Bu eser İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (SNSF; #320030_156019) bir grant tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Heidelberg Engineering GmBH, Almanya kelimelerinde destek aldı.

tüm yordamlarda kullanılan 24 kim gfp Cx3cr1 organizatörü altında hızlı BALB/c yetişkin erkek ve dişi fareler vardı. Fareler ARVO açıklamaya göre Ophthalmic ve vizyon araştırma hayvanlar kullanımı için tedavi edildi ve tüm yordamları hayvan refah İsviçre Federal düzenlemelerini göre İsviçre hükümetinin kabul edildi. Fareler medetomidine hidroklorid (0.75 mg/kg) ve ketamin (45 mg/kg) subkutan enjeksiyon tarafından anestezi. Uygun anestezi olduğunu doğruladı solunum hızı ve hayvan izleyerek &#39; s refleks bir kuyruk tutam karşı. Deney sonunda, CO 2 inhalasyon ile fareler euthanized.
 Not: görüntüleme her oturum (en fazla 20 dk) olabildiğince hızlı bir şekilde gerçekleştirmek, katarakt oluşumu beri aşağıdaki anestezi retina görselleştirme 30 engel olabilir.
 1. sistem yapılandırması <ol><li>bilgisayarı açın.</li>
	<li>Güç kaynağı açın. İleti &#34; başlangıç Alım modülü &#34; aygıtın Denetim Masası ekranda görünecektir.</li>
	<li>Çift yazılımı çalıştırmak için yazılımın masaüstü kısayolunu tıklatın.</li>
	<li>Veritabanı görünümü'nü tıklatın &#34; hasta eklemek &#34; simgesi.</li>
	<li>Açılan pencerede, gerekli tüm bilgileri ekle (Soyadı, adı, başlık, doğum tarihinizi, seks ve hasta-ID) ve'ı tıklatın &#34; Tamam &#34;. Pop penceresinde kornea eğriliği için 2 mm ve'ı tıklatın &#34; ok &#34;.</li>
	<li>78 D standart oftalmik temassız slit lamba camı standart 30 ° optik önünde konumlandırın ve güvenli bir şekilde bant ile tutturmak.</li>
	<li>Filtre kolu cihazın soldaki gösterge üzerinde konumlandırılmış emin olun &#34; A &#34; IR + OCT ve AF ( şekil 1) görüntüleme izin verecek.</li>
</ol> 2. Fare hazırlık <ol><li>Kullanım 0.75 mg/kg ve bir ketamin medetomidine hidroklorid doz doz 45 mg/kg fosfat tamponlu tuz çözeltisi (anestezi çözüm hazırlamak için PBS, pH 7,4) içinde. Böylece, bir 20 g fare için ketamin son hacmiyle 50 µL PBS 18 µL medetomidine hidroklorid 15 µL karıştırın. Bir hafta kadar çözüm 4 ° C'de depolayın.</li>
	<li>Fare scruff ile kavramak ve Gözbebeklerin büyümesinden elde etmek için her göz tropicamide %0,5 + phenylephrine hidroklorid %2.5 bir damla uygulamak.</li>
	<li>Fareyi kontrol altında tutmak ve anestezi çözüm 50 µL subkutan insülin şırınga 30 G iğne için bağlı bir enjekte. Geri Isıtma yastığını yerleştirilir onun kafes içinde fare koymak. Fare tamamen uyuşturulmuş kadar 3-5 dk bekleyin. Anestezi derinliği değerlendirmek için fare kuyruk tutam. Kornea refleksi yavaşça fare kornea bir pamuk bez ile dokunarak kontrol edin. Olumlu hiçbir refleks görülmektedir, görüntüleme ile devam. 
	Not: Anestezi sırasında solunum hızı izlemek önemlidir. Fare tamamen uyuşturulmuş değil, solunum hızı acı bir uyarıcı artacaktır.</li>
	<li>% 2 hydroxypropylmethylcellulose bir uygulama ile fare kornea damla her göz kulak hidrat.</li>
</ol> 3. SD-Ekim <ol><li>cihazın çene kalan ( şekil 1) bağlı özel yapım platformunda yaklaşık 32 ° c ısınma bir yama yerleştirin.</li>
	<li>Sağ gözü görüntü platformu ( şekil 1) sol tarafında fare yerleştirin. Fareyi sağ yörüngesini objektif yüzleri ve onun beden platformun sol tarafında yüzükoyun yatıyor olun.</li>
	<li>Hydroxypropylmethylcellulose bir damla sağ gözü üzerinde uygulamak ve dikkatle 4 diyoptri katı gaz geçirgen kontakt lens üzerinde konumlandırın (küresel güç:-25.00 +25.00 diyoptriden için). Kontakt lens dengeli tuz solüsyonu (BSS) depolar. Objektif kapmak için zarar görmemesi için plastik veya silikon forseps kullanın.</li>
	<li>Sarı kutu satın alma modülü ( şekil 2A üzerinde yeşil kutu) başlatmak için Denetim Masası görüntü sağ köşesinde tuşuna basın. Sarı kutu yeşile döndürür ve kontrol paneli menüsünden-ecek gözükmek üstünde belgili tanımlık perde ( şekil 2A).</li>
	<li>B-inceden inceye gözden geçirmek edinimi için kontrol panelindeki ( şekil 2A) IR + OCT seçeneğini belirleyin. Seçili ayarları kontrol panelindeki mavi vurgulanır.</li>
	<li>Select &#34; Retina &#34; altında &#34; uygulama ve yapısı &#34; yazılım ve hareket objektif fare göz doğru micromanipulator istimal belgili tanımlık aygıt ( şekil 1). Retina odaklanan önce şuna bir göstergesi &#34; OD &#34; ekranın sol alt tarafında seçilir. Tanımlar yazılımı otomatik olarak (OS) sol ve sağ (OD) gözü temel amacı konumuna. 
	Not: amaç platform ortasına konumlandırdıysanız, bir hata iletisi ekranın altında görüntülenir. Yazılım doğru göz tanıyana kadar bu durumda fare biraz yeniden konumlandırmak.</li>
	<li>Kadar büyük damarları açıkça içinde fundus imge bilgisayar ekranın sol üstünde görülür odak topuzu ile retina üzerinde odaklanmak. Micromanipulator sol veya kamera bu yönde taşımak için sağa veya saat yönünde veya saat yönünün tersine, kamera taşımak için sırasıyla yukarı veya aşağı doğru çevirerek kamera taşımak. 
	Not: platform üzerinde fareyi yeniden konumlandırmak veya kızılötesi görüntü optik sinir kafasından tercih edilen lokalizasyonu ulaşmak için objektif yukarı veya aşağı taşımak.</li>
	<li>Hassasiyet topuzu azaltmak için saat yönünün tersine veya fundus görüntü parlaklığını artırmak için saat yönünde çevir. Ne zaman en iyi odak elde bir SD-Ekim B-tarama ekranın sağ tarafta görünür. 
	Not: B-inceden inceye gözden geçirmek odak noktası ayarlayarak görüntülenir olamaz, klavye kombinasyonu Ctrl + Alt + üst karakter + O tuşlarına basın. B-inceden inceye gözden geçirmek ekranda görünene kadar açılan pencerede başvuru kol değerini ayarlayın.</li>
	<li>( şekil 2B tek satırda) desen menüsünden tek tarama ekranın sağ altta seçin.</li>
	<li>Micromanipulator ( şekil 1) cihazın sol, sağ, ileri veya geri (kamerayı bu yönde için) açmak B-inceden inceye gözden geçirmek üstü ve altı arasında bulunan olmasını sağlamak için pencere köşeleri, SD-Ekim tarama.</li>
	<li>Ayarla otomatik gerçek zamanlı (sanat) değeri yüksek kalitede görüntü elde etmek için en az 9. 
	Not: Sanat çeşitli ardışık taramaları sayı ortalaması alınarak görüntü kalitesini artırır. Yüksek &#34; sanat &#34; değer, daha yüksek sinyal gürültü oranı ve böylece görüntü kalitesi. Ancak, artırarak &#34; sanat &#34; değeri, edinme zaman da artırdı.</li>
	<li>Basın &#34; elde &#34; düğmesini ( Şekil 2) kontrol paneli ekranında ve görüntüleri.</li>
	<li>Fareyi sol göz görüntü ve adımları 3.2-3.12 tekrar yeniden konumlandırma.</li>
	<li>Plastik/silikon Forseps ile Kontakt lens çıkarın ve BSS yerleştirin.</li>
	<li>Hydroxypropylmethylcellulose taze bir damla ile fare kornea hidrat ve kağıt mendil ile aşırı kaldırmak.</li>
	<li>Standart 30 ° optik Saat yönünün tersine çevirerek kaldırmak.</li>
	<li>55 ° objektif mount ve adımları 3.4-3.12 her göz için yineleyin.</li>
</ol> 4. Floresans Imaging otomatik <ol><li>platform üzerinde fareyi hareket olmadan, IR kontrol panelinden seçin.</li>
	<li>Odak topuzu ile büyük retina damarları üzerinde odaklanmak.</li>
	<li>Kontrol panelinden seçin AF.</li>
	<li>Hassasiyet topuzu azaltmak için saat yönünün tersine çevirmek veya görüntü parlaklığını artırmak için saat yönünde.</li>
	<li>Hassasiyet topuzu basın ve ayarla &#34; sanat &#34; değeri 67 veya yüksek kalite elde etmek için daha fazla resim için.</li>
	<li>Ne zaman set &#34; sanat &#34; değer ulaştı, basın &#34; elde &#34; görüntü elde etmek için kontrol panelindeki. Durdurmayı yeniden ortalama hassasiyet topuzu tuşuna basın. Farklı retina Katmanlar görselleştirmek için odağı ayarlayın.</li>
	<li>55 ° objektif kaldırmak ve geniş alan 102 ° objektif mount. 4.1 adımları izleyin &#8211; 4,6 her fare ve her iki gözde her fare için.</li>
	<li>Tıklama &#8220; görüntüleri kaydetmek &#8221; pencere ve ardından sol üst kenarının üzerinde &#8220; çıkmak &#8221;. Görüntülerin bilgisayara kaydetmek için fareyi ekranın sağ tarafında yanında çift tıkırtı üstünde belgili tanımlık fare ad listeden. Çift ayrı ayrı her resmin üzerine tıklayın ve floppy disk simgesine tıklayın. Resmi olarak .tif, .bmp, .jpg veya .png, istediğiniz klasöre kaydedin. Yazılım basın çıkmak için &#8220; dosya &#8221; ve &#8220; çıkmak &#8221;.</li>
</ol> 5. Anestezi ters <ol><li>hydroxypropylmethylcellulose bir damla fare gözlerle hidrat ve fare bir Isıtma yastığı iade.</li>
	<li>Hazırla atipamezole çözüm medetomidine hidroklorid yatıştırıcı etkileri tersine çevirmek için 2.25 mg/kg dozda. 20 g fare için 150 µL PBS son bir hacim içinde atipamezol 9 µL ekleyin. Bir hafta kadar çözüm 4 ° C'de depolayın.</li>
	<li>sonra anestezi enjeksiyonu (Adım 2.2), enjekte atipamezole çözüm 150 µL subkutan min.</li>
	<li>Anestezi kurtarma kadar fare izleyin. Fare tam olarak kurtarılan (5-10 dk sonra atipamezole enjeksiyon) ne zaman geri, kafese. Kurtarma bir tarafta koydu onun beden açmak için yetenek hayvan simgesiyle yürüyüş etkinliği ve yanıt olarak çevre stimülasyon tepki yeniden kazanmak.</li>
