Bu araştırma Tom Peterson Vakfı tarafından desteklenmektedir ve NIH R01-HL119780 (Jain, MK) verin.

hayvan iletişim kuralı gözden ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım komite toplantısında Case Western Reserve Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından onaylanmış ve ulusal kurumları Sağlık (NIH) Kılavuzu için uygun olarak yapılmıştır Care and Use of Laboratory Animals (8 Edition, 2011). Fareler euthanized yöntemlerle Amerikalı hayvan hastalıklarıyla ilgili tıbbi Derneği (travma) yönergeleri ile uyumlu ötenazi hayvanlar için (2013 Edition). C57BL/6J, erkek, 8-16 hafta yaşlı fareler bu protokol için kullanılmıştır. Fareler bir 12 h karanlık/ışık siklet ortamında muhafaza.
 1. ameliyat öncesi hazırlık <ol><li>Transfer fareler temiz kafes yordamı önce 24 h için. Hayvanlar su ücretsiz erişim sağlar. Yumuşak gıda (jel diyet ek) ile yemek yemek yerine 4-6 h ince bağırsak ameliyatı için içeriğini azaltmak için ameliyattan önce.</li>
	<li>Tüm cerrahi aletler sterilize ve tek kullanımlık steril cerrahi malzemeleri hazırlayın. Temiz cerrahi alan ve % 70 etanol ile anestezik burun konisi.</li>
	<li>Diseksiyon mikroskop, isoflurane anestezik Buharlaştırıcı, aletleri ve ısı kontrollü küçük bir hayvan cerrahi tablo vücut sıcaklığı bakım için ayarlayın. Aletleri, dikiş ve ücretsiz erişim için bir konum şırıngalarda ameliyat sırasında düzenlemek.</li>
	<li>Cerrahi alan için yeterli ışık sağlamak için bir ışık kaynağını ayarlayın.</li>
	<li>Bağırsak ve karın temizlik için 5 mL şırınga steril % 0,9 salin hazırlayın.</li>
</ol> 2. Ileectomy ve anastomoz <ol><li>Anesthetize fareler küçük hayvan kuluçka odasında isoflurane (2-%3) ile. Yeterli anesthetization hayvan isoflurane üzerinde ise ayak çimdik tekniği kullanarak belirlemek.</li>
	<li>Karın saç saç kaldırma ürün uygulamak çıkarın ve uzak anestezi koruyarak cerrahi sünger kullanarak saç silin. Fareyi bir masada ısı kontrollü küçük hayvan cerrahi (vücut ısısını korumak için şekil 1 A) 37 ° C. koru anestezi isoflurane (% 1-2) bir sağlamlılık aracılığıyla ile yerleştirin. Oküler merhem fare gözlerle tedavisi.</li>
	<li>Deri povidone-iyot ve % 70 alkol kullanarak temiz ve steril cerrahi gazlı bez ( şekil 1 B) ile karın cerrahi alanı kapsayacak.</li>
	<li>Anestezi etkin olduğunda cerrahi neşter kullanarak bir karın Ensizyon olun. Bağırsak ve çekme fare karın kas tam açın ve karın boşluğu ( şekil 1 C) maruz traktör ile korumak için pamuk uçlu aplikatör kullanın.</li>
	<li>Çekum bulun. Çekum başlayarak dikkatlice hareket bağlı ileum ve değişir parçası karın boşluğu ( şekil 1 D) dışında. 
	Not: Çekum kolayca büyük onun büyüklüğü nedeniyle bile oruç sonra belirlenebilir.</li>
	<li>Superior Mezenterik arter eksize için ileal bölümünü sağlama kanı doldurmak için bir 7-0 ipek sütür ile üst dalı ligate. İleal rengi pembe koyu mor ligasyonu sonra değişir. ( şekil 1 E - F).</li>
	<li>Makas kullanarak deney, amacına bağlı olarak tüketim ve % 50 veya ileum % 90'ı kaldırın. 
	Not: Sahte ameliyata superior Mezenterik arter ligasyonu gerçekleştirmez ve ileum çıkarmak değil.</li>
	<li>Sifonu % 0,9 serum fizyolojik ile ileal her iki uçtan Lümen. 
	Kalan sağlam ileum hala bir normal kan akımı alma gibi Not: superior Mezenterik arterin kan küçük bir miktar işlemi sırasında boşaltılır. Bu da ileal uçları için kan akımı normal ve anastomoz işlem ( şekil 1 G) sırasında iskemi yok sağlar gösterir.</li>
	<li>Mesenteries ileal iki uç tarafında bulun. Mesenteries hizalayın ve birlikte 8-0 dikiş ( şekil 1 G - H) kullanarak ileal biter dikiş.</li>
	<li>Dikiş ileum tutmak için ileum kontralateral tarafında anastomosed bir doğal şekilde ( şekil 1 ı).</li>
	<li>İki özgün dikiş iyice birleştirmek iki ileal uçlarına birlikte ( şekil 1 J) arasında üst ve alt kenarları dikiş.</li>
	<li>Onaylamak üç adımlı dikiş işlemi bittikten sonra anastomoz sitesinden hiçbir sızıntı olduğunu ( şekil 1 G-Ben). Çekum ve bağırsağın karın boşluğuna özgün anatomik konumuna geri döndürmek. Cerrahi alan künt bir iğne kullanarak sıcak % 0,9 serum fizyolojik ile yıkayın. ( şekil 1 K).</li>
	<li>6-0 sütür ile karın kas tabakasının kesi kapatın. Forseps kullanarak karın cilt kesi hizalayın ve optimum yara iyileşmesi ( şekil 1 L) kolaylaştırmak için karın deri dikiş.</li>
</ol> 3. Ameliyat sonrası bakım <ol><li>Transfer ameliyat sonrası fareler için bir yoğun bakım ünitesi kurtarma için. Onları ameliyat sonrası kurtarma gecede devam etmek için bir ısı kontrollü Isıtma yastığını bir kağıt-yatak kafeste ev. Fareler düzenli gıda ve su yanı sıra yumuşak gıda ile tedarik.</li>
	<li>Yönetmek buprenorfin (0,05 - 0,1 mg/kg) Subkutan Enjeksiyon ile analjezi için her 8-12 h. 
	Not: Eğer ciddi hasta fareler tarafından CO 2 ötenazi.</li>
	<li>Fareler (Bölüm 4) gerektiği gibi çağır isoflurane ve hasat örnekleri kullanarak son nokta, kurban.</li>
</ol> 4. Ileectomy kaynaklı safra Overaccumulation değerlendirilmesi <ol><li>tartmak ve fareler bir gün %0 (sahte), % 50 veya % ileum 90 rezeksiyonundan sonra incelemek.</li>
	<li>GI yolu kaldırın ve tartmak. GI ağırlık şiddeti safra tuzu malabsorbsiyonuna ve overaccumulation değerlendirmek için vücut ağırlık oranı hesaplamak.</li>
	<li>GI yolları 15 mL konik tüpler içine aktarmak ve makas kullanarak kısa segmentleri kesin. Kesme sonra 10 dakika süreyle santrifüj 3000 x g de Transfer süpernatant (safra tuzları içeren GI sıvı) için temiz bir tüp.</li>
	<li>Toplam hacim ve ağırlık GI sıvı ölçmek ve GI yolu ağırlık oranı daha da safra overaccumulation GI sistem değerlendirmek için sıvı kilo hesaplamak.</li>
	<li>Başvuru 8 ' de açıklandığı gibi safra asidi tahlil tarafından toplam safra tutarı süpernatant belirlemek.</li>
</ol>

