Bu çalışma NIH hibe numarası P51OD010425 tarafından desteklenmiştir.

<html> Hayvanlar muhafaza ve Değerlendirme ve Akreditasyon Laboratuar Hayvan Bakımı uluslararası (AAALACi) akredite tesisleri için Birliği bakım ve tüm hayvan prosedürleri Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Washington Üniversitesi Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış protokollere göre gerçekleştirildi edildi Washington Ulusal primat Araştırma Merkezi. 1. Cerrahi Hazırlık, Anestezi ve Analjezi <ol><li> Sedasyon ve indüksiyon <ol><li> 10 mg / kg ketamin ve (bir şırınga içinde bir araya) 0.015 mg / kg deksmedetomidin bir intramüsküler enjeksiyon ile oturaklı makak. kafes alınmadan önce çekme reflekslerin yokluğu sağlanması. </li><li> hayvan entübe ve izofluran kullanılarak genel anestezi bir düzlemde hayvan bakımı (1,0-2,5%) ve% 100 oksijen. , Makak 17&#39;de entübasyon ve genel anestezi ilgili daha fazla bilgi için referanslara bakınızref &quot;&gt; 18, 19. </li></ol></li><li> Anestezi Destek ve İzleme <ol><li> çevresel bir venöz kateter takma anestezi ve ameliyat boyunca 5 ml / kg / saat arasında bir oranda (örneğin, laktatlı Ringers çözeltisi gibi) damar içi izotonik sıvı sağlar. Kornea kuruluğunu önlemek için steril göz yağ sürün. </li><li> Bu tür buprenorfin bir sürekli salım formülasyonunun (0.2 mg / kg, deri altına) olarak, analjezi sağlar. Not: bir NSAID (örneğin meloksikam ya da ketoprofen gibi) de deneysel protokol NSAID uygulanmasına imkan verir koşuluyla, anestetik kurtarma sırasında sağlanabilir ve bu hayvan normal tansiyonlu ve yüksek anestezi sırasında iyi hidratlanır. </li><li> Anestezi ve ameliyat boyunca anestezi derinliği (örn çene ton), kalp atım hızı, solunum hızı, EKG, kan basıncı, nabız oksijenasyonu, end-tidal CO2 ve vücut sıcaklığını izlemek. NOT: karın şişirilir zaman, hayvan hipoventilasyona olabilir.Solunum hızı azalır veya end-tidal CO2 seviyeleri 45 mmHg üzerinde ise mekanik havalandırma sağlayın. </li><li> Cerrahi müdahalenin ardından, deksmedetomidin tersine çevrilmesi için atipamezol (0,15 mg / kg, kas içine) uygulanması. </li></ol></li><li> Cerrahi Hazırlık <ol><li> Prosedür 20 boyunca görselleştirme ve bağırsak manipülasyon yardım etmek için kolon dışkı hacmini azaltmak için birden fazla sıcak su lavman gerçekleştirin. </li><li> Bir numara 40 bıçak ile kullanın makası cerrahi alandan saç kaldırmak için. pubis kostal sırtından ve sağ kanadındaki soldan Tıraş. </li><li> Aseptik klorheksidin-alkol ya da povidon-iyodin-alkol ovma alternatif olarak, uygun antiseptikler kullanılarak cerrahi alanı hazırlar. </li><li> dorsal ve sağ yanal yatar arasındaki açı yarım de, onun sırtında ameliyat masasına hayvan yerleştirin. bir uzama konumunda ip kollar ve bacaklar bağla. Son bir chlorhexi sağlayınhayvan ameliyat odasına hareket eder ve cerrahi konumlandırılmış bir kez yemek ve alkol hazırlık. </li></ol></li></ol> 2. Cerrahi Not: Küçük hayvanlarda laparoskopinin daha fazla bilgi için 21 başvuru bkz. <ol><li> Laparoskopik Enstrüman Hazırlık <ol><li> Steril fenestre örtüsü ile birlikte, hayvan örtün. </li><li> Steril olmayan bir asistan yardımıyla, steril kamera örtü ile dijital kamera sarın ve kuleye kabloyu takın. Kamera kafasına sert kapsamını takın. </li><li> katı kapsamı steril ışık kabloyu ve ışık kaynağına bağlayın. Beyaz üreticinin talimatlarına göre kamerayı dengeleyin. </li><li> İnsüflatörde steril insuflatör boru takın. </li></ol></li><li> Laparoskopik Girişi <ol><li> Bir 15. neşter kullanılarak, karın kaslarının uygulamanın derinliği deri yoluyla bir ~ 5 mm bıçak kesisi yapınroximately 1 - göbek sol 2 cm. </li><li> dominant olmayan el kullanarak, bıçak yarasına mahalline karın duvarı kranial, yukarı kaldırın. baskın el ile, insizyon ve açı ucu kraniyal yoluyla Veress iğne ucu yerleştirin. Not: Veress iğne giriş açısı hayvanın vücut durumuna göre değişir. Örneğin, bir yağ hayvanda, Veress iğnesi yaklaşık karın duvarına dik yerleştirilmiş olması gerekir. ince bir hayvanda, Veress iğnesi iç organ temas riskini azaltmak için kraniyal açılı olmalıdır. <ol><li> Veress iğne mili (değil merkezi) tutarak, sıkı bir şekilde karın boşluğuna karın duvarı nüfuz iğne itin. Ayrık bir &quot;klik&quot; ve sivri uç periton ileri karın boşluğuna Veress iğnesi yayların küt ucu nüfuz olarak direncinde azalma hissedilecektir. Not: İğne th içine uygun bir şekilde geçerse2 cm 1 - ileri ve geri olduğunda e karın boşluğu, çok az direnç olacaktır. </li></ol></li><li> Iğne CO2 insuflatör boru bağlayın ve vana açık. pneumoperitoneumun oluşturmak için hiçbir fazla 10-12 mmHg karın basýnçlandýrýn. NOT: simetrik genişledi zaman karın İdeal insuflasyonu elde etti ve kostal marjlar normal keskin kontur kaybı yoktur. Basınç iç organ temas riski olmadan kanül / trokar sokulması için yeterli bir alan sağlamak gerekir. </li></ol></li><li> Kanül Yerleştirme <ol><li> son kaburga 4 cm kaudal - karın kaslarının ~ 2 sol beyin karın deri yoluyla 15. bisturi bıçağı ile 7 mm insizyon - karın tam üflendi sonra, bir ~ 5 olun. </li><li> caudomedially 60 derece - cilt insizyonu ve açı o ~ 45 ile 5 mm trokar-kanal tertibatı yerleştirin. 1-2 cm derinliğe kadar karın boşluğuna nüfuz. Scre1.5 derinliğe - kanülü (1 cm daha ~ 0.5) - döndürerek karın içine dişli kanül w 3 cm, ve trokar çıkarın. </li><li> , Veress iğneden insüflatördür tüpünü çıkarın Stopcock kapatın ve iğneyi çıkartın. kanüle püskürteci boru bağlayın ve en fazla 10 bir pnömoperiton korumak için vana açık - 12 mmHg. </li><li> kanül içinden ve karın boşluğuna katı kapsamı yerleştirin. </li><li> Kamera görüntüleme altında, Veress iğnesi sokulması için kullanılan önceki cilt kesi ile karın kaslarının ve periton üzerinden bir 15. neşter bıçağı ile küçük bir kesi yapmaya devam. Kamera damarları önlemek ve kanamayı en aza indirmek için kesiğin karın tarafını görselleştirmek için kullanılır. Not: kas içinden kesi sağlanması ve periton mezenter (~ 0.5 cm) sondanın girişi ve eksteriorizasyon kolaylaştırmak için yeterince büyüktür. Daha büyük bir kesi mesent exteriorize gerekebilirAşırı mezenterik yağ hayvanlarda ery. </li><li> Kafasının üzerinde 30 derece - yaklaşık 15 en yüksek ayak Trendelenburg konumunda 21 hayvan yerleştirin. Bu isteğe bağlıdır, fakat daha kranyal konuma hareket eder, küçük bağırsak sistemi gibi kolonun mezenterik lenf düğümleri daha kolay erişim, izin verebilir. </li></ol></li><li> Mezenterik Lenf Düğümü Biyopsi <ol><li> Kamera görüntüleme altında, aşama 2.3.5 yapılan abdominal kesikten katı sonda yerleştirin. </li><li> omentum ve bağırsak arasındaki probu yerleştirilir ve hafifçe altında yatan mezenter görüntülenmesine olanak vermek üzere bağırsak dışı omentum süpürmek için kapsamlı bir hareket kullanın. kranial karın kaudalden gelen süpürme hareketi kullanmaya devam. o ameliyat alanının dışına yani omentum sağ kranial karın yerleştirilebilir. </li><li> Sol veya sağ karın duvarına doğru inen kolon hareket etmek üzere kullanmak. Bu t daha iyi görselleştirme sağlayacako mezenterik lenf düğümleri için arama yardımcı olmak için mezentere. </li><li> kolon ve mezenterik damarlar boyunca mezenterik lenf düğümleri bulmak için mezenter ile süpürme elde etmek üzere kullanmak. NOT: kolonun mezenterik sınırı boyunca çalıştırmak Kolon düğümleri, sol kolik düğümler damarlarının şube yerlerin yakınında bulunabilir ve inferior mezenterik düğümleri inferior mezenterik damarlar boyunca bulunabilir. Mezenterik lenf düğümleri yağsız