</ol> 6. El ile retina kalınlık ölçüm SD-Ekim görüntülerden <ol><li>OCT inceden inceye gözden geçirmek belgili tanımlık hayvan adını çift tıklatarak açın.</li>
	<li>30 ° veya 55 ° lens ile elde edilen B tarama açık.</li>
	<li>Seç &#34; kalınlığı profil &#34;.</li>
	<li>Basın &#34; düzenleme katman Segmentations &#34; simgesi ( şekil 2B). Yazılımı otomatik olarak iç sınırlama tanımlar ve temel membran.</li>
	<li>Gerekirse, el ile düzeltin iç sınırlama pozisyon ve baz membran. Bunu yapmak için ekran ve ardından kırmızı daire seçeneği ( şekil 2B) sol taraftan değiştirilecek katman'ı seçin. Hareket satırı değiştirin için fare düğmesini daireyle basmış.</li>
	<li>İlgili katman doğru şekilde konumlandırmak için satırı değiştirin. ' I tıklatın &#34; kaydedin ve kapatın &#34; pencereden çıkmak için. 
	Not: koroid yansıtırlık nedeniyle, belgili tanımlık bilgisayar yazılımı temel membran yanlış tespit edebilir. Böylece, retina kalınlığı ölçümleri geçmeden önce el ile tanımlamak için tercih edilir.</li>
	<li>Seç &#34; Retina &#34; altında &#34; katman &#34; seçeneği. Bir diyagramı retina kalınlığı ekranın altında görüntülenir.</li>
	<li>Seçili pozisyon için ya diyagram üzerinde ya da taramasında B-retina kalınlığı (µm gösterilen) görüntülemek için farklı bir konumda tıklatın.</li>
	<li>Optik sinir başı istenilen mesafe içinde retina kalınlık ölçümü ve elektronik tablodaki değerleri kopyalamak.</li>
	<li>5.1-5,9 her fare 30 ° ve 55 ° lens için için adımlar yineleyin.</li>
	<li>İstenen yazılım ile istatistiksel analiz.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Madeira, M. H., Boia, R., Santos, P. F., Ambrosio, A. F., Santiago, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microglia-mediated+neuroinflammation+to+retinal+degenerative+diseases.">Contribution of microglia-mediated neuroinflammation to retinal degenerative diseases.</a> Mediators Inflamm. , 673090 (2015).</li><li>Ng, T. F., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+migration+of+retinal+microglia+into+the+subretinal+space.">Light-induced migration of retinal microglia into the subretinal space.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (13), 3301-3310 (2001).</li><li>Langmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+activation+in+retinal+degeneration.">Microglia activation in retinal degeneration.</a> J Leukoc Biol. 81 (6), 1345-1351 (2007).</li><li>Joly, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+phagocytes:+resident+microglia+and+bone+marrow+immigrants+remove+dead+photoreceptors+in+retinal+lesions.">Cooperative phagocytes: resident microglia and bone marrow immigrants remove dead photoreceptors in retinal lesions.</a> Am J Pathol. 174 (6), 2310-2323 (2009).</li><li>Arroba, A. I., Alvarez-Lindo, N., van Rooijen, N., de la Rosa, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia-mediated+IGF-I+neuroprotection+in+the+rd10+mouse+model+of+retinitis+pigmentosa.">Microglia-mediated IGF-I neuroprotection in the rd10 mouse model of retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (12), 9124-9130 (2011).</li><li>Zhang, C., Lam, T. T., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+populations+of+microglia/macrophages+in+the+retina+and+their+activation+after+retinal+ischemia+and+reperfusion+injury.">Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury.</a> Exp Eye Res. 81 (6), 700-709 (2005).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+properties+of+the+mouse+eye.">Optical properties of the mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 2 (4), 717-738 (2011).</li><li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+SD-OCT+imaging.">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in SD-OCT imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li><li>Vaz-Pereira, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Coherence+Tomography+Features+Of+Active+And+Inactive+Retinal+Neovascularization+In+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Optical Coherence Tomography Features Of Active And Inactive Retinal Neovascularization In Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Retina. 36 (6), 1132-1142 (2016).</li><li>Kokona, D., Haner, N. U., Ebneter, A., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+macrophage+dynamics+with+optical+coherence+tomography+in+anterior+ischemic+optic+neuropathy.">Imaging of macrophage dynamics with optical coherence tomography in anterior ischemic optic neuropathy.</a> Exp Eye Res. , (2016).</li><li>Makiyama, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macular+cone+abnormalities+in+retinitis+pigmentosa+with+preserved+central+vision+using+adaptive+optics+scanning+laser+ophthalmoscopy.">Macular cone abnormalities in retinitis pigmentosa with preserved central vision using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy.</a> PLoS One. 8 (11), e79447 (2013).</li><li>Paques, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+fundus+imaging+by+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy+in+the+mouse.">High resolution fundus imaging by confocal scanning laser ophthalmoscopy in the mouse.</a> Vision Res. 46 (8-9), 1336-1345 (2006).</li><li>Joshi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneously+occurring+fundus+findings+observed+using+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy+in+wild+type+Sprague+Dawley+rats.">Spontaneously occurring fundus findings observed using confocal scanning laser ophthalmoscopy in wild type Sprague Dawley rats.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 77, 160-166 (2016).</li><li>Muraoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+rabbit+retina+with+retinal+degeneration+by+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">Real-time imaging of rabbit retina with retinal degeneration by using spectral-domain optical coherence tomography.</a> PLoS One. 7 (4), e36135 (2012).</li><li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive,+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography.">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).</li><li>Bell, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vasculature+of+adult+zebrafish:+in+vivo+imaging+using+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy.">Retinal vasculature of adult zebrafish: in vivo imaging using confocal scanning laser ophthalmoscopy.</a> Exp Eye Res. 129, 107-118 (2014).</li><li>Bailey, T. J., Davis, D. H., Vance, J. E., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+as+a+noninvasive+method+to+assess+damaged+and+regenerating+adult+zebrafish+retinas.">Spectral-domain optical coherence tomography as a noninvasive method to assess damaged and regenerating adult zebrafish retinas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 3126-3138 (2012).</li><li>Huber, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+mouse+models+of+retinal+degeneration.">Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (12), 5888-5895 (2009).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+of+Mouse+Retinal+Layers+Using+Automated+Segmentation+of+Spectral+Domain+Optical+Coherence+Tomography+Images.">Quantitative Analysis of Mouse Retinal Layers Using Automated Segmentation of Spectral Domain Optical Coherence Tomography Images.</a> Transl Vis Sci Technol. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Sim, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+in+vivo+labelling+of+infiltrating+leukocytes+in+the+mouse+retina+using+indocyanine+green+dye.">A simple method for in vivo labelling of infiltrating leukocytes in the mouse retina using indocyanine green dye.</a> Dis Model Mech. 8 (11), 1479-1487 (2015).</li><li>Bosco, A., Romero, C. O., Ambati, B. K., Vetter, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+dynamics+of+retinal+microglial+activation+during+neurodegeneration:+confocal+ophthalmoscopic+imaging+and+cell+morphometry+in+mouse+glaucoma.">In vivo dynamics of retinal microglial activation during neurodegeneration: confocal ophthalmoscopic imaging and cell morphometry in mouse glaucoma.</a> J Vis Exp. (99), e52731 (2015).</li><li>Acton, J. H., Cubbidge, R. P., King, H., Galsworthy, P., Gibson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drusen+detection+in+retro-mode+imaging+by+a+scanning+laser+ophthalmoscope.">Drusen detection in retro-mode imaging by a scanning laser ophthalmoscope.</a> Acta Ophthalmol. 89 (5), e404-e411 (2011).</li><li>Greenstein, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+associated+with+normal+and+abnormal+fundus+autofluorescence+in+patients+with+retinitis+pigmentosa.">Structural and functional changes associated with normal and abnormal fundus autofluorescence in patients with retinitis pigmentosa.</a> Retina. 