<ol>
	<li>McLeod, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+inflammatory+bowel+diseases.">Surgery for inflammatory bowel diseases.</a> Dig Dis. 21, 168-179 (2003).</li><li>Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+bowel+disease:+the+view+of+the+surgeon.">Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon.</a> Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).</li><li>Polle, S. W., Bemelman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+insight:+minimally+invasive+surgery+for+IBD.">Surgery insight: minimally invasive surgery for IBD.</a> Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. 4, 324-335 (2007).</li><li>Fon Tacer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resource:+Comprehensive+expression+atlas+of+the+fibroblast+growth+factor+system+in+adult+mouse.">Research resource: Comprehensive expression atlas of the fibroblast growth factor system in adult mouse.</a> Mol Endocrinol. 24, 2050-2064 (2010).</li><li>Pournaras, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+bile+after+Roux-en-Y+gastric+bypass+in+promoting+weight+loss+and+improving+glycaemic+control.">The role of bile after Roux-en-Y gastric bypass in promoting weight loss and improving glycaemic control.</a> Endocrinology. 153, 3613-3619 (2012).</li><li>Spreckley, E., Murphy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+L-Cell+in+Nutritional+Sensing+and+the+Regulation+of+Appetite.">The L-Cell in Nutritional Sensing and the Regulation of Appetite.</a> Front Nutr. 2, 23 (2015).</li><li>Inagaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+15+functions+as+an+enterohepatic+signal+to+regulate+bile+acid+homeostasis.">Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis.</a> Cell Metab. 2, 217-225 (2005).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+control+of+bile+acid+synthesis+by+a+KLF15-Fgf15+axis.">Circadian control of bile acid synthesis by a KLF15-Fgf15 axis.</a> Nat Commun. 6, 7231 (2015).</li><li>Christl, S. U., Scheppach, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+consequences+of+total+colectomy.">Metabolic consequences of total colectomy.</a> Scand J Gastroenterol Suppl. 222, 20-24 (1997).</li><li>Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+adaptation+following+massive+small+bowel+resection+in+the+mouse.">Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse.</a> J Am Coll Surg. 183, 441-449 (1996).</li><li>Tappenden, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+short+bowel+syndrome:+considerations+of+resected+and+residual+anatomy.">Pathophysiology of short bowel syndrome: considerations of resected and residual anatomy.</a> J Parenter Enteral Nutr. 38, 14-22 (2014).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acid+diarrhea:+prevalence,+pathogenesis,+and+therapy.">Bile Acid diarrhea: prevalence, pathogenesis, and therapy.</a> Gut Liver. 9, 332-339 (2015).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+understanding+of+bile+acid+diarrhea.">Advances in understanding of bile acid diarrhea.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).</li><li>Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+article:+bile+acid+diarrhoea+-+pathogenesis,+diagnosis+and+management.">Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management.</a> Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).</li><li>Rao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organic+solute+transporter+alpha-beta,+Ostalpha-Ostbeta,+is+essential+for+intestinal+bile+acid+transport+and+homeostasis.">The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).</li><li>Hofmann, A. F., Poley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholestyramine+treatment+of+diarrhea+associated+with+ileal+resection.">Cholestyramine treatment of diarrhea associated with ileal resection.</a> N Engl J Med. 281, 397-402 (1969).</li><li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF19+as+a+postprandial,+insulin-independent+activator+of+hepatic+protein+and+glycogen+synthesis.">FGF19 as a postprandial, insulin-independent activator of hepatic protein and glycogen synthesis.</a> Science. 331, 1621-1624 (2011).</li><li>Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+intestinal+soap--bile+acids+in+metabolic+control.">Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control.</a> Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).</li><li>Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGA+technical+review+on+short+bowel+syndrome+and+intestinal+transplantation.">AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation.</a> Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Başarılı bir ileectomy gerçekleştirmek için önceden resecting kesimi için kan akımı engellemek için superior Mezenterik arter bakmaksızın gerekir. İskemik ileal segment koyu mor ligasyonu sonra dönecek. İleal segment sonra tamamen rezeke gerekir. Bir normal kan akımı tutulan amaçları için sağlanmış olur. Bu hangi iskemik nekroz nedeniyle cerrahi hatasına yol açabilir dikiş sonra kolayca kaldırma, kanama ve uygunsuz önlemek için önemlidir. Anastomoz sırasında ileal biter birlikte onların doğal anatomik pozisyonda katılmak önemlidir. Bıçaklanmasından bükülmüş biter potansiyel oluşumunu önlemek ilk dikiş için en güvenilir dönüm noktası olarak kabul edilir. İleal biter kontralateral tarafındaki ikinci dikişi iki ucu onların doğal anatomik yapısına uygun olarak konumlandırılmış. Sonra intestinal anastomoz, anastomoz alanının rengini kontrol edilmelidir. Alan genellikle normal bir pembe renk gösterir. Alan işleminden sonra mor dönüşürse, dikiş bölgesi iskemi acı olabilir. Bu iskemik parçasının eksik eksizyon veya dikiş sırasında iki ucu büküm nedeniyle olabilir. Bu koşullar altında ameliyattan hemen düzeltilmesi gerekir.
İleectomy cerrahi başlıca komplikasyonları safra asidi malabsorbsiyonuna kaynaklı toksisite, ameliyat sonrası bağırsak engelleri ve anastomoz kaçağı vardır. Bağırsak diğer parçaları ile karşılaştırıldığında, ileum bağırsak geri kalanı tarafından tazmin edilmesi daha zordur birden çok yapısal ve işlevsel özelliklerine içerir. Çünkü daha fazla safra büyük fareler üretilen küçük fareler ile karşılaştırıldığında aynı ileal rezeksiyon büyük fareler için muhtemelen olabilir zarar ağır. Örneğin, safra birikimi yaş 16 - hafta eski farelerde yaş 8 hafta yaşlı fareler daha fazla olduğunu kaydetti. Bu ister cinsiyet farklılıkları ileectomy kaynaklı advers etkiler belirsizdir ve daha fazla çalışmaları gerektirir.
İleal uzunluğu rezeksiyon deneme bilerek bağlıdır. Bizim ellerde % 50 ileum kaldırılması önemli Histiositoz ile bağırsak azaltılmış contractility ikna etmek için yeterlidir. Özellikle en çok %90 ileum, nedenleri aşırı Histiositoz ve tam intestinal peristaltizm kaybı çok fazla kaldırma. Aşırı ileal rezeksiyon uygulanan fareler genellikle beş günden fazla kalan aciz. Daha kısa bir kesimi (örneğin daha az % 50 ileum) sanıyordum ileectomy nispeten uzun vadeli bir ameliyat model olarak kullanan içinde etkili bir değişiklik olduğunu. Ameliyat sonrası terapi safra asidi sequestrants (örneğin Kolestramin) ile safra overaccumulation 16azaltmak için gerekli olabilir.
Biz bir dizi ileectomy modelleri çeşitli rezeksiyon uzunlukları ile araştırdı ve hafif safra asidi overaccumulation ve toksisite bağırsak neden en uygun rezeksiyon koşulları belirledi. Böylece, bu çalışma bir daha derin fonksiyonel ve moleküler ileectomy kaynaklı ishal, lipid Çözünen vitamin malabsorbsiyonuna ve steatorrhea anlamak için bir fare modeli sağlar. Ancak, bu çalışmada biz sadece kısa vadeli bir deney gerçekleştirilen kısıtlamadır. Uzun vadeli bir çalışma gelecekte daha fazla araştırılması gerekiyor.
FGF15 bir uzun vadeli insülin regülatörü önemli glikoz ve protein metabolizması için olmak bildirilmiştir. Ayrıca, safra asidi homeostazı 17,18içinde bir rol oynar. Çalışmada bize FGF15-aracılı yönetmelik ileal rezeksiyonu ile bireylerde glikoz ve protein metabolizmasının anlamak izin verebilir. Son olarak, ileal rezeksiyonu da sentez ve diğer peptid hormonlar üretimiyle dolaşımdaki düzeyleri etkiler. Örneğin, kan konsantrasyonları PYY ve GLP, enteroendocrine L-hücreleri distal ileum tarafından sentezlenen ve Gastrik asit salgılanması ve bağırsak hareketliliği inhibe, genellikle ameliyat 6,19takip değişmiş.
Sonuç olarak, orta şiddetli safra overaccumulation fare bağırsak inducing bir akut ileal rezeksiyon modeli kurduk. Fare ILEA degrade rezeksiyonu safra asidi homeostazı ve toksisite gibi karmaşık kısa barsak sendromu enterohepatic sisteminde eğitim için uygulanabilir. Buna ek olarak, ileum orta rezeksiyon yakından Crohn hastalığı olan hastalar için kullanılan cerrahi benzer. Bu nedenle, bu modeller cerrahi operasyonlar sanıyordum ile ince bağırsak enflamatuar ve fibrotik yanıtlarında incelenmesi için faydalı olacaktır. Son olarak, fare cerrahi modelleri araştırma ve klinik advers etkiler ileectomy kaynaklı ve hastalıklar için tedavi tedaviler değerlendirilmesi için uygun bir platform sağlar.