hayvanlarda kolaylıkla görebilir. Mezenterik yağ Gömüldüğünde genellikle örten mezentere biraz yükseltilmiş, parlak bir görünüm katacaktır ardından mezenterik yağ çevreleyen daha fazla grimsi bronzluk renk olabilir. Ayrıca, mezenterik lenf düğümleri lenfatiklere ve mezenterik damarların boyunca yalan eğilimindedir. </li><li> Bir lenf nodu belirlendikten sonra, prob kaldırmak ve karın boşluğuna Maryland mekanizmayla forseps yerleştirin. bitişik hedef düğümü mezenter kavramak için forseps kullanır. inci doğru mezenteri çekinsion ve kanül gelen kapsamını çıkarın. </li><li> insuflatör kapatın ve mezenter dışsallaştırdığını kolaylaştırmak için karın basıncını açık kanül musluğunu bırakın. kesikten vücuda dışında mezenteri çekin. batın sonra, kesikten erişim sağlamak için kavisli bir sivrisinek hemostat veya başparmak forseps ile mezenter tutun. </li><li> sıkı lenf düğümü ve / veya kül renkli rengi veya lenf düğümü nodüler görünüm doğrudan görselleştirme için el ile muayenesi ile batın mezenter içindeki lenf düğümü (ler) i belirlemek. <ol><li> kavisli hemostat kullanılarak düğüm civarındaki mezenter - (5 mm ~ 3) tespit sonra, küçük bir açıklık olun. kavisli hemostatlarla künt diseksiyon kullanılarak mezentere Ücretsiz ekleri. gerekli 4-0 emilmeyen monofilament sütür ile damar sistemini Arter. Lenf düğümü uzaklaştırmak için bir neşter ile keskin diseksiyon kullanın. Roswell Park Memorial Institute düğümleri (RPMI) orta 1640 yerleştirinbuz. </li></ol></li><li> Kanama için batın mezenteri inceleyin. Kanama tespit edilirse, veya dağlama kullanımı ile hemostat ya da bitişik harfler (4-0 emilmeyen monofilaman dikiş) gemiler tıkayarak uygun hemostaz sağlar. mezenter bırakın ve 10 karın geri insüfle - mezenter karın boşluğuna dönmesine imkan vermek için 12 mmHg. </li><li> Tekrar ilave lenf nodu biyopsileri elde etmek üzere 2.4.8 boyunca 2.4.1 adımları tekrarlayın. </li></ol></li><li> Karaciğer Biyopsi <ol><li> yatay pozisyona tabloyu dönün. </li><li> Daha önce (aşama 2.3.5 yapılan kesi), lenf düğümü biyopsi toplanması için kullanılan kesikten karın içine dişli bir kanül yerleştirin. trokar olmadan kanül yerleştirilmesi sağlamak için - (7 mm ~ 5) bir kesik kadar büyük olduğundan emin olun. kranyal karın boşluğuna doğru, bu kanül yoluyla katı kapsamı yerleştirin ve kraniyal karın ve karaciğer görselleştirmek. </li><li> Kamera görüntüleme altında biyopsi f insertkanülden orceps önce sol kranyal karında (aşama 2.3.1 yapılan kesi) içine yerleştirilmiştir. </li><li> Karaciğer biyopsisi elde karaciğer bakan çenenin hareketli parçası ile seçilen karaciğer lobu kenarı altında biyopsi forseps yer, forseps açık ve kenar açık çeneleri içine düşmesine izin vermek için. Hiçbir omentum karaciğer ve biyopsi forseps arasında olduğundan emin olun. Forseps konumunu ayarlamak ve istenen numune bölge üzerinde aleti kapatın. <ol><li> 30 s hemostaz sağlamak için - yaklaşık 20 için baskı koruyun. forseps kapalı ile hafifçe kanülden forseps yukarı çekerek numuneyi çıkar. Bu hafifçe karaciğer biyopsi gözyaşı. Buz üzerinde, RPMI 1640 ortamında karaciğer biyopsisi yerleştirin. Not: Karaciğer biyopsisi büyüklüğü yaklaşık olarak 5 mm biyopsi forseps kullanılarak 5 mm x 2 mm x 2 mm&#39;dir. </li></ol></li><li> Kamera görselleştirme kullanarak kanaması için biyopsi sitesini inceleyin. kanama görülürse, bir tuzlu moistene yerleştirmekkanül içinden d steril pamuklu çubukla ve biyopsi sitesine basınç uygulayın. Seçenek olarak ise, hemostaz yardım etmek için steril jel köpük ile biyopsi siteleri paketi. </li><li> Tekrar ilave karaciğer biyopsileri elde etmek üzere 2.5.5 boyunca 2.5.3 adımları tekrarlayın. NOT: Burada prosedür başına hayvan başına 3 biyopsileri toplandı, tüm alt analizler için yeterlidir. </li></ol></li><li> Cerrahi Kapanış <ol><li> kanama karın boşluğu inceleyin. NOT: Bu tarihe oluşmamıştır. aşırı kanama not edilir, ancak, kanama alanının tespit ve steril pamuklu ya da jel, köpüğün kullanımı ile basınç ile uygun hemostaz sağlar. </li><li> insuflatör kapatın ve kanül stopcocks açın. Tamamen periton boşluğunu basıncını için Karın yumuşak manuel basınç uygulayın. kanüller çıkarın. </li><li> site başına 1 ila 2 basit tek sütürler ile karın duvarı kesiler her kapatın. 4-0 emilebilir sütür önerilir. </li><li> Yerel analjezi için önce deri kapağın her bir kesi olarak 0.1-0.3 cc bupivakain yerleştirerek bir sıçrama blok gerçekleştirin. </li><li> site başına 2 gömülü kesintiye dikişler (4-0 emilebilir sütür önerilir) - 1 ile cilt kapatın. Doku yapıştırıcı uygulanabilir. </li></ol></li></ol> 3. Karaciğer biyopsisi işlenmesi ve Lenfosit Analizi <ol><li> karaciğer dokusunun birkaç adet saklayın (yaklaşık 0.5 mm x 0.5 mm boyutunda x 0,5 mm), gelecekteki moleküler ve histolojik için tercih edilen bir RNA depolama çözeltisi içinde dondurarak saklama tüplerde, ve% 10 formalin analiz eder. <ol><li> bir kapak ile 250 mL bir steril plastik bir kap içinde 1x penisilin / streptomisin, bir ticari olarak temin edilebilir kolajenaz çözeltisi 40 ug / mL, ve 4 ug / ml DNAz ile desteklenmiş 50 ml RPMI 1640 ortamında kalan karaciğer biyopsisi yerleştirin. kuvvetli bir şekilde, bir manyetik karıştırma çubuğu ve 37 ° C &#39;de 1 saat süre ile bir karıştırma plakası kullanarak karıştırın. </li></ol></li><li> Eşit sindirilmiş doku dökülerek dağıtın. griki 70 um filtreler üzerinde (aşama 3.1.1 den) sindirilmiş doku ind 5 ml steril bir şırınga ucunu kullanarak tek bir hücre süspansiyonu içine, iki 50 ml konik tüp içine uyar. RPMI içinde% 10 fetal sığır serumu ve 1 x penisilin / streptomisin (R10) ile desteklenmiş 1640 ortamı 50 mL her iki tüpün hacmi getirin. </li><li> 4 ° C&#39;de 6 dakika boyunca 840 xg&#39;de hücreleri santrifüjleyin. Üstte kalan. 5 ml R10 her iki tüplerden süspansiyona ve bir 50 mL konik tüp içine birleştirerek tek bir 50 mL konik tüp içine hücreleri konsantre edilir. R10 ile 50 mL hacim getirin. Hücresel verimi belirlemek için, bir hemositometre kullanılarak hücre sayımı. <ol><li> 4 ° C&#39;de 6 dakika boyunca 840 xg&#39;de hücreleri santrifüjleyin. , 1 ml R10 hücrelerin tekrar iki adet 5 mL&#39;lik yuvarlak dipli bir polistiren tüpler içine eşit bir şekilde dağıtılması ve her bir tüp içinde&gt; 500,000 hücre hedefleme, R10 ile 4 mL için, her tüpün hacmi getirmek. </li></ol></li><li> 4 ° C&#39;de 6 dakika boyunca 840 xg&#39;de hücreleri santrifüjleyin. s Durusuupernatant ve 4 ml fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) içinde hücre pelletini. 4 ° C&#39;de 6 dakika boyunca 840 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Üstte kalan hafifçe karıştırın 100 uL PBS içinde tekrar süspansiyon hücreleri. sabitlenebilir bir ölü hücre leke 1.5 mcL ekleyin. 5 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> CD45-PerCP (klon D058-1283), CD3-PE-CF594 (klon SP34-2), CD20-PE-Cyanin5 (klon 2H7), CD4-BV605 (: üretici tarafından tavsiye edilen titreleri aşağıdaki seyreltilmemiş yüzey boyama antikor ekleyin klon OKT4), CD8-BV570 (klon RPA-T8) ve CD14-BV785 (klon M5E2). 20 dakika boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> 4 ° C&#39;de 6 dakika boyunca 840 xg&#39;de ml PBS ve santrifüj 4 ekleyin. Üstte kalan PBS içinde% 1 paraformaldehid 250 uL hücreler tekrar süspansiyon. Dikkat: Paraformaldehyde toksiktir. Uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın. </li><li> Referans olarak 22 tanımlanan bir akış sitometrisi kullanılarak hücre popülasyonları analiz edin. </li></ol>

