve the use of immunocompromised mice due to the different genetic backgrounds of stromal cells and epithelial cells. Extracellular matrices are often used to embed the two different cell types for consistent cell-cell interactions, but involve the use of Matrigel or rat tail collagen, which are immunogenic substrates. The lack of functional T cells from immunocompromised mice prevents accurate assessment of stromal cells on mammary tumor progression in vivo, with important implications on drug development and efficacy. Moreover, immunocompromised mice are costly, hard to breed and require special care conditions. To overcome these obstacles, we have developed an approach to orthotopically transplant stromal cell and epithelial cells into mice from the same genetic background to induce consistent tumor formation. This system involves harvesting normal, carcinoma associated fibroblasts, PyVmT mammary carcinoma cells and collagen from donor C57BL/6J mice. The cells are then embedded in collagen and transplanted in the inguinal mammary glands of female C57BL/6J mice. Transplantation of PyVmT cells alone form palpable tumors 30-40 days post transplantation. Endpoint analysis at 60 days indicates that co-transplantation with fibroblasts enhances mammary tumor growth compared to PyVmT cells transplanted alone. While cells and matrix from C57BL/6J mice were used in these studies, the isolation of cells and matrix and transplantation approach may be applied towards mice from different genetic backgrounds demonstrating versatility. In summary, this system may be used to investigate molecular interactions between stromal cells and epithelial cells, and overcomes critical limitations in immunocompromised mouse models.

In this report, we demonstrate a system to isolate and culture donor cells from the mouse mammary gland, and orthotopically transplant these cells in recipient mice to analyze stromal: epithelial interactions during mammary tumor development.

C57BL/6J Fare Stromal Cells ve Karsinomu Hücreler Meme Nakli

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Tıp

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

Hepatik Arter İmar Kısmi Ortotopik Karaciğer Nakli Bir Rat Modeli Cerrahi İşlemleri

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. To better understand the mechanism behind these surgical procedures, a rat partial liver transplantation (PLTx) model was established for relevant surgical studies. Because of the complexity of the rat PLTx model, a protocol with detailed descriptions is required. An article published previously reported a protocol in which ex vivo hepatectomy was used to achieve 50% rat PLTx. In contrast to this protocol, we introduced a re-arterialized PLTx with an in vivo 70% hepatectomy. An updated vessel-oriented hepatectomy was incorporated into the rat PLTx to refine the microsurgical procedure. The portal veins and hepatic arteries of the left lateral lobe and the median lobe were individually dissected and ligated before removal of the liver parenchyma, thereby decreasing the probability of bleeding in the remnant liver stump. Furthermore, an end-to-side vessel anastomosis between the common hepatic artery and the enlarged proper hepatic artery was introduced to re-arterialize the hepatic artery. By using this end-to-side vessel anastomosis technique, the diameter of the anastomosis was enlarged, thereby decreasing the difficulty of hand suture and maintaining a high rate of anastomotic patency. Moreover, the cuff anastomosis of the infrahepatic vena cava was slightly modified. A section of circumferential liver parenchyma around the vena cava of a recipient was preserved during cuff anastomosis to maintain the three-dimensional shape of the vascular lumen. This section of liver parenchyma was removed after completing the anastomosis. With this modification, the step involving placement of stay sutures was omitted, thereby further shortening the cuff anastomosis time. By using this protocol of rat PLTx, a low liver enzyme level, an intact liver lobular architecture and a high survival rate were achieved after microsurgery.

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Here, a protocol involving re-arterialized rat partial liver transplantation is presented. Specifically, 70% liver was resected in vivo by using an updated technique of vessel-oriented hepatectomy. The hepatic artery was reconstructed in an end-to-side manner. The cuff technique was modified to shorten the anastomosis time of the infrahepatic vena cava.

Yeniden Arterialized sıçan kısmi karaciğer nakli bir vivo içinde gemi odaklı % 70 ile Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of clinical efficacy, they are until now imperfect solutions. Stem cell therapy using ASC sheets could provide a solution to this problem. ASCs are considered as promising candidates for promoting tissue healing because of their trophic and immunomodulatory properties. Here, we provide methods to produce high-density ASC sheets, that are transplanted onto a colorectal anastomosis in a rat model to reduce the leakage. ASCs formed cell sheets in thermo-responsive culture dishes that could be easily detached. On the day of the transplantation, a partial colectomy with a 5-suture colorectal anastomosis was performed. Animals were immediately transplanted with 1 ASC sheet per rat. ASC sheets adhered spontaneously to the anastomosis without any glue, suture, or any biomaterial. Animal groups were sacrificed 3 and 7 days postoperatively. Compared to transplanted animals, the incidence of anastomotic abscesses and leakage was higher in control animals. In our model, the transplantation of ASC sheets after colorectal anastomosis was successful and associated with a lower leakage rate.