Modern Biyomedikal Araştırma, genetik olarak işlenmiş hayvan modelleri insan hastalıkları anlayışlar seçip ayırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. Özellikle, doku veya hücre özgü kazanç ve kayıp işlevleri genlerin moleküler düzenleme gibi indüklenen biyolojik etkileri eğitim için kullanılmıştır. Hedef genlerin vivo içindeişleme içinde gelişmeler rağmen kalan sınırlamalar vardır. İlk, birçok hücre veya doku belirli silme birden çok organları etkiler. Örneğin, epitel gen silme epiteli ifadede birden çok dokuların ortadan kaldırır. Ayrıca, silme işlemini belirli bir dokusu ile sınırlı olsa bile, kayma kontrol nadiren mümkün olabilir. Örneğin, gibi bağırsak dokusu, farklı kesimleri ile hassas vivomanipüle çok belirli işlevleri gerçekleştirmek. Bu durumlarda, gen içeren dokuların rezeksiyonu doku iletişim mekanik ve fonksiyonel önemini belirlemek için daha verimli bir eğitim yaklaşımı olarak kabul edilir.
Ileectomy olan Crohn çoğunlukla kullanılan hastalarda ve inflamatuar hastalıklar distal ileum 1,2,3içeren. İleum genellikle üreten birkaç fibroblast büyüme faktörü 15/19 gibi enerji depolama hormonlar (FGF15/19), peptid YY (PYY) ve glukagon benzeri peptid 1/2 (GLP1/2); Bu hormonlar birçok biyolojik fonksiyonları4,5,6' önemli yerel ve endokrin rol oynarlar. Bu hormonlar arasında FGF15 karaciğerde safra asidi sentezi sağlam bir endokrin inhibitörü olarak belirlenmiştir. Bir kez ileal enterositler emilir, safra asitlerinin için geribildirim inhibisyonu hepatik safra asidi sentez 7daha sonra açan nükleer reseptör farnesoid X reseptör (FXR) Fgf15 ifade, uyarmak için aktif hale getirin. Bir son çalışmada, biz ileal kruppel benzeri faktörü 15 (KLF15) eğitim için fare ileectomy modeli tanıttı - karaciğer 8üretimde sirkadiyen safra asidi düzenleyen eksen sinyalFgf15 . En önemlisi, bir roman ailesi, kruppel gibi faktörler, özellikle KLF15, safra asidi Biyoloji tanıttı. İleectomy cerrahi fonksiyonel çalışmaları üzerinde bağlı olarak, biz bu KLF15 upregulates safra asidi sentez yolu ile dolaylı bir sigara hepatik mekanizması belirledi. Son olarak, ileal KLF15 da ilk endojen negatif düzenleyici Fgf15tanımlanır.
Distal bölgelere proksimal üzerinden azalan bağırsak segmentleri farklı besinlerin emilimini için sorumludur. İleum safra asidi ve vitamin B12 (VB12) emme 9için sorumlu büyük kesimdir. Bir önceki çalışma kısa barsak sendromu çalışmaya proksimal bağırsak rezeksiyonu bir fare modeli istihdam; çeşitli rezeksiyon uzunlukları, diyetler ve dikiş türleri en uygun ameliyat sonrası sağkalım oranı 10sürdürmek için önerilmiştir. Ayrıca, daha yeni bir inceleme o ileal rezeksiyon genellikle diğer gastrointestinal (GI) kesimi rezeksiyonu daha daha şiddetli hastalığında kalan yolu 11azalma adaptif kapasitesi nedeniyle sonuçlar gösterir. Kurtarma ve etkili tedavi yaklaşımları anlayışı hala sınırlı ise bu konuda temel ve klinik araştırma gruplarının yoğun ilgi kazanmıştır.
Safra asidi ishal enterohepatic dolaşım 12,13homeostazı safra asidi dengesizlikler kaynaklanır. İleal rezeksiyon, gastrointestinal hastalık veya idiyopatik safra asidi malabsorbsiyonuna sonucu bir sonucu olabilir. Hastaların % 80'den fazla ileal rezeksiyon 14geçiyor sonra ishal ile mevcut tespit edilmiştir. Ileectomy safra asidi ishal incelenmesi için bir önemli ameliyat model olma potansiyeline sahiptir. Bu çalışmada, ileal kısaltma bir dizi FGF15 eksikliği gibi bağırsak safra tuzu malabsorbsiyonuna, overaccumulation ve toksik hasar degrade bir değerlendirmesini sağlar.