<ol>
	<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cells:+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis.">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li><li>Jacobs, J. P., Braun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+genetic+gardening+of+the+intestinal+microbiome.">Immune and genetic gardening of the intestinal microbiome.</a> FEBS Lett. 588 (22), 4102-4111 (2014).</li><li>Macpherson, A. J., Smith, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+lymph+nodes+at+the+center+of+immune+anatomy.">Mesenteric lymph nodes at the center of immune anatomy.</a> J Exp Med. 203 (3), 497-500 (2006).</li><li>Vaikunthanathan, T., Safinia, N., Lombardi, G., Lechler, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota,+immunity+and+the+liver.">Microbiota, immunity and the liver.</a> Immunol Lett. 171, 36-49 (2016).</li><li>Macpherson, A. J., Heikenwalder, M., Ganal-Vonarburg, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Liver+at+the+Nexus+of+Host-Microbial+Interactions.">The Liver at the Nexus of Host-Microbial Interactions.</a> Cell Host Microbe. 20 (5), 561-571 (2016).</li><li>Shuai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+immunity+in+the+liver.">Adaptive immunity in the liver.</a> Cell Mol Immunol. 13 (3), 354-368 (2016).</li><li>Chun, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+HIV+in+gut-associated+lymphoid+tissue+despite+long-term+antiretroviral+therapy.">Persistence of HIV in gut-associated lymphoid tissue despite long-term antiretroviral therapy.</a> J Infect Dis. 197 (5), 714-720 (2008).</li><li>Horiike, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+nodes+harbor+viral+reservoirs+that+cause+rebound+of+plasma+viremia+in+SIV-infected+macaques+upon+cessation+of+combined+antiretroviral+therapy.">Lymph nodes harbor viral reservoirs that cause rebound of plasma viremia in SIV-infected macaques upon cessation of combined antiretroviral therapy.</a> Virology. 423 (2), 107-118 (2012).</li><li>North, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+sanctuaries+during+highly+active+antiretroviral+therapy+in+a+nonhuman+primate+model+for+AIDS.">Viral sanctuaries during highly active antiretroviral therapy in a nonhuman primate model for AIDS.</a> J Virol. 84 (6), 2913-2922 (2010).</li><li>Xu, H., Wang, X., Lackner, A. A., Veazey, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+down-regulation+and+functional+impairment+of+SIV-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+in+lymphoid+and+mucosal+tissues+during+SIV+infection.">CD8 down-regulation and functional impairment of SIV-specific cytotoxic T lymphocytes in lymphoid and mucosal tissues during SIV infection.</a> J Leukoc Biol. 93 (6), 943-950 (2013).</li><li>Zhang, L., Dailey, P. J., Gettie, A., Blanchard, J., Ho, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Liver+Is+a+Major+Organ+for+Clearing+Simian+Immunodeficiency+Virus+in+Rhesus+Monkeys.">The Liver Is a Major Organ for Clearing Simian Immunodeficiency Virus in Rhesus Monkeys.</a> Journal of Virology. 76 (10), 5271-5273 (2002).</li><li>Dillon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+altered+intestinal+mucosal+microbiome+in+HIV-1+infection+is+associated+with+mucosal+and+systemic+immune+activation+and+endotoxemia.">An altered intestinal mucosal microbiome in HIV-1 infection is associated with mucosal and systemic immune activation and endotoxemia.</a> Mucosal Immunol. 7 (4), 983-994 (2014).</li><li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199 (8), 1177-1185 (2009).</li><li>Sandler, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+soluble+CD14+independently+predict+mortality+in+HIV+infection.">Plasma levels of soluble CD14 independently predict mortality in HIV infection.</a> J Infect Dis. 203 (6), 780-790 (2011).</li><li>Klase, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysbiotic+bacteria+translocate+in+progressive+SIV+infection.">Dysbiotic bacteria translocate in progressive SIV infection.</a> Mucosal Immunol. 8 (5), 1009-1020 (2015).</li><li>Evans, T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIV-induced+Translocation+of+Bacterial+Products+in+the+Liver+Mobilizes+Myeloid+Dendritic+and+Natural+Killer+Cells+Associated+With+Liver+Damage.">SIV-induced Translocation of Bacterial Products in the Liver Mobilizes Myeloid Dendritic and Natural Killer Cells Associated With Liver Damage.</a> J Infect Dis. 213 (3), 361-369 (2016).</li><li>Fish, R., Danneman, P. J., Brown, M., Karas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. 2 edn. , (2011).</li><li>Flecknell, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Animal Anaesthesia. 3 edn. , (2009).</li><li>Tranquilli, W. J., Thurnom, J. C., Grimm, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lumb and Jones' Veterinary Anesthesia and Analgesia. , (2007).</li><li>Ford, R. B., Mazzaferro, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Kirk and Bistner's Handbook of Veterinary Procedures and Emergency Treatment. 9 edn. , (2012).</li><li>Fransson, B. A., Mayhew, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Small Animal Laparoscopy and Thoracoscopy. , (2015).</li><li>Hensley-McBain, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Fecal+Microbial+Transplantation+on+Microbiome+and+Immunity+in+Simian+Immunodeficiency+Virus-Infected+Macaques.">Effects of Fecal Microbial Transplantation on Microbiome and Immunity in Simian Immunodeficiency Virus-Infected Macaques.</a> J Virol. 90 (10), 4981-4989 (2016).</li><li>Smedley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+Technique+for+Serial+Collection+of+Para-Colonic,+Left+Colic,+and+Inferior+Mesenteric+Lymph+Nodes+in+Macaques.">Laparoscopic Technique for Serial Collection of Para-Colonic, Left Colic, and Inferior Mesenteric Lymph Nodes in Macaques.</a> PLoS One. 11 (6), 0157535 (2016).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-chain+fatty+acids+induce+both+effector+and+regulatory+T+cells+by+suppression+of+histone+deacetylases+and+regulation+of+the+mTOR-S6K+pathway.">Short-chain fatty acids induce both effector and regulatory T cells by suppression of histone deacetylases and regulation of the mTOR-S6K pathway.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 80-93 (2015).</li><li>Ziegler-Heitbrock, H. W., Ulevitch, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD14:+cell+surface+receptor+and+differentiation+marker.">CD14: cell surface receptor and differentiation marker.</a> Immunol Today. 14 (3), 121-125 (1993).</li><li>Brenchley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12 (12), 1365-1371 (2006).</li></ol>