The preparation and transplantation of adipose tissue derived stem cell (ASC) sheets onto insufficiently sutured colorectal anastomoses in a rat model is presented. This novel application shows that ASC sheets can reduce colorectal anastomosis leakage.

Bir sıçan modelinde kısmi kolektomi sonra kaçağı azaltmak için Yağ dokusundan elde edilen kök hücre sayfasının nakli

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the treatment of many hematopoietic diseases in humans, as their use offers stable transgene expression due to the vector&#39;s ability to integrate into the host genome. This method demonstrates the application of ex vivo gene therapy of hepatocytes to a large animal model of hereditary tyrosinemia type I. This process consists of 1) isolation of primary hepatocytes from the autologous donor/recipient animal, 2) ex vivo gene delivery via hepatocyte transduction with a lentiviral vector, and 3) autologous transplant of corrected hepatocytes via portal vein injection. Success of the method generally relies upon efficient and sterile removal of the liver resection, careful handling of the excised specimen for isolation of viable hepatocytes sufficient for re-engrafting, high-percentage transduction of the isolated cells, and aseptic surgical procedures throughout to prevent infection. Technical failure at any of these steps will result in low yield of viable transduced hepatocytes for autologous transplant or infection of the donor/recipient animal. The pig model of human type 1 hereditary tyrosinemia (HT-1) chosen for this approach is uniquely amenable to such a method, as even a small percentage of engraftment of corrected cells will lead to repopulation of the liver with healthy cells based on a powerful selective advantage over native-diseased hepatocytes. Although this growth selection will not be true for all indications, this approach is a foundation for expansion into other indications and allows for manipulation of this environment to address additional diseases, both within the liver and beyond, while controlling for exposure to viral vector and opportunity for off-target toxicity and tumorigenicity.

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

This protocol is intended to describe porcine hepatocyte isolation and ex vivo gene delivery to cure models of metabolic diseases via autologous cell transplantation. Although this particular model enjoys unique advantages that favor successful therapy, the application is a relevant foundation to address additional diseases and indications.

Lentiviral vektör-aracılı gen terapisi tetkikine Ex Vivo domuz otolog nakli için

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the ...

Generation of a Rat Model of Acute Liver Failure by Combining 70% Partial Hepatectomy and Acetaminophen

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and detoxifying functions of the liver. In most irreversible liver damage cases, orthotropic liver transplant (OLT) remains the only available treatment. To study the therapeutic potential of a treatment for ALF, its prior testing in an animal model of ALF is essential. In the current study, an ALF model in rats was developed by combining 70% partial hepatectomy (PHx) and injections of acetaminophen (APAP) that provides a therapeutic window of 48 h. The median and left lateral lobes of the liver were removed to excise 70% of the liver mass and APAP was given 24 h postsurgically for 2 days. Survival in ALF-induced animals was found to be severely decreased. The development of ALF was confirmed by altered serum levels of the enzymes alanine amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), alkaline phosphatase (ALP); changes in prothrombin time (PT); and assessment of the international normalized ratio (INR). Study of the gene expression profile by qPCR revealed an increase in expression levels of genes involved in apoptosis, inflammation, and in the progression of liver injury. Diffused degeneration of hepatocytes and infiltration of immune cells was observed by histological evaluation. The reversibility of ALF was confirmed by the restoration of survival and serum levels of ALT, AST, and ALP after intrasplenic transplantation of syngeneic healthy rat hepatocytes. This model presents a reliable alternative to the available ALF animal models to study the pathophysiology of ALF as well as to evaluate the potential of a novel therapy for ALF. The use of two different approaches also makes it possible to study the combined effect of physical and drug-induced liver injury. The reproducibility and feasibility of current procedure is an added benefit of the model.

The acute liver failure animal model developed in the current study presents a feasible alternative for the study of potential therapies. The current model employs the combined effect of physical and drug-induced hepatic injury and provides a suitable time window to study the potential of novel therapies.

%70 Parsiyel Hepatektomi ve Asetaminofen birleştirerek Akut Karaciğer Yetmezliği Bir Sıçan Modeli Nin Üretimi

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunun Sıçan Modelinde Arteriyel Reconnection Sonrası Azaltılmış Komplikasyonlar

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...