<table width="722">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Dissection microscope</td>
			<td style="width:195px;">Olympus</td>
			<td style="width:97px;">SZ61</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Animal temperature controller</td>
			<td style="width:195px;">Physitemp Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:97px;">TCAT-2LV</td>
			<td style="width:183px;">For body temperature control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Isoflurane anesthetic vaporizer</td>
			<td style="width:195px;">VetEquip</td>
			<td style="width:97px;">&#160;911104</td>
			<td style="width:183px;">For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Dissection forceps</td>
			<td style="width:195px;">&#160;Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td style="width:97px;">11274-20</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Scissors</td>
			<td style="width:195px;">&#160;Fine Science Tools, Inc.</td>
			<td style="width:97px;">14084-08</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Needle holder</td>
			<td style="width:195px;">&#160;Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td style="width:97px;">RS-7882</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Micro knives-needle blade</td>
			<td style="width:195px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:97px;">10318-14</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">6-0 monofilament suture</td>
			<td style="width:195px;">Ethicon</td>
			<td style="width:97px;">1698G</td>
			<td style="width:183px;">For abdominal skin closure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">7-0 silk suture</td>
			<td style="width:195px;">Ethicon</td>
			<td style="width:97px;">766G</td>
			<td style="width:183px;">For ligation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">8-0 monofilament suture</td>
			<td style="width:195px;">Ethicon</td>
			<td style="width:97px;">1714G</td>
			<td style="width:183px;">For anastomosis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Surgical sponges</td>
			<td style="width:195px;">Dynarex Corp.</td>
			<td style="width:97px;">3333</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Small cotton-tipped applicators&#160;</td>
			<td style="width:195px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:97px;">23-400-118</td>
			<td style="width:183px;">For surgery&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:195px;">Piramal Healthcare Limited</td>
			<td style="width:97px;">66794-013-25</td>
			<td style="width:183px;">For anasthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Buprenorphine hydrochloride</td>
			<td style="width:195px;">Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:97px;">12496-0757-1</td>
			<td style="width:183px;">For analgesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">0.9% sodium chloride Injection</td>
			<td style="width:195px;">B. Braun Medical Inc.</td>
			<td style="width:97px;">0264-7800-10</td>
			<td style="width:183px;">For washing/injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Povidone iodine prep solution</td>
			<td style="width:195px;">Dynarex Corp.</td>
			<td style="width:97px;">1413</td>
			<td style="width:183px;">For skin preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Puralube vet ointment</td>
			<td style="width:195px;">Dechra Veterinary Products</td>
			<td style="width:97px;">17033-211-38</td>
			<td style="width:183px;">For eye pretection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Hair remover lotion</td>
			<td style="width:195px;">Church &#38; Dwight Co., Inc.</td>
			<td style="width:97px;"></td>
			<td style="width:183px;">For skin preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Intensive care unit</td>
			<td style="width:195px;">ThermoCare</td>
			<td style="width:97px;">FW-1</td>
			<td style="width:183px;">For post-surgery recovery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">DietGel recovery</td>
			<td style="width:195px;">ClearH2O</td>
			<td style="width:97px;">72-06-5022</td>
			<td style="width:183px;">For post-surgery recovery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Aurum total RNA fatty and fibrous tissue kit</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:97px;">7326830</td>
			<td style="width:183px;">For RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="width:248px;height:31px;">iScript reverse transcription supermix for RT-qPCR</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:97px;">1708841</td>
			<td style="width:183px;">For reverse transcription assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">TaqMan fast advanced master mix</td>
			<td style="width:195px;">Applied Biosystems/Life Technologies</td>
			<td style="width:97px;">4444965</td>
			<td style="width:183px;">For QPCR analysis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">Total bile acid assay kit</td>
			<td style="width:195px;">Genzyme Diagnostic</td>
			<td style="width:97px;">DZ042A-K01</td>
			<td style="width:183px;">For bile acid assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:248px;height:21px;">C57BL/6J&#160;</td>
			<td style="width:195px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:97px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ileectomy-induced bile overaccumulation in mouse intestine