Yazarlar herhangi mali çıkarlarını beyan ederim.

Burada, bu çalışmada açıklanmayan bu ve diğer hayvanlarda% 100 başarı oranı vardı seri MLN&#39;sinin toplama ve karaciğer biyopsileri için minimal invaziv tekniği göstermektedir. Ayrıca, zaman içinde aynı hayvanlar üzerinde bu tekniğin kullanılması herhangi bir olumsuz olaylarla ilişkili edilmemiştir. Gerçekten de, SIV, maymun / insan bağışıklık eksikliği virüsü (SHIV) kullanmaktadır, veya Zika virüsü (yayınlanmamış veriler) ile aşılanmış hayvanların diğer gruplar halinde bu tekniğin kullanımından kaynaklanan komplikasyon olmuştur. Benzer şekilde, bu ameliyat bile daha önce, majör abdominal cerrahi geçiren hayvanlarda ve trombositopenik hayvanların (yayınlanmamış veriler) başarılı olduğu kanıtlanmıştır. Biz ek kesiler ihtiyacını kaçınarak karaciğere MLN geçildiğinde bu numuneler kamera konumunu tersine çevirerek aynı iki limanları aracılığıyla toplanan edilebileceğini gösterdi. MLN toplanmasını etkileyen faktörler daha önce 13 bildirilmiştir. <p3 MLN ve 3 karaciğer biyopsileri her dört koleksiyonlarına kadar class = &quot;jove_content&quot;&gt; komplikasyon olmadan bireysel hayvanlar üzerinde zaman içinde gerçekleştirilmiş, verilere başarı oranlarındaki değişiklikler veya değişiklik topladı. Buna ek olarak, bu laparoskopik MLN / karaciğer toplama tekniği başarılı bir şekilde geniş değerlendirilmesini sağlayan aynı anestezi etkinlikte periferal LN, endoskopik üst ve alt GI biyopsiler, kemik iliği, beyin-omurilik sıvısı toplama toplanması ve damar delme gibi diğer işlemler ile kombine edilmiş virolojik ve seri bir şekilde immünolojik tepkiler (yayınlanmamış veriler). tamamlamak için 45 dakika karıştırılır ve iki ~ 0.5 cm kesiklerden elde edilir - İşlemin tamamı tipik olarak 30 alır. şişman hayvan olarak, daha büyük bir kesi yapmak için gerekli olabilir - ile MLG almak için (~ 1 ila 1.5 cm) yapılır ve tamamlanması için ek süre gerektirebilir. Kapsamlı mezenterik yağ ile hayvanlar genellikle d önemli bir deneyime ihtiyaççevredeki yağdan MLG ifferentiate. MLN sıklıkla mezenterik damarların boyunca bulundu ve damarlarda şube yerlerin yakınında daha yaygın olduğu görülüyor edilmektedir. Bu tekniğin bir kritik bir yönü mezenter abdominal kesikten batın için yeterli hareketli olması seçilen MLG gerektirmesidir. Sonuç olarak, bu teknik mezenter köküne MLN yakın toplamak için kullanılamaz. Nedeniyle büyütmeye, bu kamera ile MLG tespit etmek ve MLN yakın kavrama yerinin ve dışarıya alınır kez düğümün belirlenmesi ile yardımcı olabilir kolay kez atar. Trendelenburg pozisyonunda kullanılması her zaman MLN toplanması için gerekli olmayabilir ve MLN kolayca Trendelenburg pozisyonuna kullanılmadan alınabilir eğer o kraniyale kaymasını organlarını önleyecektir olarak karaciğer biyopsileri kolay hale getirebilir. Zaman zaman, Trendelenburg pozisyonuna yerleştirildikten sonra, karaciğer diyafram ve şırası karşı kaydırılır<html> nazikçe geri biyopsi koleksiyonuna önce pozisyona manipüle edilebilir. MLN toplama noktası yerleştirme sola olduğu gibi onlar kanül daha yakın olarak, karaciğer biyopsileri genellikle sol yanal ve sol medial karaciğer lobu alınır. MLN Toplanan ve karaciğer biyopsileri alt analizler, çeşitli için yeterli hücre verimi sağlanır ve toplanan hücrelerin yüksek yaşayabilirliği göstermemiştir. Burada hücreler lökosit ve lenfosit popülasyonu akış sitometrik analiz için boyanmıştır ve bu iki önemli bağışıklık organları arasında önemli farklılıklar ortaya konamamıştır. Örneğin, MLN yüksek iltihaplı yönetmek için, hem de CD4 + T önemine toplama ve adaptif bağışıklık tepkilerini yayılması için merkez noktaları olarak MLN&#39;sinin önemi nedeniyle, karaciğere kıyasla, CD4 + T hücreleri için zenginleştirilmiş ve ortama tolerojenik tepkileri diyet alımı ve Gl yerleşik mikroorganizmalardan türetilen antijenleris = &quot;xref&quot;&gt; 24. Ancak, karaciğer önemli MLN&#39;sinin karşılaştırıldığında CD14 + lökositler için zenginleştirilmiştir. CD14 monosit ve makrofajlar üzerinde ağırlıklı olarak ifade edilir ve bakteriyel lipopolisakarit (LPS) 25 reseptör kompleksi önemli bir bileşenidir. Gerçekten de, çözünür CD14 yüksek plazma konsantrasyonları mikrobiyal translokasyon ve HIV bağışıklık aktivasyonu ve patojenik SIV enfeksiyonu 26 ile ilişkilidir. MLN karşılaştırıldığında Böylece, karaciğer CD14 + lökositlerin yüksek frekansları muhtemel bu organda daha büyük bir bakteri yükünün sonucudur. Burada, seri MLN&#39;sinin toplanması ve herhangi bir olumsuz sonuçlara yol açmamıştır laparoskopik giriş için sadece iki küçük kesi kullanılarak karaciğer biyopsileri için hızlı ve minimal invaziv cerrahi tekniği göstermektedir. Bu örnekler pla almak önemli immünolojik, virolojik ve mikrobiyolojik süreçlerini değerlendirmek için yararlı bir yol sağlayabilirSistemik bağışıklık ayrı ve farklı olan MLN ve karaciğerde ce. Benzer şekilde, karaciğer biyopsisi çoğunlukla önemli karaciğer hasarı 16 uyarmak üzere bir araya HIV / SIV, ilaç tedavileri ve transloke mikropların etkilerine, uzun süreli değerlendirilmesi için önemlidir. MLN ve karaciğer GI Mikrobiyota maruz bağışıklık organlar çünkü Dahası, yetenek zaman içinde bu organlarda bağışıklığı değerlendirmek için mikrobiyomları konak immün dengesinin düzenlenmesinde rolünü anlamak için mükemmel bir platform sağlar. Birlikte ele alındığında, karaciğer değerlendirilmesi ve MLN aşısı ve terapötik etkinlik dereceleri, SIV viral hazne temizlenmesinde, ve genel mukoza bağışıklık bağlamında büyük önemi vardır. bir minimal invaziv bir yaklaşım ile bu numune toplama özelliğini şu anda yayınlanan teknikler ve hayvanların fizyolojisi üzerinde daha az etki ile var olan daha prosedürü ile ilgili inflamasyon daha az risk olduğu anlamına gelir. fuTure, biz önemli bir rol oynamaktadır gösterilmiştir bağışıklık sisteminin bir başka önemli ve belirgin bölümünün örnekleme için izin vermek aynı iki liman yerleri ile dalak koleksiyonu ile MLN&#39;sinin toplanması ve karaciğer birleştirmek potansiyelini değerlendirecek hastalık modelleri bir dizi.