32 (2), 349-357 (2012).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+fractalkine+receptor+CX(3)CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion.">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+Microglia+for+the+Maintenance+of+Synaptic+Function+and+Integrity+in+the+Mature+Retina.">Requirement for Microglia for the Maintenance of Synaptic Function and Integrity in the Mature Retina.</a> J Neurosci. 36 (9), 2827-2842 (2016).</li><li>Ebneter, A., Casson, R. J., Wood, J. P., Chidlow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+activation+in+the+visual+pathway+in+experimental+glaucoma:+spatiotemporal+characterization+and+correlation+with+axonal+injury.">Microglial activation in the visual pathway in experimental glaucoma: spatiotemporal characterization and correlation with axonal injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6448-6460 (2010).</li><li>Ebneter, A., Kokona, D., Schneider, N., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Activation+and+Recruitment+of+Circulating+Macrophages+During+Ischemic+Experimental+Branch+Retinal+Vein+Occlusion.">Microglia Activation and Recruitment of Circulating Macrophages During Ischemic Experimental Branch Retinal Vein Occlusion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 944-953 (2017).</li><li>Lin, Y. L., Potter-Baker, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+theoretical+models+from+adult+stroke+recovery+to+improve+use+of+non-invasive+brain+stimulation+for+children+with+congenital+hemiparesis.">Using theoretical models from adult stroke recovery to improve use of non-invasive brain stimulation for children with congenital hemiparesis.</a> J Neurophysiol. , (2017).</li><li>Combadiere, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CX3CR1-dependent+subretinal+microglia+cell+accumulation+is+associated+with+cardinal+features+of+age-related+macular+degeneration.">CX3CR1-dependent subretinal microglia cell accumulation is associated with cardinal features of age-related macular degeneration.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2920-2928 (2007).</li><li>Bermudez, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+cold+cataract+development+in+anesthetized+mice.">Time course of cold cataract development in anesthetized mice.</a> Curr Eye Res. 36 (3), 278-284 (2011).</li><li>Toth, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+retinal+morphology+viewed+by+optical+coherence+tomography+and+by+light+microscopy.">A comparison of retinal morphology viewed by optical coherence tomography and by light microscopy.</a> Arch Ophthalmol. 115 (11), 1425-1428 (1997).</li><li>Ebneter, A., Kokona, D., Jovanovic, J., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+Effect+of+Oral+CSF-1R+Kinase+Inhibitor+on+Retinal+Microglia+Revealed+by+In+Vivo+Scanning+Laser+Ophthalmoscopy.">Dramatic Effect of Oral CSF-1R Kinase Inhibitor on Retinal Microglia Revealed by In Vivo Scanning Laser Ophthalmoscopy.</a> Transl Vis Sci Technol. 6 (2), 10 (2017).</li><li>Gabriele, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+spectral-domain+optical+coherence+tomography+total+retinal+thickness+measurements+in+mice.">Reproducibility of spectral-domain optical coherence tomography total retinal thickness measurements in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6519-6523 (2010).</li><li>Nakao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wide-field+laser+ophthalmoscopy+for+mice:+a+novel+evaluation+system+for+retinal/choroidal+angiogenesis+in+mice.">Wide-field laser ophthalmoscopy for mice: a novel evaluation system for retinal/choroidal angiogenesis in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5288-5293 (2013).</li><li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+fundus+hyperautofluorescent+spots+and+their+role+in+retinal+degeneration+in+a+mouse+model+of+Goldmann-Favre+syndrome.">Origin of fundus hyperautofluorescent spots and their role in retinal degeneration in a mouse model of Goldmann-Favre syndrome.</a> Dis Model Mech. 6 (5), 1113-1122 (2013).</li><li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+origin+of+fundus+autofluorescence+in+patients+and+mice+with+a+defective+NR2E3+gene.">Cellular origin of fundus autofluorescence in patients and mice with a defective NR2E3 gene.</a> Br J Ophthalmol. 93 (9), 1234-1240 (2009).</li><li>Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sick+photoreceptors+attract+activated+microglia+from+the+ganglion+cell+layer:+a+model+to+study+the+inflammatory+cascades+in+rats+with+inherited+retinal+dystrophy.">Sick photoreceptors attract activated microglia from the ganglion cell layer: a model to study the inflammatory cascades in rats with inherited retinal dystrophy.</a> Brain Res. 588 (1), 21-28 (1992).</li><li>Hughes, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+activated+sialoadhesin-positive+microglia+during+retinal+degeneration.">Generation of activated sialoadhesin-positive microglia during retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (5), 2229-2234 (2003).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Mevcut madde retina B-inceden inceye gözden geçirmek toplama ve görüntüleme gfp olumlu microglia dağıtım fare retina görüntüleme aynı oturumda bir iletişim kuralı gösterir. SD-Ekim ve SLO giderek retina hastalığı hayvan modellerinde saat10,14,17,18,21üzerinde retina değişikliklerini bilgi sağlamak için kullanılır. Bu iletişim kuralı, Cx3cr1gfp/gfp ile ya da Cx3cr1gfp / + fare retina non-invaziv görüntüsü ve retina kalınlığı bilgi elde edilebilir. Bu hastalık şiddeti zamanla değiştiği veya tedavi tedaviler test edilirken retina hastalığı deneysel modellerinde, kritik önemlidir. Ayrıca, protokol nasıl muhabir fare satırları retina floresan hücreleri vivo içinde görüntüleme için kullanılabilir açıklar.
Ancak, burada sunulan Protokolü bazı sınırlamalar vardır. İlk olarak, insanlar için tasarlanmış aygıtlar fare retinada görüntüleme yüksek toplam optik güç büyütme yanlışlıklar7yan yol açabilir fare göz nedeniyle zor olabilir. Ancak, eksenel SD-Ekim ölçümleri doğru8vardır. Ayrıca, takip sınav belgili tanımlık bilgisayar yazılımı "başvuru oluşturun" seçeneğini kullanarak farelerde platform üzerinde fareyi sabit değil konumu nedeniyle oldukça zordur ve böylece fare retina boyuna görüntüleme zor olabilir. Boyuna hizalama gözün Optik siniri kızılötesi görüntü ortasına konumlandırma ve istediğiniz görüntüleri elde etme elde edilebilir. Göz rotasyon için düzeltmek için SD-Ekim tr yüz görüntüleri manuel hizalamaları edinme sonra gerçekleştirilebilir ve başka bir yerde33açıklandığı gibi kalınlığı ölçümleri için geçerlidir. Mevcut protokolünde kullanılan görüntüleme sistemi yanı sıra diğer görüntüleme sistemleri de daha büyük bir açı sağlayan ve Kontakt lens kullanımı olmadan daha büyük bir retina alanı olabilir görüntü geliştirilmiştir. Optos örneğin daha büyük bir retina yüzeyine kapsar ancak mevcut kullanılan aygıt kıyasla daha büyük görüntü değişkenliği ile34çalışma. Bu sınırlamaları rağmen mevcut Protokolü deneysel retina hastalığının modellerinde kullanılabilir. Retina kalınlık değişiklikler (şişme, atrofi), retina dekolmanı tespiti veya hyperreflective nokta ve fluorophore etiketli hücreleri ve artış veya azalma sayıları elde edilebilir bilgi içerir.
Heterozigoz farelerde iki yöntem Cx3cr1 bir ifade için kombinasyonu (Cx3cr1gfp / +), hangi-si olmak bir fonksiyonel fractalkine reseptör sağlar aynı anda vivo algılamaya deneyci Retina bütünlük içinde gerçek zamanlı ve olası microglia birikimi retina bozuklukları (örneğin, şişme, retina retina atrofisi) civarında retina hastalık veya yaralanma sırasında değişikliklere. Ayrıca, xarakteristikaları analiz uygulayarak, microglia harekete geçirmek durum soma boyutuna göre tespit edilebilir ve microglia karmaşıklığını21işler. Retinal ven oklüzyonu gibi retina hastalıklarında harekete geçirmek ve microglia/makrofajlar retina atrofik sitelerde birikimi27gözlenmiştir. Ayrıca, farelerde Nr2e3 gen (nükleer reseptör alt familya 2 grup E üye 3) kusurlu, recessively devralınan bir fare modeli S-koni duyarlılık Sendromu (ESCS) gelişmiş, (rozet) katlanır dış nükleer tabaka, erken görülebilir Doğum sonrası gün.
İlginçtir, microglia hücre-ebilmek bulunmak içinde rozet ve o microglia photoreceptors bu fareler35,36retina içinde gözlenen dejenerasyonu katkıda sürülmüştür. Efendim, karıştığı microglia aktivasyonu bu yana çeşitli retina hastalıkları ve bazen değişiklikler retina mimari10,27,37,38 eşlik ediyor , SD-Ekim ve SLO microglia harekete geçirmek ve retina dejenerasyonu arasındaki ilişkiler ortaya çıkarabilir. Bazı zorlukları rağmen mevcut Protokolü boyuna böyle bilgiler sağlayabilir ve böylece değerli retina hasar microglia dağıtım/harekete geçirmek ile korelasyon ve tedavi tedavisi izleme etkinliği21.