Bağırsak rezeksiyonu obezite gibi insan hastalıkları, inflamatuvar barsak hastalığı, Crohn hastalığı ve genellikle safra asidi ishal de dahil olmak üzere ağır kısa barsak sendromu gibi yan etkileri içinde sonuç kolon kanseri için ortak bir terapötik yaklaşımdır, dehidratasyon, elektrolit bozuklukları ve besin malabsorbsiyonuna. Burada ileectomy, doku iletişim ve sistemik homeostazı bakımından değerlendirmek için olarak adlandırdığı bir fare ileal rezeksiyon modeli tanıtmak. İleal rezeksiyonundan sonra kan dolaşan kalıcı olarak endokrin, karaciğerde safra asidi sentez inhibisyonu bültenleri ileum özgü endokrin hormon fibroblast büyüme faktörü 15 (FGF15), yoksun olduğunu. Artan üretim ve emiliminin safra asitlerinin kaldırıldı ileum çıkardıktan sonra birlikte safra tuzu overaccumulation bağırsak ve ilişkili ishal, morbidite ve mortalite ameliyat edildi fareler muzdarip. Bu çalışmada tanıttı cerrahi modelinin roman kullanım fizyolojisi ve hastalık sistemik metabolik regülasyon ileal kontrolünü mekanik ve fonksiyonel anlayışlar sağlayabilir.