Mide-bağırsak (GI), vücudun en büyük mukoza yüzeyi olan ve yaygın olarak mikrobiyomu 1, 2 olarak adlandırılan, gıda, patojenler ve endosimbiyotik bakteri topluluklarının türetilen bir antijen sayısız maruz kalmaktadır. Mezenterik lenf düğümlerinden (MLN) gastrointestinal sistem hat ve bu farklı antijenlere karşı enflamatuar veya tolerojenik yanıtları teşvik etmek için immün fonksiyonun bir asıl yer bulunmaktadır. MLN&#39;sinin fiziksel organizasyon lokal sistemik tepkiler 3 meydana getirmeden antijenlere yanıt verebilir bölmelere ayrılmış bir sistem oluşturur. Benzer şekilde, dolaşım dönen ve böylece lamina propria içine GI yolundan konuma transfer ve kan dolaşımına 4 girmiş mikropların ve mikrobiyal ürünlere maruz önce portal ven yoluyla karaciğere GI yolu düşene kan. Karaciğer aynı zamanda ikinci bir lenfoid organ a olarak işlevnd Transloke Mikroplar 5, 6 kaldırmak için özel makrofajlar gibi immün hücrelerin çok sayıda vardır. Bu nedenle, MLN ve karaciğer Gl kommensal ve patojenik bakterilere maruz primer immün organlar, hem de başka kaynaklardan gelen antijenleri ortam, olan bir imünolojik açıdan onları benzersiz ve önemli adrestir. MLN Human Immunodeficiency Virus (HIV) veya patojenik maymun bağışıklık yetmezliği virüsü (SIV) enfeksiyon virolojik ve immünolojik etkilerinin değerlendirilmesi için kritik siteler ve muhtemelen intrarektal tehdit sonrasında SIV erken yayılması ilgilidirler. Bağırsak ile ilişkili lenfoid doku Modern antiretroviral tedaviler (ART) 7 ile viremi etkin kontrolü rağmen, kalıcı HIV replikasyonunun önemli bir yer olarak bilinir. SIV enfeksiyonu modellerinde, MLN latent virüsün önemli rezervuarları olduğu gösterilmiştir ve mayıs edilmiştirana hazne 8, 9 olabilir. Akut SIV enfeksiyonu 10 boyunca makak karaciğerlerinde SIV spesifik CD8 + T hücrelerinin birikimi ile kanıtlandığı gibi karaciğer de lentiviral enfeksiyon önemlidir. Ayrıca, bu dolaşım 11 virüs temizleme için sorumlu başlıca organdır. HIV ve SIV enfeksiyonu değiştirilmiş Gl mikrobiyota ile ilişkilidir, Gl epitel entegriteyi bozulur ve çevresi ve dolaşım 12, 13 içine kolon mikroplar ve mikrobiyal ürünler translokasyonunu artmıştır. Bu işlemler, lokal ve sistemik immün aktivasyonu ile bağlantılı ve HIV ile enfekte olmuş bireylerin 14 morbidite ve mortalite riski vardır. SIV enfeksiyonunda transloke bakteri mikrofon birikimi ise, MLN 15 gözlenmiştirkaraciğerde robial ürünleri organı 16 enflamasyon ve zarar görmesine neden olduğu gösterilmiştir. Bu nedenle, HIV ve SIV enfeksiyonlarına bağlamında, MLN ve karaciğer Gl yerleşik bakteri tarafından tahrik ettiği enflamatuar süreçleri anlamak için oldukça bilgi verici olabilir. Burada, insan-olmayan primatlarda (NHPs) seri MLN&#39;sinin örnekleme ve karaciğer için minimal invaziv bir laparoskopik teknik sunar. Her cerrahi arasında her hayvana 160 gün ile iki kez, örnekleme, iki sağlıklı dışı makaklar (RMler) bu tekniğin başarılı bir performans sergiledik. Bu iki zaman aralığında yüksek tutarlı veri değerlendirme ve akış sitometrisi kullanılarak, her bir organ içinde önemli lökosit ve lenfosit karşılaştırılabilmesi ve göstermek için bu örneklerin kullanımı gidin.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1395">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Artficial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">97-890-8152</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Priority Care Chlorhexidine 2% Scrub</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-842-6153</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Vedco Alcohol, Isopropyl 70%</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-869-6434</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Vedco Vetadine Scrub</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-869-6772</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Hospira Lactated Ringer&#39;s 250 ml</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-800-9325</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Adolescent Laparotomy Surgical Drape</td>
			<td style="width:248px;">Medline</td>
			<td style="width:167px;">DYNJP3004</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Access 40 L Insufflator</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">7205832</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">300XL Xenon Light Source</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">7206084</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">460P 3 &#8211; CCD Digital Camera with Head</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">72200086</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Universal Camera Drape, 7&#8221; x 96&#8221;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">ESS-6920</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Universal Light Guide, 7.5 Ft</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">US.OU225</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Insufflator Tubing</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">TM-102</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Multipurpose Rigid Scope, 2.7mm x 187.5mm, 0 degree</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B30-0007-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Exam and Protective Sheath for 2.7mm x 187.5mm scope with one fixed stopcock</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B10-0025-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Rigid scope, 5mm x 300mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B30-0071-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Veress Needle, 2mm x 80mm&#160;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8302.08</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Solid Probe with Markings, 5mm x 320mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8383.661</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:441px;">Maryland Grasping and Dissecting Forceps with Double Action Ratchet Handle, 3.5mm x 240mm&#160;&#160;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8390.2054</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:441px;">Biopsy Forceps, 3.5mm X 310mm</td>
			<td style="width:248px;">R. Wolf</td>
			<td style="width:167px;">8391.4063</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Plastic Threaded Cannula with Insufflator Port, 3.5mm x 60mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.072</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Plastic Threaded Cannula with Insufflator Port, 5.5mm x 60mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8919.333</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Blunt Tip Trocar</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.101</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Pyramidal Tip Trocar</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.121</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:441px;">CO2</td>
			<td style="width:248px;">Airgas</td>
			<td style="width:167px;">CD USPE</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH30027FS</td>
			<td>with L-Glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">RNAlater Stabilization Solution</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Liberase TM Research Grade</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>5401119001</td>
			<td>Commercially available colleganse solution</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Dnase I from bovine pancrease</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">70 &#181;m cell strainers</td>
			<td style="width:248px;">Morganville Scientific</td>
			<td>CSS0200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">5mL Syringe</td>
			<td style="width:248px;">BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">50mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH3007003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">5mL Round-Bottom polystyrene tubes</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>14-959A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">PBS</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH3025601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">LIVE/DEAD Aqua Fixable Dead Cell Stain Kit</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>L34957</td>
			<td>Amine dead cell stain</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">CD45-PerCP (clone D058-1283)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>558411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">PE-CF594 Mouse anti-Hu CD3 (clone SP34-2)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>562406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BV605 Mouse Anti-Hu CD4 (clone OKT4)</td>
			<td style="width:248px;">Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">APC-H7 Mouse anti-Hu CD8 (clone SK1)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>560179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">PE-Cy5 Mouse Anti-Hu CD20 (clone 2H7)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>555624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BV786 Mouse Anti-Hu CD14 (clone M5E2)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>563698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">16% PARAFORMALDEHYDE AQ SOLUTN</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50-980-487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">LSR II Flow Cytometer</td>
			<td style="width:248px;">BD</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic technique for serial collection of liver and mesenteric lymph nodes in macaques