Deneysel Oftalmoloji retina patoloji incelenmesi genellikle histolojik teknikler kullanılarak değerlendirilir. Ancak, Histoloji hayvan euthanization gerektirir ve değişiklik doku güncel özellikler için neden olabilir. SD-Ekim ve SLO rutin klinik Oftalmoloji tanı amaçlı ve diyabetik makula ödemi9, anterior iskemik optik nöropati10veya retinitis pigmentosa11 gibi birkaç retina hastalıkları izleme kullanılır . SD-Ekim ve SLO daha fazla müdahale olmadan dilate pupil aracılığıyla görüntülenmiştir retina, yüksek çözünürlüklü görüntüler oluşturmak non-invaziv teknikler vardır. SD-Ekim SLO retina stereoskopik yüksek kontrastlı görüntüler üretmek için Floresans veri toplarken retina, kesitsel görüntüler oluşturmak için gelmekte veri toplayarak retina yapısı ve retina kalınlık bilgi sağlar. Günümüzde, her iki tekniğin de giderek daha küçük kemirgen12,13,14,15 (ya da bile Zebra balığı16,17) kullanarak deneysel Oftalmoloji kullanılır ve olabilir hem nitel ve nicel bilgi12,17,18,19,20,21sağlar.
Lipofuscins gibi endojen fluorophores birikimi ya da retina drusen oluşumu bu SLO tarafından auto floresan sinyali olarak görüntülenmeyecektir. Bu özellik, tanı ve yaşa bağlı makula dejenerasyonu veya retinitis pigmentosa22,23gibi retina hastalıkları izleme için değerli bir tekniği SLO yapar. Deneysel Oftalmoloji içinde görüntüleme (AF) otomatik Floresans belirli hücre tipleri muhabir fare satırlarındaki tespiti için kullanılabilir. Örneğin, fare heterozigoz gfp Cx3cr124 organizatörü altında bir ifade için in vivo görselleştirme mikroglial hücrelerinin normal retina ve microglia/makrofaj incelenmesi için avantajlı olan Dynamics retina hastalığı21. Microglia doku homeostazı ve doku onarımı yaralanma1,25,26üzerine çok önemli bir rol oynamak retina, ikamet makrofajlar vardır. Microglia harekete geçirmek içinde retina retina yaralanma, iskemi ve dejenerasyonu retina hastalığı2,3,4,5, bu hücrelerinde bir rolü düşündüren, bildirilmiştir 6.
Amacı mevcut protokolü, retina görüntüleme ve SD-Ekim kullanarak ve retina kalınlık ölçüm yapılmasına ve görselleştirme Cx3cr1gfp/gfp fare retina kullanarak gfp olumlu microglia hücreler için nispeten basit bir yöntem tarif etmektir SLO (Heidelberg Spectralis HRA + OCT sistemi). Bu iletişim kuralı çeşitli fare satırlarındaki sağlıklı ya da hasta retina görüntüleme ve kalınlığı ölçümleri için yararlı olabilir. Ayrıca, xarakteristikaları analizleri tanıma ve miktar microglia sayı ve microglia harekete geçirmek SLO21kullanarak retina içinde gerçekleştirilir. Merkezi sinir sistemi (MSS), dejeneratif hastalıklar ve retina27,28,29dahil ile ilişkili Microglia hücrelerdir. Böylece, mevcut protokolünde kullanılan iki yöntem birleştirerek, microglia dağıtım ve retina dejenerasyonu yapılabilir, hangi izleme hastalık şiddeti kolaylaştırabilir veya tedavi edici etkinliği içinde vivoyaklaşıyor.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Spectralis Imaging system (HRA+OCT)</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>ophthalmic imaging platform system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Eye Explorer</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Version 1.9.13.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens</td>
			<td>Volk Optical Inc., Ohio, USA</td>
			<td>V78C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectralis wide angle 55&#176; lens</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>50897-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultra widefield 102&#176; lens</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>50117-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor)</td>
			<td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td>
			<td>Swissmedic Nr. 50&#39;590 - ATCvet: QN05CM91</td>
			<td>anesthetic/analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine 50mg/ml (Ketalar)</td>
			<td>Parke-Davis, Zurich, Switzerland</td>
			<td>72276388</td>
			<td>anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tropicamide 0.5% + phenylephrine HCl 2.5% (Augentropfen mix)</td>
			<td>ISPI, Bern, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td>pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm</td>
			<td>B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Stra&#223;e, Germany</td>
			<td>9151125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydroxypropylmethylcellulose (Methocel 2%)</td>
			<td>OmniVision, Neuhausen, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>+4 dpt rigid gas permeable contact lens</td>
			<td>Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Base Curve: 7.20 to 8.40 mm 
			Diameter: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm 
			Power: -25.00 to +25.00 Diopters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>balanced salt solution (BSS)</td>
			<td>Inselspital, Bern, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicon forceps</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atipamezole 5 mg/mL (Antisedan)</td>
			<td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td>&#945;2 adrenergic receptor antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>statistical analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of cx3cr1gfp/gfp reporter mice with spectral-domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy

Spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) ve tarama lazer ophthalmoscopy (SLO), deneysel Oftalmoloji yaygın olarak kullanılır. Mevcut protokolünde ifade fareler yeşil flüoresan protein (gfp) Cx3cr1 organizatörü altında (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) microglia hücreleri vivo retina görüntü için kullanıldı. Microglia retina ikamet makrofajlar vardır ve birkaç retina hastalıkları1,2,3,4,5,6' karıştığı olmuştur. Bu iletişim kuralı retina B-bir oftalmik görüntüleme platformu sistemi kullanarak inceden inceye gözden geçirmek, SD-Ekim ve microglia hücre dağıtım SLO vivo içindeile Cx3cr1gfp/gfp farelerde görüntüleme ile üretimi için detaylı bir yaklaşım sağlar. İletişim kuralı birkaç muhabir fare satırlarında kullanılabilir. Ancak, burada sunulan protokolü için bazı sınırlamalar vardır. İlk olarak, SLO hem SD-Ekim, yüksek çözünürlüklü modunda kullanıldığında yüksek Aksiyel çözünürlük ama yanal çözünürlük ile veri toplama düşüktür (3,5 µm ve 6 µm, sırasıyla). Ayrıca, SLO odak ve doygunluk düzeyinde son derece parametre seçimi ve doğru hizalama göz bağlıdır. Ayrıca, insan hasta farelerde yüksek toplam optik güç fare göz nedeniyle zorlu için tasarlanan aygıt kullanarak insan gözünün karşılaştırıldığında; Bu büyütme yanlışlıklar7, lateral hangi da büyütme diğerleri arasında fare objektif tarafından bağlı yol açabilir. Ancak, eksenel tarama pozisyon karşın yanal büyütme bağlıdır, eksenel SD-Ekim ölçümleri doğru8.