İleectomy yordamları şekil 1' de gösterilmiştir. İlk adım fare karın deri hazırlama, karın bir kesi yapmak ve tam olarak bağırsak (şekil 1A-C) ortaya çıkarmak için ekartör kullanarak içerir. Ardından, fare çekum bulunduğu (şekil 1D); verilen boyutu ve şekli kolayca tanımlanabilen bir dönüm noktası yapmak. Çekum, ileum ve distal değişir parçası maruz ve Karın boşluğundan (şekil 1D) kaldırıldı. Bir kez resecting ileal segment kararlıydı, kesimine kan temini superior Mezenterik arter bakmaksızın ve ileum segmentin rengini hızla koyu mor (şekil 1E - F), bağırsak dinlenme sırasında değişti. normal bir pembe renk yapılmaktadır. Bütün iskemik ileal segment tamamen kesme % 0,9 serum (şekil 1G) biter çamaşır ardından rezeke. İki ileal biter sonra birlikte bir üç adım dikiş işlem (şekil 1H-J) sütüre. Şekil 1K-L, anastomoz bağırsak karın boşluğunda anatomik özgün konumuna iade edildi ve kazıma kas ve deri katmanları araya sütüre.
Karaciğer tarafından üretilen Safra Asitlerinin Enzimatik kolesterolden sentezlenen ve enterohepatic sisteminde sirküle. Bunlar çoğunlukla distal ileum tarafından emilir ve sonra karaciğer portal ven yoluyla karaciğere geri döndü. Safra asidi dolaşım Hepatosit karaciğer ve enterositler ileum arasında Şekil 2içindeAözetlenir. İleum, safra asitlerinin epitel enterositler luminal tarafına apikal sodyum bağımlı safra asidi ışınlama (ASBT) tarafından emilir ve ileal safra asidi bağlayıcı protein (IBABP) tarafından sızma demiri membran kana transfer Organik çözünen taşıyıcı (OST). Enterositler, safra asitlerinin aynı zamanda güçlü bir endokrin inhibitörü downregulating tarafından özellikle safra asidi sentezi ileum özgü hormon FGF15, ikna etmek için FXR etkinleştirmek hepatik CYP7A1, safra asidi sentezi için ilk ve hızı sınırlaması enzim Karaciğer. Ancak, Fgf15 ileal KLF158tarafından bastırılmış. Bizim nicel gerçek zamanlı Polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR) analizi son derece düşük ifade değişir ve dinlenme için ileum ve daha az Fgf15, Asbt, Ibabpve Ostβ mRNA bol ifadesi algılandı ince bağırsak (Şekil 2B-2E). Ancak, adenomatous poliposis coli (Apc) mRNA düzeyi (negatif kontrol) tüm bağırsak (Şekil 2F) karşılaştırılabilir kaldı.
Bu veriler bir önceki çalışma15 ile tutarlı ve daha fazla safra asitleri bağırsak emiliminin ileum öncelikle oluşur destek. Bu veriler safra besin sindirim ve lipid çözünür besin verimli emilimi oniki parmak bağırsağı ve değişir birincil sindirim ve dinsel rolleri biyolojik olarak uygun proksimal ince bağırsak içinde emülsifikasyon için kritik olduğunu göstermektedir . Üzerine gelen distal ince bağırsak, safra sindirim işlevini tamamladı ve karaciğere dönmek ve enterohepatic kan dolaşımı parçası olarak ileum tarafından emilir. Safra emiliminin ayrıca safra asitlerinin seyahatler için karaciğer ve safra asidi sentez bastırır ileum ikincil sinyal molekül FGF15, üretmek için uyarıcı tarafından sinyal onların işlevleri gerçekleştirmek izin verir. Bizim önceki çalışma, ileum 8~ %90 bir cerrahi rezeksiyon tarafından hepatik safra asidi sentez düzenleyici etkisi bir ileal KLF15 -Fgf15 eksen kanıtladık. Karaciğer safra asidi sentezi ileum, ayrıca bağırsakta safra asidi malabsorbsiyonuna neden çok önemli mekanik çıkarıldıktan sonra FGF15 tarafından inhibitör kontrolünü kaybeder. Safra büyük miktarda sonuç olarak ishal, Histiositoz ve gastrointestinal aktivite kaybı gibi ciddi yan etkileri neden bağırsak overaccumulated. Rezeksiyon büyüklüğü etkisini değerlendirmek ve güvenli ileectomy modeli belirlemek için biz C57BL6/J fareler %0 (sahte), % 50 ve % 90 rezeksiyon ileum gerçekleştirmek için kullanılır. 24 saat sonra bağırsak Morfoloji karakteristik degrade değişiklikleri (şekil 3A-3D) gösterdi. Sham'in ameliyatta bağırsak normal ve cerrahi olmayan fareler karşılaştırılabilir. İleum % 50'si kaldırma bazı safra birikimi, artan bağırsak boyutu ve genişleme rezeksiyonundan sonra bir gün neden oldu. Ancak, % 90 rezeksiyon uygulandı fare artan safra overaccumulation sergilenen, bağırsak boyutu ve şiddetli dilatasyon arttı. Bağırsak ileal rezeksiyon kaynaklı safra overaccumulation değerlendirmek için ameliyat sonrası GI yolları iç sıvı toplanan. Sıvı birimleri bir degrade iyileştirmesini % 0'dan % 90'ileectomy fareler (şekil 4A) sergilenmektedir. Vücut ağırlığı karşı GI ağırlık oranı sadece % 90 ileum rezeke fareler (şekil 4B) önemli ölçüde arttı. GI sıvı ameliyat sonrası GI yolları toplanan ve sıvı ağırlığı GI yolu ağırlık oranı GI rezeksiyon (şekil 4C ve 4 D) nedeniyle bir degrade artış gösterdi. Son olarak, safra asidi tahlil safra asitlerinin miktarını süpernatant artar ileal rezeksiyon (şekil 4E) artış ile tespit doğruladı. Toplu olarak, sonuçlar % 50 ileum rezeksiyonu daha uygun bir fare ileectomy modeli ile hafif safra asit birikimi bağırsak gibi nispeten ılımlı olumsuz etkileri olduğunu gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55728/55728fig1.jpg"> 
Şekil 1: Cerrahi prosedürleri Ileectomy. (A)bakım vücut sıcaklık ısı kontrollü küçük bir hayvan cerrahi tablo kullanarak. (B) kapak cerrahi alan karın deri hazırlık sonra steril gauzes ile. (C) maruz bağırsağın karın Ensizyon aracılığıyla. (D) çekum (beyaz Kesikli çizgiyle vurgulanmış) işaretli ileum bulmak için olduğunu. İleum (sarı Kesikli çizgi) ve superior Mezenterik arter dalları (sarı ok) oluşturur. (E) ileum için kan temini superior Mezenterik arter dalları Ligate. Tüp ligasyonu siteleri sarı oklarla belirtilmiştir. İleal renk koyu mor veya arter ligasyonu takip siyah olarak değiştirilir. İskemik segment sarı Kesikli çizgiyle vurgulanır. (F) Kesikli çizgi iskemik ve normalde periosteum ileum sınır belirtir; Oku ileum iskemik alanı gösterir. (G) kesme ve ileum iskemik parçası kaldırmak ve biter (sarı kesik çizgiler) % 0,9 serum floş. Sarı oklar Mezenterik tarafı gösterir. (> H) dikiş at ileal biter birlikte ve uyumlu bıçaklanmasından devam et. Mezenterik tarafında ilk dikiş sarı okla gösterilir. (ben) dikiş ileum (sarı ok) kontralateral tarafında. (J) tamamen ileum birlikte katılmak için ileal biter alt ve üst kenarlarında dikiş. Dikiş sarı okla gösterilir. (K) çekum ve bağırsağın karın boşluğuna dönün. Anastomoz alan sarı çizgili daire tarafından vurgulanır. Pembe renk anastomoz bölgesinde iskemi yok gösterir. (L) belgili tanımlık kesme karın kas tabakasının kapatın ve cilt kesi dikiş. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55728/55728fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55728/55728fig2.jpg"> 
Resim 2 : Hepatositlerin ve emiliminin Ileum enterositler tarafından safra asidi sentezi. (A)karaciğer safra asidi sentezi, ileum ve hepatik portal ven yoluyla karaciğere geri emiliminin şematik resim. Safra Asitlerinin kolesterolden enzimler tetkikine içinde ilk ve hızı sınırlaması sitokrom P450 enzim CYP7A1 dahil olmak üzere bir dizi sentezledim. Çoğu safra asitlerinin ışınlama ileal enterositler luminal tarafına ASBT tarafından emilir. Absorbe safra asitlerinin IBABP ve effluxed portal ven yoluyla geri taşınmaya karaciğer demiri ışınlama OST içine ilişkilidir. Enterositler içinde safra asitlerinin de nükleer hormon reseptör FXR ileum özgü hormon FGF15, hepatik safra asidi sentezi sağlam bir endokrin inhibitörü ikna etmek için harekete geçirmek. Buna ek olarak, ileal KLF15 FGF15 ifade engeller. (B-F) Fgf15, Asbt, Ibabp, Ostβve Apc mRNA proksimal distal kesimine duodenum (D), değişir (J), (I) ileum ve iki nokta üst üste (C) de dahil olmak üzere arasında değişen tüm bağırsak içinde göreli ifade (n = 5). Hata çubuklarını ± SD * P &#60; oniki parmak bağırsağı öğrencinin ttarafından vs 0,05-test. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55728/55728fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55728/55728fig3.jpg"> 
Şekil 3: Ileum ve bağırsak ın Histiositoz degrade rezeksiyonu. (A)fare bağırsağı sergiler hiçbir dilatasyon sham ameliyattan sonra. İç içeriği sindirim chyme gösterir. (B) % 50 ileal rezeksiyonundan sonra ince bağırsak ile önemli Histiositoz orta dilatasyon gösterir. (C) % 90 ileal rezeksiyonundan sonra ince bağırsak önemli miktarda safra birikimi ve aşırı dilatasyon gösterir. (D) GI arazisinden (rektum mide) sham cerrahi (solda), % 50 ileum rezeksiyonu (orta) ve % 90 ileum rezeksiyonu (sağda) ile fareler izole edildi. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55728/55728fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55728/55728fig4.jpg"> 
Şekil 4: Ileectomy tarafından neden safra Overaccumulation. (A)iç sıvı fare bağırsak sham, %50 ve % 90'ı ileectomy sonra 24 saat. (B) GI oranları ağırlık sham, %50 ve % 90 ileectomy ameliyatları vücut ağırlığının karşı (n = 5). (C) GI sıvı birimleri. (D) GI sıvı oranları GI ağırlık karşı ağırlık. (E) toplam safra asitlerinin sıvılar içinde toplanan bağırsaklar sonra sham, %50 ve % 90 ileectomy (n = 5). GI: gastrointestinal, GIW: gastrointestinal ağırlık, BW: vücut ağırlığı. Hata çubuklarını ± SD * P &#60; 0,05 sham, # P vs &#60; %0,05 50 ileectomy One-way ANOVA tarafından vs. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55728/55728fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine at JoVE.com