mezenterik lenf düğümlerinden (MLN) ve karaciğer bunları immünolojik benzersiz yapım, mide-barsak (GI) sistemin mikroplar ve mikrobiyal ürünler maruz kalmaktadır. Gastrointestinal sistem ve ilişkili MLN, insan bağışıklık eksikliği virüsü (HIV) enfeksiyonu ile erken viral replikasyonun siteleri ve MLN daha uzun süreli anti-retroviral tedavi (ART) sonra kuluçkada enfekte olmuş hücreleri barındıran muhtemelen önemli rezervuar yerleridir. Karaciğer Lentivirüslerden immün yanıtlarda önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir ve dolaşımdan virüsün temizlenmesinde önemli bir rol oynuyor gibi görünmektedir edilmiştir. İnsan-olmayan primat, HIV ve Kazanılan Bağışıklık Eksikliği Sendromu (AİDS) için (NSP) modelleri yakından enfeksiyon kritik olaylar aydınlatmak için yardımcı olur, HIV enfeksiyonu ve viral replikasyon ve bu modelde olarak ilişkili immün cevapların primer siteye seri boyuna örnekleme bu özelliklerini taklit eden, patogenez ve bu olaylar üzerinde çeşitli müdahale stratejilerinin etkisi. Current yayınlanan teknikler karaciğer örnek ve MLN birlikte aynı hayvanda bir seri biçimde bu önemli yerlerin araştırılması için sınırlar büyük cerrahi ve / veya otopsi, içerir. Daha önce MLN toplanması için bir laparoskopik tekniği tarif var. Burada, MLN toplanması için gerekli olan aynı iki bağlantı noktası yerleri ile karaciğer ve MLN&#39;sinin seri boyuna örnekleme için minimal invaziv bir laparoskopik tekniği açıklar. ilave kesikler gerekli olduğu gibi aynı iki bağlantı noktası kullanımı hayvanlara etkisini en aza indirir. Bu teknik, büyük karın cerrahisi ile karşılaştırıldığında artmış bir örnekleme frekansı ile kullanılan ve cerrahi komplikasyon riskini ve sonuçların yorumlanmasını karmaşık hale getirebilir lokal ve sistemik inflamatuar yanıt ilişkilendirilebilir. Bu prosedür hayvan refahı geliştirirken NHP modellerini kapsayan çalışmalar kolaylaştırmak için potansiyele sahiptir.

Bu organlarda laparoskopik toplanan MLN&#39;sinin işlenmesi için ayrıntılı yöntemler, hem de hücre verimi, ve lökosit frekansları önce 13 bildirilmiştir. Şekil 1, bu laparoskopik tekniği kullanarak iki sağlıklı kadın RMS 160 gün arayla iki zaman noktalarında toplanan MLG karşılaştırılması hücre verimi ve canlılığı veri ve karaciğer biyopsileri gösterir. Biz MLN&#39;sinin hücresel verim, sırasıyla, elde edilen 33.5 x 10 6 ve 6.74 x 10 6 hücre, ortalama karaciğer (= 0.0021 P) göre önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ortaya koymuştur. Akış sitometrisi ile ölü hücre boyama ve analizi, her iki organlardan izole edilen hücrelerin&gt;% 90 canlı olduğunu göstermiştir. flow sitometri kullanarak, değerlendirilecek ve MLN ve karaciğerde lökosit ve lenfositlerin bolluğu karşılaştırıldı. karaciğer için temsili bir geçit şeması gösterilmektedir <strong&gt; Ilk sadece canlı hücre, CD45 sonra seçim + hücreleri, ve son olarak, CD3 + hücreleri seçimi ile, agrega hariç tutmak için tek hücreler üzerinde olduğundan kapı ve ardından Şekil 2,. Biz CD3- popülasyonlarından CD14 + ve CD20 + hücrelerinin bolluklarını değerlendirirken, CD3 + nüfus, biz, CD4 + ve CD8 + T hücrelerinin bolluklarını değerlendirildi. Şekil 4, iki hayvan iki örneklem için lökosit ve lenfosit bolluğunu gösterirken Gün 0 ve gün 160 CD45 + ve MLN&#39;de gelen CD3 + popülasyonları ve her iki hayvan karaciğer gösteren sitometrisi lekeleri Örnek akışı, Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. MLN karaciğer (ortalama% 76.9 ve sırasıyla canlı hücreler, 7.66%, p = 0.0002) daha fazla CD45 + hücrelerinin önemli ölçüde daha yüksek bolluklarını göstermiştir. Şaşırtıcı olmayan bir şekilde, MLN CD3 + T hücrelerinin önemli ölçüde daha yüksek oranlarda (p gösterdi0; 0.0001) ve CD4 + T hücreleri (p = 0.0004). Bunun aksine, karaciğer anlamlı MLN (p = 0.0036) kıyasla CD14 + lökositler için zenginleştirilmiştir. MLN, CD8 + T hücrelerinin daha yüksek bir ortalama gösterdi, ama bu önemli değildi. Şaşırtıcı bir şekilde, bu iki hayvan için her iki organın CD20 + B hücreleri içindeki zengindi gösterdi. Önceden teyit Bu çalışmada hücresel verim ve MLN&#39;de farklı lökosit ve lenfosit alt bolluğu değerleri 23 bildirilmiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig1.jpg" /> Seri olarak alınan MLN ve karaciğer biyopsilerinde Şekil 1. Toplam Hücresel Verim (üst) ve Hücre Canlılığı (alt). MLN karaciğer anlamlı olarak daha yüksek hücre verimi gösterdi. Ancak, her iki numune tipleri alt analizler için yeterli hücrelerini verdiğini gösterir. akış sitometride ile ölçülen hücre viyabilitesi,etrically sabitlenebilir bir ölü hücre amin leke kullanılarak, her iki numune tipleri, tipik olarak, doku ayrışma sonra&gt;% 90 hücre canlılığı ortaya çıkardığına işaret etti. Hata çubukları, örnekler arasında, standart sapmayı temsil etmektedir. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55617/55617fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig2.jpg" /> Şekil 2. Temsilcisi Sitometrisi Geçitleme Stratejisi. İlk olarak, toplanan hücreler sabitlenebilir ölü hücre amin leke kullanılarak boyamadan sonra, sadece canlı hücrelerin seçilmesi ile hariç tutulmuştur. Daha sonra, CD45 + lökositler, seçilen CD3 + T hücresi seçimi ile takip edildi. CD3 + nüfusunun itibaren CD4 + ve CD8 + T hücreleri analiz edildi. CD3 itibaren - nüfusun CD14 + ve CD20 + hücreler analiz edildi. Thi<html> s yolluk strateji de MLN için kullanılmıştır. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55617/55617fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/55617/55617fig3.jpg" /> MLN ve İki Hayvanlar Boyuna Karaciğerinde gelen Şekil 3. Akış Sitometri Arsalar. MLN ve karaciğer örnekleri her iki hayvan için 160 gün arayla toplanmıştır. (A). MLN CD45 + hücreleri (lökositler); (B) Karaciğer CD45 + hücreleri (lökosit); (C), MLN CD3 + hücreleri (T hücreleri); (D) Karaciğer CD3 + hücreleri (T hücreleri). Her iki hayvan için, MLN karaciğere kıyasla CD45 + ve CD3 + hücrelerinin daha yüksek oranlarda şunları verdi. zaman içinde, bu popülasyonlar frekansları her iki hayvan için de benzerdi.s / ftp_upload / 55617 / 55617fig3large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayın. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/55617/55617fig4.jpg" /> Şekil CD45 + (sol) Hücrelerin 4. Frekans ve çeşitli lökosit ve 23 bireysel numune alımları karşısında lenfosit alt (sağ). Karaciğer Her organ benzersiz işlevleri gösteren, CD14 + lökositlerin önemli ölçüde daha büyük frekanslar gösterdi MLNs, CD45 +, CD3 +, CD4 + hücreleri arasında önemli ölçüde daha büyük frekanslar gösterilir. Hata çubukları, örnekler arasında, standart sapmayı temsil etmektedir. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55617/55617fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques at JoVE.com