Burada sunulan iletişim kuralını kullanarak, SD-Ekim tarar ve SLO görüntüleri Cx3cr1gfp/gfp fareler aynı görüntüleme oturumunda elde edilmiştir. Şekil 3 temsilcisi SD-Ekim 30 ° veya bir 55 ° lens (şekil 3A) ve temsilcisi SLO görüntüleri ile elde edilen tek inceden inceye gözden geçirmek nerede gfp olumlu microglia hücreleri görselleştirildiği 55 ° veya bir 102 ° lens ile elde içerir. Koroid daha yüksek yansıtırlık SD-Ekim gözlenen taramaları elde ile 30 ° 55 ° objektif ile karşılaştırıldığında. Ancak, retina mimari 30 ° ve 55 ° görüntüler (şekil 3, doğru büyütülmüş resimler) açıktır. Retina sınırları el ile düzeltme sonra (iç sınırlama ve baz membran), iyi bir korelasyon retina kalınlık ölçüm 30 o ve 55 ° objektif arasında optik sinir başı ( aynı mesafe ölçme gözlenmiştir Şekil 3 c; Pearson korelasyon 0.967, p = &#60; 0.0001). Önceki çalışmalar SD-Ekim taramaları ilişkili retina kalınlık ölçümler ex vivo ölçümleri histolojik retina bölümleri15,31 ve böylece SD-Ekim ile iyi bir non-invaziv teknik olarak kullanılabileceğini göstermiştir Retina kalınlığı ölçümleri için. Geniş alan 102 ° lens 55 ° objektif ile karşılaştırıldığında daha büyük bir fundus alanı kapsayacak şekilde mümkün ancak SLO kullanarak, biz gfp olumlu microglia hücreleri otomatik floresan görüntülerde hyperreflective sinyal olarak tanımlayabilir. SLO de kullanılan retina microglia hücreleri dağıtım ve fonksiyonel fractalkine reseptör ile muhabir farelerde harekete geçirmek izlemek için (Cx3cr1gfp / + fareler) normal ya da hastalıklı retina12, 21,32. SD-Ekim SLO ile birlikte aynı görüntüleme oturumda microglia dağıtım ve retina dejenerasyonu üzerine harekete geçirmek hakkında bilgi sağlayabilir ve fareler21retina hastalıkları izlemek için yararlı olabilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55984/55984fig1.jpg"> 
Şekil 1: mevcut çalışmada kullanılan cihazın temsili resim. Fare sağ gözü görüntü için fareyi ısmarlama platformu sol tarafında objektif ve platformun sol tarafında eğilimli yalan onun beden karşı karşıya doğru yörüngesi ile yerleştirilir. Platform yüksekliği (platform düşürmek için) saat yönünde çevirerek tarafından ayarlanan veya (platform yukarı kaldırın için) saat yönünün tersine olabilir "çene dinlenme ayarlama". Filtre kolu IR + OCT ve AF görüntüleme izin vermek için "A" konumlandırılmalıdır. Odak düğmesi (şekil üzerinde görünmeyen) deneyci odak tarayıcının değiştirebilirsiniz. Micromanipulator doğru aydınlatmak ve yüksek kaliteli görüntüler için retina hizalamak için kullanılabilir. Amaç taşındı yukarı, aşağı, sağ veya kamera tanıtıcıyla yaptı. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55984/55984fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55984/55984fig2.jpg"> 
Şekil 2: illüstrasyon cihazın kontrol panelinin. (A)Alım modları seçili Denetim Masası görüntü sol kısmında (kızılötesi, IR; otomatik Floresans, AF veya indocyanine yeşil anjiyografi, ICGA; kombine veya optik Koherens tomografi, OCT ile değil). Panelinin orta kısmı satın alma ayarı (Eğer görüntü, bölüm veya birim taramaları yoğunluğu) seçilebilir. Görüş alanı yüklü objektif tarafından belirlenir. Hassasiyet topuzu ile IR veya AF görüntünün parlaklığı ayarlanabilir. Hassasiyet topuzu basarak, belgili tanımlık bilgisayar yazılımı yüksek kaliteli görüntü sağlamak için IR veya AF içinde elde edilen görüntüleri ortalama başlayacaktır. (B) Alım desen menü Illustration. (C) Özeti karşılık gelen simgeyi yazılımıyla kullanılan fonksiyonların. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55984/55984fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55984/55984fig3.jpg"> 
Şekil 3: OCT tarar ve floresan Cx3cr1gfp/gfp fare retina görüntülerini auto. (A)B-taranmasını 55 ° (üst paneli) ya da bir 30 ° lens (alt paneli) ile elde edilen fare retina. Yüksek büyütme sarı kutuları sağ panelde sunulmaktadır. Retina 55 ° ve (sol ve sağ kapı aynası, sırasıyla) 102 ° lens ile elde edilen Cx3cr1gfp/gfp farelerin gfp olumlu microglia hücrelerinin (B) görüntüler. (C) retina kalınlığı ölçümleri, optik sinir başı 30 ° ve 55 ° objektiften türetilmiş SD-Ekim taramalar aynı mesafe ölçülür. İyi bir korelasyon arasında iki lens gözlenmiştir (Pearson korelasyon 0.967 =). Ölçek çubukları: 200 µm, 100 µm büyütülmüş SD-Ekim görüntülerde (bir, doğru kapı aynası). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55984/55984fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy at JoVE.com