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

İnce bağırsak bağlı safra asidi emiliminden ve hepatik safra asidi sentez inhibisyonu geribildirim sistemik homeostazı ve sağlık için önemli. Bu çalışmada, ileal rezeksiyon ileectomy kaynaklı safra malabsorbsiyonuna, overaccumulation ve toksisite fare bağırsak değerlendirmek için bir fare modeli açıklar.

Fare bağırsak Ileectomy kaynaklı safra Overaccumulation

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

ileectomy-induced-bile-overaccumulation-in-mouse-intestine

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.4K Görüntüleme.  Case Western Reserve University. İnce bağırsak bağlı safra asidi emiliminden ve hepatik safra asidi sentez inhibisyonu geribildirim sistemik homeostazı ve sağlık için önemli. Bu çalışmada, ileal rezeksiyon ileectomy kaynaklı safra malabsorbsiyonuna, overaccumulation ve toksisite fare bağırsak değerlendirmek için bir fare modeli açıklar.

Video: Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold standard" method for assessing insulin action in vivo. During an insulin clamp, hyperinsulinemia is achieved by a constant insulin infusion. Euglycemia is maintained via a concomitant glucose infusion at a variable rate. This variable glucose infusion rate (GIR) is determined by measuring blood glucose at brief intervals throughout the experiment and adjusting the GIR accordingly. The GIR is indicative of whole-body insulin action, as mice with enhanced insulin action require a greater GIR. The insulin clamp can incorporate administration of isotopic 2[14C]deoxyglucose to assess tissue-specific glucose uptake and [3-3H]glucose to assess the ability of insulin to suppress the rate of endogenous glucose appearance (endoRa), a marker of hepatic glucose production, and to stimulate the rate of whole-body glucose disappearance (Rd).
The miniaturization of the insulin clamp for use in genetic mouse models of metabolic disease has led to significant advances in diabetes research. Methods for performing insulin clamps vary between laboratories. It is important to note that the manner in which an insulin clamp is performed can significantly affect the results obtained. We have published a comprehensive assessment of different approaches to performing insulin clamps in conscious mice1 as well as an evaluation of the metabolic response of four commonly used inbred mouse strains using various clamp techniques2. Here we present a protocol for performing insulin clamps on conscious, unrestrained mice developed by the Vanderbilt Mouse Metabolic Phenotyping Center (MMPC; URL: www.mc.vanderbilt.edu/mmpc). This includes a description of the method for implanting catheters used during the insulin clamp. The protocol employed by the Vanderbilt MMPC utilizes a unique two-catheter system3. One catheter is inserted into the jugular vein for infusions. A second catheter is inserted into the carotid artery, which allows for blood sampling without the need to restrain or handle the mouse. This technique provides a significant advantage to the most common method for obtaining blood samples during insulin clamps which is to sample from the severed tip of the tail. Unlike this latter method, sampling from an arterial catheter is not stressful to the mouse1. We also describe methods for using isotopic tracer infusions to assess tissue-specific insulin action. We also provide guidelines for the appropriate presentation of results obtained from insulin clamps.

The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is the gold standard for assessing insulin action in vivo. A method for performing insulin clamps in mice is described. This includes a method for arterial catheterization that permits experiments to be performed in conscious, unrestrained mice with minimal stress.

Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Tıp

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

In organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is indispensable for proper physiological function, and the formation and maintenance of these structures is a highly regulated process. The analysis of these complex, 3-dimensional structures has greatly depended on either 2-dimensional examination in section or on dye injection studies. These techniques, however, are not able to provide a complete and quantifiable representation of the ductal or vascular structures they are intended to elucidate. Alternatively, the nature of 3-dimensional plastic resin casts generates a permanent snapshot of the system and is a novel and widely useful technique for visualizing and quantifying 3-dimensional structures and networks.
A crucial advantage of the resin casting system is the ability to determine the intact and connected, or communicating, structure of a blood vessel or duct. The structure of vascular and ductal networks are crucial for organ function, and this technique has the potential to aid study of vascular and ductal networks in several ways. Resin casting may be used to analyze normal morphology and functional architecture of a luminal structure, identify developmental morphogenetic changes, and uncover morphological differences in tissue architecture between normal and disease states. Previous work has utilized resin casting to study, for example, architectural and functional defects within the mouse intrahepatic bile duct system that were not reflected in 2-dimensional analysis of the structure1,2, alterations in brain vasculature of a Alzheimer's disease mouse model3, portal vein abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic mice4, developmental steps in rat lymphatic maturation between immature and adult lungs5, immediate microvascular changes in the rat liver, pancreas, and kidney in response in to chemical injury6.
Here we present a method of generating a 3-dimensional resin cast of a mouse vascular or ductal network, focusing specifically on the portal vein and intrahepatic bile duct. These casts can be visualized by clearing or macerating the tissue and can then be analyzed. This technique can be applied to virtually any vascular or ductal system and would be directly applicable to any study inquiring into the development, function, maintenance, or injury of a 3-dimensional ductal or vascular structure.

A method of visualizing and quantifying the 3-dimensional structure of mouse hepatic portal vein or intrahepatic bile duct is described. This resin cast technique can also be applied to other ductal or vascular systems and allows for in situ visualization or quantification of a system's intact communicating architecture.

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

Fare Aortocaval Fistül Teknik Yönleri

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Rahim içi Telemetri Fare Kontraktil Basıncını Ölçmek<em&gt; İn Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe the use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations of superior and uniform quality to that which can be achieved by hand. The device comprises a base that holds 4 stainless steel rods and a top, which acts a cutting guide. The rods are inserted into the lumen of the small intestine [divided into thirds] and the colon. The rods and samples are then placed over a piece of filter paper or card into the holding slots in the base of the device. The top of the device is then positioned and serves as a cutting guide. The two angled sections in the center of the top piece are used to guide a knife or scalpel and cut the intestines longitudinally on the top of the rods. Once the intestinal sections have been cut, the top is removed and the card,&#160;tissue and rods gently removed from the device and placed on the bench. The rods are then gently rolled sideways to flatten and stick the intestinal segments onto the underlying piece of filter paper or card. The final preparation can then be examined or fixed and stored for later analysis. The preparations are invaluable for the study of intestinal changes in normal or genetically modified mouse models. The preparations have been used for the study and quantification of the effects of inflammation (colitis), damage, pre-cancerous lesions (aberrant crypt foci (ACFs) and mucin depleted foci (MDFs)) and polyps or tumors.

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Basit Aygıt Hızla Fare Bağırsak Tüm Mounts Hazırlanır

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic uses.
Exosomes have recently been shown to contain microRNAs (miRs). MiRs themselves have arisen as valuable biomarkers for diagnostic purposes. As specimen collection in clinics and hospitals is quite variable, miRNA isolation from whole bile varies substantially. To achieve robust, accurate and reproducible miRNA profiles from collected bile samples in a simple manner required the development of a high-quality protocol to isolate and characterize exosomes from bile. The method requires several centrifugations and a filtration step with a final ultracentrifugation step to pellet the isolated exosomes. Electron microscopy, Western blots, flow cytometry and multi-parameter nanoparticle optical analysis, where available, are crucial characterization steps to validate the quality of the exosomes. For the isolation of miRNA from these exosomes, spiking the lysate with a non-specific, synthetic miRNA from a species like Caenorhabditis elegans, i.e., Cel-miR-39, is important for normalization of RNA extraction efficiency. The isolation of exosome from bile fluid following this method allows the successful miRNA profiling from bile samples stored for several years at -80 &#176;C.

Bile fluid is a valuable source of extracellular vesicles/exosomes that contain potentially important biomarkers. This protocol represents a robust method to isolate exosomes from human bile for further analyses including miRNA profiling.

İzolasyon ve profil MicroRNA içeren İnsan Bile dan ekzozomlar

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling molecules that affect multiple organs; they modulate gut motility and hormone production, and alter vascular tone, glucose metabolism, lipid metabolism, and energy utilization. Changes in fecal bile acids may alter the gut microbiome and promote colon pathology including cholerrheic diarrhea and colon cancer. Key regulators of fecal bile acid composition are the small intestinal Apical Sodium-dependent Bile Acid Transporter (ASBT) and fibroblast growth factor-19 (FGF19). Reduced expression and function of ASBT decreases intestinal bile acid up-take. Moreover, in vitro data suggest that some FDA-approved drugs inhibit ASBT function. Deficient FGF19 release increases hepatic bile acid synthesis and release into the intestines to levels that overwhelm ASBT. Either ASBT dysfunction or FGF19 deficiency increases fecal bile acids and may cause chronic diarrhea and promote colon neoplasia. Regrettably, tools to measure bile acid malabsorption and the actions of drugs on bile acid transport in vivo are limited. To understand the complex actions of bile acids, techniques are required that permit simultaneous monitoring of bile acids in the gut and metabolic tissues. This led us to conceive an innovative method to measure bile acid transport in live animals using a combination of proton (1H) and fluorine (19F) magnetic resonance imaging (MRI). Novel tracers for fluorine (19F)-based live animal MRI were created and tested, both in vitro and in vivo. Strengths of this approach include the lack of exposure to ionizing radiation and translational potential for clinical research and practice.

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Tools to diagnose bile acid malabsorption and measure bile acid transport in vivo are limited. An innovative approach in live animals is described that utilizes combined proton (1H) plus fluorine (19F) magnetic resonance imaging; this novel methodology has translational potential to screen for bile acid malabsorption in clinical practice.

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma<em&gt; İn Vivo</em&gt; Manyetik Rezonans Görüntüleme Tedbir Safra Asit Ulaşım

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Gut hormonu salgılanması izole kullanarak temel mekanizmaları fare bağırsağı periosteum

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...