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

Burada, yüksek örnekleme frekansı verir ve bir laparotomi performans ile karşılaştırıldığında, cerrahi komplikasyonlar potansiyelini azaltır makaklarda karaciğer ve mezenterik lenf düğümlerinden (MLN) seri örnekleme için minimal invaziv bir laparoskopik tekniği açıklar.

Macaques Karaciğer ve Mezenterik lenf nodu Seri Koleksiyonu için Laparoskopik Tekniği

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

laparoscopic-technique-for-serial-collection-liver-mesenteric-lymph

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

51.1K Görüntüleme.  Washington National Primate Research Center, University of Washington.  Burada, yüksek örnekleme frekansı verir ve bir laparotomi performans ile karşılaştırıldığında, cerrahi komplikasyonlar potansiyelini azaltır makaklarda karaciğer ve mezenterik lenf düğümlerinden (MLN) seri örnekleme için minimal invaziv bir laparoskopik tekniği açıklar. 

Video: Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Subnormothermic Tekniği<em&gt; Ex vivo</em&gt; Karaciğer Depolama, Değerlendirme Perfüzyon ve Marjinal Karaciğer Greft Onarımı

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Tıp

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality DNA. However, DNA extraction from saliva can yield high quality DNA with little to no degradation/fragmentation that is suitable for a variety of DNA assays without the expense of a phlebotomist and can even be acquired through the mail. However, at present, no saliva DNA collection/extraction protocols for next generation sequencing have been presented in the literature. This protocol optimizes parameters of saliva collection/storage and DNA extraction to be of sufficient quality and quantity for DNA assays with the highest standards, including microarray genotyping and next generation sequencing.

DNA extraction from saliva can provide a readily available source of high molecular weight DNA, with little to no degradation/fragmentation. This protocol provides optimized parameters for saliva collection/storage and DNA extraction to be of sufficient quality and quantity for downstream DNA assays with high quality requirements.

Yeni Nesil dizinleri için Toplama ve Tükrük DNA çıkarımı

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal systems. HFUS has the ability to detect structures as small as 30 &#181;m, a property that has been utilized for visualizing superficial lymph nodes in rodents in brightness (B)-mode. Combining power Doppler with B-mode imaging allows for measuring circulatory blood flow within lymph nodes and other organs. While HFUS has been utilized for lymph node imaging in a number of mouse&#160; model systems, a detailed protocol describing HFUS imaging and characterization of the cervical lymph nodes in mice has not been reported. Here, we show that HFUS can be adapted to detect and characterize cervical lymph nodes in mice. Combined B-mode and power Doppler imaging can be used to detect increases in blood flow in immunologically-enlarged cervical nodes. We also describe the use of B-mode imaging to conduct fine needle biopsies of cervical lymph nodes to retrieve lymph tissue for histological&#160; analysis. Finally, software-aided steps are described to calculate changes in lymph node volume and to visualize changes in lymph node morphology following image reconstruction. The ability to visually monitor changes in cervical lymph node biology over time provides a simple and powerful technique for the non-invasive monitoring of cervical lymph node alterations in preclinical mouse models of oral cavity disease.

This protocol describes the application of high-frequency ultrasound (HFUS) for imaging mouse cervical lymph nodes. This technique optimizes visualization and quantification of cervical lymph node morphology, volume and blood flow. Image-guided biopsy of cervical lymph nodes and processing of lymph tissue for histological evaluation is also demonstrated.

Fare Servikal lenf nodu Yüksek frekanslı Ultrasonik Görüntüleme

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Yenidoğan Domuzların Lenf Bağırsak Lenf Trunk ve Koleksiyonu Uzun Vadeli Kateterizasyon

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological resection of left-sided pancreatic cancer. Several surgical techniques have been described in recent years, but few were specifically designed for minimally invasive approaches. This study describes and demonstrates a standardized and reproducible technique for an adequate oncological resection of pancreatic cancer: laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP).
A 61-year-old woman presented with an incidental finding of a 3 cm mass in the left pancreas suspect for malignancy. Imaging did not reveal distant metastases, central vascular involvement, or morbid obesity, hence the patient was suitable for LRLP. This study describes the main steps of LRLP for pancreatic cancer. First, the lesser sac is opened by transecting the gastrocolic ligament. The splenic flexure of the colon is mobilized and the inferior border of the pancreas including Gerota&#39;s fascia is dissected down to the inferior border of the spleen. The pancreas is tunneled and hung, including Gerota&#8217;s fascia with a vessel loop. At the pancreatic neck, a tunnel is created between the pancreas and the portal vein, likewise a vessel loop is passed. The pancreas is then transected using the graded compression technique with an endostapler. Both the splenic vein and artery are transected before completing the resection. The entire specimen is extracted in a retrieval bag via a small Pfannenstiel incision.
Duration of the surgery was 210 min with 250 mL blood loss. Pathology revealed a R0-resection (&#62;1 mm) of a well-to-moderately differentiated adenocarcinoma originating from an intraductal papillary mucinous neoplasm. A total of 15 tumor-negative lymph nodes were resected. This is a detailed description of LRLP for left-sided pancreatic cancer as is currently being used within the international, multicenter randomized DIPLOMA (Distal Pancreatectomy Minimally Invasive or Open for PDAC) trial.

Oncologically safe left pancreatectomy requires radical resection (R0), Gerota&#8217;s (perirenal) fascia resection, and adequate lymph node dissection. This study describes the technical details of laparoscopic radical left pancreatectomy (LRLP), used in the first international multicenter randomized trial comparing minimally invasive with open left pancreatectomy for pancreatic cancer, the DIPLOMA trial.