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

in-vivo-imaging-cx3cr1gfpgfp-reporter-mice-with-spectral-domain

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

10.5K Görüntüleme.  Bern University Hospital and University of Bern. Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Video: In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Oral Biofilm Analysis of Palatal Expanders by Fluorescence In-Situ Hybridization and Confocal Laser Scanning Microscopy

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of natural heterogeneous biofilm is today facilitated by a comprehensive range of staining techniques, one of them being fluorescence in situ hybridization (FISH).1,2 We performed a pilot study in which oral biofilm samples collected from fixed orthodontic appliances (palatal expanders) were stained by FISH, the objective being to assess the three-dimensional organization of natural biofilm and plaque accumulation.3,4 FISH creates an opportunity to stain cells in their native biofilm environment by the use of fluorescently labeled 16S rRNA-targeting probes.4-7,19 Compared to alternative techniques like immunofluorescent labeling, this is an inexpensive, precise and straightforward labeling technique to investigate different bacterial groups in mixed biofilm consortia.18,20 General probes were used that bind to Eubacteria (EUB338 + EUB338II + EUB338III; hereafter EUBmix),8-10 Firmicutes (LGC354 A-C; hereafter LGCmix),9,10 and Bacteroidetes (Bac303).11 In addition, specific probes binding to Streptococcus mutans (MUT590)12,13 and Porphyromonas gingivalis (POGI)13,14 were used. The extreme hardness of the surface materials involved (stainless steel and acrylic resin) compelled us to find new ways of preparing the biofilm. As these surface materials could not be readily cut with a cryotome, various sampling methods were explored to obtain intact oral biofilm. The most workable of these approaches is presented in this communication. Small flakes of the biofilm-carrying acrylic resin were scraped off with a sterile scalpel, taking care not to damage the biofilm structure. Forceps were used to collect biofilm from the steel surfaces. Once collected, the samples were fixed and placed directly on polysine coated glass slides. FISH was performed directly on these slides with the probes mentioned above. Various FISH protocols were combined and modified to create a new protocol that was easy to handle.5,10,14,15 Subsequently the samples were analyzed by confocal laser scanning microscopy. Well-known configurations3,4,16,17 could be visualized, including mushroom-style formations and clusters of coccoid bacteria pervaded by channels. In addition, the bacterial composition of these typical biofilm structures were analyzed and 2D and 3D images created.

We present a protocol for structural and compositional analysis of natural oral biofilm from orthodontic appliances with in situ hybridization (FISH) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). Oral biofilm samples were collected from palatal expanders, scraping acrylic-resin flakes off their surface and referring them for molecular processing.

Floresan In-Situ Hibridizasyon ve Konfokal Lazer Tarama Mikroskopi Palatal Genişleticilerden Oral Biyofilm Analizi

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of natural heterogeneous biofilm is today facilitated by a comprehensive range of staining techniques, one of ...

Tıp

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The cell line was originally induced by intracranial injection of 3-methyl-cholantrene into a C57BL/6 syngeneic mouse strain 1; therefore, immunologically competent C57BL/6 mice can be used. While we use GL261, the following protocol can be used for the implantation and monitoring of any intracranial mouse tumor model. GL261 cells were engineered to stably express firefly luciferase (GL261-luc). We also created the brighter GL261-luc2 cell line by stable transfection of the luc2 gene expressed from the CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr mice (albino variant of C57BL/6) from the National Cancer Institute, Frederick, MD were used to eliminate the light attenuation caused by black skin and fur. With the use of albino C57BL/6 mice; in vivo imaging using the IVIS Spectrum in vivo imaging system is possible from the day of implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). The GL261-luc and GL261-luc2 cell lines showed the same in vivo behavior as the parental GL261 cells. Some of the shared histological features present in human GBMs and this mouse model include: tumor necrosis, pseudopalisades, neovascularization, invasion, hypercellularity, and inflammation 1.
Prior to implantation animals were anesthetized by an intraperitoneal injection of ketamine (50 mg/kg), xylazine (5 mg/kg) and buprenorphine (0.05 mg/kg), placed in a stereotactic apparatus and an incision was made with a scalpel over the cranial midline. A burrhole was made 0.1mm posterior to the bregma and 2.3mm to the right of the midline. A needle was inserted to a depth of 3mm and withdrawn 0.4mm to a depth of 2.6mm. Two &mu;l of GL261-luc or GL261-luc2 cells (107 cells/ml) were infused over the course of 3 minutes. The burrhole was closed with bonewax and the incision was sutured.
Following stereotactic implantation the bioluminescent cells are detectable from the day of implantation and the tumor can be analyzed using the 3D image reconstruction feature of the IVIS Spectrum instrument. Animals receive a subcutaneous injection of 150&mu;g luciferin /kg body weight 20 min prior to imaging. Tumor burden is quantified using mean tumor bioluminescence over time. Tumor-bearing mice were observed daily to assess morbidity and were euthanized when one or more of the following symptoms are present: lethargy, failure to ambulate, hunched posture, failure to groom, anorexia resulting in &gt;10% loss of weight. Tumors were evident in all of the animals on necropsy.

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Intracranial implantation of GL261 cells into C57BL/6 mice produces malignant gliomas that recapitulate many of the hallmarks of human glioblastoma multiforme. We used GL261 cells stably expressing luciferase to allow us to use in vivo imaging to follow tumor progression. The surgery and 3D in vivo imaging are demonstrated.

Müteakip 3D ile İntrakranial İmplantasyonu In Vivo Murin Gliomlar Bioluminescent Görüntüleme

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double circular scan (CDCS) that scans around the optic nerve head at 3.40 mm and 3.75 mm diameters. The double concentric circles are performed 6 times consecutively over 2 sec. The CDCS scan is saved with Doppler shift information from which flow can be calculated. The standard clinical protocol calls for 3 CDCS scans made with the OCT beam passing through the superonasal edge of the pupil and 3 CDCS scan through the inferonal pupil. This double-angle protocol ensures that acceptable Doppler angle is obtained on each retinal branch vessel in at least 1 scan. The CDCS scan data, a 3-dimensional volumetric OCT scan of the optic disc scan, and a color photograph of the optic disc are used together to obtain retinal blood flow measurement on an eye. We have developed a blood flow measurement software called "Doppler optical coherence tomography of retinal circulation" (DOCTORC). This semi-automated software is used to measure total retinal blood flow, vessel cross section area, and average blood velocity. The flow of each vessel is calculated from the Doppler shift in the vessel cross-sectional area and the Doppler angle between the vessel and the OCT beam. Total retinal blood flow measurement is summed from the veins around the optic disc. The results obtained at our Doppler OCT reading center showed good reproducibility between graders and methods (&lt;10%). Total retinal blood flow could be useful in the management of glaucoma, other retinal diseases, and retinal diseases. In glaucoma patients, OCT retinal blood flow measurement was highly correlated with visual field loss (R2&gt;0.57 with visual field pattern deviation). Doppler OCT is a new method to perform rapid, noncontact, and repeatable measurement of total retinal blood flow using widely available Fourier-domain OCT instrumentation. This new technology may improve the practicality of making these measurements in clinical studies and routine clinical practice.