Pankreas Kanseri için Laparoskopik Radikal Sol Pankretomi: Cerrahi Strateji ve Teknik Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

Karaciğer Biyolojisi Ex Vivo Modeli olarak Murine Precision-Cut Karaciğer Dilimleri

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent evidence indicates a potential inflammatory component of the disease, with both T-cells and monocytes/macrophages potentially associated with the pathogenesis of OA. Further studies postulated an important role for subsets of both inflammatory cell lineages, such as Th1, Th2, Th17, and T-regulatory lymphocytes, and M1, M2, and synovium-tissue-resident macrophages. However, the interaction between the local synovial and systemic inflammatory cellular response and the structural changes in the joint is unknown. To fully understand how T-cells and monocytes/macrophages contribute towards OA, it is important to be able to quantitively identify these cells and their subsets simultaneously in synovial tissue, secondary lymphatic organs and systemically (the spleen and bone marrow). Nowadays, the different inflammatory cell subsets can be identified by a combination of cell-surface markers making multi-color flow cytometry a powerful technique in investigating these cellular processes. In this protocol, we describe detailed steps regarding the harvest of synovial tissue and secondary lymphatic organs as well as generation of single cell suspensions. Furthermore, we present both an extracellular staining assay to identify monocytes/macrophages and their subsets as well as an extra- and intra-cellular staining assay to identify T-cells and their subsets within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue. Each step of this protocol was optimized and tested, resulting in a highly reproducible assay that can be utilized for other surgical and non-surgical OA mouse models.

Here, we describe a detailed and reproducible flow cytometry protocol to identify monocyte/macrophage and T-cell subsets using both extra- and intracellular staining assays within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue, utilizing an established surgical model of murine osteoarthritis.

Bir Osteoartrit Modelinde Minör Dalak, Kemik İliği, Lenf Düğümleri ve Sinovyal DokuDaki İmmün Hücre Alt Kümelerinin Akış Sitometri Analizi

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Laparoscopic Pancreatoduodenectomy for Pancreatic Cancer Using In-Situ No-Touch Isolation Technique

Laparoscopic pancreatoduodenectomy (LPD) is a standard radical operation for pancreatic head malignant tumors by now. Due to the complex laparoscopic resection and reconstruction techniques, it is difficult to perform LPD for patients with locally advanced pancreatic head cancer after neoadjuvant therapy. Our team initiates LPD using the in-situ No-Touch isolation technique. The innovation and optimization of this modified No-Touch isolation technique emphasize exploring the distal section of superior mesenteric vein&#160;(SMV) and the left side of the superior mesenteric artery (SMA) prior to evaluating the resectability by subcolonic mesenteric approach, which is an ideal exploring approach. After that, we use the median-anterior, and left-posterior of SMA approaches to cut off the blood flow of the pancreatic head to make the tumor isolated intact, then move and dissect the tumor. It is a process fitting the surgical principle of tumor-free. This article aims to demonstrate the feasibility and safety of performing LPD using the in-situ No-Touch isolation technique, which might elevate the R0 resection rate. It is an oncological ideal operation process.

Laparoscopic Pancreatoduodenectomy for Pancreatic Cancer Using In-Situ No-Touch Isolation Technique

No-Touch isolation procedures might prevent the dissemination of cancer cells from the primary tumor. However, these techniques are not widely accepted in laparoscopic pancreatoduodenectomy (LPD) by now. We herein present in-situ No-Touch isolation LPD with partial resection and reconstruction of the superior mesenteric vein (SMV) for pancreatic cancer after neoadjuvant therapy.

Pankreas Kanseri için In-Situ No-Touch İzolasyon Tekniği Kullanılarak Laparoskopik Pankreatoduodenektomi

Laparoscopic pancreatoduodenectomy (LPD) is a standard radical operation for pancreatic head malignant tumors by now. Due to the complex laparoscopic ...

Fluorescent Laparoscopic Central Hepatectomy for Liver Cancer Using Indocyanine Green Negative Staining

Laparoscopic hepatectomy is an important treatment method for liver cancer. In the past, the resection boundary was usually determined by intraoperative ultrasound, important vascular structures, and surgeon experience. With the development of anatomical hepatectomy, visual surgery technology has gradually been applied to this type of surgery, particularly indocyanine green (ICG)-guided anatomical hepatectomy. As ICG can be specifically ingested by hepatocytes and used for fluorescence tracing, negative staining techniques have been applied according to different tumor positions. Under ICG fluorescent guidance, the surface boundary and deep resection plane can be more accurately displayed during liver resection. Thus, the tumor-bearing liver segment can be anatomically removed, which helps to avoid damage to important vessels and reduce ischemia or congestion of the remaining liver tissue. Finally, the incidence of postoperative biliary fistula and liver dysfunction is reduced; therefore, a better prognosis is obtained after the resection of liver cancer. Centrally located liver cancer is usually defined as a tumor located at segments 4, 5, or 8 that requires resection of the middle section of the liver. These are among the most difficult hepatectomies to perform because of the large surgical wounds and multiple vessel transections. Based on the specific tumor location, we formulated the required resection ranges by designing personalized fluorescent staining strategies. By completing anatomical resection based on the portal territory, this work aims to achieve the best therapeutic effect.

The present protocol describes fluorescent negative staining in laparoscopic central hepatectomy. This technique can make hepatectomy more accurate and precise.

İndosiyanin Yeşili Negatif Boyama Kullanılarak Karaciğer Kanseri için Floresan Laparoskopik Santral Hepatektomi

Laparoscopic hepatectomy is an important treatment method for liver cancer. In the past, the resection boundary was usually determined by intraoperative ...

Application of Laparoscopic Hepatectomy Combined with Intraoperative Microwave Ablation in Colorectal Cancer Liver Metastasis

Laparoscopic hepatectomy is a common treatment for colorectal cancer liver metastasis. Previously, a sufficient number of functional liver masses had to be maintained during laparoscopic hepatectomy, with a residual liver volume of &gt;40% in cirrhotic patients and &gt;30% in non-cirrhotic patients. The high incidence of complications such as bleeding, bile leakage, or liver failure due to the exposure and difficulty of the resection of specific liver segments such as S2 and S7 reduces the success rate of liver resection. At present, microwave ablation is mainly applied in the treatment of liver metastasis using a percutaneous approach, which makes it difficult to identify hidden parts or small lesions. For some liver segments, the percutaneous puncture of liver segment 7 (S7) is likely to pass through the thoracic cavity, and the percutaneous puncture of liver segment 2 (S2) adjacent to the diaphragm is likely to injure the diaphragm and heart; these issues restrict the application of percutaneous ablation in colorectal cancer liver metastasis. Considering multiple lesions, laparoscopic microwave ablation combined with hepatectomy was performed in this study. The location of the lesions was determined by contrast-enhanced ultrasound under laparoscopy, and small lesions that were difficult to detect before the operation were identified. For the scattered lesions, which had diameters less than 3 cm and were difficult to resect, ablation was adopted to substitute hepatectomy. This technique helped to more explicitly locate the tumors, simplified the operation procedures, reduced the risk of complications such as bleeding and bile leakage, shortened the operation time, accelerated the postoperative recovery, significantly improved the success rate of operation, and enhanced the clinical prognosis of colorectal cancer liver metastasis by surgical resection.

This protocol describes the laparoscopic resection of colorectal cancer liver metastases combined with ultrasound-guided microwave ablation. This technique can safely, effectively, and accurately treat refractory liver metastases &lt;3 cm, reduce postoperative complications, and accelerate the postoperative rehabilitation of patients.

Kolorektal Kanser Karaciğer Metastazında İntraoperatif Mikrodalga Ablasyon ile Kombine Laparoskopik Hepatektomi Uygulaması

Laparoscopic hepatectomy is a common treatment for colorectal cancer liver metastasis. Previously, a sufficient number of functional liver masses had to ...