Total retinal blood flow is measured by Doppler optical coherence tomography and semi-automated grading software.

Retina Sirkülasyon Doppler Optik Koherens Tomografi

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

Segmentasyon ve Mürin Obezite Modelleri Yağ Hacimleri ölçümü X-ray Bilgisayarlı Tomografi Kullanımı

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating important information on the pathogenesis of lesion formation and the action of novel therapies. Use of atherosclerosis-prone mice, surgical methods of lesion induction, and dietary modification has dramatically improved understanding of the mechanisms that contribute to disease development and the potential of new treatments.
Classically, analysis of lesions is performed ex vivo using 2-dimensional histological techniques. This article describes application of optical projection tomography (OPT) to 3-dimensional quantitation of arterial lesions. As this technique is non-destructive, it can be used as an adjunct to standard histological and immunohistochemical analyses.
Neointimal lesions were induced by wire-insertion or ligation of the mouse femoral artery whilst atherosclerotic lesions were generated by administration of an atherogenic diet to apoE-deficient mice.
Lesions were examined using OPT imaging of autofluorescent emission followed by complementary histological and immunohistochemical analysis. OPT clearly distinguished lesions from the underlying vascular wall. Lesion size was calculated in 2-dimensional sections using planimetry, enabling calculation of lesion volume and maximal cross-sectional area. Data generated using OPT were consistent with measurements obtained using histology, confirming the accuracy of the technique and its potential as a complement (rather than alternative) to traditional methods of analysis.
This work demonstrates the potential of OPT for imaging atherosclerotic and neointimal lesions. It provides a rapid, much needed ex vivo technique for the routine 3-dimensional quantification of vascular remodelling.

Ex vivo analysis of arterial lesions from animal models of cardiovascular disease classically relies on histological and immunohistochemical techniques. These provide 2-dimensional measurements in 3-dimensional lesions. This manuscript describes the generation of arterial lesions for quantitative analysis in 3-dimensions using optical projection tomography.

Üretim ve Farelerde arteriyel Lezyonlarının 3-Boyutlu kantitasyonu Optik Projeksiyon Tomografi ile

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent marker. Mouse models (brain tumor and arthritis) were used to evaluate the usefulness of this method. Saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tagged with CellVue Maroon (CVM) fluorophore were administered intravenously. Animals were then placed in the rotational holder (MARS) of the in vivo imaging system. Images were acquired in 10&#176; steps over 380&#176;. A rectangular&#160;region of interest (ROI) was placed across the full image width at the model disease site. Within the ROI, and for every image, mean fluorescence intensity was computed after background subtraction. In the mouse models studied, the labeled nanovesicles were taken up in both the orthotopic and transgenic brain tumors, and in the arthritic sites (toes and ankles). Curve analysis of the multi angle image ROIs determined the angle with the highest signal. Thus, the optimal angle for imaging each disease site was characterized. The MAROI method applied to imaging of fluorescent compounds is a noninvasive, economical, and precise tool for in vivo quantitative analysis of the disease states in the described mouse models.

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo quantitation of a fluorescent marker delivered by saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. Employing mouse models of cancer and arthritis, we demonstrate how the MAROI signal curve analysis can be used for the precise mapping and biological characterization of disease processes.

Floresan SapC-DOPS Nanovesicles kullanma Beyin Tümörleri ve Artrit Vivo Optik Görüntüleme

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

Kombine<em&gt; In vivo</em&gt; Optik ve uCT Görüntüleme Farelerde bir Ortopedik İmplant Enfeksiyon Enfeksiyon, Enflamasyon ve Kemik Anatomisi Monitör

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi ile Çıplak Fareler içine İnsan Yağ Enjeksiyonu Canlılığına Değerlendirilmesi

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.
First we describe how to generate subcutaneous tumors in mice, using antigen-negative cell lines as negative controls and antigen-positive cells as positive controls in the same mice for intraindividual comparison. We outline how to administer intravenously near-infrared fluorophore labelled (AlexaFluor680) antigen-specific nanobodies and conventional antibodies. In vivo imaging was performed with a small-animal NIRF-Imaging system. After the in vivo imaging experiments the mice were sacrificed. We then describe how to prepare the tumors for parallel ex vivo analyses by flow cytometry and fluorescence microscopy to validate in vivo imaging results.
The use of the near-infrared fluorophore labelled nanobodies allows for non-invasive same day imaging in vivo. Our protocols describe the ex vivo quantification of the specific labeling efficiency of tumor cells by flow cytometry and analysis of the distribution of the antibody constructs within the tumors by fluorescence microscopy. Using near-infrared fluorophore labelled probes allows for non-invasive, economical in vivo imaging with the unique ability to exploit the same probe without further secondary labelling for ex vivo validation experiments using flow cytometry and fluorescence microscopy.

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real time images with a 15 &#181;m axial resolution at an effective tissue penetration of 2-3 mm. Within the OCT images the loss of signal intensity per millimeter of tissue penetration, the attenuation coefficient, is calculated. The attenuation coefficient is a tissue specific property, providing a quantitative parameter for tissue differentiation. 
Until now, renal mass treatment decisions have been made primarily on the basis of MRI and CT imaging characteristics, age and comorbidity. However these parameters and diagnostic methods lack the finesse to truly detect the malignant potential of a renal mass. A successful core biopsy or fine needle aspiration provides objective tumor differentiation with both sensitivity and specificity in the range of 95-100%. However, a non-diagnostic rate of 10-20% overall, and even up to 30% in SRMs, is to be expected, delaying the diagnostic process due to the frequent necessity for additional biopsy procedures. 
We aim to develop OCT into an optical biopsy, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication provides a detailed step-by-step approach for percutaneous, needle based, OCT of renal masses.

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is a high resolution imaging technique that allows analysis of tissue specific optical properties providing the means for tissue differentiation. We developed needle based OCT, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication describes a method for percutaneous, needle based OCT of renal masses.

Vivo, Perkütan, İğne Tabanlı, Böbrek Kitlelerin Optik Koherens Tomografi

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...